超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究論文

1、中華人民共和國(guó)教育部東北林業(yè)大學(xué)畢 業(yè) 論 文 論文題目： 超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究 學(xué) 生： 冷帥辰 指導(dǎo)教師： 趙曉丹 講師 學(xué) 院： 林學(xué)院 專(zhuān) 業(yè)： 食品科學(xué)與工程2008級(jí)1班 2012年6月東北林業(yè)大學(xué)畢 業(yè) 論 文 任 務(wù) 書(shū)論文題目 超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究 指導(dǎo)教師 趙曉丹 講師 專(zhuān) 業(yè) 食品科學(xué)與工程2008級(jí)1班 學(xué) 生 冷帥辰 2011年9月25日題目名稱(chēng)：超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究任務(wù)內(nèi)容（包括內(nèi)容、計(jì)劃、時(shí)間安排、完成工作量與水平具體要求） 榛蘑，生長(zhǎng)在針闊葉樹(shù)的干基部、代根、倒木及埋在土中的枝條上，主要分布在我國(guó)東北地區(qū)，是一種我

2、國(guó)特有的食用菌。榛蘑肉質(zhì)鮮美，而且富含蛋白質(zhì)、多糖及多種維生素和礦物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有極高的食用價(jià)值。榛蘑還有著重要的藥用價(jià)值，其多糖成分是一種能夠控制細(xì)胞的分裂分化和調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)衰老的活性多糖，具有抗氧化、抗輻射、促進(jìn)造血、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等藥理作用。1.試驗(yàn)內(nèi)容（1）取野生榛蘑，洗凈、干燥、粉碎、過(guò)篩后，制得實(shí)驗(yàn)所需榛蘑粉。（2）采用苯酚硫酸比色法，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而測(cè)定多糖含量。（3）采用傳統(tǒng)水提法，原料經(jīng)浸提、過(guò)濾、濃縮、醇沉、抽濾等操作后，測(cè)定吸光值，計(jì)算多糖得率。（4）采用超聲波法，提取榛蘑多糖。分別對(duì)料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間4個(gè)因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果，進(jìn)行正交試驗(yàn)，求得超聲波法提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。（5）采用超聲波-酶聯(lián)合提取法，在提取液中加入纖維素酶，經(jīng)酶解后，在超聲波法最佳工藝條件下超聲處理，提取多糖。分別對(duì)加酶率、酶解時(shí)間、酶解溫度、pH為因素，進(jìn)行單因素試驗(yàn)。根據(jù)結(jié)果，進(jìn)行正交試驗(yàn)，得到超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖的最佳工藝條件。（6）采用酶法提取多糖，根據(jù)超聲波酶聯(lián)合提取法最佳工藝條件，只進(jìn)行酶解，不超聲處理，計(jì)算多糖得率。2.時(shí)間安排2012.02.012012.02.26 文獻(xiàn)查閱，方案設(shè)計(jì)2012.02.272011.03.03 準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器，購(gòu)買(mǎi)試驗(yàn)材料2012.03.042012.03.07 繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

4、2012.03.082012.03.20 傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖2012.03.212012.04.11 超聲波法提取榛蘑多糖條件優(yōu)化2012.04.122012.05.10 超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖條件優(yōu)化2012.05.112012.05.12 酶法提取榛蘑多糖2012.05.132012.05.22 數(shù)據(jù)處理并撰寫(xiě)、修改論文2012.05.232012.06.10 準(zhǔn)備答辯其中： 參考文獻(xiàn)篇數(shù)： 25篇以上（其中，外文文獻(xiàn)3篇以上） 論 文 字 數(shù)： 1.1萬(wàn)字以上專(zhuān)業(yè)負(fù)責(zé)人意見(jiàn)簽名：年 月 日超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑粗多糖工藝優(yōu)化摘 要 本試驗(yàn)以榛蘑為原料，研究其多糖的提取工藝，通過(guò)傳

5、統(tǒng)水提法、超聲波法、酶法、超聲波酶聯(lián)合提取法四種方法對(duì)榛蘑多糖進(jìn)行提取，根據(jù)單因素和正交試驗(yàn)的結(jié)果，得到最佳的提取工藝條件。 結(jié)果如下：傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖的得率只有5.42%；酶法提取榛蘑多糖的得率為10.21%；超聲波法提取榛蘑多糖的最佳工藝條件為料液比1:40，超聲時(shí)間40min，超聲功率300W，超聲溫度60，多糖得率為9.67%；超聲波酶法聯(lián)合提取的最佳工藝條件為料液比1:40，加酶率2.2%，pH5.0，酶解溫度50，酶解時(shí)間90min，超聲功率300W，超聲時(shí)間40min，超聲溫度60，此時(shí)的多糖得率為16.53%。 結(jié)論為超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖提取率是傳統(tǒng)水提法的3.05

6、倍，超聲波法的1.71倍，酶法的1.62倍，具有明顯的優(yōu)勢(shì)。關(guān)鍵詞:榛蘑多糖；超聲波；酶法；提??；工藝優(yōu)化Study on Combined Ultrasonic and Enzyme Hydrolysis Extraction of polysaccharide from Armillaria melleaAbstract The optimum conditions for extraction of polysaccharides from Armillaria mellea were studied. The extraction was assisted with water bat

7、h, ultrasonic wave,enzyme technology and ultrasonic wave combined with enzymete chnology. The process parameters were optimized by single factor test and orthogonal experiment to obtain the optimum extraction conditions.The extraction percent of soluble polysaccharides from Arimillaria mellea with t

8、raditional water bath method is 5.42%.The optimum extraction conditions of ultrasonic wave method areas follows solid-liquid ratio is 1:40,ultrasonic power is 300W, the temperature is 60and the extraction time is 40 min.Under these conditions, the extraction percent of polysaccharides from Arimillar

9、ia mellea is 9.67%.The optimum extraction conditions of ultrasonic wave combined with enzyme method are as follows: solid-liquid ratio is 1:40, ultrasonic power is 300W, temperature is 60, the extraction time is 40 min, the rateof enzyme is 2.2%, the value of pH is 5.0,the temperature of enzyme hydr

10、olysisis 50,the time of enzyme hydrolysis is 90min. Under these conditions, the extraction percent of polysaccharides from Arimillaria melleais16.53%;The extraction percent of soluble polysaccharides from Arimillaria mellea with enzyme method is 10.21%. According to validation experiment, compared w

11、ith traditional methods, ultrasonic wave combined with enzyme method produced higher extraction percent of soluble polysaccharides(the 3.05 times of the traditional water bath extraction, 1.71 times of the ultrasonic wave method extraction, 1.62 times of the enzyme method extraction ,respectively).

12、Key words：Armillaria mellea; polysaccharides; ultrasonic wave; enzyme hydrolysis;extraction technology.目 錄摘要Abstract1 緒論11.1榛蘑多糖研究現(xiàn)狀分析11.1.1榛蘑概述11.1.2榛蘑的化學(xué)成分11.1.3榛蘑的功能及作用11.1.4榛蘑多糖的生理功能21.2常用的多糖提取技術(shù)31.2.1傳統(tǒng)水提法31.2.2超臨界流體萃取41.2.3微波萃取41.2.4超聲波萃取技術(shù)41.2.5酶法提取技術(shù)41.3本實(shí)驗(yàn)的目的和意義51.4本試驗(yàn)的內(nèi)容及技術(shù)路線52 材料和方法62.1 試

13、驗(yàn)器材62.1.1 試驗(yàn)儀器62.1.2 試驗(yàn)材料62.2 試驗(yàn)方法72.2.1榛蘑粉的制備72.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制72.2.3傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖72.2.4超聲波法提取榛蘑多糖72.2.5超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖82.2.6酶法提取榛蘑多糖93 結(jié)果與分析103.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制103.2傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖103.3超聲波法提取榛蘑多糖113.3.1單因素試驗(yàn)結(jié)果113.3.2超聲波法提取榛蘑多糖工藝優(yōu)化133.3.3超聲波法提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗(yàn)證143.4超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖143.4.1單因素試驗(yàn)結(jié)果143.4.2超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝優(yōu)

14、化163.4.3超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗(yàn)證173.4.4酶法提取榛蘑多糖183.4.5四種提取方法所得榛蘑多糖得率比較184 結(jié)論19參考文獻(xiàn)致謝超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝研究1 緒論1.1榛蘑多糖研究現(xiàn)狀分析1.1.1榛蘑概述 榛蘑為真菌植物門(mén)真菌蜜環(huán)菌的子實(shí)體。一般生長(zhǎng)在淺山區(qū)的榛柴崗上，所以得名“榛蘑”。其外型呈傘狀，土黃色，廣泛分布在我國(guó)東北地區(qū)，被稱(chēng)為“東北第四寶” 1。然而榛蘑是一種野生菌類(lèi)，人工無(wú)法培育。在人們追求健康飲食的今天，榛蘑由于其肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富及出色的藥用功能，受到越來(lái)越多人的歡迎2。1.1.2榛蘑的化學(xué)成分 榛蘑中富含大量多糖，除多糖外，榛

15、蘑中蛋白質(zhì)含量達(dá)44%，含有18種氨基酸及鉀、鈣、鎂、鐵、鋅等礦物質(zhì)元素，維生素B1、B2和維生素C含量也較高3。1.1.3榛蘑的功能及作用 榛蘑不僅是食材，還可入藥，自古以來(lái)一直是一種中醫(yī)藥材，具有清目、利肺、益腸胃及活血化瘀，強(qiáng)筋健骨的功效。常被人用于治療羊癲風(fēng)，腰酸腿疼，佝倭病等；經(jīng)常食用榛蘑，可以保護(hù)視力，預(yù)防視力失常。經(jīng)常食用可加強(qiáng)肌體免疫力，益智開(kāi)心，延年輕身等作用，還可以防止皮膚干燥，預(yù)防某些心腦血管疾病和呼吸道及消化道疾病4。 利用榛蘑與天麻的共生關(guān)系，還可用榛蘑培育藥材天麻，從而提高天麻的產(chǎn)量5。1.1.4榛蘑多糖的生理功能(1)榛蘑多糖的免疫增強(qiáng)作用 大量文獻(xiàn)報(bào)道榛蘑多糖具

16、有免疫增強(qiáng)作用，能增強(qiáng)小鼠的免疫能力、促進(jìn)生長(zhǎng)，但對(duì)其作用機(jī)理闡述得并不完全一致。李延平等6研究表明，榛蘑多糖通過(guò)刺激骨髓細(xì)胞使幼稚細(xì)胞增多，分化成成熟細(xì)胞，致使分葉核細(xì)胞增多，保護(hù)骨髓造血系統(tǒng)，拮抗環(huán)磷酰胺對(duì)骨髓細(xì)胞的損傷，其作用結(jié)果呈劑量依賴(lài)性關(guān)系。Li YP7等在使用昆明純種小鼠研究榛蘑多糖時(shí)發(fā)現(xiàn)，榛蘑多糖對(duì)環(huán)磷酰胺引起的小鼠骨髓細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。王惠國(guó)等8研究表明，給小鼠腹腔注射AMP具有增加小鼠吞噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)脾臟T 淋巴細(xì)胞的增殖能力，提高小鼠血清溶血素水平的作用。于敏等9研究結(jié)果表明，AMP 能抵抗環(huán)磷酰胺作用前期白細(xì)胞數(shù)下降和環(huán)磷酰胺作用后期白細(xì)胞數(shù)過(guò)分升高，一定劑

17、量的AMP 能顯著降低肝臟重量，表明其對(duì)免疫器官有一定程度的影響。AMP能顯著增強(qiáng)T 細(xì)胞介導(dǎo)遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，說(shuō)明可增強(qiáng)小鼠的體液免疫反應(yīng)及細(xì)胞免疫反應(yīng)能力10。另有報(bào)道AMP能在體外顯著增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的作用11，并可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO且呈現(xiàn)一定的濃度相關(guān)性，在高濃度時(shí)，對(duì)巨噬細(xì)胞分泌IL1有一定的促進(jìn)分泌作用。AMP能增強(qiáng)機(jī)體的特異性和非特異性免疫功能，可作為免疫增強(qiáng)劑。綜合上述，榛蘑多糖是通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞以及免疫分子等多方面發(fā)揮其正向免疫調(diào)節(jié)作用，具有較好的藥用價(jià)值，蜜環(huán)菌多糖是否可作為骨髓細(xì)胞的保護(hù)劑，抗放射，抗化學(xué)藥物對(duì)骨髓造細(xì)胞損傷，是值得深入研究的課題。(2)榛蘑

18、多糖的抗腫瘤作用 經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究可知，榛蘑多糖亦具有抗腫瘤的生理活性。實(shí)驗(yàn)中，將肝癌細(xì)胞SMMC 7721進(jìn)行體外培養(yǎng)，研究AMP的抗腫瘤作用。在倒置顯微鏡下觀察AMP以0.05mg/mL、0.10mg/mL 及0.20mg/mL 三個(gè)濃度給藥48h后，肝癌細(xì)胞SMMC7721的形態(tài)學(xué)變化; 采用MTT法檢測(cè)蜜環(huán)菌多糖對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7221的增殖抑制作用; 采用Brandford 法測(cè)定AMP對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7221重要蛋白合成的影響;采用免疫細(xì)胞化學(xué)法分析其對(duì)凋亡相關(guān)蛋白bcl2表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，榛蘑多糖可使細(xì)胞間隙增大，懸浮細(xì)胞增多，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖; 同時(shí)在

19、給藥濃度為0.10mg/ml和0.20mg /mL時(shí)，能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成; 榛蘑多糖還能夠下調(diào)凋亡抑制蛋白bcl2的表達(dá)水平，此實(shí)驗(yàn)指出，榛蘑多糖是通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞增殖以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抗腫瘤作用的。榛蘑多糖的抗腫瘤作用不僅在體外實(shí)驗(yàn)中得到驗(yàn)證，也體現(xiàn)在化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)紅外光譜檢測(cè)，榛蘑多糖具有型糖苷鍵，這種構(gòu)效關(guān)系的多糖具有抗腫瘤的藥理活性，并且在對(duì)移植S180小鼠進(jìn)行在體抗腫瘤實(shí)驗(yàn)，也證實(shí)其抗腫瘤的作用。(3)榛蘑多糖的降糖作用 研究發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖(AMP1) 能使正常小鼠的糖耐量增強(qiáng)。能使四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖顯著降低。同時(shí)發(fā)現(xiàn)AMP1對(duì)胰島細(xì)胞的分

20、泌也有一定的促進(jìn)作用12。操玉平等13通過(guò)培養(yǎng)大鼠胰島素瘤細(xì)胞(INS1) ，并以四氧嘧啶(AXN) 損傷細(xì)胞，培養(yǎng)液中加入不同濃度的AMP1，檢測(cè)其對(duì)INSl細(xì)胞葡萄糖刺激的胰島素和C 肽分泌量的影響，并檢測(cè)細(xì)胞存活率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在一定濃度范圍內(nèi)AMPl對(duì)AXN損傷的INSl細(xì)胞分泌胰島素和C肽均具有一定的促進(jìn)作用，尤其是在葡萄糖濃度為16.7mmol/L時(shí)，效果明顯; 因此可以得出AMPl可減少AXN對(duì)INSl細(xì)胞的損傷，增加INSl細(xì)胞的存活率。陸軍等14研究發(fā)現(xiàn)AMP1能使INS1細(xì)胞NOS活性降低，NO和MDA含量減少，同時(shí)使SOD的活性增強(qiáng)，增加了GSH的含量，因此在一定濃度范圍的

21、AMP1對(duì)葡萄糖刺激下INS1細(xì)胞的胰島素分泌的促進(jìn)作用，可能與AMPl能夠增加細(xì)胞清除自由基能力有關(guān)。AMP對(duì)血糖的作用機(jī)制尚不明確。而榛蘑多糖可在較短時(shí)間內(nèi)大量獲得，多糖含量高，便于對(duì)榛蘑多糖關(guān)于血糖影響的研究。(4)榛蘑多糖的抗氧化及抗衰老作用 榛蘑多糖的抗氧化抗衰老作用近些年來(lái)取得較大的研究進(jìn)展?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)一部分糖類(lèi)復(fù)合物可通過(guò)清除自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、調(diào)節(jié)免疫功能、調(diào)節(jié)核酸和蛋白質(zhì)代謝等途徑起到抗氧化作用從而延緩機(jī)體衰老。榛蘑多糖作為蜜環(huán)菌的主要成分之一亦被發(fā)現(xiàn)有此項(xiàng)作用，在研究培養(yǎng)藥用型真菌蜜環(huán)菌抗氧化作用活性時(shí)，發(fā)現(xiàn)蜜環(huán)菌勻漿提取物榛蘑多糖具有強(qiáng)大的清除自由基和抗脂質(zhì)過(guò)氧化作

22、用15。在研究蜜環(huán)菌誘導(dǎo)細(xì)胞間粘附因子ICAM1的表達(dá)能力時(shí)，發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖在誘導(dǎo)ICAM1和THP1細(xì)胞中的mRNA的表達(dá)存在劑量和時(shí)間依賴(lài)關(guān)系，在人體單核細(xì)胞中，榛蘑多糖誘導(dǎo)ICAM1 的表達(dá)是通過(guò)ROS/JNK信號(hào)通路去激活轉(zhuǎn)錄因子NFKB、AP1、SP1和STAT1的16。沈明花17等研究結(jié)果顯示榛蘑多糖對(duì)羥基自由基和二苯基苦味?；诫戮哂休^顯著的清除能力，甚至可以提高肝組織中的SOD、CAT、GSHPx活性并且抑制MDA 生成，因而具有明顯的抗氧化作用。虞磊18等從自由基代謝的角度探討了蜜環(huán)菌菌索多糖的抗衰老機(jī)制，通過(guò)觀察D半乳糖致衰小鼠模型的跳臺(tái)法和迷宮法學(xué)習(xí)記憶能力，測(cè)定衰老小鼠部

23、分組織中的SOD、MDA、NO、GSHPx，發(fā)現(xiàn)榛蘑菌索多糖可通過(guò)調(diào)節(jié)生物的機(jī)體免疫功能或者清除自由基來(lái)延緩機(jī)體組織衰老，觀察果蠅的壽命發(fā)現(xiàn)蜜環(huán)菌菌索多糖亦可顯著延長(zhǎng)果蠅的平均壽命和提高果蠅的最長(zhǎng)壽命。丁誠(chéng)實(shí)19等通過(guò)觀察榛蘑殼聚糖對(duì)D半乳糖致衰老小鼠的影響和對(duì)果蠅壽命的影響，測(cè)定受試小鼠血清中的SOD活性、MDA的含量以及分析小鼠記憶學(xué)習(xí)行為等可以得出榛蘑殼聚糖有顯著抗衰老作用。(5)榛蘑多糖的抗突變作用 張穎等人在研究榛蘑多糖對(duì)低能離子束誘變作用的恢復(fù)效應(yīng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)從蜜環(huán)菌Am991菌株人工發(fā)酵菌體內(nèi)分離出來(lái)的榛蘑多糖Aml，誘變?cè)礊榈湍躈+離子束，受試動(dòng)物為黑腹果蠅，并檢測(cè)Aml對(duì)離子束誘

24、變果蠅的恢復(fù)功能。此實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，1.0%和l.5%濃度的榛蘑多糖Aml 可以使受試果蠅蛹的孵出率提高，當(dāng)代及F2代果蠅突變率降低，同時(shí)染色體水平上的檢測(cè)也證實(shí)了此結(jié)論。因此得出榛蘑多糖對(duì)于低能離子束誘變具有一定的防護(hù)作用20。(6)其他作用 榛蘑多糖具有鎮(zhèn)靜作用，能明顯減少小鼠自發(fā)活動(dòng)，并能使環(huán)己烯巴比妥鈉或戊巴比妥鈉引起的小鼠睡眠時(shí)間顯著延長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)榛蘑多糖可以并通過(guò)抑制NO、INOS、COX2和THP1細(xì)胞中的活性因子的表達(dá)，而達(dá)到抗炎作用21。在臨床上榛蘑多糖還用于治療肢麻、佝僂病、頸椎病、風(fēng)濕病、腰腿酸痛，可以強(qiáng)壯筋骨。此外，榛蘑多糖對(duì)癲癇、耳鳴、眩暈癥也有一定療效22。1.2常用

25、的多糖提取技術(shù)1.2.1傳統(tǒng)水提法 水作為溶劑提取多糖是最常使用的一種方法，可以用熱水提取，也可以用冷水浸泡。水提取多糖的多數(shù)是中性多糖23。一般多糖提取大多數(shù)采用熱水提取，得到了多糖可以直接或離心去除不溶物，或利用多糖不溶于高含量乙醇的性質(zhì)，用高濃度酒精沉淀凈化多糖。1.2.2超臨界流體萃取 超臨界流體萃取(SFE)是以某一介質(zhì)(CO2、H2O、N2)作為萃取劑，在其臨界溫度和臨界壓力之上的條件下，從液體或固體物料中萃取出待分離組分的一種提取分離技術(shù)。其特點(diǎn)是產(chǎn)物純度高，質(zhì)量好，特別適用于熱敏性原料，但提取率較溶劑萃取法低23。廣泛應(yīng)用于玫瑰精油、不飽和脂肪酸等植物中液態(tài)物質(zhì)和芳香物質(zhì)的提取

26、。1.2.3微波萃取 微波輔助萃取，是使用微波加熱接觸樣溶劑，化合物從要求的樣品分離，進(jìn)入一種溶劑的過(guò)程。廣泛應(yīng)用于植物活性成分，如多糖提取23。1.2.4超聲波萃取技術(shù) 超聲波是指頻率為15KHz60MHz之間的一種高頻彈性機(jī)械波，通常需要介質(zhì)如空氣、水等進(jìn)行傳播。超聲提取法的機(jī)理是分成熱機(jī)理、力學(xué)機(jī)制，超生汽蝕機(jī)理。分散在樣本和溶劑的之間產(chǎn)生的空化效應(yīng)，小氣泡的形成，增長(zhǎng)和爆破壓縮，產(chǎn)生5000的高溫和50MPa的局部高壓，從而使固體樣品分散與溶液產(chǎn)生高速碰撞，增大樣品與溶劑之間的接觸面積，從而加速植物細(xì)胞內(nèi)目標(biāo)物轉(zhuǎn)移到溶劑中，提高傳質(zhì)速率23。是提取植物（中藥）中活性成分最常用的方法之一

27、。1.2.4.1超聲波萃取的特點(diǎn)：（1）常溫萃取。超聲波可在常溫條件下進(jìn)行萃取，適合一些熱不穩(wěn)定的植物活性成分的萃取。（2）常壓萃取。無(wú)需高壓，對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器及玻璃器皿的要求較低，操作簡(jiǎn)單易行。（3）萃取效率高。由于超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈的空化作用，大大增加了萃取劑與物料的接觸面積，使用超生比技術(shù)兩小時(shí)左右即可達(dá)到最佳提取率，大大縮短了萃取時(shí)間。（4）適用性廣。幾乎適合所有的植物性和動(dòng)物性材料。（5）節(jié)能環(huán)保。超聲波可在常溫、常壓條件下萃取，且萃取時(shí)間短，萃取劑消耗量也較低，因此降低能耗。（6）其他優(yōu)點(diǎn)，如藥材原料處理量大，雜質(zhì)少，有效成分易于分離、凈化。萃取工藝成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著。1.2.5酶法

28、提取技術(shù) 植物細(xì)胞壁是由纖維素、半纖維素、木質(zhì)素、果膠、物質(zhì)構(gòu)成，通常提取劑添加適量的纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶和分解的細(xì)胞壁,半纖維素、果膠、破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu),加速細(xì)胞的有效成分溶出率，提高提取效率，縮短提取時(shí)間23。適用于所提取的多糖。1.3本試驗(yàn)的目的和意義 我國(guó)榛蘑資源豐富，廣泛生長(zhǎng)于我國(guó)東北地區(qū)。榛蘑肉質(zhì)鮮美，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，富含蛋白質(zhì)、多糖及多種維生素和礦物質(zhì)，具有極高的食用價(jià)值。榛蘑還有著重要的藥用價(jià)值，其多糖成分具有抗氧化、抗衰老、抗輻射、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力、降血糖等藥理作用，在食品行業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用前景，所以榛蘑多糖引起了許多人的關(guān)注，不少科研工作者開(kāi)始研究榛蘑多糖的提取純

29、化及各種理化性質(zhì)。目前榛蘑多糖的提取多采用傳統(tǒng)水提法，提取率偏低，所以本實(shí)驗(yàn)通過(guò)進(jìn)行傳統(tǒng)水提法、超聲波法、酶法和超聲波酶聯(lián)合提取法提取榛蘑多糖，從而得到最佳工藝條件，提高榛蘑多糖的提取率，為創(chuàng)建高效、經(jīng)濟(jì)的多糖提取工藝提供參考，為今后榛蘑多糖精深產(chǎn)品加工提供一定的理論和技術(shù)支持。 1.4本試驗(yàn)的內(nèi)容及技術(shù)路線 榛蘑粉傳統(tǒng)水提 超聲波法 超聲波-酶聯(lián)合法 酶法 加酶率酶解溫度酶解時(shí)間 PH 料液比超聲功率超聲溫度超聲時(shí)間 回流浸提 超聲處理 濃縮除蛋白離心醇沉榛蘑多糖計(jì)算提取率2 材料和方法2.1 試驗(yàn)器材2.1.1 試驗(yàn)儀器超聲波細(xì)胞清洗器KQ500DE 昆山超聲波儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋D

30、K-S12上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司臺(tái)式低速離心機(jī)TDL-5W湖南星科科學(xué)儀器有限公司恒溫水浴搖床HZS-HA哈爾濱東聯(lián)電子技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司循環(huán)水多用真空泵SHB-3鄭州杜甫儀器廠旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE- 52A上海亞榮生化儀器廠中草藥粉碎機(jī)FW135天津市泰斯特儀器有限公司可見(jiàn)光分光光度計(jì)722S上海精密科學(xué)儀器有限公司臺(tái)秤YP2001N上海精密科學(xué)儀器有限公司分析天平JA-2003上海良品儀器儀表有限公司pH計(jì)PB-10Sartorius有限公司電冰箱BCD-215KSHaier有限公司2.1.2 試驗(yàn)材料榛蘑購(gòu)于家樂(lè)福超市纖維素酶購(gòu)于美國(guó)Sigma公司苯酚分析純天津市瑞金特化學(xué)試劑有限公司濃硫酸分

31、析純北京化工廠正丁醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司鹽酸分析純北京化工廠氫氧化鈉分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司無(wú)水乙醇分析純天津市天力化學(xué)試劑有限公司三氯甲烷分析純天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠2.2 試驗(yàn)方法2.2.1榛蘑粉的制備 將榛蘑洗凈、晾曬后，置于烘箱中，80下恒溫烘干后用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)80目篩，得到榛蘑粉。2.2.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 采用苯酚硫酸比色法測(cè)定多糖含量24。精密稱(chēng)取干燥恒質(zhì)量的分析純葡萄糖0.05 g，加水定容至100mL，得到質(zhì)量濃度為500 g/mL 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，精確吸取0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，分別置于10 mL容量

32、瓶中，補(bǔ)加蒸餾水至2 mL，加入5%苯酚1 mL，混合均勻后快速加入98%濃硫酸7 mL，搖勻后室溫放置30 min，在波長(zhǎng)490nm下測(cè)定吸光值A(chǔ)。以吸光值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，以葡萄糖的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.2.3傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖 根據(jù)邵信儒、孫海濤等人用熱水浸提法提取山榛蘑多糖得到的最佳工藝條件，取1.00g榛蘑粉， 裝瓶備用。加入25ml蒸餾水，在95下回流浸提5h，回流結(jié)束后收集濾液； 相同條件下，再將濾渣洗入圓底燒瓶二次浸提， 浸提3次后，合并濾液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮（原料重：濃縮液=1:2） ，向濃縮液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，按照濾液體積的1/4量加入Sevag試劑（氯

33、仿:丁醇=4:1），直到?jīng)]有乳白色變性蛋白質(zhì)析出后，在150r/min下振蕩20min，4000r/min下離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。2.2.3.1榛蘑多糖質(zhì)量濃度的測(cè)定及得率的計(jì)算 從得到的榛蘑多糖中取0.01g，定容至100 mL 后準(zhǔn)確吸取200 L 于10 mL 容量瓶中，補(bǔ)加蒸餾水至2 mL，加入5%苯酚1 mL，混合均勻后快速加入98%濃硫酸7 mL，搖勻后室溫放置30 min，以不含樣品的溶液作為空白，于490 nm測(cè)定吸光度，根據(jù)葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程可計(jì)算出相應(yīng)的多糖質(zhì)量濃度

34、。同時(shí), 可根據(jù)多糖得率公式計(jì)算出榛蘑多糖的得率： 多糖得率(%)=(50 ×V × C × f × W2 /W3× W1 )×100%式中: W1：稱(chēng)取榛蘑粉的質(zhì)量( g ) W2：由W1 提取的榛蘑多糖的質(zhì)量( g ) W3：從W2 中稱(chēng)取的用于分析測(cè)定的榛蘑多糖質(zhì)量( g ) V：溶解W3 定容后的體積( L ) f ：多糖的校正系數(shù), f= 0.9 C：由回歸方程計(jì)算所得多糖的質(zhì)量濃度( g/L )。 實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，得到傳統(tǒng)水提法的多糖得率。2.2.4超聲波法提取榛蘑多糖 準(zhǔn)確稱(chēng)取榛蘑粉1.00g，按一定料液比加入蒸餾水，置于

35、超聲波清洗機(jī)中于一定溫度下作用一定時(shí)間，得到的提取液抽濾，向?yàn)V液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，在 150r/min下振蕩20min, 離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。按2.2.3.1的方法測(cè)定榛蘑多糖質(zhì)量濃度并計(jì)算得率，每個(gè)處理重復(fù)3 次。2.2.4.1超聲波法提取榛蘑多糖單因素實(shí)驗(yàn)分別對(duì)料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間4個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn)26.（1）料液比對(duì)榛蘑多糖得率的影響 在超聲溫度60，超聲波功率250W，超聲30min的條件下，分別配制料液比為1:30、1:35、1:40、1:45、1

36、:50，提取多糖，計(jì)算得率。（2）超聲時(shí)間對(duì)榛蘑多糖提取率的影響 在超聲波功率250W，料液比1:40，超聲溫度60的條件下，分別超聲10、20、30、40、50min，提取多糖，計(jì)算得率。（3）超聲波功率對(duì)榛蘑多糖提取率的影響 在料液比1:40，超聲溫度60，超聲30min的條件下，分別設(shè)定超聲波功率為200、250、300、350、400W，提取多糖，計(jì)算得率。（4）超聲溫度對(duì)榛蘑多糖提取率的影響 在超聲波功率250W，料液比1:40，超聲30min的條件下，分別設(shè)超聲溫度為40、50、60、70、80，提取多糖，計(jì)算得率。以上每個(gè)處理均重復(fù)3 次。2.2.4.2根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，選用正

37、交表L9(34)研究超聲波提取榛蘑多糖的最佳條件 超聲波法提取榛蘑多糖正交因素水平表L9(34)水平因素A料液比B時(shí)間/minC功率/WD溫度/1 2 3 2.2.4.3超聲波法提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn) 取1.00g榛蘑粉，根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件，提取多糖，重復(fù)3次，得到最佳條件下的多糖得率。與正交試驗(yàn)中各條件下得到的得率比較，觀察該值是否最高。2.2.5 超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖 取1.00g榛蘑粉，按超聲波法提取榛蘑多糖正交試驗(yàn)得到的最佳料液比加入一定量的水，再向溶液中加入一定量的纖維素酶，調(diào)節(jié)溶液的pH為某一固定的值，并在一定溫度下水浴一定時(shí)間后，進(jìn)行超聲處理，其中超聲

38、的功率、時(shí)間、溫度參照超聲波法提取榛蘑多糖得到的最佳工藝條件，對(duì)得到的提取液抽濾，向?yàn)V液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，在150r/min下振蕩20min, 離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。按2.2.3.1的方法測(cè)定榛蘑多糖質(zhì)量濃度并根據(jù)公式計(jì)算得到多糖得率27。(1)加酶率對(duì)榛蘑多糖得率的影響 在溫度為50、pH 4.0，酶解時(shí)間為90 min 條件下，按照加酶率為1.0%、1.5%、2.0%、2.5%、3.0%，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計(jì)算得率。（2）酶解時(shí)間對(duì)榛蘑多糖得率的影響 加酶率為2.0%，溫度

39、為50，pH 4.0條件下，分別酶解30、60、90、120、150 min，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計(jì)算得率。（3）酶解溫度對(duì)榛蘑多糖得率的影響 在pH4.0時(shí)，加酶率為2.0%，酶解時(shí)間為90 min 條件下，分別設(shè)酶解溫度為40、45、50、55、60，再經(jīng)超聲處理提取多糖，計(jì)算得率。（4）pH對(duì)榛蘑多糖得率的影響 在50，加酶率為2.0%，酶解時(shí)間為90 min 的條件下，分別調(diào)節(jié)pH2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ，再經(jīng)超聲處理進(jìn)行多糖提取，計(jì)算得率。以上每個(gè)處理均重復(fù)3 次。2.2.5.2根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用正交表L9(34)研究超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖的最佳條件28超

40、聲波-酶法聯(lián)合法提取榛蘑多糖正交因素水平表L9(34)水平因素A加酶率/%B時(shí)間/minC溫度/DpH1 2 3 2.2.5.3超聲波酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗(yàn)證試驗(yàn) 取1.00g榛蘑粉，根據(jù)正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件進(jìn)行酶解，再經(jīng)超聲波處理后得到提取液，重復(fù)3次，得到最佳條件下的多糖得率。與正交試驗(yàn)中各條件下得到的得率比較，觀察該值是否最高。2.2.6酶法提取榛蘑多糖 根據(jù)超聲波酶法最佳工藝條件中的酶解條件，只進(jìn)行酶解，提取液不再用超聲波處理，進(jìn)行抽濾、除蛋白、離心、醇沉等操作后，得到榛蘑多糖，按2.2.3.1的方法測(cè)定榛蘑多糖質(zhì)量濃度并根據(jù)公式算出多糖得率。試驗(yàn)重復(fù)三次，得到酶法提

41、取榛蘑多糖的得率。3 結(jié)果與分析3.1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將葡萄糖配制成不同濃度的溶液，采用苯酚-硫酸法測(cè)定其在490nm處的吸光值，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)繪制曲線，得到圖3-1 圖3-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，葡萄糖濃度在0g/mL-30g/mL區(qū)間，呈線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為 0.998?；貧w方程為：y = 0.057x-0.008，R2=0.998 x為葡萄糖質(zhì)量濃度，g/mL y為吸光值3.2傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖 傳統(tǒng)水提法提取榛蘑多糖，加入25mL蒸餾水， 在95下回流浸提5h，回流結(jié)束后收集濾液;；相同條件下， 再將濾渣洗入圓底燒瓶二次浸提， 浸提3次后，合并濾

42、液并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮(原料重:濃縮液= 1:2) ，向濃縮液內(nèi)加入Sevag試劑除蛋白，按照濾液體積的1/4量加入Sevag試劑(氯仿:丁醇= 4:1)，直到?jīng)]有乳白色變性蛋白質(zhì)析出后，在 150r/min下振蕩20min，離心10min，取上清液，加入3倍體積的95%乙醇沉淀多糖，再離心10min，將得到的沉淀用無(wú)水乙醇洗滌，干燥，得到榛蘑多糖。按2.2.3.1的方法測(cè)定榛蘑多糖質(zhì)量濃度并根據(jù)多糖得率公式計(jì)算得到榛蘑多糖的得率為5.42%。3.3超聲波法提取榛蘑多糖3.3.1單因素試驗(yàn)結(jié)果3.3.1.1料液比對(duì)榛蘑多糖得率的影響固定超聲波功率250W，溫度60，超聲時(shí)間30min，改變料液比

43、。圖3-2不同料液比下的榛蘑多糖得率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3-2所示：隨著料液比的增大，多糖得率先大幅增加，料液比為1:40時(shí)多糖得率達(dá)到最大，之后多糖得率緩慢下降，添加溶劑的量過(guò)多時(shí)，超聲波被溶劑吸收較多，作用于料液的相對(duì)減少，從而影響榛蘑多糖的析出。料液比太大不利于對(duì)多糖的提取。因此，本試驗(yàn)選用料液比1:40比較適宜。3.3.1.2提取時(shí)間對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定料液比1：40，溫度60，超聲功率為250W，改變超聲時(shí)間。圖3-3不同提取時(shí)間下榛蘑多糖得率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3-3所示：隨著超聲時(shí)間的增加，多糖得率不斷升高，在時(shí)間達(dá)到30min時(shí)，得率達(dá)到最大，之后略有下降趨勢(shì)?？赡苁浅暡ǖ臋C(jī)械剪切

44、作用會(huì)使一部分多糖降解，導(dǎo)致得率降低。所以多糖提取時(shí)超聲時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，本試驗(yàn)選用超聲30min，得率最高。3.3.1.3超聲波功率對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定料液比1:40，溫度60，提取時(shí)間30min，改變超聲功率。圖3-4不同超聲功率下榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖3-4所示：隨著超聲波功率的不斷提高，多糖得率不斷升高，在功率達(dá)到300W時(shí)，得率達(dá)到最大，之后隨著功率的提高得率呈下降趨勢(shì)。因?yàn)閺?qiáng)超聲波作用可能導(dǎo)致多糖糖苷鍵斷裂, 造成榛蘑多糖降解為單糖或小分子還原糖，使得率下降，所以提取功率不宜太高。所以本試驗(yàn)中，超聲功率控制在300W較好。3.3.1.4超聲溫度對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定超聲波

45、功率250W，提取時(shí)間30min，料液比1:40，改變溫度。圖3-5不同溫度下榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖3-3所示：隨著溫度的升高，多糖得率緩慢提高，在60時(shí)，得率達(dá)到最大，之后略微下降。說(shuō)明過(guò)高的溫度不利于多糖的提取，在植物中多糖多與蛋白質(zhì)結(jié)合為糖蛋白。溫度高使蛋白質(zhì)變性，不利于糖蛋白的析出。所以本試驗(yàn)中，把超聲溫度控制在60較為適宜。3.3.2超聲波法提取榛蘑多糖工藝優(yōu)化根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果，得出對(duì)多糖得率影響突出的相關(guān)因素，主要影響因素為料液比、超聲溫度、超聲波功率、超聲時(shí)間。因此，為了更好地考察提取的最優(yōu)條件，綜合各個(gè)單因素，從而進(jìn)一步設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，各組試驗(yàn)均按照常規(guī)試驗(yàn)方法進(jìn)行，通過(guò)

46、測(cè)定各組試驗(yàn)的多糖得率，經(jīng)過(guò)直觀分析，最后得出最佳的提取水平組合。由此制定出3-1的分析因素與水平表。表 3-1 分析因素與水平水平因素A料液比B超聲時(shí)間/minC功率/WD超聲溫度/11:35202505521:40303006031:454035065根據(jù)表3-1進(jìn)行正交試驗(yàn)，得到結(jié)果如下 表3-2正交試驗(yàn)直觀分析表序號(hào)A料液比B超聲時(shí)間/min C超聲功率/WD超聲溫度/得率/%11:3520250559.0221:3530300609.4931:3540350659.3841:4020300659.3751:4030350559.5861:4040250609.5171:4520350

47、608.9481:4530250659.0991:4540300559.30K19.2979.1109.2079.300K29.4879.3879.3879.313K39.1109.3979.3009.280R0.3770.2870.1800.033表3-3方差分析表因素偏差平方和自由度F比F臨界值料液比0.21322.0144.460時(shí)間0.15921.5044.460功率0.04920.4634.460溫度0.00220.0194.460誤差0.428 根據(jù)表3-2、3-3中數(shù)據(jù)，極差R表明，超聲波法提取榛蘑多糖正交實(shí)驗(yàn)中，各因素對(duì)多糖提取率影響程度大小為：料液比 > 提取時(shí)間 &g

48、t; 超聲功率 > 溫度。根據(jù)K值分析可得，最佳工藝條件為A2B3C2D2 ，即料液比為1:40，超聲時(shí)間為40min，超聲功率為300W，超聲溫度為60。3.3.3超聲波法提取榛蘑多糖最佳工藝條件驗(yàn)證 取1.00g榛蘑粉，加入40ml蒸餾水，在超聲波清洗機(jī)內(nèi)設(shè)定超聲溫度為60，功率為300W，超聲40min。得到提取液，經(jīng)過(guò)抽濾、除蛋白、離心、醇沉等操作，得到榛蘑多糖，再按2.2.3.1的方法測(cè)定榛蘑多糖質(zhì)量濃度并根據(jù)公式算出得率，并重復(fù)三次。最終得到的多糖得率為9.67%，高于其他條件下的得率，所以該最佳工藝條件成立。3.4超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖3.4.1單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在超聲

49、波處理之前先進(jìn)行酶解，其中超聲波條件為時(shí)間40min，料液比1:40，超聲波的固定功率為300 W，超聲溫度60。3.4.1.1加酶率對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定酶解溫度50，提取時(shí)間90min，pH 4.0，改變加酶率。圖3-6不同加酶率下的榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖3-6所示：加酶率在1.0%-2.0%時(shí)，榛蘑多糖得率隨加酶率的增大，迅速升高，當(dāng)加酶率高于2.0%后，多糖得率升高十分緩慢，并趨于平穩(wěn)。纖維素酶能夠分解纖維素，破壞植物的細(xì)胞壁，有利于多糖的提取。所以開(kāi)始時(shí)加入纖維素酶，多糖得率有顯著的提高，然而當(dāng)加酶率超過(guò)2.0%后，可能由于纖維素酶過(guò)量，底物已被酶解完全，所以得率不再迅速升高

50、，而是趨于一個(gè)穩(wěn)定的值。由于纖維素酶價(jià)格較高， 所以加酶率在2.0%左右，比較合適。3.4.1.2酶解時(shí)間對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定加酶率2.0%，酶解溫度50， pH 4.0，改變酶解時(shí)間。圖3-7不同酶解時(shí)間下的榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖3-7所示：隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，榛蘑多糖得率不斷升高，酶解90min后，趨于平穩(wěn)，不再有明顯的增加?？紤]到節(jié)約能源，所以本試驗(yàn)酶解90min左右比較合適。3.4.1.3酶解溫度對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定加酶率2.0%，提取時(shí)間90min，pH 4.0，改變酶解溫度。圖3-8不同酶解溫度下的榛蘑多糖得率 試驗(yàn)結(jié)果如圖3-8所示：隨著酶解溫度的升高，榛蘑多糖得

51、率先顯著提高，在溫度為50時(shí)，得率達(dá)到最大值，之后隨著溫度的升高，不斷下降。這是因?yàn)殚_(kāi)始時(shí)溫度上升，纖維素酶的活力增強(qiáng)，多糖得率迅速提高，而超過(guò)50后，高溫使纖維素酶的活性不斷降低，所以多糖得率急劇下降。因此本試驗(yàn)選取酶解溫度為50，比較合適。3.4.1.4pH對(duì)榛蘑多糖得率的影響 固定加酶率2.0%，提取時(shí)間90min，酶解溫度50，改變pH。圖3-9不同pH值下的榛蘑多糖得率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3-9所示：隨著pH的升高，榛蘑多糖得率不斷提高，并且在pH5.0時(shí)，得率達(dá)到最大，之后隨著pH的繼續(xù)增大，提取率開(kāi)始降低。這是纖維素酶的活性易受pH的影響，如果pH不適宜，會(huì)使酶的活性降低，所以本試驗(yàn)選擇pH5.0較合適。3.4.2超聲波-酶法聯(lián)合提取榛蘑多糖工藝優(yōu)化根據(jù)單因素的試驗(yàn)結(jié)果，得出對(duì)提取率影響突出的相關(guān)因素，主要影響因素為加酶率、解時(shí)間、酶解溫度、pH。因此，為了更好地考察提取的最優(yōu)條件，綜合各個(gè)單因素，從而進(jìn)一步設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，各組試驗(yàn)均按照常規(guī)試驗(yàn)方法進(jìn)行，通過(guò)測(cè)定各組試驗(yàn)的提取率，經(jīng)過(guò)直觀分析，最后得出最佳的提取水平組合。由此制定出3-4的分析因素與水平表。表 3-4 分析因素與水平水平因素A加酶率/%B酶解時(shí)間/minC酶解溫度/DpH11.880454.