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文檔簡介
1、部分文章解讀-遺傳群體SLAF 遺傳圖譜篇11、SLAF-seq 高密度遺傳圖譜棉花重 QTL12、SLAF-seq 構(gòu)建高密度遺傳圖譜3、基于 SLAF 技術(shù)高密度遺傳圖譜白菜抗霜霉病機(jī)理3大豆耐低磷機(jī)理54、SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建西瓜高密度遺傳圖譜75、SLAF 構(gòu)建丹參高密度遺傳圖譜96、SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建黃瓜高密度遺傳圖譜107、花椰菜高密度遺傳圖譜128、首張壇紫菜的高密度遺傳圖譜149、SLAF 構(gòu)建南美白對(duì)蝦高密度遺傳圖譜1710、東鄉(xiāng)野生稻由于具有多個(gè)抗冷的位點(diǎn)而表現(xiàn)出了適合高緯度環(huán)境生長的特點(diǎn)1911、SLAF 助力核桃高密度遺傳圖譜構(gòu)建及炭疽病抗性 QTL.21
2、12、高密度遺傳圖譜枝性狀23遺傳圖譜大豆抗核菌病 QTL 位點(diǎn)26密度遺傳圖譜構(gòu)建27密度遺傳圖譜構(gòu)建2913、全組關(guān)聯(lián)分析14、SLAF 技術(shù)助力牡丹首15、SLAF 技術(shù)助力茶樹首16、SLAF 技術(shù)再次構(gòu)建葡萄高密度遺傳圖譜3017、利用 SLAF 和 SSR 標(biāo)記構(gòu)建鴨茅高密遺傳圖譜并進(jìn)行開花期 QTL. 3218、櫻桃高密度遺傳圖譜樹干直徑 QTL3419、珍珠蚌圖譜20、SLAF-seq珍珠品質(zhì)相關(guān)性狀機(jī)理35水稻抗寒性狀3821、SLAF-seq 構(gòu)建冰草 P組首密度遺傳圖譜3922. SLAF 構(gòu)建中蝥蟹高密度遺傳圖譜及 QTL 分析4023、玉米 GBS 圖譜4424、海參
3、高密度遺傳圖譜的構(gòu)建和 QTL.4925. SLAF 遺傳圖譜助力揭示水稻籽粒調(diào)控機(jī)制5126. 海膽 SLAF-遺傳圖的構(gòu)建及主要性狀相關(guān) QTL55重遺傳圖譜篇59大豆抗性591、利用重2、基于重3、利用重構(gòu)建大豆高密度遺傳圖譜并精細(xì)遺傳圖譜和 RNA-seq分析黃瓜果色和果刺.62水稻產(chǎn)量相關(guān)機(jī)制和提升親本組水平644、四倍體棉花重5、表型組學(xué)、遺傳圖66組轉(zhuǎn)錄組學(xué)整合分析發(fā)現(xiàn)多個(gè)增產(chǎn)的雜種優(yōu)勢相關(guān)位點(diǎn)70枯病746、利用重高密度遺傳圖譜甜瓜轉(zhuǎn)錄組遺傳圖譜篇791、油菜 RNA-seq 遺傳圖文獻(xiàn). 79SLAF-BSA 篇821、SLAF-BSA 技術(shù)油菜千粒重候選. 822、SLAF
4、-BSA甜瓜果味性狀843、SLAF-BSA 對(duì)桃樹植株高度的. 86.87Cf-19894、SLAF-BSA5、SLAF-BSA水稻稻瘟病抗性番茄葉霉病抗性6、SLAF-BSA7、SLAF-BSA8、SLAF-BSA辣椒疫霉根腐病抗性PhR1091黃瓜抗蚜蟲候選.93紫薇植株矮化性狀候選949、Super BSA 技術(shù)關(guān)聯(lián)分析玉米花序分生組織突變性狀9610、Super BSA 技術(shù)快速水稻粒重性狀9711、BSA高粱莖含水量性狀9812、Super BSA擬南芥與疫霉菌免疫互作機(jī)制99品質(zhì)性狀的 QTL10013、SLAF 技術(shù)助力陸地棉14、BSA大白化性狀102黃瓜果肉厚度10415、
5、SLAF-BSA16、SLAF-BSA 挖掘黃瓜抗白粉病的候選. 10617、Super BSA 技術(shù)高效棉花多枝 QTL 位點(diǎn)107(CMV)10918. SLAF-BSA辣椒抗黃瓜花葉19.利用 SLAF-BSA 快速鑒定小麥空間輻射突變體中抗條紋病.11320.SLAF-BSA 助力黃瓜耐水淹機(jī)制.118BSA 篇1353重1、重酵母 BSA 文獻(xiàn)解讀123.1242、基于二代3、水稻耐鹽性狀的陸地棉短Li2.1264、水稻抗低溫研究1275、抗大豆疫霉菌的識(shí)別1286. DNA-BSA 助力芥菜突變.131轉(zhuǎn)錄組 BSA-BSR 篇1351、轉(zhuǎn)錄組 BSR 技術(shù)研究玉米雄性不育候選.1
6、352、向日葵抗霜霉病 BSR1393、BSR 技術(shù)快速組物種抗病141復(fù)雜技術(shù)類文章1441、不同簡化組方法的比較1442、單細(xì)胞揭示卵細(xì)胞全組重組和異常分離147SLAF 遺傳圖譜篇1、SLAF-seq 高密度遺傳圖譜棉花重 QTLConstruction of a high-density genetic map by specific locus amplified fragment sequencing (SLAF-seq) and its application to Quantitative Trait Loci (QTL) analysis for boll weight in
7、 upland cotton (Gossypium hirsutum.)雜志:BMC plant biologyIF:3.813合作:中國農(nóng)科院棉花研究背景棉花是重要的作物,提供了高質(zhì)量的棉用于工業(yè)生產(chǎn)和人類使用。不斷增長的工業(yè)需求給棉花增產(chǎn)提出了更高的要求。重是重要的產(chǎn)量因子之一,如何在不降低其他品質(zhì)的前提下提高產(chǎn)量是育種家孜孜以求的目標(biāo)。通過MAS輔助育種能夠直接對(duì)型進(jìn)行選擇?;谶z傳圖譜的QTL研究可以到相應(yīng)的功能或者與功能緊密連鎖的標(biāo)記,因此能極大地促進(jìn)MAS研究。常規(guī)的SSR標(biāo)記很難構(gòu)建飽和的遺傳圖譜,而利用SNP標(biāo)記則可以解決這個(gè)問題。利用高通量技術(shù)能夠?qū)θM開發(fā)SNP標(biāo)記,使高密
8、度遺傳圖譜構(gòu)建成為可能。本研究利用SLAF-seq技術(shù)對(duì)包含196個(gè)子代的陸地棉RIL群體構(gòu)重的表型數(shù)據(jù)進(jìn)行QTL定的挖掘。建高密度遺傳圖譜,并結(jié)合多年多點(diǎn)QTL位。同時(shí)材料和方法區(qū)域進(jìn)行候選本文親本是0-153和sGK9708,0-153品質(zhì)較好,而sGK9708重性狀差異極顯著。F6:8重組自交產(chǎn)量潛力適應(yīng)性廣。雙親系196個(gè)。方法:利用SLAF-seq技術(shù)構(gòu)建高密度遺傳圖譜并進(jìn)行QTL。QTL結(jié)果分析軟件:Windows QTL Cartgrapher 2.5。1、共獲得443.56M reads共計(jì)87.89GB數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)Q20為82.24%,GC含量為34.47%。親本共開發(fā)SLAF
9、102.13X。子代平均開發(fā)5萬個(gè)SLAF5.3萬個(gè),深度分別為78.66X和,平均深度為14.5X。1基于SLAF共開發(fā)出 160876 個(gè)SNP,其中親本中多態(tài)性有 23519個(gè),多態(tài)率為 14.62%。適合棉花作圖的 SNP 標(biāo)記(aaxbb 型)18318 個(gè),去除低質(zhì)量、低深度和極顯著偏分離的標(biāo)記后后剩余 5521 個(gè)SNP用于遺傳圖譜構(gòu)建。2、構(gòu)建了棉花A組和D組連鎖群26個(gè),共3259.37cM的遺傳圖譜,平均圖距0.78cM。其中A組包含標(biāo)記3550個(gè),遺傳距離1838.37個(gè),D組包含標(biāo)記個(gè)1971個(gè),遺傳距離1971cM。(1)遺傳圖與棉花物理圖譜共線性分析發(fā)現(xiàn)圖譜覆蓋度良
10、好,絕大多數(shù)的SNP與物理圖譜的共線性良好,相對(duì)于A組的共線性更好。組而言,D(2)重組熱點(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)26條連鎖群中,21條含有重組熱點(diǎn)區(qū)域,A 套中9條LG含有重組熱點(diǎn),D套中12條LG含有重組熱點(diǎn)。所有LG中,13號(hào)含有重組熱點(diǎn)最多,有196個(gè)。3、結(jié)合多年多點(diǎn)的表型數(shù)據(jù)進(jìn)行QTL,共檢測到11個(gè)不同環(huán)境下146個(gè)重的QTL位點(diǎn),其中16個(gè)能在至少3個(gè)環(huán)境中重復(fù)檢測到。這16個(gè)QTLs中qBW-chr13-7能在7種環(huán)境下檢測到,包含26個(gè)SNP2標(biāo)記,解釋表型變異率在6.13%-14.7%之間。結(jié)合參考組共鑒定出344個(gè)候選,其中340個(gè)含有注釋信息,并利用GO,KEGG和KOG數(shù)據(jù)分別進(jìn)
11、行種奠定基礎(chǔ)。和MAS育富集分析。為更進(jìn)一步精細(xì)2、SLAF-seq 構(gòu)建高密度遺傳圖譜Construction of a sequence-based bin map白菜抗霜霉病機(jī)理and mapping of QTLs fordowny mildewat four developmental stages incabbage (Brassica rapa L. ssp. pekinensis)雜志:Molecular breedingIF:1.543合作:北京市材料與方法:以 91-112(感霜霉病)和 T2-19(抗霜霉?。橛H本構(gòu)建 DH 系群體,100 個(gè)子代進(jìn)行圖譜構(gòu)建和 QTL;
12、抗性 DH 系DH100-88 和DH100-60 構(gòu)建 BC2 群體用于QTL 驗(yàn)證。研究技術(shù):SLAF-seq 簡化平臺(tái):Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):139.46 M 個(gè)reads組QTL軟件:MapQTL 3.0 ,IM法3研究結(jié)果(1)共得到親本和子代共 139.46M 的 reads。Q30 為 86.45%,GC含量為 38.72%。雙親中開發(fā) SLAF平均深度為19.48X 和24.43X,子數(shù)分別為 41969 和 43495 個(gè),3825246 個(gè),平均深度為11.14X。中,多態(tài)性標(biāo)記為 7230 個(gè),多態(tài)率為 13.47%。去除不在開發(fā)的適合DH 群體的多
13、態(tài)性標(biāo)記和低深度標(biāo)記后共得到 3482 個(gè)標(biāo)記用于圖譜構(gòu)建。(2)結(jié)合開發(fā)的 slaf 標(biāo)記和已經(jīng)的 206 個(gè)標(biāo)記進(jìn)行圖譜構(gòu)建,最終上圖標(biāo)記 3688 個(gè),共獲得白菜 10 個(gè)連鎖群。將共分離的標(biāo)記作為一個(gè)bin,共開發(fā)出 1064 個(gè)bin,構(gòu)建了總圖距 858.98cM 的遺傳圖譜,平均圖距為 0.81cM。這是迄今為止白菜中標(biāo)記密度最高的圖譜。如下圖所示:(3)結(jié)合表型數(shù)據(jù)進(jìn)行A08Bin46 和A0848 之間QTL, 在第 8 號(hào)上的 Bin到一個(gè)主效的QTL-sBrDM8,LOD 值4高達(dá) 20.71,PVE 高達(dá) 66.9%。該QTL 區(qū)域與前人研究的區(qū)間一致,證明了該遺傳圖譜
14、進(jìn)行QTL的準(zhǔn)確度。(4)基于該區(qū)域 SNP 信息設(shè)計(jì)了 3 個(gè) KASP 標(biāo)記,在 BC2 群體中驗(yàn)證 QTL 準(zhǔn)確性。利用 KASP 標(biāo)記 A08-709 檢測發(fā)現(xiàn),含有抗性基因且雜合的 82 個(gè)植株中抗性評(píng)級(jí)為 0-3 級(jí),而在 82 個(gè)感病植株中(抗性評(píng)級(jí)為 5-9),79 個(gè)該區(qū)域?yàn)榧兒稀r?yàn)證了的準(zhǔn)確性,同時(shí)說明該標(biāo)記與抗性緊密連鎖,可作為MAS 育種的功能標(biāo)記。3、基于SLAF 技術(shù)高密度遺傳圖譜大豆耐低磷機(jī)理High-Density Genetic Mapping Identifies New Major Loci for Tolerance to Low-Phosphorus
15、Stress in Soybean雜志:FRONTIERS IN PLANT SCIENCEIF:3.948合作:河業(yè)大學(xué)94-156(利用率)和 Bogao(低磷利用率)材料與方法:以為親本構(gòu)建 RIL 群體,146 個(gè)子代研究技術(shù):SLAF-seq 簡化平臺(tái):Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):188.77 M 個(gè)reads組QTL軟件:WinQTlCart 2.5 ,CIM法5研究結(jié)果(1)本研究共獲得 188.77M 的 reads,親本中開發(fā) SLAF數(shù)為23W 個(gè)左右。94-156 中 SLAF 平均深度為 20.69X,Bogao 深度為 20.87X,子代深度為 2.9
16、3X-7.86X,平均深度為 4.48X。(2)質(zhì)控過濾后獲得 253809 個(gè)高質(zhì)量的SLAF,其中多態(tài)性標(biāo)簽為 34551 個(gè),多態(tài)率為 13.61%。完整度過濾后剩余 30354 個(gè) slaf編碼的aaxbb 型標(biāo)記為 6178 個(gè)用于遺傳用于圖譜構(gòu)建。型編碼,(3)利用 HighMap 軟件構(gòu)建了大隊(duì) 20 個(gè)連鎖群圖譜,上圖標(biāo)記為6159 個(gè),完整度達(dá)到 95%。上圖標(biāo)記在親本中的深度分別為 54.19X和 54.02X,子為 7.89X。該圖譜覆蓋了大豆組 3020.59cM 的上圖標(biāo)記有 616遺傳距離,平均圖距為 0.49cM。其中第 15 號(hào)個(gè),平均圖距為 0.25cM。(3
17、)圖譜評(píng)估構(gòu)建好的圖譜進(jìn)行熱圖評(píng)估,共線性評(píng)估和單體來源評(píng)估:顯示出圖譜構(gòu)建的精確度和準(zhǔn)確度。(4)結(jié)合多年的表型數(shù)據(jù)進(jìn)行 QTL,總共到 85 個(gè)與低磷性狀相關(guān)的QTL 位點(diǎn)。遺傳圖距在 5cM 以內(nèi)的稱為同一個(gè)區(qū)域,以此為標(biāo)準(zhǔn),85 個(gè)QTL 分為 20 個(gè)區(qū)域,其中 12 個(gè)區(qū)域與前人研究結(jié)果一致(同樣的群體),新發(fā)現(xiàn)的區(qū)域有 8 個(gè)。其中一個(gè) q4-2 在多個(gè)環(huán)境均能檢測到,LOD 值在 3.36-8.57 之間,解釋表型變異率在67.42-28.1%之間,如下左圖所示。同時(shí)到結(jié)合前人研究結(jié)果有交了QTL 的克隆。如下右集的QTL 區(qū)域,縮小了圖所示。區(qū)間,大大文章亮點(diǎn):將高密度遺傳圖
18、譜QTL結(jié)果與前任研究結(jié)果對(duì)比,將磷利用效率的QTL 區(qū)域顯著縮小,大大促進(jìn)改QTl 的克隆進(jìn)程。4、SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建西瓜高密度遺傳圖譜Constructionofahigh-densitygeneticmapforwatermelon(Citrulluslanatus L.) based on large-scale SNP discovery by specific lengthamplified fragment sequencing (SLAF-seq)雜志:Scientia HorticulturaeIF:1.365合作:中國農(nóng)科院鄭州果樹所材料與方法:以 ZXG1478(
19、 F2 群體,93 個(gè)子代研究技術(shù):SLAF-seq 簡化平臺(tái):Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):85.60 M 個(gè)reads 研究結(jié)果)和 14CB11(父本)為親本構(gòu)建組(1)共獲得 17.61GB 數(shù)據(jù),Q30 位 76.14%。GC 含量為 35.31%。父中 SNP 數(shù)量為 167034 和 164450,平均深度分別為 28.05X 和20.13X,子SNP 數(shù)量為 130271 個(gè),平均深度為 5.46X。數(shù)據(jù)過濾后多態(tài)性SNP 為 8028 個(gè),多態(tài)率為 4.45%,去除顯著偏分離標(biāo)記7和完整度低于 70%的標(biāo)記后剩余標(biāo)記用于遺傳圖譜構(gòu)建,(2)構(gòu)建了西瓜 11 個(gè)連
20、鎖群的遺傳圖譜,包含了 2817 個(gè)SNP,總圖距為 1906.31cM。平均圖距為 0.72cM。最大的為第 9 號(hào)連鎖群,包含 478 個(gè)標(biāo)記,平均圖距為 0.40cM。(3)利用遺傳圖譜錨定西瓜參考scaffold 共計(jì) 276.68Mb 的參考組 scaffold。共錨定了 184 個(gè)組。在第 2-第 10上錨定效果好,在第 1 號(hào)第 11 號(hào)錨定效果一般。(4)與西瓜物理圖譜進(jìn)行共線性分析除了第 1 號(hào)第 11 號(hào)之外,其他均表現(xiàn)出良好的共線性。與第(4)點(diǎn)結(jié)果一致。85、SLAF 構(gòu)建丹參高密度遺傳圖譜Construction of the first highdensity ge
21、netic linkage map of Salvia miltiorrhiza using specific length amplified fragment (SLAF) sequencing雜志:Scientific ReportsIF:5.578研究物種:丹參研究技術(shù):SLAF-seq 簡化組材料選?。簝蓚€(gè)親本及 96 個(gè)F1 子代策略:Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):155,958,181 pair-end reads主要結(jié)果(1)此研究總共獲得 155.96Mb 的高質(zhì)量reads,Q30 為 89%,GC 含量為 41.96%,父數(shù)據(jù),155,958,181 個(gè)的平
22、均深度為83.43× ,子代平均深度為 10.36× 。(2)通過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),共獲得了 151,035 個(gè)高質(zhì)量的 SLAF 片段,其中 62,834 個(gè)具有多態(tài)性,多態(tài)率為 41.60%。過濾父信息、完整度過低,和不適合該群體作圖的多態(tài)性標(biāo)記后,采用HighMap 作圖軟件,計(jì)算兩兩標(biāo)記之間的重組率和 LOD 值,采用最短距離法進(jìn)行聚類分析,選擇回歸算法和MST 算法估算相鄰標(biāo)記間的遺傳距離,通過回歸排序分析獲得連鎖群內(nèi)標(biāo)記的最佳線性排列順序,將所有標(biāo)記劃分到 8 個(gè)連鎖群中,構(gòu)建了丹參首密度遺傳圖譜。此圖譜包含 5,164 個(gè)標(biāo)記,總圖距為 1519.04 cM ,
23、標(biāo)記間平均距離為 0.29 cM。(3)HighMap 軟件對(duì)構(gòu)建的圖譜進(jìn)行了獨(dú)創(chuàng)性的圖譜評(píng)價(jià),雙交換及比例小于 0.02%。文章亮點(diǎn):首張丹參高密度遺傳圖譜,之前只有一張丹參遺傳圖,上圖標(biāo)記9僅有 97 個(gè);親本及子代高深度,保證標(biāo)記分型的準(zhǔn)確性。6、SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建黃瓜高密度遺傳圖譜A High-Density Genetic Map for Cucumber (Cucumis Sativus L.) Based on Specific Length Amplified Fragment (SLAF) Sequencing and QTL Analysis of Fruit Tr
24、aits in Cucumber雜志:FRONTIERS IN PLANT SCIENCEIF:3.948合作:上海交通大學(xué)材料與方法:以 S1000(、小葉短果)和S1002(父本、大葉長果)為親本構(gòu)建F2 群體,153 個(gè)子代研究技術(shù):SLAF-seq 簡化平臺(tái):Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):93.46 M 個(gè)reads 研究結(jié)果(1)此研究總共獲得 22.98.69G 的高質(zhì)量組數(shù)據(jù),143.63 M 個(gè)reads,Q30 為 81.35%,GC 含量為 39.04%,父本的深度為 39.95為 29.05× ,子代平均深度為 3.45× 。×
25、 ,(2)通過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),共獲得了 115,789 個(gè)高質(zhì)量的 SLAF 片段,其中 15,946 個(gè)具有多態(tài)性,多態(tài)率為 13.77%。過濾父信息、完整度過低,和不適合該群體作圖的多態(tài)性標(biāo)記后,采用HighMap 作圖軟件,計(jì)算兩兩標(biāo)記之間的重組率和 LOD 值,采用最短距離法進(jìn)行聚類分析,選擇回歸算法和MST 算法估算相鄰標(biāo)記間的遺傳距離,通過回歸排序分析獲得連鎖群內(nèi)標(biāo)記的最佳線性排列順序,將所有標(biāo)記劃分到 7 個(gè)連鎖群中,構(gòu)建了黃瓜高密度遺傳圖譜。此圖譜包含 3,057 個(gè)標(biāo)記,總圖距為 1061.19 cM ,標(biāo)記間平均距離為 0.35 cM,是目前標(biāo)記密度最高的黃瓜圖譜。10(3
26、)收集了 F3 群體 3 年的表型數(shù)據(jù)(2013autumn,2014 spring and2015 spring)代表 F2遺傳圖進(jìn)行果實(shí)長度和(F2:3),利用本獲得的黃瓜高密度到 15 個(gè) QTLs,解的QTL,共釋表型變異 5.7%-13.6%。117、花椰菜高密度遺傳圖譜Genome-WideSingle-NucleotidePolymorphismsDiscoveryandUsingHigh-DensityGeneticMapConstructioninCauliflowerSpecific-Locus Amplified FragmentSequencing雜志:FRONTIER
27、S IN PLANT SCIENCE合作:浙江農(nóng)業(yè)研究物種:花椰菜研究技術(shù):SLAF-seq 簡化組分別為花球緊湊型“4305”和花球松散型“ZN198”,材料選?。焊笜?gòu)建DH 群體,獲得 79 個(gè)子代策略:Illumina Hiseq 2500 數(shù)據(jù):77.92 M pair-end reads文章解讀:1、雙親的深度分別為 52.66×和 49.35×,子代平均深度為4.71×,Q30 達(dá)到 91.07%。通過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),共獲得了 81,311 個(gè)高質(zhì)量的SLAF markers,其中 6815 個(gè)具有多態(tài)性,多態(tài)率為 8.38% ; 2、構(gòu)建了包含 9
28、條連鎖群的花椰菜高密度遺傳圖譜,1776 個(gè)SLAF(2741 個(gè) SNP),總圖距為 890.01 cM, 物理距離為 364.9Mb,標(biāo)記間平均距離為 0.50 cM;3、通過花椰菜遺傳圖和物理圖譜的共線性比較,發(fā)現(xiàn)在 4 號(hào)連鎖群上存在明顯的片段倒置,可能與花椰菜和甘藍(lán)的分化有關(guān);124、通過HighMap 構(gòu)圖軟件對(duì)花椰菜圖譜進(jìn)行了獨(dú)創(chuàng)的質(zhì)量評(píng)估:組是甘藍(lán)(B.首先是共線性評(píng)估,由于本用的參考o(jì)leracea var. capitata),通過花椰菜遺傳圖和甘藍(lán)物理圖譜的共線性比較,發(fā)現(xiàn)在 4 號(hào)連鎖群上存在明顯的片段倒置,可能與花椰菜和甘藍(lán)的分化有關(guān);為了評(píng)價(jià)圖譜的準(zhǔn)確性,構(gòu)建的單體
29、來源圖,用來分析鑒定有沒錯(cuò)誤的分型數(shù)據(jù)。單體來源評(píng)估包含每條連鎖群上雙交換位點(diǎn)及13比例的統(tǒng)計(jì)。在一條連鎖群中,雙交換的比例越高,表示圖譜的在 3%以下。在本研分型或順序存在一定的問題,通常把雙交換比例都為 0。究中,雙交換和最后是熱圖評(píng)估,可以直觀的展示每條連鎖群上標(biāo)記之間的重組關(guān)系,通過相鄰標(biāo)記間重組率大小可以評(píng)估排圖準(zhǔn)確性。8、首張壇紫菜的高密度遺傳圖譜Construction of a dense genetic linkage map and mapping quantitative trait loci for economic traits of a doubled haploi
30、d population of Pyropia haitanensis (Bangiales, Rhodophyta)期刊:BMC Plant Biology合作:集美大學(xué)14研究背景紫菜是最重要的海洋大型藻類之一,分布廣泛且價(jià)值高。在中國,壇紫菜占總紫菜產(chǎn)量的 75%。到目前為止,由于種質(zhì)相對(duì)匱乏,傳統(tǒng)標(biāo)記密度低且匱乏,工作量大,培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)壇紫菜品種工作進(jìn)展十分緩慢。通過 NGS 技術(shù)構(gòu)建高密度遺傳圖譜極大地促進(jìn)了功能挖掘研究。SLAF-seq 是基于酶切的簡化組技術(shù),在大幅降低基因組復(fù)雜度的同時(shí)還可以避開重復(fù)序列,且成本低廉,不受參考組的限制,適用于大規(guī)模遺傳群體的標(biāo)記開發(fā),已經(jīng)應(yīng)用在水
31、稻,玉米,棉花,大豆,核桃,牡丹,黃瓜,茶樹,白對(duì)蝦等不同物種上。數(shù)量性狀尤其是復(fù)雜數(shù)量性狀結(jié)合MAS 育通過高密度遺傳圖譜種是培育高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)紫菜品種的高效的途徑。本研究利用 SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建了首張壇紫菜的高密度遺傳圖譜,并結(jié)合表型性狀進(jìn)行 QTL礎(chǔ)。方法與結(jié)果1、遺傳圖譜構(gòu)建,為壇紫菜育種奠定堅(jiān)實(shí)基,最終選擇 HaeIII 和Hpy166II 雙酶切,以包含 100通過酶切的壇紫菜 DH 系為材料,結(jié)合 SLAF-seq 技術(shù)個(gè)。共獲得120.33Gb 的數(shù)據(jù),Q30 達(dá)到 78.52%,GC 含量為 53.19%。其中父母量分別為 1.6Gb(75.5X)和 1.5Gb(74.02
32、X),子代平均深度本為 6.14X。共獲得 188,982 個(gè)高質(zhì)量的SLAF,其中多態(tài)性 SLAF有 8553 個(gè),去除不適合 DH 系作圖的標(biāo)記后,適合上圖的標(biāo)記僅僅只剩下 2 個(gè)。這個(gè)時(shí)候顯然需要轉(zhuǎn)變思路利用這些標(biāo)記。在過濾掉的標(biāo)記中有大量的片段長度多態(tài)性標(biāo)記(與組比對(duì),暫未組),即SLAF 序列一致,但是片段長度在親本之間不一致,該標(biāo)記,利用這個(gè)特點(diǎn),在 180,394 個(gè)被過濾的非這也可作為一種SNP 多態(tài)性標(biāo)記中,篩選得到 86190 個(gè)長度多態(tài)性標(biāo)記,去除低深度,偏分離的標(biāo)記后篩選到 6713 個(gè)長度多態(tài)性標(biāo)記用于連鎖圖譜構(gòu)建。通過連鎖分析之后,共有 4550 個(gè)標(biāo)記上圖,另外
33、2181 個(gè)標(biāo)記未檢測到與連鎖群連鎖。利用這 4550 個(gè)上圖標(biāo)記構(gòu)建了 740 個(gè) Bins,繼續(xù)以 Bins 為標(biāo)記上圖,最終得到覆蓋組 874.33cM 的遺傳圖譜,5 個(gè)連鎖群,平均圖距為 1.18cM。利用單體來源評(píng)估和熱圖評(píng)估評(píng)價(jià)15該圖譜的質(zhì)量。結(jié)果表明通過以上流程得到一密度的遺傳圖譜,可用于QTL和輔助組組裝。2、QTL利用以上構(gòu)建的高密度遺傳圖譜進(jìn)行葉片長度,寬度,厚度,鮮重,葉片生長速度和鮮重增長速度QTL,軟件為winQTLCart,LOD 值為 2.5,共檢測到 15 個(gè)不同性狀的QTL 位點(diǎn)。單個(gè) QTL解釋表型變異率在 9.59% 到 16.61%之間, 置信區(qū)間在
34、 0.97cM 到16.51cM 之間。研究結(jié)論本研究利用 SLAF-seq 技術(shù)構(gòu)建了壇紫菜第一密度遺傳圖譜,并QTL 精細(xì)到了 15 個(gè)與重要、壇紫菜高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)性狀關(guān)聯(lián)的 QTL 位點(diǎn),為后續(xù)的育種奠定堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。同時(shí)這張高密度遺傳圖譜也將助力壇紫菜組組裝到水平。169、SLAF 構(gòu)建南美白對(duì)蝦高密度遺傳圖譜Genome survey and high-density genetic map construction providegenomicandgeneticresourcesfor Litopenaeus vannamei雜志:Scientific ReportsIF:5.578研究物
35、種:南美白對(duì)蝦thePacificWhiteShrimp研究技術(shù):SLAF-seq 簡化組材料選?。簝蓚€(gè)親本及 149 個(gè)F1 子代策略:Illumina Hiseq 2500,PE100 數(shù)據(jù):456,620,260 個(gè) reads主要結(jié)果:本研究采用 Illumina Hiseq 2500,PE100 的策略,所用的群體類型是F1,149 個(gè),利用SLAF-seq 技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行高通量標(biāo)記。共獲得 456,620,260 個(gè) reads,開發(fā)了 114,829 個(gè)SLAF開發(fā),其中多態(tài)性標(biāo)記 25,140 個(gè),編碼的高質(zhì)量標(biāo)記 6359 個(gè),采用擬測交的原理構(gòu)建了包含 44 個(gè)連鎖群的遺傳
36、圖譜,總圖距為4,271.43 cM,平均圖距為 0.7cM,其中雄性圖包含 4201 個(gè)標(biāo)記,雌性圖包含 4396 個(gè)標(biāo)記,中性圖包含 6146 個(gè)標(biāo)記,同時(shí)對(duì)構(gòu)建的圖譜進(jìn)行了獨(dú)創(chuàng)性的圖譜評(píng)價(jià)。白對(duì)蝦部分連鎖群結(jié)合白對(duì)蝦生長性狀的數(shù)據(jù)分析到 11 個(gè)與體長緊密相關(guān)的QTL 位點(diǎn),7 個(gè)與體重相關(guān)的 QTL 位點(diǎn),分布于不同連鎖群上,其17中只有Marker 7605 與兩種性狀同時(shí)顯著相關(guān),對(duì)于后續(xù)的輔助育種具有很好的利用價(jià)值。標(biāo)記體長相關(guān)的 QTL到體重和體長 QTL 共 11 個(gè),共可解釋表利用區(qū)間作圖法,型變異為 38.56%。其中位于連鎖群 33 標(biāo)記 24250 位置的 QTL 解
37、釋表型變異達(dá)到 17.9%,LOD 值為 6.5,為一主效QTL。白對(duì)蝦是一個(gè)高雜合物種,其組含有 80%的重復(fù)序列,其基因組組裝是一個(gè)很大的難題。本研究通過對(duì)遺傳圖譜、白對(duì)蝦初步組裝的 Scaffold、BAC的序列進(jìn)行共線性比較,最終使得 5922 個(gè)標(biāo)記錨定到 5885 個(gè)Scaffold 上 ,有利于后續(xù)白對(duì)蝦的組組裝。遺傳圖、Scaffold、BAC 共線性比較1810、東鄉(xiāng)野生稻由于具有多個(gè)抗冷的位點(diǎn)而表現(xiàn)出了適合高緯度環(huán)境生長的特點(diǎn)Multiple coldloci confer the high cold tolerance adaptation ofDongxiang wil
38、d rice (Oryza rufipogon) to its high-latitude habitat.雜志:Theor Appl Genet合作:中國亞熱帶農(nóng)業(yè)研究物種:禾本科稻屬水稻研究技術(shù):SLAF-seq 簡化材料選?。耗屠溆H本 DXWR組和 不耐冷親本Xieqingzao B 構(gòu)建的 94個(gè) BILs(BC1F7)群體;耐冷親本 DXWR 和不耐冷親本 1504 構(gòu)建的146 RILs 群體;由 DXWR 和 0298 雜交選育而成的超級(jí)耐冷的材料DY1,用于構(gòu)建高密度圖譜和進(jìn)行QTL;選取分布于 5 種型的 39 個(gè)栽培水稻和來自全世界的 40 個(gè)普通野生稻,用于DXWR 的系
39、統(tǒng)進(jìn)化分析。策略:Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):46,594,650 pair-end reads文章解讀:水稻是一個(gè)對(duì)冷害敏感的作物,冷害會(huì)減少水稻產(chǎn)量,是影響水稻減產(chǎn)的重要因素。本研究發(fā)現(xiàn)了利用水稻野生種DXWR 和稻0298 選育出了一個(gè)高抗冷害的水稻品系 DY1 ,并對(duì)水稻野生種DXWR 的抗冷遺傳性狀進(jìn)行了分析,采用 SLAF-seq 技術(shù)開發(fā)標(biāo)記,利用 HighMap 軟件排圖構(gòu)建高密度遺傳圖譜,結(jié)合表型性狀對(duì)該性狀進(jìn)行QTL,并利用進(jìn)化樹分析對(duì)來自 5 個(gè)類型的 39個(gè)栽培水稻和來自全世界的 40 個(gè)普通野生稻進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)水稻野生種DXWR 屬于Or-III 類
40、群。主要結(jié)果:1、將水稻野生種DXWR 及其衍生系DY1 和常規(guī)栽培品系冷害處理6 天,DXWR 存活率達(dá)到 100%,DY1 的存活率達(dá)到 90%,其存活率顯著高于栽培品系XQZB 和 1504,這兩個(gè)品系在該處理下存活率幾乎為零,表明DXWR 和DY1 抗冷性極強(qiáng)。192、雙親的平均深度為 67.3×,子代平均深度為 4×。通過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),共獲得了 50,109 個(gè)高質(zhì)量的 SLAF 片段,其中10,519 個(gè)具有多態(tài)性,多態(tài)率為 21.0% 。過濾父信息、完整度過低,和不適合該群體作圖的多態(tài)性標(biāo)記后,獲得 4740 個(gè)量的SLAF marker。構(gòu)建了包含 480
41、3 個(gè)標(biāo)記,總圖距為 1537.1 cM, 標(biāo)記間平均距離為 0.32 cM 的連鎖群。3、與水稻組進(jìn)行共線性分析,結(jié)果顯示標(biāo)記的排列和順序與基因組一致,除了在 8 號(hào)和 11 號(hào)上。并且 SLAF 標(biāo)記覆蓋了大部分組,除了 2 號(hào)上有約 7Mb 的區(qū)間無 SLAF 標(biāo)記。然而通過PCR 分析顯示在雙親中有特異擴(kuò)增產(chǎn)物,說明無大片段。4、對(duì)構(gòu)建的 BIL 進(jìn)行了 QTL3、7、8、9、11、12 個(gè),共檢測到了 15QTL,分別位于 2、上。這些 QTL 的加性效應(yīng)為 0.21-0.61,對(duì)存活率的貢獻(xiàn)為 9.5%-26.9%,可以解釋 13.8-35.7%的表型變異。并對(duì)這些QTL 在 RI
42、L 群體中進(jìn)行了驗(yàn)證,QTL 包括qCTS7.2、qCTS2.1、20qCTS2.3、qCTS3.3、qCTS12.1、 qCTS12.3 、qCTS2.2、qCTS7.1 和qCTS12.2 均可在 RIL 群體中檢測到。qCTS3.2、5、利用進(jìn)化樹分析對(duì)來自5個(gè)類型的39個(gè)栽培水稻和來自全世界的40個(gè)普通野生稻進(jìn)行了分析,發(fā)現(xiàn)水稻野生種DXWR屬于Or-III 類群,而Japonica也來源于Or-III 類群,Indica來源于Or-類群,因此推斷其抗冷來源于Japonica。11、SLAF 助力核桃高密度遺傳圖譜構(gòu)建及炭疽病抗性 QTLConstructionofahigh-dens
43、itygeneticmapusingspecificlengthamplified fragment markers and identification of a quantitative trait locusforosein walnut (Juglans regia L.)21雜志:BMC Genomics合作:山東農(nóng)業(yè)大學(xué)研究物種:核桃研究技術(shù):SLAF-seq 簡化組為 Yuan Lin(感?。副緸?Qing Lin(抗?。?,構(gòu)材料選取:建F1 群體,獲得 84 個(gè)子代群體策略:Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):472,66 M pair-end reads文章解讀:
44、核桃,為植物,種植面積廣泛,且核桃仁含有豐富的營養(yǎng)素,與扁桃、腰果、榛子并稱為世界著名的“四大干果”。由于易炭疽病,導(dǎo)致核桃的產(chǎn)量嚴(yán)重受到影響。傳統(tǒng)的抗病已滿足不了生產(chǎn)要求,因此通過抗病育種,提高抗病能力才是防御炭疽病的有效途徑。1、本研究總共獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù) 161.64M pair-end reads,GC 含量為 41.50%,Q20 為 83%,父本深度為 127.19×為 99.38×,深度為 15.04 ×。子代平均圖 1.子代標(biāo)記深度和數(shù)量2 、通過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn), 共獲得了 153,820 個(gè)高質(zhì)量的 SLAFmarkers,其中 49,174 個(gè)具
45、有多態(tài)性,多態(tài)率為 31.97% 。過濾父母本信息、完整度過低和不適合該群體作圖的多態(tài)標(biāo)記后,獲得13,635 個(gè)高質(zhì)量的多態(tài)性SLAF。3、通過計(jì)算標(biāo)記間的遺傳距離,將 2,577 個(gè)多態(tài)性劃分到 16 個(gè)連鎖群,構(gòu)建了包含 5,043 個(gè)SNP 位點(diǎn)的核桃高密度遺傳圖譜,總圖距為 2,457.82 cM,相鄰標(biāo)記間的平均距離為 0.95 cM。圖譜包含三22,SNP_only,InDel_only,SNP&InDel,種類型的多態(tài)性其中SNP_only比例達(dá)到 89.25%。圖 2.核桃高密度遺傳圖譜到一個(gè)與炭疽病抗性相關(guān)的QTL 區(qū)間,位于4、采用區(qū)間作圖法LG16 連鎖群上 1
46、65.51-176.33cM 的區(qū)間范圍內(nèi),此區(qū)間包含 10 個(gè)多,表型貢獻(xiàn)率為 16.2%-19.9%,LOD值為 3.22-4.04。態(tài)性圖 3.炭疽病抗性相關(guān)QTL結(jié)果12、高密度遺傳圖譜枝性狀High-density genetic map construction and identification of a locuscontrolling weeping trait in an ornamental woody plant (Prunus mume23Sieb. et Zucc).雜志:DNA Research合作:北京林業(yè)大學(xué)研究物種:薔薇科李屬梅研究技術(shù):SLAF-seq
47、簡化組為LiuBan(直立性狀),父本為 Fen Tai Chui Zhi(垂材料選?。褐π誀睿?,構(gòu)建F1 群體,獲得 387 個(gè)子代策略:Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):472,66 M pair-end reads文章解讀:對(duì)于觀賞樹木(包括灌木)來講,和枝姿同花一樣具有同等重要的觀賞價(jià)值。許多觀賞樹木具有垂枝類型(penduloustype),如龍爪槐、垂枝桑、垂枝榆、垂枝梅等等。因此,狀對(duì)改良梅性狀具有重要的意義。垂枝性本研究采用SLAF-seq 技術(shù)開發(fā)標(biāo)記,利用 HighMap 軟件排圖構(gòu)建高密度遺傳圖譜,結(jié)合表型性狀進(jìn)行QTL。此外,借鑒Mupmap-like 和 B
48、SA 的研究策略對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分組分析,通過計(jì)算每個(gè)SLAF marker 的(SLAF-index)值的方法,進(jìn)一步精細(xì)性狀。主要結(jié)果:垂枝1、雙親的平均深度為 35.15×,子代平均深度為 4 ×。通SLAF 片段,其中過嚴(yán)格的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn),共獲得了 230,584 個(gè)高質(zhì)量的93,103 個(gè)具有多態(tài)性,多態(tài)率為 40.35% 。過濾父信息、完整度過低,和不適合該群體作圖的多態(tài)性標(biāo)記后,獲得 9412 個(gè)量的SLAF marker。242、構(gòu)建了包含 8007 個(gè)標(biāo)記,總圖距為 1550.63 cM, 標(biāo)記間平均距離為 0.195 cM 的連鎖群。其中父本標(biāo)記深度為 155.7
49、7×,為98.21×,子代平均深度為 8.18×,標(biāo)記平均完整度為 96%。3、與桃組進(jìn)行共線性分析,6,837 個(gè) SLAF markers 可以比對(duì)到桃屬物種組上,其中梅花 LG5 比對(duì)到桃 ch2 和 ch4 上,說明梅與桃李發(fā)生了或易位。4、在 F1 群體中,垂枝:直枝性狀比為 165:222 ,偏離 1:1 的分離比,說明在LiuBan 和FenTaiChuiZhi 親本中垂枝性狀由一個(gè)主效協(xié)同幾個(gè)微效共同調(diào)控。5、通過 R/qtl 軟件將垂枝性狀在 7 號(hào)上。通過計(jì)算每個(gè)SLAF marker 的(SLAF-index)值的方法,進(jìn)一步精細(xì)在 7 號(hào)染
50、色體 1.14 Mb (10.5411.68 Mb)區(qū)域內(nèi),獲得 18 個(gè)候選對(duì)其進(jìn)行功能注釋。,并2513、全位點(diǎn)Loci and大豆抗核菌病 QTL組關(guān)聯(lián)分析遺傳圖譜candidate gene identification forto Sclerotiniasociation andsclerotiorum in soybean (Glycine max L. Merr.) v linkage maps.雜志:Plant Journal合作:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)研究物種:豆科研究技術(shù):SLAF-seq 簡化材料選?。?06 份大豆品種(從組收集的 2000 份大豆種質(zhì)中篩選出,306 份材料包括
51、抗病和感病材料、不同地理區(qū)域的 105 份地方品種和201 份骨干品種)和 24 份國外種質(zhì)為研究材料進(jìn)行 GWAS 分析;以Maple Arrow(抗?。┖?Hefeng 25(易感)為親本構(gòu)建重組自交系遺傳群體 128 株,通過 SSR 標(biāo)記構(gòu)建遺傳圖譜。所有材料經(jīng) 40mM 草酸處理 48 小時(shí)后測定OD518 值。策略:Illumina Hiseq 2500數(shù)據(jù):11.39 Gbp文章解讀:大豆是我國重要的農(nóng)作物,對(duì)保障糧食生產(chǎn)安全有著重要意義。自然界存在的各種病害嚴(yán)重影響大豆的生長與產(chǎn)量,而大豆菌核?。⊿WM)的發(fā)生不僅降低了產(chǎn)量,也降低了大豆含油量,是影響大豆經(jīng)營成果的重要病害之一。大豆菌核病主要影響地上部,在大豆苗期、成株期均可發(fā)病,造成苗枯、葉腐、莢腐等癥狀。
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