生科第十三章 DNA的生物合成

1、Reverse transcriptionDNA的雙向和單向復(fù)制的雙向和單向復(fù)制環(huán)狀環(huán)狀 DNA復(fù)制時(shí)復(fù)制時(shí)所形成的所形成的結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)起點(diǎn)起點(diǎn)復(fù)制叉的推進(jìn)復(fù)制叉的推進(jìn)復(fù)制叉復(fù)制叉 起點(diǎn)起點(diǎn) 起點(diǎn)起點(diǎn) 起點(diǎn)起點(diǎn)復(fù)制叉復(fù)制叉復(fù)制叉復(fù)制叉未復(fù)制未復(fù)制DNA單向復(fù)制單向復(fù)制雙向復(fù)制雙向復(fù)制（DNA polymorase，Pol）合成合成20個(gè)核苷酸即離開模板，填充空隙。個(gè)核苷酸即離開模板，填充空隙。 從細(xì)胞中分從細(xì)胞中分離出離出DNA限制酶截取限制酶截取DNA片斷片斷分離大腸桿分離大腸桿菌中的質(zhì)粒菌中的質(zhì)粒 DNA重組重組用重組質(zhì)粒用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌轉(zhuǎn)化大腸桿菌培養(yǎng)大腸桿菌培養(yǎng)大腸桿菌克隆大量基因克

2、隆大量基因重組體的篩選重組體的篩選DNA“克隆克隆”過(guò)程過(guò)程核心酶核心酶 (core enzyme)全酶全酶 (holoenzyme) RNA聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合聚合酶全酶在轉(zhuǎn)錄起始區(qū)的結(jié)合 真核生物DNA聚合酶、及四種，都有5 3聚合功能。及參與核DNA復(fù)制； ：鏈合成的引發(fā)，：鏈的延長(zhǎng) pol；切除引物后填補(bǔ)空隙 ：外切核酸酶 ：線粒體DNA復(fù)制真核生物的真核生物的DNA聚合酶聚合酶DNA聚合酶聚合酶 分子量分子量亞基數(shù)亞基數(shù)細(xì)胞內(nèi)分布細(xì)胞內(nèi)分布酶活力百分比酶活力百分比外切酶活力外切酶活力DNA聚合酶聚合酶 110-23，000多個(gè)多個(gè)細(xì)胞核細(xì)胞核80%無(wú)無(wú)120，000一個(gè)一個(gè)細(xì)

3、胞核和線粒體細(xì)胞核和線粒體2 15%無(wú)無(wú)-400，000一個(gè)一個(gè)細(xì)胞核細(xì)胞核+10 25% 5 -3 外切酶外切酶DNA聚合酶聚合酶 DNA聚合酶聚合酶 45，000一個(gè)一個(gè)細(xì)胞核細(xì)胞核10 15%無(wú)無(wú)逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象逆轉(zhuǎn)錄病毒細(xì)胞內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象RNA 模板模板逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶DNA-RNA 雜雜化雙鏈化雙鏈RNA酶酶單鏈單鏈DNA逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈雙鏈DNA PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性主要由引物決定，引物的設(shè)計(jì)是PCR成功的關(guān)鍵， 引物位置和產(chǎn)物長(zhǎng)度 根據(jù)不同目的和要求確定，長(zhǎng)度一般在200800bp之間 引物的長(zhǎng)度 一般為1825bp 末端核苷酸 3端不得有任何修飾 GC含量和Tm值 一般在4060%之間，兩條相差23 36512 決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄決定哪些基因被轉(zhuǎn)錄 150618 催化功能催化功能 155