熒光衍生試劑在高效液相色譜和電泳中的應(yīng)用 - 科學(xué)網(wǎng)

1、熒光衍生試劑在高效液相色譜和電泳中的應(yīng)用熒光衍生試劑在高效液相色譜和電泳中的應(yīng)用導(dǎo)導(dǎo) 師：張玉奎師：張玉奎 學(xué)學(xué) 生：張生：張 琳琳中科院大連化學(xué)物理研究所中科院大連化學(xué)物理研究所1810組組 引言引言 常用熒光衍生化試劑應(yīng)用簡介常用熒光衍生化試劑應(yīng)用簡介 展望展望 衍生的目的衍生的目的 衍生發(fā)應(yīng)方式衍生發(fā)應(yīng)方式 熒光衍生試劑的構(gòu)成熒光衍生試劑的構(gòu)成 在線在線 (on line) 離線離線 (off line) 從衍生反應(yīng)的場所來分從衍生反應(yīng)的場所來分 柱前衍生化柱前衍生化 (pre-column derivatization) 柱上衍生化柱上衍生化 (on-column derivatiza

2、tion) 柱后衍生化柱后衍生化 (post-column derivatization) 從是否與儀器聯(lián)機的角度來分從是否與儀器聯(lián)機的角度來分 從是否形成共價鍵來從是否形成共價鍵來分分 標記標記 非標記非標記 取代基熒光團（試劑分子母體）反應(yīng)基團膽磺酰肼 DNS-H 芳香鄰二醛類 OPA 異硫氰酸酯類 FITC 酰氯類 FMOC 活性鹵類 NBD-Cl N-羥基琥珀酰亞胺活性酯類 AQC 鄰苯二甲醛鄰苯二甲醛 OPA4-氯氯-7-硝基硝基-2,1,3-苯并惡二唑苯并惡二唑 NBD-Cl熒光素異硫氰酸酯熒光素異硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯芴代甲氧基酰氯 6-氨喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯氨

3、喹啉基琥珀酰亞胺碳酸酯AQC J Chromatorgr. 1990,499:557高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報 2004, 25: 189190J Chromatorgr. 1990,499:557Anal. Biochem 2003,313 1727圖3 CEOC 衍生胺類化合物色譜分離圖（23種）圖2 FMOC 衍生胺類化合物色譜分離圖（23種） 羰基氯類： FMOC CEOC 磺酰氯類: DNs-Cl 鹵代三嗪類: EDTN 1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）分析化學(xué)分析化學(xué) 2003, 31, 62651.苯酚 2.對氯苯酚 3. 2,5-二甲基苯酚 4. 2,4-二氯

4、苯酚 5. 1,4對苯二酚 肼類肼類 DNsDNs-H CEOC-H-H CEOC-H 氨基類氨基類 氨基甲基芘氨基甲基芘 1.乳糖 2.甘露糖 3.葡萄糖 4.鼠李糖 5. 山梨糖(FL detection)咔唑咔唑-9-9-乙氧基羰基肼乙氧基羰基肼(CEOC-H)(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色譜分離柱前衍生中性糖高效液相色譜分離IV IV 羧酸類化合物的衍生試劑羧酸類化合物的衍生試劑 溴甲基類 BrMMC 哌嗪基類 DBD-Pz 重氮甲烷基類 ADAM 其它類 9-(2-羥乙基)-吖啶酮 HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素 (ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽

5、重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)熒光衍生試劑與羧酸的反應(yīng)熒光衍生試劑與羧酸的反應(yīng)4-4-氨甲基氨甲基-6,7-6,7-二甲基香豆素二甲基香豆素 (ADMC) (ADMC) 衍生羧酸衍生羧酸 色譜分離圖色譜分離圖Anal.Sci.1996,12:189Fig.1 膽汁酸分離色譜圖（熒光檢測）. 衍生物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為 ex=404, em=440nm9-(2-9-(2-羥乙基羥乙基)-)-吖啶酮吖啶酮 HEA HEA 衍生膽汁酸衍生膽汁酸 色譜分離圖色譜分離圖V V 分離對映體的手性熒光衍生試劑分離對映體的手性熒光衍生試劑Toshimasa Toyooka Japan

6、J.C.A 1998 822 215224 手性熒光衍生試劑手性熒光衍生試劑 R(-)DBD-PyNCS R(-)DBD-PyNCS 衍生分離衍生分離DLDL氨基酸氨基酸OPA OPA 與手性硫醇與手性硫醇 衍生分離衍生分離DLDL氨基酸氨基酸N-異丁?；?D(L)-半胱氨酸 (IBDC和IBLC)J.C.A 1999 832 123目前目前常用常用衍生蛋白質(zhì)的熒光標記試劑有：衍生蛋白質(zhì)的熒光標記試劑有： 鄰鄰苯二甲醛苯二甲醛 ( (OPA) OPA) 4- 4-氟氟-7-7-硝基苯并惡二唑硝基苯并惡二唑 ( (NBD-F)NBD-F) 熒光素異硫氰酸酯熒光素異硫氰酸酯 ( (FITC)FIT

7、C) 3- 3-呋喃甲酰喹啉呋喃甲酰喹啉-2-2-羰醛羰醛 ( (FQ)FQ) Fig.5 OPA 柱后標記馬心肌紅蛋白質(zhì)毛細管電泳圖J.Am.Chem.Soc. 1995,117:3325 J.Am.Chem.Soc. 1989,111: 5008DNA序列分析中所用的四種熒光衍生試劑Nature 1986,327: 674Nature 1986,327: 674分析化學(xué)中的有機試劑在分析化學(xué)中占有與分析儀器同等重分析化學(xué)中的有機試劑在分析化學(xué)中占有與分析儀器同等重要的地位，熒光衍生化試劑則是有機分析試劑的一類重要分要的地位，熒光衍生化試劑則是有機分析試劑的一類重要分支。支。 性能優(yōu)良的熒光衍生化試劑可能性能優(yōu)良的熒光衍生化試劑可能將將成為成為某些某些物質(zhì)的高靈敏物質(zhì)的高靈敏高選擇性分析的關(guān)鍵高選擇性分析的關(guān)鍵，熒光衍生試劑的開發(fā)與應(yīng)用熒光衍生試劑的開發(fā)與應(yīng)用也也正正朝這朝這個個方向發(fā)展。方向發(fā)展。在實際工作中將可能遇到各種現(xiàn)有熒光衍生試