氨基苯甲酸對脂肪胺的熒光標(biāo)記及質(zhì)譜鑒定

1、氨基苯甲酸對脂肪胺的熒光標(biāo)記及質(zhì)譜鑒定W育嚴(yán)可以看做是氨中的氫談輕基取代的衍生物嚴(yán)舅和它冊的衍生物是十分重要的化件物a環(huán)境巾的議類物質(zhì)山于其毒性及反應(yīng)活性已經(jīng)誡為人類生活中備覺關(guān)注的類化舍物,諫攢物質(zhì)的側(cè)定*燉于嗥物學(xué).臨味化學(xué)*耳境建學(xué)*T物學(xué)具刊非端重聲的總義；唱肪肢和芳香戡類優(yōu)件物般為無嘛外吸收或界圧木刃不發(fā)比的物質(zhì)，進(jìn)荷化學(xué)熒光衍生是提高該類化件物井辨度檢測的個有奴的途彳嚴(yán)W例如苯異丙胺類藥物能以某種方式作用于交感神經(jīng)系統(tǒng)而使人們有興奮、機靈、清蠹.耀少嶽勞、增加箱神活力的感黨t然大劑呈或長期服用¥NK也會引起粘沖上的不愉快零負(fù)作用.巴比妥類踴物能降低屮槪胖經(jīng)泵統(tǒng)的話性，誘發(fā)

2、傕眠星一婁常川的頤靜別因此.它們是“抑制性葩物S寫苯界丙胺“興奮性藥物"正好相乩住天燃植物小的一腔胺類代合物.如嗎啡等生物璇.對高尊生物的中樞累統(tǒng)有縊大的柞用“現(xiàn)在煙常使用的炎光類桁生試#h11甘：4-權(quán)聽肚21一罩井黑畔(NED-F)y6-M£4*%-Hinl亞胺碳酸酣(AJQC)*1"、9-茹甲基氯甲ffii(FMOC)lK1-胡I利竝茶亠磺脫氫®NS-C1)”，；N日D-F試劑木討&廿T.物iT以中的穂定性差*見光再易分解：AQC法有較高的選擇性但它反應(yīng)的重現(xiàn)性和其衍生物的穂定性較準(zhǔn)：FMOC時使用試?yán)^宜會降低邑謂柱壽命，用此需要經(jīng)過萃取

3、處理.操作過理JRflhDNS-C1除試劑的穩(wěn)宦件皋外.衍牛物還有熒先淬滅現(xiàn)亀*本實臉采用4-(9-1®)氨基苯甲戰(zhàn)作為柱前衍牛:試刑°在乙盼溶剝屮以DMAP(4-二甲氨基毗嚏)撇催化剤.任和"條件下口脂肪脈反廟孔inn：叫決酣穩(wěn)址的黃比產(chǎn)物*建立了嵌類的島救液相色鍛分折方法。甌笈波栓和坡射放也分別為337421對日拾生活用水中的聃禺脂肪胺測宦祐果滿點一2實驗部分2.1主轄儀器與試劑1100飛爲(wèi)戦液柑邑溝質(zhì)諧聯(lián)用儀(美國Agihni公司九配陣大氣壓化學(xué)電離W(APCI>.熒比檢制糯、1叩；訂|型進(jìn)樣器：Hypersil0DS-C8色誹社4.6iimX100m

4、mX5nm人謹(jǐn)依利待分析儀器育限公可九4-(9-TC)猟堆狀甲隈(門制k脂肪胺標(biāo)準(zhǔn)桿品<卜黠試劑廠h光講純乙脇<CAN.MerckMJ)：池烤水(取H曲阜卿范大學(xué)圖書館的；蛙哈喑純凈4U兒他試刑均為分析純試刊.DMF減爪按惴破使用g2標(biāo)準(zhǔn)溶植足制準(zhǔn)確取址量脂肪胺標(biāo)唯品.用光諧純乙膊配JLOXIO'2molA,的涪戕相磁低濃度IB肪肢標(biāo)準(zhǔn)液(1.0X104mol/L)用光諧郭乙躺稀釋而成.IIZ16.6mg':：'1-(4口丫唳)氮臺苯甲酸用比満純乙腦定容至10ml.濃度為5.0X10-3mol/L低濃度的試劑(2.5XlOmol/L)川光活純乙粘稀科而成。粧

5、確稱取0.2014g4-甲氨堆毗陀(DMAP),乙脯定容至10ml.濃度為20g/L。準(zhǔn)確稱取1.乙也.又G：甲氨丙基).碳聯(lián)二亞胺(EDC.HC1)0.1438g用乙脂定容至10ml.濃度為0.0755mol/Lo2.3脂肪胺標(biāo)準(zhǔn)品的衍生向2nd安甌瓶中依次加入200ul衍生試劑.90ulDMAP,90ulEDC50ul脂肪胺標(biāo)準(zhǔn)樣品.密封疔50。水浴中反by30min.蔭蕩放冷。加入170ulS0%乙肪水溶液贛進(jìn)樣10衍生反應(yīng)如下圖31：圖314-(9-葉.氮基苯屮酸9脂肪胺衍生丿.2.4色譜條件及質(zhì)譜條件色満條件：HypersilBDS.ClS色満柱4.6X100mm5um人連依利待公可

6、九流動相A：50%乙脯水溶液.B；100%乙酬。洗脫條件見下衣.流動相流速為1OmL/min柱溫3LC.進(jìn)樣10uL熒光激發(fā)和發(fā)射波氏分別為：ex=337iiniAem=421nni質(zhì)諧條件：大氣爪化學(xué)電離源(APCI).1E離子模式，噴霧壓力60p.f.i(lp.s.i=6S94.76Pa).I：燥氣流量為5L/min,氣化溫度400°C,I燥氣溫度350*C,毛細(xì)管電爪3500V,電暈電流4000nA(Pos)o下3-1為梯度洗脫條件34梯度洗脫秤序Time(min)A(%)B(%)050502001003001002.5實際樣品的處理flZ500ml池塘用水（曲阜師范大學(xué)圖書館

7、前）,使用0.45um濾膜除去固體雜質(zhì),隨后經(jīng)過高純水、甲醉、乙粘、高純水處理過的ODS（C18）柱子進(jìn)行聚集，址麻用10ml甲醇并加入0.01mm01鹽酸lml洗脫，超聲后用N?吹I戲余物加入2ml80%的乙蒯水溶液溶解冷藏備川。3結(jié)果與討論3.1衍生條件優(yōu)化實臉中發(fā)現(xiàn).4-（9川丫嚨）氮基苯甲酸住衍生化過程中.衍生效率隨著溫度、試劑比例以及反應(yīng)時間的不同會有很大的變化,例如.囲定反應(yīng)時間和試劑的比例,反應(yīng)效率隧著溫度的升髙而增加,在50。時達(dá)到效率最優(yōu)化:固定反應(yīng)溫度和試劑比例,反應(yīng)效率隨著反應(yīng)時間的升高而變大,在反應(yīng)時間為30分鐘時，達(dá)到效率繪高：固定反應(yīng)溫度和反應(yīng)時何,反應(yīng)效率隨著衍生

8、試劑的比例的升髙而變大,在衍生試劑叱例為4倍.具有最人衍牛效率。本章以乙胺（C2）、丁胺（C4、己胺（C6、豐胺（C8）4種不同的胺為例，下圖32至34顯示了反應(yīng)效率隨著反應(yīng)時何、試劑比例及溫度的關(guān)系圖標(biāo),總結(jié)來說當(dāng)衍生試劑打標(biāo)準(zhǔn)樣品的比例為4倍.處于5DC,反應(yīng)30分鐘具冇最大衍生效率。圖3-2衍生反應(yīng)的時何對效率的形響C2：乙胺(ethyiamme)：C4：J胺(butylamine)：C6：l!胺(hexylamine)：C8：?胺(octylamine)圖3-3衍生試刑與標(biāo)準(zhǔn)樣品的比例對效率的影響C2：乙胺(ethylame)：C4：胺(butylamme)：C6：LL(hexylai

9、mne)：C8：胺(octylamine)C2C4-C6C8圖34衍生溫度對效申的影響C2：乙胺(ethylanune)：C4：J胺(butylamine)：C6：l!胺(hexylamine)：CS：宇胺(octylftiniiie)3.2標(biāo)準(zhǔn)品色譜分離及質(zhì)譜鑒定依照1二述的優(yōu)化條件/f：EclipseXDB-C8色諧柱(4.6X150mm,5uinAgilent公司)乙冊/水做流動相.采用梯度洗脫A30分鐘內(nèi)實現(xiàn)了12種(C1.C12)直鏈b舫胺衍生物的完全垂線分離.結(jié)果見圖35采用大氣壓化學(xué)電離源(APCI)在正離子檢測模式E.進(jìn)行了在線的柱后質(zhì)譜定性,各組分質(zhì)譜數(shù)據(jù)見圖.以己胺衍生物為

10、例其質(zhì)諸圖打質(zhì)活裂解模式見圖36圖35標(biāo)準(zhǔn)脂肪胺衍生物的色誥分離圖C1甲胺（methylamine”C2乙胺（ethylamineAC3丙胺（propylamme：C4胺（butylamine：C5戊胺（pentylamine”C6lL胺hexylanune）：C7丿刃肢<heptylamme）：C8辛胺（octylainine$C9壬胺<nanylamine>：CIO癸胺<decylamine）：CllI胺mdecylamine）：C12十二胺<dodecylamine）：ODwoijGOfi.:e<40wo*»mZ3992|.UHJHl丫290

11、3圖36己胺衍牛物質(zhì)請燼A：級質(zhì)講)(B：級質(zhì)満九(C裂解模式)3.3錢性回歸方程以及檢出限依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)脂肪胺衍生峰面積及實際進(jìn)樣嚴(yán)進(jìn)行線性回歸,得出線性方程、相關(guān)系數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)僞差及各脂肪胺的檢測線見農(nóng)3.2。脂肪胺的錢性相關(guān)系數(shù)都之何，保留時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%)均小P0.090%，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偵差均小0.44%,按照信噪比為S/N-3:!來計算檢岀限均任19.8843.69finolZ何。表32脂肪胺衍T.物的線性冋0方用、和關(guān)系數(shù)、檢出限和標(biāo)擅«1差碳脈子數(shù)冋歸方程Regressionequation相關(guān)系數(shù)CorrelationCoefficientR*檢出限D(zhuǎn)etect

12、ionlimitsfixwl»RSDofretentiontime(%)RSDofpeakarea(%)C1Y=94.33X+7.440.999940.220.090033C2Y=6664X+4.410.999S37.6S90.0S10.24C3Y=80.21X+2.610.999725.SS0.0730.22C40.997943.690.0690.23C5Y=85.33X+4.310.99S150.990.0410.39C6Y=71.4SX+4.130.999523.7S0.0130.2SC7Y=61.5SX+4.740.99S930.790.0120.13CSY=53.44X+4

13、.210.999922990.0120.44C9Y=79.7SX+7.700.999419.S80.0100.1SC10Y=41.76X+2.S10.99S428.920.0140.29C11Y=49.9SX+3.610.99SS22.540.0290.12C12Y=33.61X+8.210.999133.880.0560.19X：進(jìn)ITt(injectedaniountpmol)：Y:峰面積(peakarea)：RSD:相對標(biāo)準(zhǔn)偏怎3.4實際樣品分析將處理過的池畑川水樣品按照前述優(yōu)化的條件講行測岀實際樣品的譜分離圖s<m3-7.兀脂肪胺含秋及冋收率見衣33。圖37池塘水中的脂肪胺色諧分離圖W6M議販子數(shù)水樣中含量（嘰）回收帑（）C133.S199.14C220.1998.72C311.50101.23C48.7299.63C51.04107.45C68.84102.82C70.72102.38CS10.28106.S1C9