實(shí)驗(yàn)六植物組織中總糖和還原糖含量的測(cè)定DNS法ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)六、植物組織中總糖和實(shí)驗(yàn)六、植物組織中總糖和復(fù)原性糖含量的測(cè)定復(fù)原性糖含量的測(cè)定1 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?掌握總糖和復(fù)原糖含量的測(cè)定方法掌握總糖和復(fù)原糖含量的測(cè)定方法 學(xué)習(xí)總糖和復(fù)原糖提取的方法學(xué)習(xí)總糖和復(fù)原糖提取的方法2 2、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)和難點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)和難點(diǎn) 利用利用3,5-二硝基水楊酸法測(cè)定復(fù)原糖含量的二硝基水楊酸法測(cè)定復(fù)原糖含量的實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 多糖在酸性加熱條件下會(huì)降解為復(fù)原糖多糖在酸性加熱條件下會(huì)降解為復(fù)原糖3 3、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)原理3.13.1、復(fù)原糖的概念、復(fù)原糖的概念指含有游離的半縮醛酮基糖。單糖指含有游離的半縮醛酮基糖。單糖都是復(fù)原糖；某些二糖是復(fù)原糖如麥都是復(fù)原糖；某

2、些二糖是復(fù)原糖如麥芽糖、乳糖等；多糖多為非復(fù)原糖。芽糖、乳糖等；多糖多為非復(fù)原糖。葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，故它們都是復(fù)原糖。含有游離的醛基，故它們都是復(fù)原糖。3.23.2、3,5-3,5-二硝基水楊酸比色法二硝基水楊酸比色法 總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有復(fù)原性的雙糖和多糖，可用別提取出來(lái)，對(duì)沒(méi)有復(fù)原性的雙糖和多糖

3、，可用酸水解法使其降解成有復(fù)原性的單糖進(jìn)展測(cè)定，酸水解法使其降解成有復(fù)原性的單糖進(jìn)展測(cè)定，再分別求出樣品中復(fù)原糖和總糖的含量。再分別求出樣品中復(fù)原糖和總糖的含量。 復(fù)原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)復(fù)原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，物，3,5-3,5-二硝基水楊酸二硝基水楊酸( (黃色那么被復(fù)原為棕紅黃色那么被復(fù)原為棕紅色的色的3-3-氨基氨基-5-5-硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，復(fù)原硝基水楊酸。在一定范圍內(nèi)，復(fù)原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色的深淺成正比關(guān)系，利用分光光度計(jì)，在用分光光度計(jì)，在540nm540nm波長(zhǎng)下測(cè)定光密度值，查波長(zhǎng)下

4、測(cè)定光密度值，查對(duì)規(guī)范曲線并計(jì)算，便可求出樣品中復(fù)原糖和總對(duì)規(guī)范曲線并計(jì)算，便可求出樣品中復(fù)原糖和總糖的含量。糖的含量。 由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需參由于多糖水解為單糖時(shí)，每斷裂一個(gè)糖苷鍵需參與一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以與一分子水，所以在計(jì)算多糖含量時(shí)應(yīng)乘以0.90.9。相對(duì)密度法相對(duì)密度法折光法折光法旋光法旋光法物理法物理法3.33.3、糖含量測(cè)定方法、糖含量測(cè)定方法化學(xué)法化學(xué)法復(fù)原糖法復(fù)原糖法碘量法碘量法比色法比色法直接滴定法直接滴定法 (改良的蘭改良的蘭愛(ài)農(nóng)法愛(ài)農(nóng)法 高錳酸鉀法高錳酸鉀法 薩氏法薩氏法 3，5二硝基水楊酸二硝基水楊酸 酚酚硫酸法硫酸法蒽酮法蒽酮法半

5、胱氨酸半胱氨酸咔唑法咔唑法 紙色譜 薄層色譜 GC HPLC 半乳糖脫氫酶測(cè)半乳糖、乳糖 葡萄糖氧化酶測(cè)葡萄糖 發(fā)酵法 測(cè)不可發(fā)酵糖 分量法測(cè)果膠、纖維素、膳食纖維素 色譜法色譜法 酶法酶法4 4、操作步驟、操作步驟4.14.1、制定規(guī)范曲線、制定規(guī)范曲線管號(hào)管號(hào)012345標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.0蒸餾水蒸餾水/mL1.00.80.60.40.20DNS試劑試劑/mL2.02.02.02.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫蒸餾水蒸餾水/mL9.09.09.09.09.09.0葡萄糖

6、濃度葡萄糖濃度/mg/mL00.20.40.60.81.0A5404.24.2、植物組織中總糖與復(fù)原糖溶液的獲取、植物組織中總糖與復(fù)原糖溶液的獲取(1)復(fù)原糖：30mL水沖研缽2-3次1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中50水浴0.5h冷卻定到100mL混勻,過(guò)濾取濾液作為復(fù)原糖提取液(2)總糖：1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中沸水浴0.5h冷卻,用NaOH中和,加水定容到100mL混勻,過(guò)濾取濾液作為總糖提取液12mL水沖研缽2-3次10mL6MHClI2-KI檢測(cè)4.34.3、用、用3,5-3,5-二硝基水楊酸法測(cè)復(fù)原糖、二硝基水楊酸法測(cè)復(fù)原糖、總糖含量總糖含量管號(hào)管號(hào)空白對(duì)照空白對(duì)照還原糖還原糖樣液管樣液管總糖樣液管總糖樣液管樣液樣液/mL01.01.0水水1.000DNS試劑試劑/mL2.02.02.0沸水浴中準(zhǔn)確煮沸沸水浴中準(zhǔn)確煮沸5min，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫，取出，用自來(lái)水冷卻至室溫蒸餾水蒸餾水/mL9.09.09.0A5405 5、數(shù)據(jù)處置與問(wèn)題、數(shù)據(jù)處置與問(wèn)題 5.1、計(jì)算濃度 5.2、本