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1、2022-4-151實(shí)驗(yàn)三:根系活力的測(cè)定 (一)(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康募耙饬x及意義 (二)(二)實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 (三)(三)實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 (四)(四)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告2022-4-152實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x 掌握根系活力測(cè)定的方法2022-4-153實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 氯化三苯基四氮唑( TTC )是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為 80 mV 的氧化還原色素,溶于水中成為無(wú)色溶液,但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯甲 ( TTF )生成的三苯甲 ( TTF )比較穩(wěn)定,不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化,所以 TTC 被廣泛用作酶試驗(yàn)的氫受體,植物根系中脫氫酶所引起的 TTC 還原,可因加入琥珀酸、延胡索
2、酸、蘋(píng)果酸得到增強(qiáng),而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以 TTC 還原量能表示脫氫酶活性,并作為根系活力的指標(biāo)。2022-4-154實(shí)驗(yàn)材料和器材實(shí)驗(yàn)材料和器材 試劑 乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸鈉粉末、1TTC、1/15mol/LpH7.0磷酸緩沖液、1mol/L硫酸 實(shí)驗(yàn)材料 蒜根 器材 分光光度計(jì)、分析天平、恒溫水浴鍋、研缽、漏斗個(gè)、移液管、比色管、10ml容量瓶、50ml燒杯2022-4-155實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟( 2 )稱(chēng)取根尖樣品 0.5 g ,放入小燒杯中,加入 0.4 TTC 溶液和磷酸緩沖液( pH7.0 )各 5 mL ,使根充分浸沒(méi)在溶液內(nèi),在 37 下暗保溫 1 2 h ,此后立
3、即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ,以停止反應(yīng)。(與此同時(shí)做一空白實(shí)驗(yàn),先加硫酸,再加根樣品, 37 下暗保溫后不加硫酸,其溶液濃度、操作步驟同上)。 ( 1 ) TTC 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作 取 0.4 TTC 溶液 0.2 mL 放入大試管中,加 9.8 mL 乙酸乙酯,再加少許 Na 2 S 2 O 4 粉末搖勻,則立即產(chǎn)生紅色的 TTF 。此溶液濃度為每毫升含有 TTF 80 g 。分別取此溶液 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.00 mL 、 1.50 mL 、 2.00 mL 置 10 mL 刻度試管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含 TTF 20 g 、 40 g 、 80 g 、 120 g 、 160 g 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,以乙酸乙酯作參比,在 485 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。2022-4-156實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟 ( 3 )把根取出,用濾紙吸干水分,放入研缽中,加乙酸乙酯 3 4 mL ,充分研磨,以提出 TTF 。把紅色提取液移入刻度試管,并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈?2 3 次,皆移入刻度試管,最后加乙酸乙酯使總量為 10 mL ,用分光光度計(jì)在波長(zhǎng) 485 nm 下比色,以空白試驗(yàn)作參比測(cè)出
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