脊髓損傷.ppt

1、12l脊髓原發(fā)性損傷(ASCI)l脊髓繼發(fā)性損傷 (SSCI)3l機械壓迫，出血，細胞內(nèi)外電解質(zhì)改變l一般4 h 內(nèi)l不可逆4l包括水腫、局部缺血、炎癥反應，再灌注、鈣離子通道改變、脂質(zhì)過氧化等l生物化學變化中，具自體損傷因素及神經(jīng)保護因素，在分子細胞水平起主動調(diào)節(jié)過程l可逆性，可被控制l了解其分子機制，對采取治療措施有重要意義5l出血 l水腫 l神經(jīng)壞死 l軸突碎裂 l脫髓鞘l空洞形成6l乳酸水平明顯升高l低灌注量程度與脊髓生理功能改變及誘發(fā)電位相關l組織氧含量明顯減低7l灰、白質(zhì)血管反應不同，前者在傷后12h 內(nèi)迅速出現(xiàn)缺血和梗死，白質(zhì)血流 (SCBF) 與創(chuàng)傷程度有關l引起脊髓壞死或神經(jīng)

2、功能喪失重要原因l除與血管直接損傷有關外，還與血管活性物質(zhì)釋放引起血管痙攣、血栓形成、血栓素(TXA)有關8l血管內(nèi)皮損傷與SCBF 同等重要l再灌注后最初數(shù)分鐘內(nèi)，細胞死亡有一爆發(fā)過程，缺血后40 min, 神經(jīng)元胞體和軸突有明顯免疫組化及病理學損傷，再灌注 4 h，NF 反應陽性，NF 紊亂、稀疏、崩潰、溶解、軸突腫脹、擴大、消失 9lSCI 后，血-腦（脊髓）屏障 (BSCB) 破壞，CNS 正常內(nèi)皮的選擇性滲透性受到影響，內(nèi)皮的損壞將促進血管性水腫的形成，血管外間隙內(nèi)聚集富含蛋白的血漿樣液體l一定程度細胞毒性水腫，對神經(jīng)組織引起壓迫，維持異常電解質(zhì)環(huán)境l白質(zhì)水腫降低灌注，促進組織繼發(fā)損

3、傷10l傷后立即，水腫局限于脊髓中央部分，逐漸呈離心性向白質(zhì)擴散lSCI 嚴重程度與水腫縱向擴展有關，傷后68d 達高峰l水腫可表現(xiàn)為繼發(fā)形式，血漿超濾液逐漸出現(xiàn)，呈持久血管性水腫l繼發(fā)性內(nèi)皮細胞連接的松弛發(fā)生毛細管 漏，或超過內(nèi)皮增加的小泡樣輸送 11 分為兩區(qū) ： 第一區(qū)第一區(qū)：出血，組織不存活，微血管床逐漸喪失灌注的能力 第二區(qū)第二區(qū) ：血管床仍保持暢通 治療在于盡量不使第一區(qū)擴大，同時使第二區(qū)仍然存活的組織維持灌注 微循環(huán)障礙微循環(huán)障礙12正常脊髓血流量脊髓血流量 (SCBF) : 分布呈階段性 腰膨大 頸膨大 胸腰段 上胸段 中胸段 上頸段 平均 SCBF 為 24.29 5.63

4、ml/100g/min 灰質(zhì)與白質(zhì)血流量比率約為 3.22 : 1 正常脊髓血壓在6.7 17.3kPa下可自行調(diào)節(jié)13l灌注壓 ( perfusion pressure, PP )l平均動脈壓 ( mean arterial pressure, MAP) lSCI 后，脊髓自動調(diào)節(jié)血壓機制受到損害l腦脊髓壓 (cerebrospinal pressure , CSFP ) SCBP 與 MAP呈線性相關 PP = MAP CSFP14lSCI 后首先是 PMN 浸潤，傷后12 d 開始巨噬細胞浸潤， 57 d 達到峰值， SCI 后存活的神經(jīng)纖維繼發(fā)脫髓鞘及軸突遲發(fā)功能喪失，與巨噬細胞應答時

5、間一致l巨噬細胞具清除細胞碎片、恢復血流及SCI 內(nèi)環(huán)境等保護作用, 但與吞噬細胞活性和刺激瘢痕形成等破壞作用很難分開15l通過調(diào)節(jié)細胞外電解質(zhì)平衡和合成CNS 細胞外基質(zhì)蛋白 （膠原蛋白、纖維粘連蛋白），以維持CNS的完整和內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定 l促進內(nèi)皮細胞的緊密連接（血脊髓屏障組成部分）直接或間接保護神經(jīng)細胞l通過控制調(diào)控因子和基質(zhì)蛋白的合成對神經(jīng)起破壞作用16l5 min : 皮質(zhì)小靜脈擴張，紅細胞膨脹l1530 min : 血管周圍間隙出血，軸突變化l1 h ：染色質(zhì)溶解，前角細胞缺血l4 h ：中央?yún)^(qū)出血壞死，灰白質(zhì)交界處進行性水腫l1 w ：中央?yún)^(qū)出現(xiàn)囊形變l4 w : 囊腔內(nèi)有星形膠質(zhì)

6、細胞或殘存脫髓鞘的軸突17l凋亡是以細胞或細胞核皺縮、染色質(zhì)密度增加，膜芽出為特征，其過程需要精確的基因轉(zhuǎn)錄和一定量蛋白質(zhì)合成，是一種主動性、不同于壞死的死亡形式lSCI 后，神經(jīng)元及膠質(zhì)細胞都產(chǎn)生凋亡，但就分布范圍及持續(xù)時間來說，后者更具意義18l應用原位末端標記法 (TUNEL) 與免疫組化結(jié)合， l大鼠脊髓橫斷后，斷端兩側(cè)白質(zhì)脫髓鞘區(qū) P53 和 Bax 表達增強，Bcl-2 僅少量表達 ；出現(xiàn)大量 TUNEL 標記陽性細胞；TEM 見少突膠質(zhì)細胞典型凋亡改變，說明大鼠脊髓橫斷后白質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)細胞出現(xiàn)凋亡19lK+ 從受傷的神經(jīng)元釋放，細胞外 K+ ，神經(jīng)元喪失傳導沖動的能力l細胞外 K +

7、 濃度 20 mmol/L 可使動作電位傳導終止l嚴重SCI后，白質(zhì)細胞外 K+ 在6 min 內(nèi)可由4 mmol/L 到 50 mmol/L, 甚至更高l此現(xiàn)象可持續(xù)達 2 h,直到細胞外 K+ 濃度降低到 15mmol/L 以下時，抑制方能逆轉(zhuǎn)20l細胞內(nèi)Ca 2+ 后，可激活蛋白溶酶和脂質(zhì)溶酶，引起細胞損傷和壞死 lSCI 后，細胞外 Ca2+ 內(nèi)流超載，損傷周圍組織 Ca 2+ 也流向損傷組織，使組織總 Ca 2+ 和細胞內(nèi) Ca 2+ 都過度增高，細胞內(nèi) Ca 2+ 超載稱為細胞死亡最后公共通路21l細胞膜缺損處的泄露，去極化，特異性Ca2+通道的開放lN-甲基D-天冬氨酸(NMDA

8、)依賴性通道的活化l清除功能障礙 （Na+-Ca2+交換減少、Ca2+泵失能等）l細胞內(nèi)儲庫釋放Ca2+l脊髓組織壞死的磷脂膜局部自溶或許是SCI區(qū)域內(nèi)細胞外液Ca2+過高的一種主動機制，以獲得自身修復或保護的足夠時間22脊髓損傷后，局部組織 Mg2+ 含量下降，其程度與 SCI 損傷程度呈正相關。說明 Mg2+ 的降低參與了 SSCI早期補充 Mg2+ 可減輕因 Mg2+ 下降造成的 SSCIMg2+是一種非竟爭性 NMDA 受體拮抗劑 ，可阻滯 NMDA 受體的離子通道，并調(diào)節(jié) EAAs 的釋放，從而拮抗由 EAAs 所致?lián)p傷 Mg2+ 對的保護作用有賴于對 Ca2+ 的拮抗作用 23lS

9、CI 后 24h 和 48 h，局部組織總 Ca2+ 含量顯著增高，Ca2+ 大量細胞內(nèi)流，導致細胞內(nèi) Ca2+ 濃度大大升高lMg2+ 通過與 Ca2+ 競爭細胞膜上的結(jié)合位點而抑制 Ca2+ 內(nèi)流；通過 Mg2+ - Na+ 交換從而抑制 Ca2+-Na+ 交換，阻止Ca2+_內(nèi)流l細胞外 Mg2+ 上可通過 Mg2+ - Ca2+ 交換促進 Ca2+ 外流24l內(nèi)源性抗氧化劑減少，自由基 (FR) 生成增加l主要來自遭受損害或破裂的磷脂細胞膜，膜的通透性或完整性受到破壞，甚至引起細胞死亡lFR 抑制 PGI2，使TXA2 合成及血小板凝聚作用增強，微血管閉塞和痙攣，間接造成脊髓缺血25l

10、EAAs 主要包括 谷氨酸及天門冬氨酸，是重要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，正常存在于神經(jīng)末梢的囊泡中l(wèi)EAAs通過其受體介導，啟動一系列神經(jīng)損傷，最終導致死亡細胞的病理生化反應，稱為EAAs神經(jīng)毒性26lEAAs 有三種具特性的受體 ：kainate, quisqualte 及 NMDARlNMDA 是一種興奮性極強的 EAA，作用強度為 Asp 的1000倍lNMDAR 可使神經(jīng)細胞Na+, Ca2+內(nèi)流，K+外流，造成細胞內(nèi)Na+, Ca2+濃度升高, K+ 濃度降低27 EAAs 在 SSCI 的神經(jīng)毒素表現(xiàn) ： 1. 傷后數(shù)小時內(nèi)因 EAAs 受體過度興奮，介導神經(jīng)細胞急性滲透性腫脹，以Na+內(nèi)流

11、和Cl-及水分被動內(nèi)流為特征 2. 傷后數(shù)小時至數(shù)日內(nèi), 因NMDAR 過度興奮引起的神經(jīng)細胞延遲性損傷, 以Ca2+內(nèi)流為特征28lNMDAR 主要分布于神經(jīng)元細胞體和樹突的突觸后膜 lNMDAR 數(shù)量的減少可能起一種代償性神經(jīng)保護作用 lNMDAR 數(shù)量的減少并不是神經(jīng)元原發(fā)損傷變性壞死的結(jié)果，而是在繼發(fā)性損傷過程中起了作用29l類阿片受體主要有 、 及 三種，納絡酮對受體最具選擇性，但大劑量對三種受體的配體均有活性l強腓肽強腓肽(dynorphin)即 類阿片受體的配體，在SCI最易被累及，SCI后，強腓肽的免疫反應有選擇性地增加，與損傷嚴重程度相關30l納絡酮納絡酮可逆轉(zhuǎn)頸段脊髓橫切后

12、引起的低血壓，可改善SCBFl強腓肽強腓肽在內(nèi)源性類阿片中是唯一在大鼠腰蛛網(wǎng)膜下腔注射后能產(chǎn)生后肢癱瘓者，部分系非類阿片劑作用31lFR 是具異常反應的分子，繼發(fā)于其外軌道不成對電子l氧FR鏈反應累及 LPO, 生物膜的磷脂及膽固醇成分被FR反應所破壞l正常還原的細胞代謝途徑可產(chǎn)生 ：O2，OH-, H2O2l正常通過一些天然抗氧化物可管制FR產(chǎn)生的有害作用32l病理性 FR 的產(chǎn)生及其有害作用可引起 SCI 后的缺血 lASCI 后，F(xiàn)R 可引起 LPO 并使細胞膜節(jié)裂，表現(xiàn)為過氧化多不飽和脂肪酸(PUSFA) 分解產(chǎn)物增多，膽固醇減少，伴膽固醇氧化產(chǎn)物。鳥苷酸環(huán)化酶的活化及相應 cGMP

13、增加；組織內(nèi)抗氧化物如壞血酸及生育酚減少；磷脂依耐性膜結(jié)合Na+ K+ ATP 酶的抑制等33lSCI 后，花生四烯酸從膜磷脂釋出，很快游離，被環(huán)氧化酶代謝形成過氧化類及甘烷類，或經(jīng)脂氧化酶代謝為羥脂肪酸和白三烯l甘烷類中兩個具最強活性，能影響血液阻斷及血管完整性的為 : 血栓素( thromboxane, TXA2 ) 前列環(huán)素 ( prostacyclin, PGI2 ) 34lTXA2 刺激血小板聚集及血管收縮，細胞內(nèi) Ca2+ 增加，cAMP 降低lPGI2 作用相反，抑制血小板聚集和使血管擴張，細胞內(nèi) Ca2+ 外流，cAMP增加l貓 L2髓節(jié)從腹側(cè)打擊后 6h，TXB2 5倍， 6

14、KetoPGF1 TXB2/6KetoPGF1 近三倍35lTXA2 和 PGI2是一對重要前列腺素產(chǎn)物，具有非常強烈相互對立的血管活性l生理情況下，TXA2 和 PGI2的產(chǎn)生和分解保持相對平衡，以維持機體循環(huán)功能正常lTXA2/PGI2失衡后，一方面病理性FR增加，加重LPO；另一方面加重血管內(nèi)皮損害，血管滲透性增加，發(fā)生微循環(huán)障礙l兩者互為因果，形成惡性循環(huán)36l細胞破裂時，花生四烯酸叢磷脂結(jié)構(gòu)釋放，作為環(huán)氧化酶或脂氧化酶底物發(fā)揮作用，生成PG, PG-I, TXA2和白三烯lTXA2 和白三烯是強力血管收縮劑和中性粒細胞的趨化因子，在炎癥前效應中有廣泛作用l這些化合物與脂質(zhì)過氧化生成密

15、切相關37lET 是血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生具強烈收縮血管作用的生物活性多肽， 正常血漿 ET 水平較低，缺血、缺氧條件下， ET 水平明顯升高 lET 縮血管效應起效慢，持續(xù)時間長，微血管較大血管對ET 更敏感 lET 在 CNS 中起神經(jīng)遞質(zhì)作用，可引起腦血管持久性收縮及蛛網(wǎng)膜下腔出血lET水平越高，脊髓損害程度越重 38ET 在ASCI 的作用機理 ： 1. 引起血管痙攣, 導致脊髓缺血缺氧 2. 作用于受體后, 細飽內(nèi)游離 Ca2+ , 導 致脊髓缺血, 線粒體功能受損, EAAs , 中性蛋白酶活化, 加劇脊髓損傷 3. 破壞BSCB39l在創(chuàng)傷應激條件下，血小板、血管內(nèi)皮細胞和神經(jīng)細胞均能

16、產(chǎn)生大量 PAF，與靶細胞膜上的 PAF 特異性受體結(jié)合后即產(chǎn)生生物效應 lPAF 可使 Na+、K+、Ca2+、Mg2+ 通道開放，細胞外 Na+、Ca2+ 內(nèi)流，細胞內(nèi) K+ 外流 lPAF 加重脊髓損傷后水腫，抑制 Na+K+ATP酶及 Ca2+Mg2+ATP酶的活性，結(jié)果是 Na+、Ca2+濃度升高， K+ Mg2+濃度降低 40lPAF 是生物活性很強的多功能脂質(zhì)炎性介質(zhì)，也是SSCI的啟動因子，能介導神經(jīng)毒性水腫作用l組織損傷可刺激、介導中性粒細胞和血管內(nèi)皮細胞間的粘附作用，與細胞間粘附分子 ICAM1，內(nèi)皮細胞和白細胞粘附分子ELAM1及顆粒膜蛋白GMP140有關lPAF 可使血

17、管內(nèi)皮細胞ICAM1、RNA、ELAM1、mRNA表達41l腺苷是 CNS 內(nèi)重要抑制性保護遞質(zhì)之一， SCI 后，腺苷含量立即升高，1 h 達高峰， 2 h 降為正常，腺苷含量與損傷程度成正比，大量興奮性毒性物質(zhì)釋放，損傷細胞釋放 K+以及缺血、缺氧均可刺激腺苷的合成與釋放l腺苷是 CNS 內(nèi)一種突觸傳遞及神經(jīng)元活動的抑制性調(diào)節(jié)因子，腺苷激活突觸前膜 A1 受體，影響 Ca2+ 的內(nèi)流，以抑制 Ca2+ 依賴的興奮性遞質(zhì)的釋放，腺苷還可激活 A2受體，使血管平滑肌松弛，防止血栓形成42lTNF-, IL-1, IL-6 : 在脂質(zhì)過氧化生成過程中起重要作用，促進炎癥反應，不利于修復l TGF

18、- 43 TGF- ：l多功能多肽性生長因子l對急、慢性炎癥有重要對抗性調(diào)節(jié)作用l通過抑制質(zhì)脂過氧化生成能防止缺氧性損傷l通過細胞表面受體調(diào)節(jié)基因表達，調(diào)節(jié)細胞外基質(zhì)合成、細胞分化和增殖l通過刺激NGF生成及抑制細胞增殖，調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細胞功能44lNO 對 SCI 同時起保護作用及破壞作用l在CNS內(nèi)，主要由血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞中 NOS 催化精氨酸胍基末端氮原子與氧結(jié)合生成l NO 作為一種血管舒張劑， 可舒張血管，增加血流，同時也抑制中性白細胞、血小板和巨噬細胞貼附于血管內(nèi)皮，避免血栓形成，有助于維持正常血管通透性 45lNO 將增強炎癥細胞的粘附和從血管內(nèi)滲出，白細胞滲入

19、組織中的破壞作用，減少促炎癥反應細胞因子（ TNF、 IL-1） 防止 LPO 的生成 lNO 與 TGF- 可相互作用，促進 TGF- 抗炎癥反應l NO 是 CNS 中強有力的信息傳遞介質(zhì)，不需細胞表面受體應答而奏效4647 大劑量甲基強的松龍大劑量甲基強的松龍 的應用的應用(METHYLPREDNISOLONE SODIUM SUCCINATE, MP) 48l抑制LPOl保存生物膜的結(jié)構(gòu)和功能完整性l促進神經(jīng)功能恢復49lNASCISI : 首次1000mg，以后 1000mg/d，連續(xù) 10d. 與100 相比,感覺與運動功能均無明顯差異lNASCISII: 首次 30mg/kg,以

20、后5.4mg/kg/h, 共 23h. 與大劑量納絡酮及安慰劑(5.4g/kg/h, 然后是 3.6mg/kg/h) 相比,結(jié)果顯示,傷后8 h 內(nèi)應用大劑量者, 其神經(jīng)功能改善在統(tǒng)計學上有顯著意義50lNASCIS II: 傷后3 8 h內(nèi)首次 30mg/kg, 分為 24h 及 48h 組,后者在傷后6周、6月和 1年時運動功能顯著改善。在 3h 以內(nèi)接受治療時，應維持 24h；在傷后 38h 治療者，應維持 48h51l需要靜脈大劑量給藥l早期治療 （8 h 以內(nèi)）l神經(jīng)保護時間曲線與組織藥代學平行l(wèi)神經(jīng)保護作用獨立于糖皮質(zhì)激素活性 52lCPP 3- ( 2-carboxypipara

21、zin-4-yl) propyl-1-phosphonic acid 鞘內(nèi)注射能有效地減輕神經(jīng)功能和組織的損害，拮抗Na+,Ca2+通過受體門控通道的內(nèi)流, 而減輕神經(jīng)細胞的損傷 lDizocilpine maleate (MK801) : 強有力非竟爭性NMDAR拮抗劑，在局灶型腦缺血可使組織損傷減少3090% MK801可改善脊髓損傷或缺血病變53l在大鼠后鞘內(nèi)注射相對無選擇性受體拮抗劑 win44, 4413, nalmefene及高選擇性受體拮抗劑 norbinaltorplimine ( norbin )，較納絡酮能更好保護肢體運動功能, 而阿片受體拮抗劑ICI154，,129無此作

22、用l特異性拮抗劑norbin 和AndynA113分別從阿片肽受體水平和阿片肽配體水平阻斷dynA的作用，藥理劑量足以拮抗或中和脊髓全部受體和dynA，4周后顯示AndynA113對脊髓的保護作用強于norbin，殘留脊髓面積最大 54l尼莫地平尼莫地平( nimodipine ) 對腦血管有選擇性擴張作用，大劑量因引起的血壓而無效。加用腎上腺素以維持一定平均全身動脈壓（MSAP）非常重要lSCI后，低血壓將加重缺血，單純應用升壓藥不能恢復SCBFl尼莫地平雖能改善SCBF，能否促進神經(jīng)功能仍不明確，但對 Ca2+誘導細胞死亡具有保護作用55l皮質(zhì)類固醇能抑制AA的釋放，降低LPO的形成，增強

23、Na+K+ATP酶的活性lMP, 環(huán)氧化酶抑制劑如消炎痛，甲氯滅酸的結(jié)合堿（ meclofenamate），SOD， 維生素C，維生素 E 及尼莫地平可在不同環(huán)節(jié)打斷 FR 反應 lTirilazad 為強有力自由基清除劑及抗氧化劑，特別是 LPO 強有力的抑制劑， Tirilazad 也能降低損傷部位釋放的 AA 量 56l小劑量非特異性NOS 競爭性抑制劑 L NAME ( L NG硝基精氨酸甲酯）可減輕組織損害，但大劑量可使組織破壞加重，神經(jīng)功能不能恢復，說明 NO在參與SSCI 中， 既具保護作用，又具破壞作用lLNAME 對神經(jīng)細胞和血管內(nèi)皮細胞具抑制作用，并呈劑量依賴性57lPAF

24、受體拮抗劑BN52021是一種二萜化合物，能抑制3HPAF與血小板、血管內(nèi)皮細胞、神經(jīng)細胞特異性結(jié)合，有很強競爭專一性lBN52021能減輕脊髓組織水腫，防止血管內(nèi)皮細胞損害以及因血管通透性增高所致BBB障礙 lBN52021對SCBF有重要調(diào)節(jié)作用，通過阻斷PAF受體，間接抑制PLA2及TXA2合成酶的活性，減少AA代謝產(chǎn)物釋放lBN52021抑制Ca2+內(nèi)流、LPO反應及EAAs的產(chǎn)生和釋放58lGg 是組織細胞膜上含糖鞘脂的唾液酸， CNS 含量最高lGg 至少有四種，即GM1、 GD1a、 GD1b 和 GT1b，其中 GM1 最為重要，被認為是繼大劑量 MP 后治療 ASCI 有價值

25、的藥物lGM1 能激活 Na+K+ATP 酶，防止神經(jīng)組織因缺血造成的細胞水腫及神經(jīng)細胞在缺氧狀態(tài)下的存活率，并能促進神經(jīng)細胞軸突、樹突發(fā)芽和再生 lGM1能抑制NOS 的活性，降低NO的合成及因此造成的神經(jīng)損害59lGeisler (1991) : SCI 后，先采用 MP，傷后 72 h 內(nèi)，靜脈注射 GM1 100 mg/d，共1832次，1年隨訪 ASIA 運動評分較對照組提高，但受到質(zhì)疑lGeisler （1992）再次進行總結(jié)， GM1組應用 Frankel 評分平均提高23級，主要能促進白質(zhì)神經(jīng)纖維通過損傷平面l臨床觀察應用小劑量MP和 GM1比單用 MP好lMP與GM1最佳配伍

26、劑量、給藥時間及是否可與 NGF聯(lián)合應用尚需進一步研究60EXPERIMENTAL TREATMENTOFSPINAL CORD INJURY61l出芽出芽l延長延長l功能性連接功能性連接62l環(huán)境因素環(huán)境因素 (ENVIRONMENTAL FACTORS)l內(nèi)在因素內(nèi)在因素 (INTRINSIC FACTORS)63l缺乏缺乏NTFs的營養(yǎng)、促進作用的營養(yǎng)、促進作用l缺乏適宜引導通路基質(zhì)缺乏適宜引導通路基質(zhì)l膠質(zhì)瘢痕阻礙生長膠質(zhì)瘢痕阻礙生長l存在髓鞘相關抑制因子存在髓鞘相關抑制因子64l生長相關蛋白生長相關蛋白 (GAP 43)l降鈣素基因相關肽降鈣素基因相關肽 (CGRP)l原癌基因原癌基

27、因 (Bcl 2)lNMDA 受體受體65l繼發(fā)性脊髓損傷治療繼發(fā)性脊髓損傷治療l神經(jīng)營養(yǎng)因子神經(jīng)營養(yǎng)因子l神經(jīng)組織或細胞移植神經(jīng)組織或細胞移植l基因治療基因治療66l神經(jīng)營養(yǎng)因子神經(jīng)營養(yǎng)因子 ：l 神經(jīng)生長因子神經(jīng)生長因子 (NGF)l 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子 (BDNF)l 神經(jīng)營養(yǎng)素神經(jīng)營養(yǎng)素3 (NT3)l 神經(jīng)營養(yǎng)素神經(jīng)營養(yǎng)素4/5 ( NT4/5)l睫狀體神經(jīng)營養(yǎng)因子（睫狀體神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF)67l低親和力受體低親和力受體 (LNGFR)l高親和力受體高親和力受體 (HNGFR)68l與神經(jīng)膜、軸膜上受體高選擇性結(jié)合與神經(jīng)膜、軸膜上受體高選擇性結(jié)合l調(diào)控神經(jīng)細胞

28、內(nèi)相關細胞因子及鈣離子調(diào)控神經(jīng)細胞內(nèi)相關細胞因子及鈣離子重新分布重新分布l改善損傷部位的微循環(huán)改善損傷部位的微循環(huán)l促進神經(jīng)元纖維再生促進神經(jīng)元纖維再生69l周圍神經(jīng)移植周圍神經(jīng)移植l胚胎脊髓移植胚胎脊髓移植l雪旺細胞移植雪旺細胞移植l混合移植混合移植l其它其它70l胚胎脊髓塊移植胚胎脊髓塊移植 (FSC)l胚胎脊髓懸液移植胚胎脊髓懸液移植 (FSCS)71l抑制膠質(zhì)瘢痕抑制膠質(zhì)瘢痕l營養(yǎng)神經(jīng)組織營養(yǎng)神經(jīng)組織l誘導作用誘導作用l傳導作用傳導作用l中繼作用中繼作用l救援作用救援作用l替代作用替代作用 72l產(chǎn)生的產(chǎn)生的NTFs對神經(jīng)元的存活有協(xié)同對神經(jīng)元的存活有協(xié)同作用作用l表面細胞粘附分子（表

29、面細胞粘附分子（CAM) 與軸突與軸突生長錐表面相應分子親和性結(jié)合生長錐表面相應分子親和性結(jié)合l分泌細胞外基質(zhì)（分泌細胞外基質(zhì)（ECM)，如層粘蛋，如層粘蛋白白(LN)、纖維連接蛋白、纖維連接蛋白(FN)等等 73 利用外源基因在靶細胞中的利用外源基因在靶細胞中的表達，改變神經(jīng)元內(nèi)在特性，促表達，改變神經(jīng)元內(nèi)在特性，促進神經(jīng)元存活、再生，達到功能進神經(jīng)元存活、再生，達到功能恢復恢復 74l活體外法活體外法(EXVIVO APPROACH)：將經(jīng)過遺傳修飾的特定細胞移植到將經(jīng)過遺傳修飾的特定細胞移植到活體神經(jīng)組織，表達或分泌特定分活體神經(jīng)組織，表達或分泌特定分子，促使神經(jīng)功能恢復子，促使神經(jīng)功能

30、恢復l在體法（在體法（INVIVO APPROACH) ：利用病毒或非病毒載體將外源基因利用病毒或非病毒載體將外源基因直接導入神經(jīng)組織而使其表達直接導入神經(jīng)組織而使其表達75l重組分子的構(gòu)建重組分子的構(gòu)建l受體細胞的選擇受體細胞的選擇l載體的選擇載體的選擇76l目的基因目的基因cDNAl啟動子啟動子/增強子增強子l載體載體77l通過基因克隆化、人工合成、通過基因克隆化、人工合成、PCR 擴增及人體基因組降解而擴增及人體基因組降解而獲得獲得l通過粘性末端連接法、平頭末端通過粘性末端連接法、平頭末端直接連接法或同聚物結(jié)尾法進行直接連接法或同聚物結(jié)尾法進行構(gòu)建構(gòu)建78l強組成型強組成型 （STRON

31、G CONSTITUTIVE）l管家型（管家型（HOUSE KEEPING）l組織特異型組織特異型 （TISSUE SPECIFIC）79l易于獲取或培養(yǎng)增殖易于獲取或培養(yǎng)增殖l易于接納重組分子易于接納重組分子l易于移植、存活，長期表達外源易于移植、存活，長期表達外源基因基因l無免疫原性及形成腫瘤危險無免疫原性及形成腫瘤危險80l雪旺細胞雪旺細胞l成纖維細胞成纖維細胞l成肌細胞成肌細胞l胚胎干細胞胚胎干細胞l神經(jīng)干細胞神經(jīng)干細胞l嗅鞘細胞嗅鞘細胞81l多能干細胞多能干細胞l通過體細胞核轉(zhuǎn)移而獲得通過體細胞核轉(zhuǎn)移而獲得l一定條件下可分化為神經(jīng)元或支一定條件下可分化為神經(jīng)元或支持細胞持細胞l分泌生

32、物活性物質(zhì)，促進脊髓組分泌生物活性物質(zhì)，促進脊髓組織再生織再生82l產(chǎn)生神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞的前體細產(chǎn)生神經(jīng)元或膠質(zhì)細胞的前體細胞胞l由胚胎或成年哺乳動物由胚胎或成年哺乳動物 CNS 組組織分離獲得織分離獲得l易于遺傳調(diào)控易于遺傳調(diào)控l組裝表達外源基因組裝表達外源基因83l自我復制更新，維持穩(wěn)定細胞儲備自我復制更新，維持穩(wěn)定細胞儲備l處于較原始未分化狀態(tài)處于較原始未分化狀態(tài)l具多向分化的潛能具多向分化的潛能l在胞漿內(nèi)表達巢素（在胞漿內(nèi)表達巢素（nestin) 的特異的特異性蛋白性蛋白84lOECs和嗅神經(jīng)軸索來源于嗅基板，屬外周起和嗅神經(jīng)軸索來源于嗅基板，屬外周起源源lOECs分布在嗅上皮、嗅神經(jīng)和嗅球分布在嗅上皮、嗅神經(jīng)和嗅球(OB) 第第1、2層層l嗅神經(jīng)元終生具再生能力，嗅神經(jīng)元終生具再生能力，OB 除星