獸醫(yī)生物制品學(xué)

1、獸醫(yī)生物制品學(xué)第一講 緒論一、獸醫(yī)生物制品學(xué)的概念1、獸醫(yī)生物制品學(xué)（veterinary biologicology）以預(yù)防獸醫(yī)學(xué)和生物工程學(xué)理論為基礎(chǔ)，研究動(dòng)物傳染病和寄生蟲病的免疫預(yù)防、診斷和治療用生物性制品的制造理論和技術(shù)、生產(chǎn)工藝、制品質(zhì)量檢驗(yàn)與控制及保藏和使用方法，以增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體特異性和非特異性免疫力，及時(shí)準(zhǔn)確診斷動(dòng)物疫病，并給予特異性治療，防止疫病傳播的綜合性應(yīng)用學(xué)科。2、獸醫(yī)生物制品 (veterinary biologics)是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用微生物、寄生蟲及其代謝產(chǎn)物或免疫應(yīng)答產(chǎn)物制備的一類物質(zhì)，專供相應(yīng)的疫病診斷、治療或預(yù)防之用。二、獸醫(yī)生物制品學(xué)的應(yīng)用：免疫預(yù)防、診

2、斷、治療 1、免疫預(yù)防： 18-19世紀(jì),牛瘟在法國(guó)和南美引起大量牛只死亡； 牛肺疫曾在亞非地區(qū)包括我國(guó)廣泛流行； 1956年周泰沖、袁慶志等研制成功的中國(guó)系（C系）豬瘟兔化弱毒疫苗。 口蹄疫多價(jià)滅活疫苗已被成功應(yīng)用，特別是口蹄疫在歐洲的控制和撲滅、其中部分應(yīng)歸功于O型、A型、C型口蹄疫三價(jià)滅活疫苗的有效應(yīng)用 。2、診斷：豬瘟、豬偽狂犬病、雞新城疫及傳染性法氏囊病等ELISA抗體檢測(cè)試劑盒已在普遍使用。3、治療：有些動(dòng)物傳染病的免疫血清、痊愈血清和卵黃抗體等生物制品具有幫助動(dòng)物機(jī)體殺死、抑制或消除病原體的致病作用。三、生物制品的發(fā)展史（1） 經(jīng)驗(yàn)時(shí)期時(shí)間：十一世紀(jì)-1798年主要事件：1、十一

3、世紀(jì)我國(guó)的“痘癥防御法”。2、1400年，我國(guó)甘肅牧區(qū)的“灌花”預(yù)防牛瘟。（二）實(shí)驗(yàn)時(shí)期 時(shí)間：1798年-1945年主要事件：1、1798年Jenner（秦納）：天花疫苗的由來及效果的研究。2、疫苗技術(shù)研究：18811885Pasteur(巴斯德）培養(yǎng)雞霍亂陳舊物、高溫培養(yǎng)炭疽、兔體傳代狂犬病毒，首創(chuàng)弱毒疫苗。1886Salmon首創(chuàng)滅活技術(shù)并培育成功滅活疫苗。1888外毒素的脫毒技術(shù)，研制成功類毒素。 1890 德國(guó)人Behring和日本人北里（Kitasato）將白喉外毒素注射給動(dòng)物，發(fā)現(xiàn)抗毒素。這是第一次用人工被動(dòng)免疫的方法治療疾病的病例。榮獲1901年諾貝爾獎(jiǎng)3、免疫技術(shù)：相繼建立凝

4、集實(shí)驗(yàn)（1896，Gruber and Durham)、沉淀實(shí)驗(yàn)（1897，Kraus）、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)（1900,Bordet and Gengou）。4、免疫機(jī)理：細(xì)胞免疫學(xué)說研究白細(xì)胞、吞噬細(xì)胞。體液免疫學(xué)說研究抗體、補(bǔ)體。（3） 近代時(shí)期時(shí)間：1930年1960年。主要事件：1、1930年，Tiselius和Kabat電泳鑒定抗體是-球蛋白2、1959年，Porter和Edelman對(duì)抗體結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究，證明是四肽鏈組成，借二硫鍵連接在一起3、建立了更多的免疫學(xué)技術(shù)：間接血凝實(shí)驗(yàn)、凝膠擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)、免疫標(biāo)記技術(shù)。（四）分子生物學(xué)時(shí)期時(shí)間：1960年現(xiàn)在主要事件：1、20世紀(jì)70年代，日本的利

5、根川進(jìn)等應(yīng)用分子雜交技術(shù)證明并克隆出Ig分子V區(qū)和C區(qū)基因。1987年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)2、1975年，英國(guó)劍橋Kohler和Milstein發(fā)明了雜交瘤技術(shù)與丹麥人耶那共獲1984年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)（生物導(dǎo)彈）1994年以來，已經(jīng)有13種單克隆抗體通過FDA的批準(zhǔn)在臨床上應(yīng)用于抗腫瘤、抗凝血反應(yīng)以及治療各種免疫系統(tǒng)疾病3、分子生物學(xué)的興起，從基因水平揭示了抗體多樣性產(chǎn)生的機(jī)制 （麥克林托克與轉(zhuǎn)移基因）4、20世紀(jì)80年代早期興起基因工程抗體5、1994年美國(guó)Cell Genesys公司和Genpharm國(guó)際公司宣布轉(zhuǎn)基因小鼠作為生產(chǎn)全抗體的載體問世。四、獸醫(yī)生物制品的分類（一）按生物制品性質(zhì)分類1.

6、疫苗（vaccine） 2. 類毒素（toxoid） 3. 診斷制品（diagnostic preparation） 4. 抗病血清（antiserum） 5. 微生態(tài)制劑（probiotics） 6. 副免疫制品（paraimmunity prepariations） （二）按生物制品制造方法和物理性狀分類1. 普通制品 2. 精制生物制品 3. 液狀制品 4. 干燥制品 5. 佐劑制品TIPS:1、 疫苗（vaccine）1、凡接種機(jī)體后能產(chǎn)生自動(dòng)免疫和預(yù)防疾病的一類生物制劑均稱為疫苗。l 細(xì)菌性菌苗l 病毒性疫苗l 寄生蟲性蟲苗l 治療性疫苗（腫瘤、過敏和一些傳染性疾?。﹍ 生理調(diào)控疫苗

7、（如促進(jìn)生長(zhǎng)和控制生殖等）弱毒疫苗(attenuated vaccine)基因缺失疫苗(gene deleted vaccine)基因工程活載體疫苗(genetic engineering live vector vaccine)病毒抗體復(fù)合物疫苗(virus-antibody complex vaccine)2、 根據(jù)疫苗抗原的性質(zhì)和制備工藝，疫苗又分為：活疫苗（live vaccine）、死疫苗（killed vaccine）、基因疫苗（genetic vaccine）。（一種疫病究竟以哪類疫苗最為有效可行，取決于該疫病特點(diǎn)，包括流行病學(xué)、病原理化特性、致病機(jī)理和免疫特點(diǎn)以及各種技術(shù)手段是

8、否可行。）活疫苗(live vaccine)滅活疫苗(inactivated vaccine)化學(xué)合成亞單位疫苗(chemical subunit vaccine)基因工程亞單位疫苗(genetic engineering subunit vaccine)抗獨(dú)特型抗體疫苗(anti-idiotype vaccine) 死疫苗(killed vaccine)基因疫苗(genetic vaccine)：又稱DNA疫苗或核酸疫苗二、類毒素（toxoid）1、又稱脫毒毒素，是指細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖過程中產(chǎn)生的外毒素，經(jīng)化學(xué)藥品（甲醛）處理后，成為無毒性而保留免疫原性的生物制劑。2、于類毒素中加入適量磷酸鋁或氫

9、氧化鋁等吸附劑吸附的類毒素即為吸附精制類毒素。三、微生態(tài)制劑（probiotics）1、又稱益生素、活菌制劑或生菌劑。2、是用非病原性微生物，如乳酸桿菌，醋樣芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌或雙歧桿菌等活菌制劑，口服治療畜禽正常菌群失調(diào)引起的下痢。3、飼料添加劑。 五、生物制品命名原則 1. 一般采用“動(dòng)物種名+病名+制品名稱”的形式 2. 共患病一般可不列動(dòng)物種名 3. 由兩種以上的病原體制成的一種疫苗，命名采用“動(dòng)物種名+若干病名+×聯(lián)疫苗“的形式。 4. 由兩種以上血清型制備的一種疫苗，命名采用“動(dòng)物種名+病名+若干型名+×價(jià)疫苗”的形式。 六、我國(guó)獸醫(yī)生物制品的歷史與成就l

10、1930建立實(shí)業(yè)部青島商品檢驗(yàn)局青島血清制造所和1931建立上海商品檢驗(yàn)局血清制造所l 50年代初，建立9個(gè)獸醫(yī)生物制品廠，組建了國(guó)家獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，制定多種生物制品的制造和檢驗(yàn)規(guī)程。l 牛瘟兔化弱毒苗，牛肺疫兔化弱毒苗l 馬傳貧驢白細(xì)胞活疫苗 （哈獸研 沈榮顯院士）l 80年代以來，禽用疫苗發(fā)展迅速l 研制了多種疾病的滅活疫苗l 基因工程技術(shù)應(yīng)用到疫苗研究領(lǐng)域l 除疫苗外的其它獸醫(yī)生物制品的研究拓寬了獸醫(yī)生物制品的領(lǐng)域l 大型冷凍干燥機(jī)為高質(zhì)量生物制品國(guó)產(chǎn)化創(chuàng)造了物質(zhì)條件l 診斷技術(shù)和制品發(fā)揮重要作用l 到2001年，我國(guó)獸醫(yī)生物制品共有188種，滅活苗56種，活疫苗57種，抗血清7種，診斷

11、制品61種，其它制品7種。l 規(guī)范了獸醫(yī)生物制品生產(chǎn)、組織管理制度l 建立了獸醫(yī)生物制品的管理、監(jiān)督檢察機(jī)構(gòu)l 逐漸制定和完善了獸醫(yī)生物制品的行政法規(guī)7、 獸醫(yī)生物制品學(xué)的發(fā)展前景l(fā) 傳統(tǒng)疫苗仍占主導(dǎo)地位，多聯(lián)多價(jià)疫苗更受青睞l 改進(jìn)疫苗質(zhì)量，提高免疫效果，研究和開發(fā)新出現(xiàn)傳染病的疫苗倍受關(guān)注 l 以分子生物技術(shù)為基礎(chǔ)，研制新型疫苗是新世紀(jì)疫苗研究的一個(gè)主導(dǎo)方向l 常規(guī)診斷試劑標(biāo)準(zhǔn)化、新診斷技術(shù)實(shí)用化l 微生態(tài)制劑、寄生蟲蟲苗與魚用疫苗的研制將拓寬獸醫(yī)生物制品的范圍l 加快獸醫(yī)生物制品GMP建設(shè)，迎接WTO新挑戰(zhàn)l 進(jìn)一步完善法規(guī)，加強(qiáng)獸醫(yī)生物制品管理第二講 抗 原（antigen，Ag）&#

12、167;1、抗原的概念1.概念：能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)啟動(dòng)免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)的免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)或體外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)，即抗原。2. 特性 （1）免疫原性 （2）免疫反應(yīng)性相關(guān)名詞術(shù)語：l 半抗原：只有免疫反應(yīng)性，而無免疫原性的小分子物質(zhì)。如藥物、多糖、類脂等。l 載體：賦予半抗原具有免疫原性的蛋白質(zhì)分子，即為載體。l 半抗原 結(jié)合 某些蛋白質(zhì) 抗原（完全抗原）l 載體(Carrier，C) ：大分子，Pro.等l 半抗原(Hapten，H)： H1、H2、H3 l 完全抗原(Ag) = C + nH§2、影響抗原分子免疫原性的因素 一、異物性 1.抗原與自身成分相異（異種物質(zhì)、異

13、體物質(zhì)）2.未與宿主胚胎期免疫細(xì)胞接觸過的自身物質(zhì)。（隔絕的自身成分和修飾的自身成分）二、理化狀態(tài)（1）化學(xué)性質(zhì)：l 天然抗原多為大分子有機(jī)物。一般蛋白質(zhì)是良好的抗原。l 多糖及多肽也具有一定的免疫原性。（2）分子量大小：要求分子量一般在10.0kD以上。 （3）化學(xué)結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性：必須有較復(fù)雜的化學(xué)組成和特殊的化學(xué)基團(tuán)（要含有大量的芳香族氨基酸）。（4）物理狀態(tài)：聚合狀態(tài)的蛋白質(zhì)較其單體免疫原性強(qiáng)，顆粒性抗原強(qiáng)于可溶性抗原。 （5）分子結(jié)構(gòu)和易接近性：l 分子結(jié)構(gòu)是指抗原分子中一些特殊化學(xué)基團(tuán)的立體構(gòu)象。l 易接近性是指抗原表面這些特殊的化學(xué)基團(tuán)與淋巴細(xì)胞表面相應(yīng)受體相互接觸的難易程度。l 易

14、接近性常與這些化學(xué)基團(tuán)在抗原分子中分布的部位有關(guān)。 三、機(jī)體因素 l 遺傳、年齡、生理狀態(tài)、個(gè)體差異等因素l 抗原進(jìn)入機(jī)體的方式和途徑也有關(guān)四、抗原進(jìn)入機(jī)體的方式抗原進(jìn)入機(jī)體的數(shù)量、途徑、兩次免疫間的時(shí)間間隔、次數(shù)以及免疫佐劑類型等都影響機(jī)體對(duì)抗原的應(yīng)答。§3、 抗原的特異性與交叉反應(yīng)l 特異性既表現(xiàn)在免疫原性上，也表現(xiàn)在免疫反應(yīng)性上。l 特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗原表位或抗原決定簇。一、表位或抗原決定簇1、概念相應(yīng)淋巴細(xì)胞表面受體表位（epitope）或抗原決定簇（antigenic determinant）是指存在于抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)。其性質(zhì)、數(shù)量和空間構(gòu)象決定了抗

15、原的特異性。2、抗原簇表位結(jié)合 相應(yīng)抗體3、表位是免疫細(xì)胞識(shí)別的標(biāo)志及免疫反應(yīng)具有特異性的物質(zhì)基礎(chǔ)。§4、醫(yī)學(xué)上重要的抗原物質(zhì)一、病原微生物及其代謝產(chǎn)物機(jī)體l 各種病原微生物的化學(xué)組成復(fù)雜，是含有多種抗原決定簇的復(fù)合物。l 細(xì)菌的代謝產(chǎn)物有些也是良好的抗原，如細(xì)菌外毒素。 產(chǎn)生抗毒素外毒素注入類毒素甲醛脫毒（失去毒性，保留免疫原性）1、細(xì)菌抗原（bacterial antigen ）l 細(xì)菌的抗原結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，每個(gè)菌的每種結(jié)構(gòu)都由若干抗原組成，因此細(xì)菌是多種抗原成分的復(fù)合體。l 根據(jù)細(xì)菌的結(jié)構(gòu)，抗原組成有鞭毛抗原、菌體抗原、莢膜抗原和菌毛抗原。（1） 菌體抗原（somatic ant

16、igen）l 又稱O抗原，主要指革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁抗原，其化學(xué)本質(zhì)為脂多糖（LPS）。 （2） 鞭毛抗原（flagllar antigen）l 又稱H抗原。l 細(xì)菌鞭毛是一種空心管狀結(jié)構(gòu)，由蛋白亞單位（亞基）組成，此亞單位稱為鞭毛蛋白或鞭毛素（flagellin）。l 鞭毛抗原的特異性較強(qiáng)，用其制備抗鞭毛因子血清，可用于沙門氏菌和大腸桿菌的的免疫診斷。（3） 莢膜抗原（capsular antigen）l 又稱K抗原。l 莢膜由細(xì)菌菌體外的粘液物質(zhì)組成，電鏡下呈致密絲狀網(wǎng)絡(luò)。l 細(xì)菌莢膜構(gòu)成有莢膜細(xì)菌有機(jī)體的主要外表面，是細(xì)菌主要的表面免疫原。（4） 菌毛抗原（pili antigen）l 許

17、多革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌的某些菌株、沙門氏桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌等）和少數(shù)革蘭氏陽性菌（如某些鏈球菌），菌體表面有無數(shù)細(xì)小、堅(jiān)韌、沒有波曲的絨毛，稱為菌毛（pili）或稱纖毛（fimbriae）。l 根據(jù)菌毛的形態(tài)和功能，分為普通菌毛和性菌毛。菌毛由菌毛素組成，有很強(qiáng)的抗原性。2、 病毒抗原（viral antigen）l 各種病毒結(jié)構(gòu)不一,因而其抗原成分也很復(fù)雜,都有相應(yīng)的抗原結(jié)構(gòu)。l 一般有V抗原（viral antigen）、VC抗原（viral capsid antigen）、S抗原（soluble antigen,可溶性抗原）和NP抗原（核蛋白抗原）。（1） V抗原l 又稱為囊膜

18、抗原（envelope antigen）有囊膜的病毒均具有V抗原，其抗原特異性主要是囊膜上的纖突（spikes）所決定的。l 如流感病毒囊膜上的血凝素（hemagglutinin,HA）和神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase,NA）都是V抗原。（2） VC抗原l 又稱衣殼抗原。l 無囊膜的病毒，其抗原特異性決定于病毒顆粒表面的衣殼結(jié)構(gòu)蛋白，如口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3和VP4即為此類抗原（3） 毒素抗原（toxin antigen）l 很多細(xì)菌（如破傷風(fēng)桿菌、白喉?xiàng)U菌、肉毒梭菌）能產(chǎn)生外毒素，其成分為糖蛋白或蛋白質(zhì)，具有很強(qiáng)的抗原性，能剌激機(jī)體產(chǎn)生抗體（即抗毒素）。l 外毒素

19、經(jīng)甲醛或其它方法處理后，毒力減弱或完全喪失，但仍保持其免疫原性，稱為類毒素（toxoid）。（4）保護(hù)性抗原（protective antigen）l 在微生物具有多種抗原成分中，一般只有12種抗原成分剌激機(jī)體產(chǎn)生的抗體具有免疫保護(hù)作用，因此將這些抗原稱為保護(hù)性抗原，或功能抗原（functional antigen）l 口蹄疫病毒的VP3、腸致病性大腸桿菌的菌毛抗原（如K88、K99等）和腸毒素抗原（如ST、LT等）。動(dòng)物血清中含大量抗毒素 二、動(dòng)物免疫血清 （動(dòng)物免疫血清）免疫動(dòng)物類毒素注入人體（ 特異性治療和緊急預(yù)防用）1、動(dòng)物免疫血清對(duì)人體具有兩重性。提供了特異性抗體，中和細(xì)菌的外毒素，

20、防治疾病。是異種蛋白質(zhì)，可引起超敏反應(yīng)。 超抗原（superantigen，SAg）：一類可直接結(jié)合抗原受體，只需極低濃度即可激活2%20%T細(xì)胞或B細(xì)胞克隆，并誘導(dǎo)強(qiáng)烈免疫應(yīng)答的物質(zhì)。即超抗原。2、種類 （1）根據(jù)激活的細(xì)胞分T細(xì)胞超抗原 B細(xì)胞超抗原 （2）根據(jù)化學(xué)成分分細(xì)菌性超抗原 革蘭陽性菌產(chǎn)生的外毒素病毒性超抗原 分內(nèi)源性和外源性3、作用特點(diǎn)1) 無需抗原加工與提呈，可直接與MHC類分子結(jié)合。2) 形成TCRV-超抗原- MHC類分子復(fù)合物。3) 無MHC限制性4) 誘導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答是通過分泌大量細(xì)胞因子而參與某些病理生理過程的發(fā)生與發(fā)展。第三講 免疫球蛋白（immunoglobul

21、in，Ig）§1、抗體（antibody，Ab）概念：n B細(xì)胞在抗原的刺激下分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生具有與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白，稱為抗體。存在部位：v 血清、其他體液或外分泌液中。v 將抗體介導(dǎo)的免疫稱為體液免疫。v 將含有抗體的血清稱為抗血清或免疫血清。電泳區(qū)帶：大部分在區(qū)帶，故曾有球蛋白（或丙種球蛋白）之稱。免疫球蛋白v 具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白。v Ig=Ab+化學(xué)結(jié)構(gòu)類似物v Ab=Ig Ig Ab1968年世界衛(wèi)生組織決定，將具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)§

22、;2、免疫球蛋白的分子結(jié)構(gòu)一、免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu) 由二硫鍵相連的四條對(duì)稱的多肽鏈構(gòu)成的單體。形成一“Y”字形結(jié)構(gòu)。 重鏈、輕鏈（一）重鏈與輕鏈1.重鏈（heavy chain，H鏈）v 450550個(gè)氨基酸殘基，分子量約5575kD。v 根據(jù)Ig重鏈抗原性的差異，Ig可分為五類v 即IgG、IgM、IgA、IgD、IgE，v 相應(yīng)H鏈為、 、 、 及 鏈。2. 輕鏈v 輕鏈為重鏈的1/2，約由214個(gè)氨基酸組成v 根據(jù)輕鏈的不同，分為、兩型。v 正常人血清Ig的:=2 :1v 天然的Ig單體結(jié)構(gòu)中，兩條重鏈同類，兩條輕鏈同型。（二）可變區(qū)和恒定區(qū) 1.可變區(qū)（variable region，

23、V區(qū)） 近N端的1/2 L鏈和1/4（或1/5）H鏈，氨基酸的組成及序列變化較大，而得名。 高變區(qū)（hypervariable region，HVR）v V區(qū)內(nèi)變化最為劇烈的特定部位。L鏈3個(gè)，H鏈3個(gè)。v 因其在空間結(jié)構(gòu)上可與抗原決定簇形成精密的互補(bǔ)，故又稱互補(bǔ)性決定區(qū)（complementarity determing region，CDR）v 不同Ig分子在超變區(qū)結(jié)構(gòu)上各自具有獨(dú)特的氨基酸排序和構(gòu)型特點(diǎn)，也稱為Ig分子的獨(dú)特型或獨(dú)特型決定簇。v 超變區(qū)、互補(bǔ)性決定區(qū)和獨(dú)特型決定簇指的是Ig分子中的同一結(jié)構(gòu)部位，只是從不同的角度闡述而已。骨架區(qū)（framework region，F(xiàn)R）v

24、Ig分子V區(qū)超變區(qū)之外的部位，其氨基酸組成及排列相對(duì)保守。v 作用：主要是穩(wěn)定CDR的空間構(gòu)型，以利IgCDR與抗原表位精細(xì)的特異性結(jié)合。2.恒定區(qū)（constant region，C區(qū)）Ø 近C端的1/2 L鏈及3/4（或4/5）H鏈。Ø 氨基酸組成在同一物種的同一類Ig中相對(duì)穩(wěn)定。（三）其他結(jié)構(gòu)1.J鏈（jioning chain，J鏈） v 由漿細(xì)胞合成。v 主要作用：在H鏈的羧基端將Ig單體連接成雙體或多聚體，起穩(wěn)定多聚體結(jié)構(gòu)及參與體內(nèi)運(yùn)轉(zhuǎn)的作用。2.分泌片（secretory piece，SP）v 由粘膜上皮細(xì)胞合成。v 是分泌型IgA（SIgA）的結(jié)構(gòu)成分。v

25、作用：保護(hù)SIgA抵抗外分泌液中蛋白酶的降解作用和介導(dǎo)多聚IgA向粘膜上皮外主動(dòng)輸送的作用。二、免疫球蛋白的功能區(qū)（結(jié)構(gòu)域）n 約由110個(gè)氨基酸組成。由鏈內(nèi)二硫鍵連接并經(jīng)-片層折疊形成的具有特定功能的球形結(jié)構(gòu)域，稱為Ig的功能區(qū)或結(jié)構(gòu)域。（一）功能區(qū)的名稱 L鏈：VL、CL H鏈：CH1、CH2、CH3、CH4（IgM和IgE有） -有2個(gè)圖-（二）功能區(qū)的功能 1.VL、VH：特異性識(shí)別和結(jié)合抗原 2.CH、CL：具有同種異型遺傳標(biāo)記 3.IgG的CH2和IgM的CH3：具有補(bǔ)體C1q的結(jié)合點(diǎn)；與IgG通過胎盤有關(guān)。 4.CH3/CH4：具有多種細(xì)胞Fc受體結(jié)合的功能，不同的Ig在結(jié)合不同

26、的細(xì)胞時(shí)可產(chǎn)生不同的免疫效應(yīng)。（三）絞鏈區(qū)（hinge region） 位于CH1CH2之間。富含脯氨酸，對(duì)蛋白酶敏感，易伸展彎曲。作用：1.彎曲利于V區(qū)與不同距離的抗原表位結(jié)合。2.使Ig分子發(fā)生“T” “Y”的構(gòu)型改變，暴露補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)。三、免疫球蛋白的水解片段（一）木瓜蛋白酶的水解作用二個(gè)相同的單價(jià)抗原結(jié)合片段 （fragment of antigen-binding，F(xiàn)ab段）IgG水解木瓜蛋白酶一個(gè)可結(jié)晶片段（crystalizable fragment，F(xiàn)c段） Fab段保留了特異性結(jié)合抗原的功能。Fc段保留了重鏈的抗原性和Ig相應(yīng)功能區(qū)的生物學(xué)活性。§3、五類免疫球蛋白

27、的特點(diǎn)與功能一、IgG v 1.單體。血清中含量最高。可分為四個(gè)亞類，各亞類的生物學(xué)活性有差異。v 2.主要的抗感染抗體。具有抗菌、抗病毒、中和毒素、免疫調(diào)理及ADCC作用。v 3.唯一通過胎盤的抗體（有自然自動(dòng)免疫作用）。人類IgG能借助Fc段選擇性地與胎盤微血管內(nèi)皮細(xì)胞可逆性結(jié)合，主動(dòng)穿過胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)。v 4.半衰期約1624天，故臨床應(yīng)用以23重復(fù)為宜。治療用的丙球的主要成分為IgG（有人工被動(dòng)免疫作用）。v 5.可結(jié)合SPA，以純化抗體，用于免疫診斷。v 6.某些自身抗體和引起型超敏反應(yīng)的抗體屬此類。 二、IgM1.為五聚體。又稱巨球蛋白。激活補(bǔ)體和免疫調(diào)理作用較IgG強(qiáng)。2.個(gè)

28、體發(fā)育中合成最早的Ig。3.半衰期較短，有助于感染性疾病的早期診斷。4.天然的血型抗體。5.單體的IgM是細(xì)胞膜表面型免疫球蛋白。 三、IgA1. 有血清型和分泌型。血清型有兩個(gè)亞類。2. 分泌型IgA（SIgA）存在于外分泌液中，初乳中含量較高。3. SIgA的分子結(jié)構(gòu)中有J鏈和SP。后者是粘膜上皮細(xì)胞的多聚Ig受體的胞外區(qū)。4. SIgA是皮膚和粘膜表面局部抗感染的重要因素（如免疫屏障、中和病毒及抑制病毒復(fù)制的作用）。四、IgE1. 血清中含量極低。2. 對(duì)肥大細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞有高度的親和力。與型超敏反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)。3.可能與機(jī)體抗寄生蟲免疫有關(guān)。五、IgD 1. 血清含量極低。 2.

29、對(duì)蛋白酶敏感，極易降解。  §4、免疫球蛋白的生物學(xué)活性一、IgV區(qū)的功能特異性結(jié)合抗原 v Ig可特異性識(shí)別、結(jié)合抗原。V區(qū)的CDR在識(shí)別和結(jié)合特異性抗原中起決定性作用。v Ig的V區(qū)與抗原結(jié)合后，可通過其C區(qū)發(fā)揮作用，V區(qū)本身也可中和毒素或阻斷病原入侵。二、IgC區(qū)的功能（一）激活補(bǔ)體IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。（二）結(jié)合Fc受體1.調(diào)理作用 促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬作用。2.發(fā)揮抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的的細(xì)胞毒作用（ADCC）-有圖有真相-3. 介導(dǎo)型超敏反應(yīng)4. 人IgG的Fc段與

30、SPA結(jié)合 阻斷IgG對(duì)吞噬細(xì)胞的調(diào)理作用。在體外已用于IgG的純化及臨床檢測(cè)。（三）穿過胎盤和黏膜 人IgG穿過胎盤；IgA經(jīng)粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)入消化道及呼吸道。我是可愛的分割線，進(jìn)入下一講第四講 免疫血清學(xué)技術(shù)及診斷、診斷液 用于檢測(cè)抗原或抗體的體外免疫反應(yīng)技術(shù)或稱免疫檢測(cè)技術(shù)，這一類技術(shù)因一般都需用血清進(jìn)行試驗(yàn)，通常稱為免疫血清學(xué)反應(yīng)或免疫血清學(xué)技術(shù)。1、 凝聚性試驗(yàn)l 抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在有電解質(zhì)存在下，相互凝聚形成肉眼可見的凝聚小塊或沉淀物，根據(jù)是否產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象來判定相應(yīng)抗體或抗原，稱為凝聚性試驗(yàn)。l 根據(jù)參與反應(yīng)的抗原性質(zhì)不同，分為由顆粒性抗原參與的凝集試驗(yàn)和由可溶性抗原參

31、與的沉淀試驗(yàn)二大類。（1） 凝集試驗(yàn)1. 細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原，與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，經(jīng)過一定時(shí)間，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊，稱為凝集試驗(yàn)(agglutination test)。2. 參與凝集試驗(yàn)的抗體主要為IgG、IgM。3. 凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)抗原或抗體。4. 凝集試驗(yàn)可根據(jù)抗原的性質(zhì)、反應(yīng)的方式分為直接凝集試驗(yàn)（簡(jiǎn)稱凝集試驗(yàn)）和間接凝集試驗(yàn)。 ST1、直接凝集試驗(yàn) l 顆粒性抗原與凝集素直接結(jié)合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗(yàn)稱作直接凝集試驗(yàn)(direct agglutination test) l 玻片法 l 試管法 2、間接凝集試驗(yàn)l 將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫

32、無關(guān)的，一定大小的不溶性顆粒(統(tǒng)稱為載體顆粒)的表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)稱為間接凝集反應(yīng)。 3、可溶性抗原l 細(xì)菌、立克次氏體及病毒的可溶性抗原l 原蟲、吸蟲、絲蟲的浸出液l 動(dòng)物的可溶性物質(zhì)l 激素及各種組織器官浸出液l 植物性蛋白質(zhì)如花粉浸出液等l 某些細(xì)菌的可溶性多糖4、常用的載體顆粒有紅細(xì)胞(“O”型人紅細(xì)胞，羊紅細(xì)胞)、聚苯乙烯膠乳顆粒，其次為白陶土、離子交換樹脂、火棉膠等。5、間接血凝試驗(yàn)l 將抗原致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測(cè)相應(yīng)抗體，在與相應(yīng)抗體反應(yīng)時(shí)出現(xiàn)肉眼可見凝集，稱為間接血凝試驗(yàn)(passive heamagglu

33、tination assay, PHA) 。l 將抗體致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測(cè)檢樣本中相應(yīng)抗原，致敏紅細(xì)胞在與相應(yīng)抗原反應(yīng)時(shí)發(fā)生凝集，稱為反向間接血凝試驗(yàn)(reverse passive heamagglutination assay, RPHA)。6、乳膠凝集試驗(yàn)l 聚苯乙烯乳膠是利用化工原料聚苯乙稀經(jīng)過乳液聚合得到的高分子乳膠液，乳膠微球直徑約0.8m。l 它對(duì)蛋白質(zhì)、核酸等高分子物質(zhì)具有良好的吸附性能。l 利用聚苯乙烯乳膠的微球作載體，以吸附某些抗原(或抗體)，即能用以檢測(cè)相應(yīng)的抗體(或抗原)，稱為乳膠凝集反應(yīng)。(latex agglutination test)注：乳膠顆粒（不同直徑

34、大小）有張圖，不知道要說什么6、乳膠凝集試驗(yàn)1) 病毒或蛋白致敏乳膠顆粒，制備成診斷抗原。2) 現(xiàn)場(chǎng)圈舍旁邊檢測(cè)抗體。3) 技術(shù)特點(diǎn)：l 3-5分鐘出現(xiàn)結(jié)果l 實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)單，操作容易，樣品處理量大。l 適合于動(dòng)物偽狂犬病毒感染的早期檢測(cè)TIP：乳膠凝集的陰性和陽性反應(yīng)a. 陰性結(jié)果：呈原有的均勻乳狀b. 陽性結(jié)果：顆粒聚于液體邊緣,透明7、協(xié)同凝集試驗(yàn)l 葡萄球菌A蛋白(staphylococal protein A，簡(jiǎn)稱SPA)是大多數(shù)金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動(dòng)物IgG分子的Fc片結(jié)合。l SPA與IgG結(jié)合后，其Fab片暴露于外，并保持其抗體活性。l 當(dāng)此被覆著特異性抗

35、體的葡萄球菌與相應(yīng)的抗原結(jié)合時(shí)，就可互相連結(jié)引起協(xié)同凝集反應(yīng)，簡(jiǎn)稱C。END（2） 沉淀試驗(yàn) l 可溶性抗原(如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見的白色沉淀，稱為沉淀試驗(yàn)(precipitation test)。 l 抗原可以是多糖、蛋白質(zhì)、類脂等，抗原分子較小，單位體積內(nèi)所含的量多，與抗體結(jié)合的總面積大，故在作定量試驗(yàn)時(shí)，為了不使過剩，通常稀釋抗原，并以抗原稀釋度作為沉淀試驗(yàn)效價(jià)。l 參加沉淀試驗(yàn)的抗原稱沉淀原，抗體稱為沉淀素。 1、環(huán)狀沉淀試驗(yàn)l 在小口徑試管內(nèi)先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原

36、于血清表面，使之成為分界清晰的兩層。l 數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽性反應(yīng)。l 本法主要用于抗原的定性試驗(yàn)，如炭疽病的診斷(Ascoli試驗(yàn))。試驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)白色沉淀帶的最高抗原稀釋倍數(shù)，即為血清的沉淀價(jià)。 2、瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)l 瓊脂的作用l 抗原抗體在瓊脂凝膠中擴(kuò)散，當(dāng)二者在比例適當(dāng)處相遇，即發(fā)生沉淀反應(yīng)，形成肉眼可見的沉淀帶，此種反應(yīng)稱為瓊脂免疫擴(kuò)散，又簡(jiǎn)稱瓊脂擴(kuò)散和免疫擴(kuò)散。Ø 單向單擴(kuò)散 單向雙擴(kuò)散Ø 雙向單擴(kuò)散 雙向雙擴(kuò)散ST免疫沉淀反應(yīng)瓊擴(kuò)試驗(yàn)：某種抗原和對(duì)應(yīng)的抗體分別自瓊脂凝膠兩個(gè)孔向外擴(kuò)散，在相互接觸的地方，由于抗原和抗體結(jié)合而形成肉眼可見

37、的沉淀線。END3、免疫電泳技術(shù)l 免疫電泳l 對(duì)流免疫電泳l 火箭免疫電泳二、標(biāo)記抗體技術(shù) l 抗體、抗原分子小，在含量低時(shí)形成的抗原抗體復(fù)合物是不可見的。l 將特殊物質(zhì)標(biāo)記在抗體分子上，通過檢測(cè)標(biāo)記分子來顯示抗原抗體復(fù)合物的存在，即根據(jù)抗原抗體結(jié)合的特異性和標(biāo)記分子的敏感性建立的技術(shù)，稱為標(biāo)記抗體技術(shù)(labelled antibody technique)。 ST高敏感性的標(biāo)記分子 ：熒光素、酶分子、放射性同位素 、熒光抗體技術(shù)、酶標(biāo)抗體技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù) DND（一）熒光抗體標(biāo)記技術(shù) l fluorescent-labelled antibody techniquel 是指用熒光素對(duì)

38、抗體或抗原進(jìn)行標(biāo)記，然后用熒光顯微鏡觀察所標(biāo)記的熒光以分析示蹤相應(yīng)的抗原或抗體的方法。 1、熒光色素1) 是能夠產(chǎn)生明顯熒光，并能作為染料使用的有機(jī)化學(xué)物稱為熒光色素或熒光染料。2) 可用于標(biāo)記的熒光素有異硫氰酸熒光素(FITC)、四乙基羅丹明(RB 200)和四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC) 2、染色方法 1）常用直接法與間接法 2）將SPA標(biāo)記FITC制成FITC-SPA （二）酶標(biāo)抗體技術(shù)l 根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的特異性和酶催化反應(yīng)的高敏感性而建立起來的免疫檢測(cè)技術(shù)。l 酶是一種有機(jī)催化劑，如果產(chǎn)物為有色可見產(chǎn)物，則極為敏感。l 根據(jù)底物溶液的顏色反應(yīng)來判定有無相應(yīng)的免疫反應(yīng)。顏色反應(yīng)的深

39、淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。 1、用于標(biāo)記的酶1) 用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(Horseradish peroxidase，HRP)、葡萄糖氧化酶、堿性磷酸酶。2) HRP的作用底物為過氧化氫，催化時(shí)可使供氫體產(chǎn)生一定顏色。l 鄰苯二胺(OPD)，顯色呈橙色l 四甲基聯(lián)苯胺（TMB），顯色呈藍(lán)色l 3，3二氨基聯(lián)苯胺(DAB)。反應(yīng)后的氧化型中間體迅速聚合，形成不溶性棕色吩嗪衍生物。1、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)1）ELISA是當(dāng)前應(yīng)用最廣、發(fā)展最快的一項(xiàng)新技術(shù)。其基本過程是將抗原(或抗體)吸附于固相載體，在載體上進(jìn)行免疫酶染色反應(yīng)，底物顯色后用肉眼或分光光度計(jì)判定結(jié)果。 2）

40、將病毒、純化的蛋白質(zhì)等抗原包被在酶聯(lián)板上，通過間接法、競(jìng)爭(zhēng)法等程序檢測(cè)抗體。3）ELISA實(shí)驗(yàn)中的影響因素l 固相載體 ：聚苯乙烯微量滴定板 l 包被：包被的蛋白質(zhì)濃度通常為110ug/mll 洗滌 l 試驗(yàn)方法 ELISA的核心是利用抗原抗體的特異性吸附，在固相載體上一層層地疊加。整個(gè)反應(yīng)都必需在抗原抗體結(jié)合的最適條件下進(jìn)行。每加一層均需充分洗滌。l 底物顯色 l 結(jié)果判定 三、中和試驗(yàn) l 根據(jù)抗體能否中和病毒的感染性而建立的免疫學(xué)試驗(yàn)稱為中和試驗(yàn)。l 主要用于病毒感染的血清學(xué)診斷、病毒分離株的鑒定、不同病毒株的抗原關(guān)系研究、疫苗免疫原性的評(píng)價(jià)、免疫血清的質(zhì)量評(píng)價(jià)和檢測(cè)動(dòng)物血清中的抗體等。

41、 1、中和試驗(yàn)分為2種1）終點(diǎn)法中和試驗(yàn)(endpoint neutralization test) l 固定病毒稀釋血清法 l 固定血清稀釋病毒法2）空斑減少試驗(yàn)(plague reduction test)四、其他檢測(cè)技術(shù) 1、免疫轉(zhuǎn)印技術(shù)（immunoblotting） 2、免疫沉淀（immunoprecipitation） 3、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（chemiluminescent immunoassay，CLIA） 4、膠體金免疫檢測(cè)技術(shù) 第五講 單克隆抗體制備技術(shù)l （一）單克隆抗體的概念單克隆抗體是指由一個(gè)B細(xì)胞分化增殖的子代細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的針對(duì)單一抗原決定簇的抗體。l 1975

42、年 Kohler和Milstein發(fā)現(xiàn)將小鼠骨髓瘤細(xì)胞與和綿羊紅細(xì)胞免疫的小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行融合，形成的雜交瘤細(xì)胞既可產(chǎn)生抗體，又可無性繁殖，從而創(chuàng)立了單克隆抗體雜交瘤技術(shù)，這項(xiàng)技術(shù)上的突破使血清學(xué)的研究進(jìn)入了一個(gè)高度準(zhǔn)確的新紀(jì)元。（有圖）l 免疫細(xì)胞化學(xué)的技術(shù)關(guān)鍵之一是制備特異性強(qiáng)，親和力大，滴度高的特異性抗體。l 單克隆抗體則是由一個(gè)產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與一個(gè)骨髓瘤細(xì)胞融合而形成的雜交瘤細(xì)胞經(jīng)無性繁殖而來的細(xì)胞群產(chǎn)生的，所以它的免疫球蛋白屬同一類型，質(zhì)地純一，而且它是針對(duì)某一抗原決定簇的，因此特異性強(qiáng)，親和性也一致。1、單抗與多抗的不同項(xiàng)目常規(guī)免疫血清抗體McAb抗體產(chǎn)生細(xì)胞多克隆性單克隆性抗體的結(jié)

43、合力特異性識(shí)別多種抗原決定簇特異性識(shí)別單一抗原決定簇免疫球蛋白類別及亞類不均一性，質(zhì)地混雜同一類屬，質(zhì)地純一特異性與親和力批與批之間不同特異性高，抗體均一有效抗體含量低高用于常規(guī)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)可用單抗組合應(yīng)用沉淀反應(yīng)容易形成一般難形成（還有2個(gè)圖，看不懂）1、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備2、骨髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備3、細(xì)胞融合4、選擇性培養(yǎng)5、抗體分泌細(xì)胞的篩選6、克隆化過程7、單克隆抗體的制取2、單克隆抗體制備過程3、致敏淋巴細(xì)胞的準(zhǔn)備1）動(dòng)物選擇：品系、年齡、性別、健康狀態(tài)2）抗原接種： 方式體內(nèi)、體外 劑量0.5-100mg 次數(shù)視抗原而定 間隔視抗原而定 佐劑視抗原而定3）收集時(shí)間： 末次接種后72h4、骨

44、髓瘤細(xì)胞的準(zhǔn)備1）細(xì)胞株處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)2）常用骨髓瘤細(xì)胞：Sp2/0或NS-13）細(xì)胞株保持HGPRT缺陷狀態(tài)（HGPRT：次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶）5、細(xì)胞融合1）方式：物理、化學(xué)、生物2）PEG融合要點(diǎn)：（見圖）6、選擇性培養(yǎng)1）隨機(jī)融合后的細(xì)胞類型2）HAT選擇培養(yǎng)原理7、隨機(jī)融合后的細(xì)胞類型細(xì)胞組合 HGPRT生長(zhǎng)狀態(tài)淋巴細(xì)胞 + 骨髓瘤+長(zhǎng)期生長(zhǎng)淋巴細(xì)胞 + 淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)骨髓瘤 + 骨髓瘤-不能生長(zhǎng)未融合淋巴細(xì)胞+短期生長(zhǎng)未融合骨髓瘤 -不能生長(zhǎng)8、HAT選擇培養(yǎng)原理9、抗體分泌細(xì)胞的篩選1）對(duì)篩選方法的要求： 多大量樣品一次檢測(cè) 快迅速取得檢測(cè)結(jié)果 準(zhǔn)檢測(cè)結(jié)果可靠性

45、高 靈檢測(cè)方法靈敏度高2）常用篩選方法： ELISA、IFA等10、克隆化過程1）概念：建立單一細(xì)胞克隆2）方法：有限稀釋法3）克隆建立的標(biāo)準(zhǔn)：連續(xù)兩次以上100%陽性孔4）飼養(yǎng)細(xì)胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾細(xì)胞11、有限稀釋法12、單克隆抗體的制取1）制取方式：l 體外培養(yǎng)罐法l 體內(nèi)腹腔接種2）純化：鹽析、層析、制備型HPLC3）鑒定：l 特征鑒定Ig類型、親和力、效價(jià)、特異性l 決定簇鑒定是否針對(duì)同一決定簇13、 抗與單抗制劑的比較多抗（血清）單抗（腹水） 單抗（培養(yǎng)上清）特異性抗體含量（mg/ml）0.1-1 0.5-50.005-0.025無關(guān)Ig含量（mg/ml） 100.5-50

46、.005-0.025其他血清蛋白 大量極少-均一性 -+特異性 多決定簇 單決定簇單決定簇穩(wěn)定性 較好 略差略差重復(fù)性 差 好 好14、單克隆抗體的特性1）理化性狀高度均一2）抗原結(jié)合性高度特異3）生物活性高度單一（2） 單抗的應(yīng)用1、在血清學(xué)技術(shù)方面 l 提高了方法的特異性、重復(fù)性、穩(wěn)定性和敏感性，同時(shí)使一些血清學(xué)技術(shù)得到標(biāo)準(zhǔn)化和商品化，即制成診斷試劑盒。l 自單克隆抗體技術(shù)問世以來，已研制出很多病原微生物的單克隆抗體，可取代原有的多克隆抗體，用于傳染病的診斷及病原的分型，避免了多克隆抗體引起的交叉反應(yīng)。2、在免疫學(xué)基礎(chǔ)研究方面 l 對(duì)抗體結(jié)構(gòu)和氨基酸順序的分析l 應(yīng)用單克隆抗體對(duì)淋巴細(xì)胞表

47、面標(biāo)志以及組織細(xì)胞組織相容性抗原的分析:用單克隆抗體對(duì)淋巴細(xì)胞CD抗原進(jìn)行分析，可以對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行分群。3、在腫瘤免疫治療方面 l 通過采用雜交瘤技術(shù)，制備出腫瘤細(xì)胞特異性抗原的單克隆抗體，然后與藥物或毒素連接制成免疫毒素（immunotoxin），又稱生物導(dǎo)彈，用于腫瘤的臨床治療，這在醫(yī)學(xué)上已獲初步成效。 4、 在抗原純化方面 l 利用單克隆抗體的特異性，可將單克隆抗體與瓊脂糖等偶聯(lián)制成親和層析柱，可從混合組分中提取某種抗原成分。此技術(shù)可與基因工程疫苗的研究相結(jié)合，即先用單克隆抗體作為探針，篩選出保護(hù)性抗原成分或決定簇，然后再采用DNA重組技術(shù)表達(dá)目的抗原。（三）展望自1975年以來，單克隆

48、抗體技術(shù)本身也取得了極大的發(fā)展，T細(xì)胞雜交瘤、T-B細(xì)胞雜交瘤、人-人B細(xì)胞雜交瘤、人T細(xì)胞雜交瘤以及用于制備雙特異性抗體的三源雜交瘤和四源雜交瘤等技術(shù)相繼問世、進(jìn)一步促進(jìn)和推動(dòng)了免疫學(xué)及其它相關(guān)學(xué)科的發(fā)展。第六講 多克隆抗體制備技術(shù)PcAb的制備是一個(gè)復(fù)雜的過程，為制備高效價(jià)和高特異性的PcAb，必須要有理想的免疫原、適宜的動(dòng)物及切實(shí)可行的免疫方法。1、 作用機(jī)理1、含有特異性的免疫球蛋白抗體輸入動(dòng)物體后，動(dòng)物即可被動(dòng)地獲得了抗體，從而形成免疫力，即所謂的人工被動(dòng)免疫。2、當(dāng)動(dòng)物己感染某種病原微生物發(fā)生傳染病時(shí)，注射大量的抗病血清后，可抑制動(dòng)物體內(nèi)的病原體繼續(xù)繁殖，并協(xié)助體內(nèi)正常防御機(jī)能，消

49、滅病原微生物，使病畜逐漸恢復(fù)健康。二、應(yīng)用1、用作緊急預(yù)防注射。優(yōu)點(diǎn)是注射后立即產(chǎn)生免疫，疫苗是起不到這種作用的。2、維持時(shí)間較短，一般僅23周。在注射血清后23周仍需再注射一次疫苗，才能獲得較長(zhǎng)時(shí)間的抗傳染能力。3、目前生產(chǎn)較多的抗病血清有：抗炭疽血清、破傷風(fēng)抗毒素、抗氣腫疽血清、抗豬瘟血清、抗小鵝瘟血清、抗傳染性法氏囊病血清和抗犬瘟熱血清等，其中，破傷風(fēng)抗毒素血清的效果最佳，應(yīng)用最廣。3、 制造高免血清用動(dòng)物的選擇與管理（一）動(dòng)物的選擇1、動(dòng)物的品種 1) 馬、牛、山羊、綿羊、豬、兔、犬、雞和鵝等。2) 分為同源血清和異源血清。3) 制備抗菌和抗毒素血清多用異種動(dòng)物，通常用馬和牛等大動(dòng)物制

50、備。如破傷風(fēng)抗毒素多用青年馬制備，抗豬丹毒血清多用牛制備。4) 抗病毒血清的制備多用同種動(dòng)物，如犬瘟熱血清用犬制備，抗豬瘟血清用豬制備。2、動(dòng)物的年齡及健康情況1）通常選擇體型較大、性情溫馴、體質(zhì)強(qiáng)健的青壯年動(dòng)物為宜。馬以年齡38歲、體重350kg以上者為宜；牛以310歲、體重300400kg以上為宜；豬以50kg以上，年齡612月齡為宜；家免體重需達(dá)2kg以上為好。2）動(dòng)物必須從非疫區(qū)選購(gòu)，經(jīng)過嚴(yán)格檢疫,并經(jīng)隔離觀察，每日測(cè)溫兩次，觀察二周以上， 確認(rèn)健康者方可應(yīng)用。（二）動(dòng)物的管理1、由專人負(fù)責(zé)喂養(yǎng)和精心管理。2、加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理，喂以營(yíng)養(yǎng)豐富的飼料，并加喂多汁飼料。3、在高度免疫和采血期

51、間，每日要檢測(cè)體溫兩次，隨時(shí)觀察其健康情況。每日至少運(yùn)動(dòng)4h。4、動(dòng)物采血前1d，禁食喂水，避免血中出現(xiàn)乳糜。5、在生產(chǎn)過程中，若發(fā)現(xiàn)健康狀況異常或有患病可疑時(shí)，應(yīng)停止注射抗原和采血，并進(jìn)行隔離治療。 四、免疫原 （一）免疫原的基本要求 1、異物性、結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和一定的物理性狀。2、顆粒性抗原較可溶性抗原的抗原性強(qiáng)3、球形分子的蛋白質(zhì)較纖維形分子的免疫原性強(qiáng)4、聚合狀態(tài)的蛋白質(zhì)較單體狀態(tài)的蛋白質(zhì)免疫原性強(qiáng)。5、分子量較小和抗原性較低的蛋白質(zhì)應(yīng)吸附于載體上，才可獲得較高的免疫原性。1）抗細(xì)菌免疫血清制備l 基礎(chǔ)免疫用抗原多為疫苗或死菌l 高度免疫的抗原，一般選用毒力較強(qiáng)的毒株。l 多價(jià)抗病血清用

52、的抗原，要求用多血清型菌株。TIP：菌種接種于最適生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，按常規(guī)方法進(jìn)行培養(yǎng)l 固體培養(yǎng)基上繁殖，加適量滅菌生理鹽水或PBS洗下菌苔，制成均勻的菌懸浮液l 液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，對(duì)數(shù)期收獲l 為減少由培養(yǎng)基帶來的非特異性成分，可通過離心，棄上清，再將菌體制成一定濃度的細(xì)菌懸浮液，作為免疫原。2）抗病毒免疫血清制備l 以病毒為免疫原，須通過反復(fù)凍融或超聲裂解方法，將病毒從細(xì)胞中釋放出來，并盡可能地提高病毒滴度和免疫原性。3）抗毒素血清制備l 免疫原可用類毒素、毒素或全培養(yǎng)物（活菌加毒素），但后兩者只有在需要加強(qiáng)免疫刺激的情況下才應(yīng)用，一般多用類毒素作免疫原。 5、 免疫程序免疫程序分為兩個(gè)階段，第一階段為基礎(chǔ)免疫，第二階段為高度免疫。（一）基礎(chǔ)免疫先用本病的疫苗按預(yù)防劑量作第一次免疫經(jīng)13周再用較大劑量的滅活苗或活菌或特制的滅活抗原再免疫13次基礎(chǔ)免疫大多數(shù)13次即可，抗原無須過多過強(qiáng)，可為高度免疫產(chǎn)生有效的回憶應(yīng)答打下基礎(chǔ)。