葡萄糖氧化酶對仔豬胃腸道微生物區(qū)系及血液生化指標(biāo)的影響_百度

1、葡萄糖氧化酶對仔豬胃腸道微生物區(qū)系及血液生化指標(biāo)的影響楊久仙 1, 張榮飛 1, 張金柱 1, 馬秋剛 2, 白錦梅 3, 喬立東 1(1北京農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院 , 北京 102442;2中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院 , 北京 100193;3河北懷來長福養(yǎng)殖有限公司 , 河北 懷來 075400摘要 :本文旨在研究葡萄糖氧化酶 (GOD 對斷奶仔豬胃腸道微生物區(qū)系和部分血液生化指標(biāo)以及生產(chǎn)性能的影響 , 討論其可能的作用機理 。 試驗選用 160頭 10kg 左右斷奶仔豬 , 根據(jù)體重隨機分為 (對照 、 、 和 4組 , 每組 5個重復(fù) , 每個重復(fù) 8頭豬 。 組飼喂基礎(chǔ)日糧 , 試 驗 、 和

2、組在飼喂基礎(chǔ)日糧上分別添加 0. 1%、 0. 2%和 0. 3%的 GOD 。 結(jié)果顯示 :與對照相比 , 日糧中添加 0. 3%GOD 的仔豬日增重提高 8. 2%(P 0.05 ; 飼料轉(zhuǎn)化效率提高 7. 9%(P =0. 09 ; 血清胰島素提高 17. 6%(P 0.05 ; 日糧中添加 0. 2%和 0. 3%GOD 的仔豬比對照組血 清尿素氮水平分別降低 16. 37%和 14. 35%, 差異均顯著 (P 0.05 ; 與對照組相比 , 日糧中添加 0. 2%和 0. 3%GOD 可以顯著降低仔豬胃和回腸 大腸桿菌數(shù)量 (P 0.05 , 增加仔豬胃和回腸乳酸菌數(shù)量 (P 0.

3、05 。 提示 :日糧中添加 0. 2% 0. 3%GOD 可以提高仔豬飼料轉(zhuǎn)化效率和對氮 的利用效率 , 促進機體營養(yǎng)物質(zhì)的合成 , 從而提高斷奶仔豬的增重 。關(guān)鍵詞 :葡萄糖氧化酶 ; 仔豬 ; 胃腸道微生物菌群 ; 血液代謝物中圖分類號 :S828. 9文獻標(biāo)識碼 :A 文章編號 :0529-5130(2011 06-0053-04斷奶仔豬抵抗力差 , 腸道形態(tài)發(fā)育不完善 , 各種 消化酶分泌量較低 , 營養(yǎng)物質(zhì)消化率低 , 容易受食源 性病菌的感染 , 拉稀和死亡率均較高 。 抗生素的使用 對食品安全的負(fù)面影響越來越多的受到人們的關(guān)注 , 為此在動物生產(chǎn)上人們一直在尋求抗生素的替代品

4、, 如酸化劑能夠降低動物胃腸道內(nèi) pH 值 , 從而抑制有 害菌 、 促進有益菌的生長繁殖 , 減少動物拉稀 , 改善 動 物 生 長 13。 葡 萄 糖 氧 化 酶 (Glucose oxidase , GOD 是用黑曲霉等發(fā)酵制得的一種需氧脫氫酶 , 能專一地氧化 -D-葡萄糖成為葡萄糖酸 。 葡萄糖酸 具有抑制有害菌 、 促進有益菌生長 , 改善動物腸道微 生態(tài)平衡和腸道形態(tài) , 從而提高飼料營養(yǎng)物質(zhì)消化和 吸收 , 促進動物生長 , 具有類似酸化劑的作用 47。 本研究擬通過在日糧中添加葡萄糖氧化酶來探討其促 生長作用 , 確定其最佳添加劑量 。 本研究成果將對葡 萄糖氧化酶的應(yīng)用提供

5、理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù) , 為開發(fā) 環(huán)保無殘留 、 抑菌促生長飼料添加劑提供新的思路 。1材料與方法1. 1試驗設(shè)計試驗選用健康 , 體重 、 日齡相近的斷奶仔豬 160頭 , 公母各半 , 采用單因子試驗設(shè)計 , 隨機分為 4收稿日期 :2011-01-05基金項目 :北京市教委 2010年 度 科 技 計 劃 面 上 項 目 基 金 資 助 (KM201000005001 。作者簡介 :楊久仙 (1960- , 女 , 教授 , 研究方向為動物營養(yǎng) 與飼料科學(xué) , E-mail :yangjiuxian2003yahoo. com. cn 。 組 , 每組 5個重復(fù) , 每個重復(fù) 8頭豬 。

6、以玉米 -豆粕 型日糧為基礎(chǔ)日糧 (表 1 。 組為對照組 , 飼喂基 礎(chǔ)日糧 , 不添加葡萄糖氧化酶 ; 、 、 組在基礎(chǔ) 日糧中分別添加 0. 1%、 0. 2%、 0. 3%的葡萄糖氧化 酶 , 試驗進行預(yù)試期 3d , 正試期 4周 。試驗在懷來長福養(yǎng)殖有限公司進行 , 斷奶仔豬由 其提供 。 葡萄糖氧化酶制劑由保定鮮爾康生物工程有 限公司提供 。表 1基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平 1. 2飼養(yǎng)管理試驗斷奶仔豬在保育舍飼養(yǎng) , 漏糞地板式圈舍 , 每圈 8頭 , 公母各半 , 試驗飼喂干粉日糧 , 自由采食 和飲水 , 試驗期記錄圈舍內(nèi)溫度 、 濕度及各項試驗 數(shù)據(jù) 。1. 3樣品采集與測定

7、試驗開始和結(jié)束時對仔豬稱重 。 試驗期間記錄耗 料量 , 計 算 平 均 日 采 食 量 (ADFI 、 平 均 日 增 重 (ADG 、 飼料轉(zhuǎn)化效率 (F /G 。 試驗前和試驗結(jié)束 前 1d , 每個重復(fù)組隨機選取 2頭仔豬頸靜脈采血 , ·35·畜牧與獸醫(yī) 2011年 第 43卷 第 6期3000r /min離心 15min 后 , 分裝血漿 , 20 冰箱 保存待用 。 血清葡萄糖的測定用比色法 , 測定儀器為 多功能生化分析儀 , 試劑盒由上?？迫A生物有限公司 提供 ; 血清胰島素測定用放射免疫法 , 試劑盒由北京 北方生物技術(shù)研究所提供 , 具體操作按試劑盒說

8、明進 行操作 。 試驗結(jié)束時 , 每個重復(fù)隨機抽取中等體重仔 豬 1頭 , 屠宰開腹后 , 分別采集胃 、 回腸以及盲腸食 糜 5 10g , 放入預(yù)先準(zhǔn)備的試劑液中 。 在無菌操作 臺中 , 準(zhǔn)確稱取胃 、 回腸和十二指腸食糜 1g 放入盛 有 99mL 滅菌生理鹽水的三角瓶中 , 充分振蕩后取稀 釋液 10倍稀釋 , 準(zhǔn)確吸取 0. 1mL 接種于培養(yǎng)基上 。 大腸桿菌用伊紅美蘭瓊脂作培養(yǎng)基 , 37 培養(yǎng) 48h 后進行菌落計數(shù) ; 乳酸菌以 LBS 作培養(yǎng)基 , 37 培 養(yǎng) 48h 后進行菌落計數(shù) 。 計數(shù)結(jié)果均以對數(shù)形式表 示并進行統(tǒng)計 。 1. 4統(tǒng)計分析試驗數(shù)據(jù)用 SAS (1

9、996 統(tǒng)計軟件單因子方差分 析 , 鄧肯氏多重比較 。 統(tǒng)計結(jié)果均以平均值 標(biāo)準(zhǔn)誤 表示 , P 0.05為差異顯著 。2結(jié)果與分析2. 1葡萄糖氧化酶對仔豬生長性能的影響日糧中添加不同水平的葡萄糖氧化酶對斷奶仔豬 生產(chǎn)性能的影響如表 2所示 。 組仔豬平均日增重為 566g , 比 組 (對照組 提高了 8. 2%, 差異顯著 (P 0.05 , 其他各組間差異均不顯著 。 對飼料轉(zhuǎn)化 效率的影響 , 組與 組相比 , 降低了 7. 9%(P = 0. 09 。 其他各組間差異均不顯著 。 葡萄糖氧化酶對 仔豬末重 、 日采食量沒有顯著影響 (P 0.05 。表 2葡萄糖氧化酶對仔豬生產(chǎn)性

10、能的影響處理 始重 /kg10. 360. 3510. 350. 3310. 320. 3210. 310. 32末重 /kg25. 070. 5925. 850. 6025. 430. 6625. 930. 58日增重 /g52313 a 55312 ab 54017 ab 56611 b 日采食量 /g92832 95361 89549 94648 飼料轉(zhuǎn)化效率 /%1. 780. 081. 720. 051. 660. 071. 640. 04注 :同行肩標(biāo)小寫字母不同者表示差異顯著 (P 0.05 , 無字母或字母相同者表示差異不 顯著 (P 0.05 。 下同 。2. 2葡萄糖氧化酶

11、對部分血液生化指標(biāo)的影響 葡萄糖氧化酶對斷奶仔豬血液生化指標(biāo)的影響如 表 3所 示 。 與 對 照 組 相 比 , 日 糧 中 添 加 0. 2%和 0. 3%的 GOD , 血 清 尿 素 氮 分 別 降 低 16. 37%和 14. 35%, 差 異 均 顯 著 (P 0. 05 ; 而 添 加 0. 3% GOD 組胰島素水平提高 17. 60%(P 0.05 。 未發(fā)現(xiàn) 葡萄糖氧化酶對仔豬血液中葡萄糖水平的影響 。表 3葡萄糖氧化酶對仔豬血液生化指標(biāo)的影響處理 試驗前葡萄糖 /(mg ·dL 1 97. 622. 5296. 082. 2795. 631. 7596. 922

12、. 01血漿尿素氮 /(mg ·dL 1 8. 180. 298. 590. 318. 980. 358. 370. 27胰島素 /(U ·mL 1 7. 930. 237. 620. 268. 140. 308. 010. 21試驗期葡萄糖 /(mg ·dL 1 104. 602. 22105. 682. 16108. 082. 56106. 852. 14血漿尿素氮 /(mg ·dL 1 14. 840. 37a 14. 040. 29ab 12. 410. 31b 12. 710. 30b 胰島素 /(U ·mL 1 9. 490. 33

13、a 9. 930. 31ab 10. 340. 35ab 11. 160. 37b2. 3葡萄糖氧化酶對仔豬胃腸道微生物菌群的影響 葡萄糖氧化酶對仔豬胃腸道微生物菌群數(shù)量的影 響如表 4所示 。 GOD 對大腸桿菌的影響 :與對照組 相比 , 日糧中添加 0. 1%、 0. 2%和 0. 3%的 GOD , 胃 大腸桿菌數(shù)量分別降低 6. 5%、 9. 3%和 8. 4%, 差異 均顯著 (P 0. 05 ; 與 對 照 組 相 比 , 日 糧 中 添 加 0. 2%和 0. 3%的 GOD , 回腸大腸桿菌數(shù)量分別降低 13. 0%和 11. 7%, 差異均顯著 (P 0.05 。 GOD

14、對乳酸菌的影響 :日糧中添加 0. 2%和 0. 3%的 GOD 比 對照組 、 0. 1%GOD 組仔豬胃內(nèi)乳酸菌數(shù)量增加 , 差 異顯 著 (P 0. 05 ; 日 糧 中 添 加 0. 1%、 0. 2%和 0. 3%的 GOD 組比對照組仔豬回腸內(nèi)乳酸菌數(shù)量顯著 增加 (P 0.05 。 GOD 對仔豬盲腸內(nèi)大腸桿菌和乳 酸菌沒有顯著影響 (P 0.05 。表 4葡萄糖氧化酶對仔豬胃腸道微生物菌群數(shù)量的影響 lg cfu /g處理 大腸桿菌胃 10. 70. 2a 10. 00. 2b 9. 70. 2b 9. 80. 1b 回腸 7. 70. 2a 7. 20. 2ab 6. 70.

15、 2b 6. 80. 2b 盲腸 6. 50. 26. 40. 26. 30. 26. 10. 1乳酸菌胃 6. 20. 2a 6. 40. 2a 7. 30. 2b 7. 80. 2b 回腸 7. 40. 2a 8. 20. 2b 8. 60. 2b 9. 40. 2c 盲腸 7. 80. 27. 60. 18. 40. 28. 30. 23討論一分子葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化下氧化成一 分子葡萄糖酸和過氧化氫 , 同時消耗一分子氧 。 葡萄 糖酸降低胃內(nèi)食糜的 pH 值 , 提供胃酸性環(huán)境 , 發(fā)揮 著酸化劑的作用 56; 胃內(nèi) pH 降低能有效抑制其有 害菌 、 促進有益菌的生長 6,

16、同時酸激活胃蛋白酶 活性 , 提高飼料蛋白質(zhì)的消化率 2。本試驗日糧中添加 0. 3%葡萄糖氧化酶能顯著提 高斷奶仔豬的日增重 , 與對照相比差異顯著 (P 0. 05 , 這與 Biagi 等 6應(yīng)用葡萄糖酸所得的結(jié)果一 致 。 研究結(jié)果表明 , 斷奶對仔豬應(yīng)激較大 , 改變仔豬 腸道微生物區(qū)系 , 從而對胃腸道的形態(tài)產(chǎn)生不利影 響 , 腸絨毛形態(tài)變短 710。 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖 生產(chǎn)葡萄糖酸 , 后者能有效改善胃腸道微生態(tài)區(qū)系 , 離體培養(yǎng)試驗表明 , 葡萄糖酸促進胃腸道食糜產(chǎn)生更 多的短鏈脂肪酸 , 后者是腸道微生物的主要能量來 源 6, 11。 這也進一步解釋了本試驗中斷奶仔豬采

17、食沒 有差異 , 而日增重和飼料轉(zhuǎn)化效率都有所提高 。 Malmolf 等 12報道血清尿素氮水平可以準(zhǔn)確反映 動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸代謝之間的平衡狀況 , 當(dāng)各氨基酸之間達(dá)到理想平衡時 , 氮的利用效率最 高 , 血清尿素氮水平最低 。 譙仕彥等 13認(rèn)為血清尿 素氮含量下降 , 氮存留增加說明氨基酸合成蛋白質(zhì)的 效率提高 。 本試驗中日糧添加 0. 2%和 0. 3%GOD 組 血清尿素氮水平均顯著降低 。 胰島素是合成代謝類激 素 , 其生理功能為促進蛋白質(zhì) 、 糖原等營養(yǎng)物質(zhì)的合 成 。 本試驗中日糧添加 0. 3%的 GOD 顯著提高血清 胰島素水平 , Davis 等 14研究

18、表明 , 灌注重組胰島素 可以提高仔豬血液中生長激素和 IGF-I 水平 , 增加肌 肉蛋白質(zhì)的合成 。研究表明 , 斷奶仔豬胃腸道發(fā)育不完全 , 消化液 和鹽酸分泌都受到抑制 , 食源性細(xì)菌攝入增加 , 使得 仔豬胃 腸 道 大 腸 桿 菌 數(shù) 量 增 加 , 乳 酸 桿 菌 數(shù) 量 減 少 1516, 大腸桿菌數(shù)量增加易造成仔豬拉稀 、 生產(chǎn) 性能下降和死亡率增加 。 Canibe 等 1研究報道 , 酸 性條件可以抑制大腸桿菌等有害菌的生長繁殖 , 而有 利于乳酸菌的生長繁殖 , 這與李鵬 、 林映才在斷奶仔 豬日 糧 中 添 加 復(fù) 合 酸 化 劑 的 技 術(shù) 一 致 23。 Biag

19、i 等 6試驗研究表明 , 葡萄糖酸能降低斷奶仔豬腸道 大腸桿菌數(shù)量 , 增加乳酸菌數(shù)量 。 本試驗在基礎(chǔ)日糧 中分別添加 0. 2%和 0. 3%GOD 顯著降低仔豬胃和回 腸大腸桿菌數(shù)量 , 增加乳酸菌數(shù)量 。 表明 GOD 有酸 制劑類似的改善仔豬胃腸道健康 , 提高仔豬生產(chǎn)性能 的作用效果 。4結(jié)論葡萄糖氧化酶能夠提高斷奶仔豬日增重 , 飼料轉(zhuǎn) 化效率趨于提高 。 其可能的作用途徑是葡萄糖氧化酶 降低仔豬胃腸道大腸桿菌數(shù)量 , 提高胃腸道乳酸桿菌 數(shù)量 , 從而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收率 , 提高胰島 素水平 , 促進機體營養(yǎng)物質(zhì)的合成 。參考文獻 :1Canibe N , Steie

20、n S HEffect of K-diformate in starter diets on acid-ity , miccrobiotia , and the amount of organic acids in the digestive tract of piglet , and on gastric alteration J J Anim Sci , 2001 (79 :2123-21332李 鵬 , 武書庚 , 張海軍 , 等 復(fù)合酸化劑對斷奶仔豬腸黏膜 形態(tài)和腸道微生物區(qū)系及免疫功能的影響 J 營養(yǎng)飼料 , 2009(9 :28-313林映才 , 陳建新 , 蔣宗勇 , 等 復(fù)合酸

21、化劑對早期斷奶仔豬生喹乙醇藥物 ELISA 檢測方法的建立何方洋 1, 郗日沫 2, 馮才偉 1, 顧蓉蓉 1, 羅曉琴 1, 王建霞 1, 萬宇平 1*(1北京望爾生物技術(shù)有限公司 , 北京 102206;2南開大學(xué)藥學(xué)院 , 天津 300191摘要 :本文根據(jù)抗原抗體特異性反應(yīng)及酶聯(lián)反應(yīng)放大作用原理 , 建立了喹乙醇藥物殘留 ELISA 檢測方法 。 該方法可檢測對象涉及飼料及動物性 食品 , 檢測靈敏度達(dá)到 0. 5ng ·g 1, 準(zhǔn)確度可達(dá) 85%, 檢測時間僅需 75min , 能夠滿足靈敏 、 快速 、 簡便 、 低成本 、 大批量的檢測需求 。 關(guān)鍵詞 :抗原抗體 ;

22、 特異性反應(yīng) ; 酶聯(lián)反應(yīng) ; 喹乙醇藥物 ; ELISA 檢測中圖分類號 :S859. 84文獻標(biāo)識碼 :B 文章編號 :0529-5130(2011 06-0056-05喹乙醇是化學(xué)合成的喹惡林類廣譜抗菌藥物 1。 它是一種具有促生長作用的藥物性添加劑 , 具有抗菌 及促進蛋白同化作用 , 促進動物生長 , 增加瘦肉率 , 促進畜禽生長 , 提高飼料轉(zhuǎn)化率 , 廣泛用于豬 、 牛 、 雞 、 羊的促生長 2。 1976年 , 西歐共同體正式批準(zhǔn) 喹乙醇為飼料添加劑 , 隨后美國 、 日本 、 西德 、 瑞 典 、 芬蘭 、 捷克等國開始推廣使用喹乙醇 。 20世紀(jì) 80年代 , 喹乙醇作為

23、飼料添加劑在我國開始推廣使 用 3。 由于喹乙醇有中度至明顯的蓄積毒性 , 對大 多數(shù)動物有明顯的致畸作用 , 其代謝物 3-甲基 -喹啉 -2-羥酸會在動物體內(nèi)殘留 , 進而對人體產(chǎn)生耐藥性 ,收稿日期 :2010-10-15基金項目 :國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃 (863計劃 (2010AA10Z402 。 作者簡介 :何方洋 (1969- , 男 , 博士 , 研究員 。*通訊作者 :萬宇平 , 主要從事食品安全免疫檢測技術(shù) , E-mail : bjwanger010163. com 。 而卡巴多具有潛在的三致性 , 即致畸性 、 致突變 、 致 癌 。 因此 , 喹乙醇后期在美國和歐盟都

24、被禁止用作飼 料添加劑 。 我國農(nóng)業(yè)部在 2001年第 168號公告中就 作了嚴(yán)格規(guī)定 , 只能用于體重低于 35kg 的豬 , 添加 量為 50mg ·kg 1飼料 , 禁止用于家禽及水產(chǎn)養(yǎng)殖 。 本研究是應(yīng)用 ELISA 反應(yīng)建立喹乙醇的快速檢 測方法 , 從而為開發(fā)快速 、 準(zhǔn)確的檢測試劑盒奠定基 礎(chǔ) 。 本方法檢測時間僅需 75min , 能夠滿足靈敏 、 快 速 、 簡便 、 低成本 、 大批量的檢測需求 。1材料與方法1. 1試驗動物雌性 Balb /c小鼠 , 6周齡 。1. 2主要試劑喹乙醇藥物系列標(biāo)準(zhǔn)品 , 牛血清白蛋白 (BSA , 卵清白蛋白 (OVA , 購自

25、美國 Sigma 公司櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔櫔 。產(chǎn)性能 、 血清生化指標(biāo) 、 腸道形態(tài)和微生物區(qū)系的影響 J 養(yǎng)豬 , 2001(1 :13-164趙國先 , 張小云 , 計 成 , 等 葡萄糖氧化酶對蛋雞生產(chǎn)性能 的影響 J 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報 , 2007(1 :89-925趙曉芳 , 張宏福 葡萄糖氧化酶的功能及在畜牧業(yè)中的應(yīng)用 J 廣東飼料 , 2007(1 :34-356Biagi G , Piva A , Moschini M , et alEffect of gluconic acid on piglet g

26、rowth performance , intestinal microflora , and intestinal wall morphology J J Anim Sci , 2006(84 :370-3787Gu X , Li D , She REffect of weanling on small inteatinal structure and function in the piglet J Arch Tierernahr , 2002(56 : 275-2868王繼強 , 張 波 , 劉 福 柱 酸 化 劑 在 畜 禽 業(yè) 中 應(yīng) 用 的 研 究 J 中國動物保健 , 2004(

27、10 :32-339呂進宏 , 黃 淘 , 馬立保 新型飼料添加劑 -葡萄糖氧 化 酶 J 中國飼料 , 2004(3 :15-1610BeersSchreurs V , Nabuurs M J , Vellenga S , et alWeanling and the weanling diet influence the villous height and crypt depth in the small intestine of pigs and alter the concentrations of short-chain fatty acids in the large intestine and blood J J Nutr , 1998(128 :947-95311Tsuka