醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：第25章 病毒感染的檢查方法和防治原則

1、第第2 25 5章章 病毒感染的檢查方法和防治病毒感染的檢查方法和防治原則原則 掌握：無(wú)掌握：無(wú)熟悉：病毒標(biāo)本的采集與送檢原則。病熟悉：病毒標(biāo)本的采集與送檢原則。病毒分離培養(yǎng)的方法。毒分離培養(yǎng)的方法。了解：檢測(cè)病毒核酸的方法；病毒感染了解：檢測(cè)病毒核酸的方法；病毒感染的特異性預(yù)防。抗病毒治療。的特異性預(yù)防?？共《局委煛５谝还?jié)第一節(jié) 病毒感染的檢查方法病毒感染的檢查方法二、二、 病毒的分離培養(yǎng)病毒的分離培養(yǎng)動(dòng)物接種動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞株二倍體細(xì)胞株傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系絨毛尿囊膜痘病毒特異性損傷(1) 原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng) 動(dòng)物或人組織直接

2、用蛋白酶消化所得動(dòng)物或人組織直接用蛋白酶消化所得的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長(zhǎng)。(2)二倍體細(xì)胞株二倍體細(xì)胞株 在體外連續(xù)培養(yǎng)在體外連續(xù)培養(yǎng)5060代仍保持其代仍保持其二倍染色二倍染色體體數(shù)目的單型細(xì)胞。數(shù)目的單型細(xì)胞。為生產(chǎn)人用為生產(chǎn)人用疫苗疫苗的首選細(xì)胞株。的首選細(xì)胞株。(3) 傳代細(xì)胞系傳代細(xì)胞系 能在體外連續(xù)傳代的細(xì)胞。能在體外連續(xù)傳代的細(xì)胞。病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢測(cè)與鑒定病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢測(cè)與鑒定(1)細(xì)胞病變效應(yīng)：細(xì)胞病變效應(yīng)：cytopathic effect，CPE 病毒感染宿主細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)的變化，如細(xì)病毒感染宿主細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)的變化

3、，如細(xì)胞團(tuán)縮、腫大、死亡、脫落、融合等。胞團(tuán)縮、腫大、死亡、脫落、融合等。細(xì)胞病變現(xiàn)象（細(xì)胞病變現(xiàn)象（CPE）病毒感染導(dǎo)致細(xì)胞凋亡病毒感染導(dǎo)致細(xì)胞凋亡細(xì)胞融合，形成多核巨細(xì)胞細(xì)胞融合，形成多核巨細(xì)胞*包涵體形成的觀察Negri Body病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定噬斑形成試驗(yàn)噬斑形成試驗(yàn) 將一定量適當(dāng)稀釋濃度的待檢病將一定量適當(dāng)稀釋濃度的待檢病毒液接種于敏感的單層細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)毒液接種于敏感的單層細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間培養(yǎng)后，在細(xì)胞上方覆蓋一層半固體物質(zhì)后繼續(xù)培養(yǎng)，后，在細(xì)胞上方覆蓋一層半固體物質(zhì)后繼續(xù)培養(yǎng)，可見(jiàn)單個(gè)病毒的增殖使感染的單層細(xì)胞溶解脫落，可見(jiàn)單個(gè)病毒的增殖

4、使感染的單層細(xì)胞溶解脫落，形成肉眼可見(jiàn)的空板。用于測(cè)定病毒數(shù)量。形成肉眼可見(jiàn)的空板。用于測(cè)定病毒數(shù)量。Plaque assay噬斑實(shí)驗(yàn)Plaque assay噬斑實(shí)驗(yàn)Plaque forming unit, PFUPlaque assay噬斑實(shí)驗(yàn)病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定50%組織細(xì)胞感染量組織細(xì)胞感染量TCID50 將病毒原將病毒原液做液做10倍系列稀釋后，計(jì)算倍系列稀釋后，計(jì)算50%組織感染量即引組織感染量即引起細(xì)胞病變（起細(xì)胞病變（CPE）的病毒量。用于測(cè)定病毒的毒的病毒量。用于測(cè)定病毒的毒力。力。Fig HSV 熒光抗體法查抗原熒光抗體法查抗原三、三、 病毒成分的檢測(cè)

5、：病毒成分的檢測(cè)：檢查病毒性抗原：檢查病毒性抗原：四、四、 病毒感染的血清學(xué)診斷病毒感染的血清學(xué)診斷(1) 單份血清檢測(cè)：?jiǎn)畏菅鍣z測(cè)：IgMIgG(2) 雙份血清檢測(cè)：雙份血清檢測(cè)：IgG恢復(fù)期恢復(fù)期/早期早期 4:1五、病毒核酸的檢測(cè)：五、病毒核酸的檢測(cè)：核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù) Southern blot基因芯片基因芯片PCRPCR cycler2. 形態(tài)學(xué)檢查形態(tài)學(xué)檢查3. 檢查病毒性抗原檢查病毒性抗原4. 檢查病毒抗體檢查病毒抗體5. 病毒核酸的檢測(cè)病毒核酸的檢測(cè)光鏡光鏡大病毒、包涵體大病毒、包涵體 電鏡電鏡直接電鏡、免疫電鏡直接電鏡、免疫電鏡免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)熒光素、放射性核

6、素、酶熒光素、放射性核素、酶ELISAIgM; IgG核酸雜交技術(shù)核酸雜交技術(shù) Southern、Nouthern PCR1. 病毒的分離病毒的分離第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的防治原則病毒感染的防治原則一、病毒感染的預(yù)防一、病毒感染的預(yù)防u傳統(tǒng)疫苗傳統(tǒng)疫苗 滅活疫苗滅活疫苗 減毒活疫苗減毒活疫苗 亞單位疫苗亞單位疫苗Fig Edward Jenner vaccinating (inoculating) James Phipps with cowpox material.u現(xiàn)代疫苗現(xiàn)代疫苗 基因工程的疫苗基因工程的疫苗 核酸疫苗核酸疫苗 其他類型的疫苗：合成肽疫苗其他類型的疫苗：合成肽疫苗 抗獨(dú)特型

7、疫苗抗獨(dú)特型疫苗 聯(lián)合多價(jià)疫苗等聯(lián)合多價(jià)疫苗等基因工程疫苗：基因工程疫苗：合成編碼保護(hù)性合成編碼保護(hù)性抗原的基因片段抗原的基因片段克隆表達(dá)克隆表達(dá)于載體于載體細(xì)胞、真菌細(xì)胞、真菌細(xì)菌等細(xì)菌等大量增殖大量增殖基因重組疫苗基因重組疫苗純化純化二、抗病毒治療二、抗病毒治療1.抗病毒藥物或制劑抗病毒藥物或制劑 策略：作用于病毒復(fù)制周期的不同環(huán)節(jié)策略：作用于病毒復(fù)制周期的不同環(huán)節(jié) 核苷類藥物核苷類藥物 阻抑子代病毒結(jié)構(gòu)基因的合成與表達(dá)。阻抑子代病毒結(jié)構(gòu)基因的合成與表達(dá)。 病毒蛋白酶的抑制劑病毒蛋白酶的抑制劑 指與指與蛋白酶蛋白酶分子分子活性中心活性中心上的一上的一些些基團(tuán)基團(tuán)結(jié)合，使蛋白酶活力下降，甚至消失結(jié)合，使蛋白酶活力下降，甚至消失。 其他：其他：IFN、干擾素誘生劑、干擾素誘生劑、TNF、IL-2、中草藥等中草藥等抑制病毒復(fù)制。抑制病毒復(fù)制。 抗病毒基因治療：抗病毒基因治療：asODN、asON、ribozyme 2.免疫制劑免疫制劑吸附吸附擬受體制劑擬受體制劑擬配體制劑擬配體制劑中和抗體中和抗體穿入穿入金剛烷胺金剛烷胺脫殼脫殼生物合成生物合成裝配、釋放裝配、釋放核苷類似物核苷類似物干擾素干擾素反義技術(shù)等反義技術(shù)等mRNAProte