生物分離技術(shù)綜合實驗_ ppt課件

1、生物分別技術(shù)綜合實驗生物分別技術(shù)綜合實驗植物色素提取、分別及定量與初步鑒定植物色素提取、分別及定量與初步鑒定實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康?了解有機溶劑提取目的物質(zhì)植物色素的過程了解有機溶劑提取目的物質(zhì)植物色素的過程與本卷須知。并了解目的物質(zhì)提取過程中的主與本卷須知。并了解目的物質(zhì)提取過程中的主要影響因子及其相互關(guān)系。要影響因子及其相互關(guān)系。二二 實驗原理：實驗原理：用有機溶劑法從原料中提取黃酮類成分用有機溶劑法從原料中提取黃酮類成分,利用黃酮利用黃酮類物質(zhì)在熱乙醇中溶解度較高類物質(zhì)在熱乙醇中溶解度較高,將其提取出。將其提取出。實驗一、實驗一、 植物色素

2、的制備植物色素的制備 三、三、 儀器儀器 高速干粉粉碎機、恒溫水浴鍋、燒杯試管假設(shè)干、高速干粉粉碎機、恒溫水浴鍋、燒杯試管假設(shè)干、中低速離心機、過濾安裝漏斗和濾紙，中低速離心機、過濾安裝漏斗和濾紙，250ml磨口椎形瓶磨口椎形瓶6個個/每組；每組；10ml容量瓶容量瓶4個個/組。組。 四、試劑四、試劑 配配40%80ml/組、組、70%450 ml/組的乙醇，組的乙醇，10硝酸鋁溶液硝酸鋁溶液50ml/組，組，5亞硝酸鈉亞硝酸鈉50 ml/組組, 質(zhì)量分數(shù)質(zhì)量分數(shù)4.3氫氧化鈉氫氧化鈉200 ml/組。組。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 五、操作五、操作 1、不同浸提劑濃度對黃

3、酮提取率的影響、不同浸提劑濃度對黃酮提取率的影響 1.1取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2.5克每組，用克每組，用8倍體積指倍體積指料液比料液比v/m為為8：1即即20ml的的40%、70%，95%的乙醇浸提的乙醇浸提溫度溫度70，時間，時間1.5h，浸提時每隔，浸提時每隔15 min用手輕搖用手輕搖2min。浸提所得粗液進展離心浸提所得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 1.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質(zhì)容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)量分數(shù)5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后

4、，加質(zhì)量分數(shù)后，加質(zhì)量分數(shù)10硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質(zhì)量分數(shù)，再加質(zhì)量分數(shù)4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下測得其波長下測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提劑濃度。吸光度值，得出最優(yōu)的浸提劑濃度。 按三個程度，每個程度做兩組操作，即每個單要素條件得六按三個程度，每個程度做兩組操作，即每個單要素條件得六個數(shù)據(jù)。個數(shù)據(jù)。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 2、不同浸提時間對黃酮提取率的影響、不同浸提時間對黃酮提取率的影響 2.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2

5、.5克每組，用按克每組，用按8：1指指料液比料液比v/m的的70%乙醇浸提溫度乙醇浸提溫度70，浸提時間分別為，浸提時間分別為90min、120min，150min，浸提時每隔，浸提時每隔15分鐘用手輕搖分鐘用手輕搖2min。浸提所得粗液進展離心浸提所得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 2.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質(zhì)容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)量分數(shù)5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質(zhì)量分數(shù)后，加質(zhì)量分數(shù)10硝酸鋁硝酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質(zhì)量分數(shù)，再加質(zhì)量

6、分數(shù)4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下波長下測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提時間。測得其吸光度值，得出最優(yōu)的浸提時間。 按三個程度，每個程度做兩組操作每個程度做兩組操作，按三個程度，每個程度做兩組操作每個程度做兩組操作，即每個單要素條件做六個數(shù)據(jù)。即每個單要素條件做六個數(shù)據(jù)。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 3、不同料液比對黃酮提取率的影響、不同料液比對黃酮提取率的影響 3.1 取干粉原料取干粉原料15克，分成克，分成6組組2.5克每組，用按克每組，用按6：1，8：1，10：1指料液比指料液比v

7、/m，即，即ml/克的克的70%乙醇浸提溫度乙醇浸提溫度70，時間，時間1.5h，浸提時每隔，浸提時每隔15分鐘用手輕搖分鐘用手輕搖2min。浸提所。浸提所得粗液進展離心得粗液進展離心4500r/min20min，得浸提上清液。，得浸提上清液。 3.2 精細汲取上清液精細汲取上清液1.0 mL，分別置于，分別置于10 mL容量瓶中，加質(zhì)容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)量分數(shù)5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質(zhì)量分數(shù)后，加質(zhì)量分數(shù)10硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質(zhì)量分數(shù)，再加質(zhì)量分數(shù)4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻

8、，放置15 min，在，在510nm波長下測得其波長下測得其吸光度值，按吸光度值，按V*A值的大小比較得出最優(yōu)的料液比。值的大小比較得出最優(yōu)的料液比。 選做部分：假設(shè)出現(xiàn)從選做部分：假設(shè)出現(xiàn)從6：18：110：1的的V*A繼續(xù)平繼續(xù)平穩(wěn)添加，那么可以繼續(xù)加大料液比可以為穩(wěn)添加，那么可以繼續(xù)加大料液比可以為12：1，14：1,直到找到拐點位置的最正確料液比。直到找到拐點位置的最正確料液比。 實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 六、實驗本卷須知六、實驗本卷須知 1 1、將本實驗中一切的乙醇提取的浸提液集中起來一定要、將本實驗中一切的乙醇提取的浸提液集中起來一定要記下這些浸提液所對應(yīng)的原

9、料質(zhì)量記下這些浸提液所對應(yīng)的原料質(zhì)量M M，量取其總體積，量取其總體積V V，將提取液分出將提取液分出50ml50ml，將這，將這50ml50ml和其他色素液分置于兩個燒和其他色素液分置于兩個燒杯中，然后將兩個燒杯在杯中，然后將兩個燒杯在44左右的低溫下并用保鮮膜封鎖左右的低溫下并用保鮮膜封鎖保管按如今的溫度，放在臺子上避光保管即可，以供保管按如今的溫度，放在臺子上避光保管即可，以供后面純化實驗運用。后面純化實驗運用。 2 2、在色素提取過程中，每隔一段時間要進展輕搖，搖擺時、在色素提取過程中，每隔一段時間要進展輕搖，搖擺時幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，呵斥原料損失。幅度要小，以免使提取原

10、料粘在壁上，呵斥原料損失。 3 3、在做不同料液比對色素提取影響實驗時，比較結(jié)果優(yōu)劣、在做不同料液比對色素提取影響實驗時，比較結(jié)果優(yōu)劣要用要用V V* *A,A,即：體積即：體積* *吸光度值。吸光度值。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 六、實驗本卷須知六、實驗本卷須知 4 4、離心前一定要仔細平衡好，兩管質(zhì)量平衡誤差應(yīng)在、離心前一定要仔細平衡好，兩管質(zhì)量平衡誤差應(yīng)在0.10.1克以內(nèi)。同時，在離心過程中，一定要有專人看護克以內(nèi)。同時，在離心過程中，一定要有專人看護以免發(fā)惹事故。以免發(fā)惹事故。 5 5、實驗當中的提取液一定要全部從磨口錐形瓶和離心、實驗當中的提取液一定要全部從磨口

11、錐形瓶和離心管中倒出，在將離心好的色素倒出時，一定要小心，管中倒出，在將離心好的色素倒出時，一定要小心，不要將底部的沉降物倒出來。不要將底部的沉降物倒出來。 6 6、色素提取過程中一定要在錐形瓶上加上塞子，假設(shè)、色素提取過程中一定要在錐形瓶上加上塞子，假設(shè)乙醇蒸發(fā)較快時如：乙醇蒸發(fā)較快時如：80%80%以上的高濃度乙醇提取時，以上的高濃度乙醇提取時，可以思索在磨口錐形瓶上加一蛇形管，但低濃度乙醇可以思索在磨口錐形瓶上加一蛇形管，但低濃度乙醇提取時沒有必要加蛇形管。提取時沒有必要加蛇形管。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 7、上樣液的制備該步驟亦可以在實驗二中完成、上樣液的制備該步

12、驟亦可以在實驗二中完成 將實驗一中所得的一切浸提液用燒杯放在將實驗一中所得的一切浸提液用燒杯放在100水浴中濃縮水浴中濃縮到到20ml，將所得濃縮液置于，將所得濃縮液置于50ml或更大的分液漏斗中，或更大的分液漏斗中，按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚層，按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚層，得下層黃酮液，放在得下層黃酮液，放在90水浴中濃縮，濃縮至水浴中濃縮，濃縮至10ml詳細操詳細操作時，可先用大燒杯進展?jié)饪s，待溶液約作時，可先用大燒杯進展?jié)饪s，待溶液約50ml左右時，改用左右時，改用50ml小燒杯進展?jié)饪s，這樣便于進展定量，備用。小燒杯進展?jié)饪s，這樣便于進

13、展定量，備用。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備 8、丈量吸光度時，一定要設(shè)空白對照即把除、丈量吸光度時，一定要設(shè)空白對照即把除1ml樣樣液以外的其他液以外的其他9ml亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒸餾亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、蒸餾水水+1ml乙醇乙醇 9、由于各提取液濃度較大，在丈量吸光度前，一定要、由于各提取液濃度較大，在丈量吸光度前，一定要將待測液取出將待測液取出1mL，稀釋到，稀釋到10mL后，再按前面后，再按前面A值測值測定方法進展測定。定方法進展測定。實驗一、實驗一、 植物色素的制備植物色素的制備附錄附錄 1 1、實驗前面預(yù)備同窗們不需求做：、實驗前面預(yù)備同窗們不需求做

14、： 1 1、原料的制備、原料的制備 用高速干粉粉碎機將銀杏葉粉碎，過用高速干粉粉碎機將銀杏葉粉碎，過4040目以上，目以上，40-6040-60目，目，60-7060-70目，目，70-8070-80目，目，80-9080-90目，目，90-10090-100目，目，100100目以上，篩后目以上，篩后備用。備用。 2 2、規(guī)范曲線的繪制：、規(guī)范曲線的繪制： 精細稱取蘆丁對照品精細稱取蘆丁對照品200 mg200 mg，用體積分數(shù)，用體積分數(shù)( (下同下同)70)70乙醇溶乙醇溶解，定容至解，定容至100 mL100 mL容量瓶中搖勻。精細移取容量瓶中搖勻。精細移取10 mL10 mL蘆丁乙醇

15、液蘆丁乙醇液于于25 mL25 mL容量瓶中，用蒸餾水定容，得到容量瓶中，用蒸餾水定容，得到0.8 mg0.8 mgmLmL規(guī)范溶液。規(guī)范溶液。精細汲取規(guī)范溶液精細汲取規(guī)范溶液0.00.0、0.20.2、0.40.4、0.60.6、0.80.8、1.0 mL1.0 mL，分別，分別置于置于10 mL10 mL容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)5 5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 6 minmin后，加質(zhì)量分數(shù)后，加質(zhì)量分數(shù)1010硝酸鋁硝酸鋁0.4 mL0.4 mL，放置，放置6 min6 min，再加質(zhì)，再加質(zhì)量分數(shù)量分數(shù)4.34.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL4

16、mL，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置，加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 15 minmin，進展丈量，在，進展丈量，在510nm510nm處有最大吸收波長。以測定結(jié)果得處有最大吸收波長。以測定結(jié)果得蘆丁濃度與吸光度的規(guī)范曲線：蘆丁濃度與吸光度的規(guī)范曲線：Y=0.1035Ad-0.0016(YY=0.1035Ad-0.0016(Y：蘆?。禾J丁濃度，濃度，mgmgmlml；A A：吸光值：吸光值) )，R =0.9999R =0.9999。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 一、目的一、目的 學(xué)習(xí)掌握柱層析法分別純化目的物質(zhì)植物色素的方法學(xué)習(xí)掌握柱層析法分別純化目的物質(zhì)植物色素的方法和

17、操作。和操作。 二、原理二、原理 柱層析是比較理想的分別黃酮類色素的方法柱層析是比較理想的分別黃酮類色素的方法,其原理是經(jīng)其原理是經(jīng)過基質(zhì)分子與黃酮類化合物分子上的酚羥基構(gòu)成氫鍵締合過基質(zhì)分子與黃酮類化合物分子上的酚羥基構(gòu)成氫鍵締合物而產(chǎn)生作用物而產(chǎn)生作用,其作用力強弱取決于黃酮類化合物分子上其作用力強弱取決于黃酮類化合物分子上羥基的數(shù)目與位置以及洗脫劑與黃酮類化合物和基質(zhì)之間羥基的數(shù)目與位置以及洗脫劑與黃酮類化合物和基質(zhì)之間構(gòu)成氫鍵締合才干的大小。常用不同比例的水和醇混合溶構(gòu)成氫鍵締合才干的大小。常用不同比例的水和醇混合溶劑作為洗脫劑，能勝利分別各種類型的黃酮。劑作為洗脫劑，能勝利分別各種類

18、型的黃酮。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 三、器材與試劑三、器材與試劑 1、 實驗儀器實驗儀器 層析柱、試管、燒杯、量筒、烘箱。層析柱、試管、燒杯、量筒、烘箱。 2、 實驗試劑實驗試劑 石油醚、石油醚、40%乙醇乙醇200ml/組、組、70%乙醇乙醇300ml/組、組、95%乙醇乙醇200ml/組、基質(zhì)。組、基質(zhì)。 3 、實驗資料、實驗資料 銀杏葉提取液銀杏葉提取液實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 四、操作四、操作 1、上樣液的制備該步驟亦可以在實驗一中完成、上樣液的制備該步驟亦可以在實驗一中完成 將實驗一中所得的一切浸提液用燒杯放在將實驗一中所得的一

19、切浸提液用燒杯放在100水浴中濃縮水浴中濃縮到到20ml，將所得濃縮液置于，將所得濃縮液置于50ml或更大的分液漏斗中，或更大的分液漏斗中，按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚按等量體積參與石油醚后塞上塞子并充分搖勻，棄石油醚層，得下層黃酮液，放在層，得下層黃酮液，放在90水浴中濃縮，濃縮至水浴中濃縮，濃縮至10ml詳細操作時，可先用大燒杯進展?jié)饪s，待溶液約詳細操作時，可先用大燒杯進展?jié)饪s，待溶液約50ml左左右時，改用右時，改用50ml小燒杯進展?jié)饪s，這樣便于進展定量，小燒杯進展?jié)饪s，這樣便于進展定量，備用。備用。 2、基質(zhì)的的預(yù)處置：、基質(zhì)的的預(yù)處置： 稱取所需的大孔吸附樹脂

20、稱取所需的大孔吸附樹脂 (濕重濕重)，以，以95乙醇浸泡乙醇浸泡24 h，充分溶脹后用乙醇濕法裝柱，充分溶脹后用乙醇濕法裝柱， 實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化3 裝柱：裝柱：將酒精浸泡好的基質(zhì)約將酒精浸泡好的基質(zhì)約40ml指混勻外形下取樣，經(jīng)過漏斗緩慢倒入指混勻外形下取樣，經(jīng)過漏斗緩慢倒入柱中柱中曾經(jīng)裝好柱中柱中曾經(jīng)裝好10ml95%乙醇，邊加邊用木夾子輕敲柱子，同時乙醇，邊加邊用木夾子輕敲柱子，同時用竹簽悄然壓實。流速應(yīng)控制在用竹簽悄然壓實。流速應(yīng)控制在20滴滴/min，待裝至，待裝至20cm柱高，再加與柱柱高，再加與柱壁完全吻合的濾紙片，接著參與壁完全吻合的濾紙片，接

21、著參與1.0 cm高海沙或石英砂。留意，在高海沙或石英砂。留意，在整個裝柱過程中，樹脂應(yīng)浸泡在溶液中，否那么會出現(xiàn)斷痕，氣泡等。假整個裝柱過程中，樹脂應(yīng)浸泡在溶液中，否那么會出現(xiàn)斷痕，氣泡等。假設(shè)柱子無砂芯，要在裝柱前加一小團大拇指指甲大小的棉花封住柱子，設(shè)柱子無砂芯，要在裝柱前加一小團大拇指指甲大小的棉花封住柱子，以防基質(zhì)漏出。以防基質(zhì)漏出。4、平衡：、平衡：用用95%乙醇洗柱，不時檢查流出的乙醇液，待流出的乙醇液與去離子水以乙醇洗柱，不時檢查流出的乙醇液，待流出的乙醇液與去離子水以1：3的體積比混合，振搖不顯白色渾濁時終了洗柱已洗好，不用做，的體積比混合，振搖不顯白色渾濁時終了洗柱已洗好，

22、不用做，用純化水將柱中樹脂洗至無醇味后備用。留意，一切醇洗液需回收到大用純化水將柱中樹脂洗至無醇味后備用。留意，一切醇洗液需回收到大的燒杯里，水洗液不用回收的燒杯里，水洗液不用回收5、上樣與吸附：、上樣與吸附： 取濃縮液取濃縮液10ml上柱，吸附上柱，吸附20min流速流速20滴滴/min，等樣品液完全流入基，等樣品液完全流入基質(zhì)中后，用質(zhì)中后，用3倍柱體積約倍柱體積約150ml去離子水洗脫。去離子水洗脫。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 6、洗脫解吸附：、洗脫解吸附： 6.1 依次用依次用40%200ml流速約流速約30滴滴/min、70%300ml流流速約速約20滴滴/

23、min、95%200ml流速約流速約40滴滴/min乙醇分別乙醇分別進展洗脫，將試管放在試管架上按序接納洗脫液，每管搜集進展洗脫，將試管放在試管架上按序接納洗脫液，每管搜集 8ml左右洗脫液左右洗脫液 6.2 從第一管起，每接納從第一管起，每接納3管，那么精細汲取第管，那么精細汲取第1、4、7、10等管中的洗脫液等管中的洗脫液1.0 mL，置于，置于10 mL容量瓶中，加質(zhì)量容量瓶中，加質(zhì)量分數(shù)分數(shù)5亞硝酸鈉亞硝酸鈉0.4 mL，放置，放置6 min后，加質(zhì)量分數(shù)后，加質(zhì)量分數(shù)10硝硝酸鋁酸鋁0.4 mL，放置，放置6 min，再加質(zhì)量分數(shù)，再加質(zhì)量分數(shù)4.3氫氧化鈉氫氧化鈉4 mL，加蒸餾水

24、至刻度，搖勻，放置加蒸餾水至刻度，搖勻，放置15 min，在，在510nm波長下測得波長下測得其吸光度值；其吸光度值；實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 6、洗脫解吸附：、洗脫解吸附： 6.3 確定黃酮所在的主要流分后，將吸光度值在確定黃酮所在的主要流分后，將吸光度值在0.1以上含以上含0.1的一切管中的洗脫液集中起來，測出其總體積的一切管中的洗脫液集中起來，測出其總體積V純化純化接著，可直接測定純化液的接著，可直接測定純化液的A值，預(yù)留值，預(yù)留50ml純化液，用純化液，用保鮮膜封鎖后放在保鮮膜封鎖后放在4中低溫保管，并將其他的純化液置于中低溫保管，并將其他的純化液置于90水

25、浴中濃縮至水浴中濃縮至10ml，用保鮮膜封鎖后放在，用保鮮膜封鎖后放在4中低溫避中低溫避光保管，備用。光保管，備用。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 五、實驗本卷須知五、實驗本卷須知 1 1、裝柱前在柱子底部加一小棉花球。、裝柱前在柱子底部加一小棉花球。 2 2、裝柱時，邊加樹脂邊用木質(zhì)棒或橡膠棒輕、裝柱時，邊加樹脂邊用木質(zhì)棒或橡膠棒輕敲柱子，使基質(zhì)漸漸下沉敲柱子，使基質(zhì)漸漸下沉 。 3 3、裝柱要求延續(xù)、均勻、無紋格、無氣泡，外表、裝柱要求延續(xù)、均勻、無紋格、無氣泡，外表平整，整個層析過程中液面一定不得低于樹脂外表。平整，整個層析過程中液面一定不得低于樹脂外表。 4 4、

26、要留意及時開啟和封鎖旋紐，即在上一種液體、要留意及時開啟和封鎖旋紐，即在上一種液體剛好沒入基質(zhì)時，才開場參與下一種液體，且一定剛好沒入基質(zhì)時，才開場參與下一種液體，且一定要用玻棒引流。要用玻棒引流。實驗二、植物色素的分別純化實驗二、植物色素的分別純化 五、實驗本卷須知五、實驗本卷須知 5 5、要留意控制流速，不宜過快。、要留意控制流速，不宜過快。 6 6、在參與好樣品后在洗壁前就要接納洗、在參與好樣品后在洗壁前就要接納洗脫液。脫液。 7 7、柱子預(yù)處置時的流出液用三角瓶或燒杯接、柱子預(yù)處置時的流出液用三角瓶或燒杯接納，而上樣后的色素洗脫液那么用試管接納。納，而上樣后的色素洗脫液那么用試管接納。

27、 8 8、所預(yù)留的純化液、所預(yù)留的純化液50ml50ml和和10ml10ml，必需是在一，必需是在一切洗脫下來的切洗脫下來的A A值大于值大于0.10.1的純化液混勻后才干的純化液混勻后才干取液。取液。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 一、目的一、目的 用化學(xué)方法鑒定上面所純化的提取液中有黃酮存在，用化學(xué)方法鑒定上面所純化的提取液中有黃酮存在，同時測定黃酮的含量和最后的得率。同時測定黃酮的含量和最后的得率。 二、原理二、原理 黃酮化合物分子構(gòu)造中具有黃酮化合物分子構(gòu)造中具有C5、C6位的酚羥基或鄰二位的酚羥基或鄰二酚羥基可與金屬鹽試劑鋁鹽生成有色絡(luò)合物，黃酮絡(luò)酚

28、羥基可與金屬鹽試劑鋁鹽生成有色絡(luò)合物，黃酮絡(luò)合物在合物在510nm處有較大的吸收峰，可由分光光度法測處有較大的吸收峰，可由分光光度法測出黃酮含量。根據(jù)黃酮的一些特性，利用黃酮與一些出黃酮含量。根據(jù)黃酮的一些特性，利用黃酮與一些試劑發(fā)生特殊的發(fā)色反響來檢測黃酮。試劑發(fā)生特殊的發(fā)色反響來檢測黃酮。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三、實驗器材三、實驗器材 1、實驗儀器：分光光度計，烘箱，電子天平，、實驗儀器：分光光度計，烘箱，電子天平，10ml 容量容量瓶瓶1支支/組，組，100m容量瓶容量瓶1支支/組，移液管假設(shè)干。組，移液管假設(shè)干。 2、實驗試劑：、實驗試劑：

29、80%的氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)溶液，的氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)溶液，10%的的FeCl3，10%的的FeCl2溶液，溶液，2%NaBH4溶液，甲醇。溶液，甲醇。 3、實驗資料：實驗二中所得的洗脫液的濃縮液總體積、實驗資料：實驗二中所得的洗脫液的濃縮液總體積為為10ml。 實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 四、實驗步驟四、實驗步驟 一物質(zhì)初步鑒定操作樣液是實驗二中純化液濃縮一物質(zhì)初步鑒定操作樣液是實驗二中純化液濃縮而來的而來的10ml： 1、在所純化的提取液、在所純化的提取液2ml中參與中參與10%的氫氧化鈉質(zhì)量的氫氧化鈉質(zhì)量分數(shù)溶液分數(shù)溶液2ml，假設(shè)色素液馬上由黃色變?yōu)樯铧S

30、色；那，假設(shè)色素液馬上由黃色變?yōu)樯铧S色；那么認定黃酮化合物的存在。么認定黃酮化合物的存在。 2、在所純化的提取液兩份，各為、在所純化的提取液兩份，各為2ml，分別參與，分別參與10%的的FeCl3，F(xiàn)e Cl2；假設(shè)發(fā)現(xiàn)兩種離子都使色素溶液變?yōu)樗{；假設(shè)發(fā)現(xiàn)兩種離子都使色素溶液變?yōu)樗{綠色，那么可認定黃酮化合物的存在。綠色，那么可認定黃酮化合物的存在。 3、硼酸氫鈉反響：取黃酮純化液、硼酸氫鈉反響：取黃酮純化液2ml，再加等量的，再加等量的2%NaBH4的甲醇溶液的甲醇溶液1min后加濃鹽酸買來即用，不后加濃鹽酸買來即用，不需調(diào)配數(shù)滴，假設(shè)有紫色或紫紅色出現(xiàn)，那么闡明此需調(diào)配數(shù)滴，假設(shè)有紫色或紫紅

31、色出現(xiàn)，那么闡明此黃酮純化液中有二氫黃酮存在。黃酮純化液中有二氫黃酮存在。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 二目的物質(zhì)得率確實定：二目的物質(zhì)得率確實定： 1、規(guī)范曲線及方程和最正確吸收波長用實驗一的結(jié)果。、規(guī)范曲線及方程和最正確吸收波長用實驗一的結(jié)果。 2、從實驗二所得的預(yù)留在冰箱中的、從實驗二所得的預(yù)留在冰箱中的10ml純化液中精細汲純化液中精細汲取取1ml，留意，假設(shè)儲存液有沉降景象，那么可進展，留意，假設(shè)儲存液有沉降景象，那么可進展40 加熱，待其廓清后再進展光度測定，但假設(shè)是延續(xù)實驗，加熱，待其廓清后再進展光度測定，但假設(shè)是延續(xù)實驗，就不用在冰箱中保管而

32、是在實驗二中直接測定其就不用在冰箱中保管而是在實驗二中直接測定其A值，值，放置于放置于10 mL容量瓶中，冰箱中取出放置一定時間，使之容量瓶中，冰箱中取出放置一定時間，使之到達室溫后，按前面方法，在到達室溫后，按前面方法，在510nm波長下測得其吸光度波長下測得其吸光度值值A(chǔ)。 此步驟亦可在實驗二中直接測定。此步驟亦可在實驗二中直接測定。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定二目的物質(zhì)得率確實定：二目的物質(zhì)得率確實定：將將A樣品代入規(guī)范曲線方程樣品代入規(guī)范曲線方程Y=KA+b(Y：黃酮濃度，：黃酮濃度，gL；A：吸：吸光值，用各組本人測得的方程光值，用各組本人測得的方

33、程)，可以得到待測樣品的黃酮濃度，可以得到待測樣品的黃酮濃度，C純化純化 單位為單位為mg/ml。C純化純化=Y*10*n由于測定濃度過程中，待測液由由于測定濃度過程中，待測液由1ml定容到定容到10ml，n為實驗過程中待測液的稀釋倍數(shù)為實驗過程中待測液的稀釋倍數(shù)黃酮得率黃酮得率%=測得的黃酮含量測得的黃酮含量mg/原料總質(zhì)量原料總質(zhì)量100% = C純化純化 V純化純化mgM1000mg100% M代表代表V所對應(yīng)的原料的總質(zhì)量。將書本公式中的所對應(yīng)的原料的總質(zhì)量。將書本公式中的“V提取液提取液/200 去掉去掉 ，由于實驗二中，由于實驗二中10ml濃縮液對應(yīng)的是一切提取液。濃縮液對應(yīng)的是一

34、切提取液。實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三目的物質(zhì)的純度測定：三目的物質(zhì)的純度測定： 取實驗一中所得的提取液取實驗一中所得的提取液50ml，放置在曾經(jīng)烘干，并，放置在曾經(jīng)烘干，并曾經(jīng)稱好質(zhì)量為曾經(jīng)稱好質(zhì)量為m1的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯的小燒杯中，放在真空枯燥箱中枯燥，枯燥到恒重后，稱其分量燥，枯燥到恒重后，稱其分量m2，得色素浸膏分量為，得色素浸膏分量為m2 m1，再根據(jù)上面第二中的公式算出總，再根據(jù)上面第二中的公式算出總黃酮含量黃酮含量m總，那么其純度為：總，那么其純度為： 目的物質(zhì)的純化前純度目的物質(zhì)的純化前純度= C純化純化50 100% m2 m1實驗三、植物色素的定量與初步鑒定實驗三、植物色素的定量與初步鑒定 三目的物質(zhì)的純度測定：三目的物質(zhì)的純度測定： 取實驗二中所得的純化液取實驗二中所得的純化液50ml，放置在曾經(jīng)烘干，并曾，放置在曾經(jīng)烘干，并曾經(jīng)稱好質(zhì)量為經(jīng)稱好質(zhì)量為m3的小燒杯中，