生物工程下游技術(shù)復(fù)習(xí)題及解答

1、名詞解釋連續(xù)培養(yǎng)反應(yīng)器：不斷地往反應(yīng)器中加入營(yíng)養(yǎng)物，利用罐中的菌體增 殖得到產(chǎn)物，并不斷采出。在良好的控制下，罐內(nèi)菌體的增殖速度可 以與采出速度相同而達(dá)到穩(wěn)態(tài)。菌體比生長(zhǎng)速率（W）:單位濃度菌體在一定條件下引起的反應(yīng)速率， 其值反映了培養(yǎng)菌體增長(zhǎng)的能力，受菌株及各種物理化學(xué)環(huán)境的影 響.表示為w =dx/x.dt得率系數(shù)：兩種物質(zhì)得失之間的計(jì)量比。Yx/s,Yp/s貼壁培養(yǎng)：貼壁依賴性細(xì)胞在培養(yǎng)中要貼附于壁上才能迅速鋪展 ，開(kāi) 始有絲分裂并迅速進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，這種培養(yǎng)方式就叫貼壁培養(yǎng).多 數(shù)動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)都采取這種方式.蛋白質(zhì)的復(fù)性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所 有的氫鍵、疏

2、水鍵全部被破壞，疏水側(cè)鏈完全暴露，但一級(jí)結(jié)構(gòu)和共 價(jià)鍵不被破壞，當(dāng)除去變性劑后，一部分蛋白質(zhì)可以自動(dòng)折疊成具有 活性的正確構(gòu)型，這一折疊過(guò)程稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。濃差極化：指在分離過(guò)程中，料液中的溶劑在壓力驅(qū)動(dòng)下透過(guò)膜，溶質(zhì)被截留，于是在膜表面與臨近膜面區(qū)域濃度越來(lái)越高。在濃度梯度作用下，溶質(zhì)由膜面向本體溶液擴(kuò)散，形成邊界層，使流體阻力與局 部滲透壓增加，從而導(dǎo)致溶劑透過(guò)量下降。溶劑向膜面流動(dòng)引起溶質(zhì) 向膜面的流動(dòng)，這種流動(dòng)如果與濃度梯度所驅(qū)動(dòng)的溶質(zhì)向本體溶液擴(kuò)散的速度平衡時(shí)，在膜面附近就形成一個(gè)穩(wěn)定的濃度梯度區(qū)， 這一區(qū) 域就稱為濃度極化邊界層，這一現(xiàn)象稱為濃差極化。濃差極化是一個(gè)可逆的過(guò)程；膜污

3、染：物料中的微粒、膠體粒子或溶質(zhì)大分子由于與膜存在物理化 學(xué)相互作用或機(jī)械作用而引起的在膜表面或膜孔內(nèi)吸、沉積造成膜孔 徑變小或堵塞，使膜產(chǎn)生透過(guò)流量與分離特性的不可逆變化的現(xiàn)象。排阻色譜又稱凝膠色譜或凝膠滲透色譜，是利用被分離物質(zhì)分子量大 小的不同和在填料上滲透程度的不同， 以使組分分離。常用的填料有 分子篩、葡聚糖凝膠、微孔聚合物、微孔硅膠或玻璃珠等，可根據(jù)載 體和試樣的性質(zhì)，選用水或有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。分配色譜是利用溶液中被分離物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)不同，以使組分分離。其中一相為液體，涂布或使之鍵合在固體載體上，稱固定相； 另一相為液體或氣體，稱流動(dòng)相。常用的載體有硅膠、硅藻土、硅鎂 型吸附

4、劑與纖維素粉等。有效柱長(zhǎng)（有效遷移距離，Leff ）:（不同溶質(zhì)在其遷移速度大于零， 但小于流動(dòng)相的線性流速時(shí)，溶質(zhì)在色譜柱上的遷移對(duì)分離有貢獻(xiàn)， 溶質(zhì)遷移所經(jīng)歷的柱長(zhǎng)也對(duì)分離有貢獻(xiàn)，而當(dāng)其遷移速度等于流動(dòng)相 速度時(shí)，溶質(zhì)遷移所經(jīng)歷的柱長(zhǎng)對(duì)分離無(wú)貢獻(xiàn)。）溶質(zhì)從開(kāi)始遷移至其遷移速度等于流動(dòng)相速度時(shí)，溶質(zhì)在色譜柱上遷移的距離稱為有效 遷移距離，也稱為有效柱長(zhǎng)。吸附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過(guò)程 達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。切向流過(guò)濾（錯(cuò)流過(guò)濾、交叉流過(guò)濾、十字過(guò)濾）：就是一種維持恒 壓下高過(guò)濾速度的技術(shù)，其原理就是：使懸浮液在過(guò)濾介質(zhì)表面作切 向流動(dòng)，利用液體的

5、剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走， 當(dāng)移走固體與 固體沉積速率相同時(shí)，過(guò)濾速度就保持恒定，控制不同的切向流速度 就可以得到不同的過(guò)濾速度。（實(shí)際是維持了R c）.目前幾乎所有的膜 固液分離都采用切向流方式包含體（包涵體，inclusion bodies）:存在于基因工程細(xì)胞中，主要 由蛋白質(zhì)構(gòu)成，其中大部分是克隆表達(dá)的產(chǎn)物，這些產(chǎn)物在一級(jí)結(jié)構(gòu) 上是正確的，但在立體結(jié)構(gòu)上卻是錯(cuò)誤的，因此沒(méi)有生物學(xué)活性。難 溶于水，只有在變性劑溶液中才能溶解。蛋白質(zhì)的復(fù)性：包含體蛋白質(zhì)溶解于變性劑溶液中，呈變性狀態(tài)，所 有的氫鍵、疏水鍵全部被破壞，疏水側(cè)鏈完全暴露，但一級(jí)結(jié)構(gòu)和共 價(jià)鍵不被破壞，當(dāng)除去變性劑后，一部分

6、蛋白質(zhì)可以自動(dòng)折疊成具有 活性的正確構(gòu)型，這一折疊過(guò)程稱為蛋白質(zhì)復(fù)性。（重復(fù)）切向流過(guò)濾（錯(cuò)流過(guò)濾、交叉流過(guò)濾、十字過(guò)濾）：就是一種維持恒 壓下高過(guò)濾速度的技術(shù)，其原理就是：使懸浮液在過(guò)濾介質(zhì)表面作切 向流動(dòng)，利用液體的剪切作用將介質(zhì)表面的固體移走， 當(dāng)移走固體與 固體沉積速率相同時(shí)，過(guò)濾速度就保持恒定，控制不同的切向流速度 就可以得到不同的過(guò)濾速度。（重復(fù)）雙水相萃?。豪帽惶崛∥镌诙嘀械姆峙洳煌鴮?shí)現(xiàn)分離的目的； 由于蛋白質(zhì)在有機(jī)相中容易失活，因此采用的二相均為親水相，如 PEG葡聚糖、PEG/無(wú)機(jī)鹽等，稱為雙水相，兩相密度不同，輕相 富含一種高分子，重相可能富含另一高分子，細(xì)胞碎片和蛋

7、白質(zhì)在二 相間的分配系數(shù)不同，從而實(shí)現(xiàn)分離的目的。反滲透：在高于溶液滲透壓的壓力作用下，只有溶液中的水透過(guò)膜， 而所有溶液中的大分子、小分子有機(jī)物及無(wú)機(jī)鹽全被截留。 理想的反 滲透膜應(yīng)被認(rèn)為是無(wú)孔的，它分離的原理是溶解擴(kuò)散（或毛細(xì)孔流學(xué) 說(shuō)）。分配系數(shù)：組分在固定相和流動(dòng)相間發(fā)生的吸附、脫附，或溶解、揮 發(fā)的過(guò)程叫做分配過(guò)程。在一定溫度下，組分在兩相間分配達(dá)到平衡 時(shí)的濃度（單位：g / mL ）比，稱為分配系數(shù)，用 K表示 色譜曲線基線：無(wú)試樣通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，檢測(cè)到的信號(hào)即為基線。保留值：保留時(shí)間（tR）:組分從進(jìn)樣到柱后出現(xiàn)濃度極大值時(shí)所需的時(shí)間。 死時(shí)間（tM）:不與固定相作用的氣體（如空

8、氣）的保留時(shí)間。調(diào)整保留時(shí)間（tR。： tR/ = tR -tM容量因子k:平衡時(shí)，組分在各相中總的質(zhì)量比離子交換色譜：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)； 組分與離 子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。排阻色譜：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通 過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分 子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。（重復(fù)）親和色譜：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力， 進(jìn)行選擇性分離。親水性固定液常采用疏水性流動(dòng)相，即流動(dòng)相的極性小于固定相的極 性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。若流動(dòng)相

9、的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱 也稱為反相柱。非線性色譜：Cm與Cs不存在線性關(guān)系的色譜.吸附等溫線：指在一定溫度下物質(zhì)分子在兩相界面上進(jìn)行的吸附過(guò)程 達(dá)到平衡時(shí)它們?cè)趦上嘀袧舛戎g的關(guān)系。(重復(fù))全交換容量：每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)具有的功能基含量.是一個(gè)定值.工作容量：每克干介質(zhì)或每毫升濕介質(zhì)在一定的操作條件下的交換吸 附蛋白質(zhì)的實(shí)際容量.是一個(gè)變值.疏水性色譜：填料表面具有弱疏水性，蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)與填料表面 之間產(chǎn)生弱的疏水性相互作用.高濃度的鹽條件下，蛋白質(zhì)與疏水固 定相的吸附能力高，隨著鹽濃度的下降，吸附能力下降.當(dāng)淋洗液離子 強(qiáng)度逐漸降低時(shí)，蛋白質(zhì)樣品按其疏

10、水性的不同依次被洗脫.采用徑向流技術(shù)的色譜，即樣品和流動(dòng)相沿徑向流動(dòng)，可以從色譜柱 的周圍流向圓心，也可以從圓心流向柱的周圍.通常采用從柱的周圍 流向圓心的方式.泳動(dòng)度(遷移率)：帶電質(zhì)點(diǎn)在單位強(qiáng)度電場(chǎng)下的泳動(dòng)速度即:U=V/E=(d/t)/(V/L)變性膠：膠電脈在蛋白質(zhì)變性的狀態(tài)下進(jìn)行， 主要指SD酸性條件下 進(jìn)生非變性膠：電泳在蛋白質(zhì)保持天然狀態(tài)下進(jìn)行，不加變性劑高壓均漿法：高壓泵將電機(jī)的旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)變成勻漿閥柱桿的直線運(yùn)動(dòng)，從高壓室（幾十兆帕）壓出細(xì)胞懸浮液，經(jīng)過(guò)碰撞環(huán)的撞擊后改 變方向從出口管噴出，使細(xì)胞經(jīng)歷較高的流速下的剪切碰撞發(fā)生較大 的變形，從而達(dá)到破碎細(xì)胞的目的。二、填空題超聲

11、波破碎細(xì)胞的效率與聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度及細(xì)胞類 型等因素有關(guān)。目前用于固液分離的膜過(guò)濾法主要有以下三種：微孔過(guò)濾（微濾）、超 濾、反滲透。在生物工程下游技術(shù)領(lǐng)域， 色譜 和 電泳 是目前所知最好的兩種分 離蛋白的方法。在生物物質(zhì)分離中，可以依據(jù)一次進(jìn)樣量多少，將色譜分為：分析色譜、半制備色譜（中等規(guī)模制備色譜）、制備色譜和工業(yè)生產(chǎn)規(guī) 模色譜4大類。無(wú)論是什么類型的液相或氣相色譜，其色譜裝置均應(yīng)包括：流動(dòng)相供 給、進(jìn)樣、 色譜柱、檢測(cè)器 等四大部分。在色譜過(guò)程中，有兩種將目標(biāo)產(chǎn)品從色譜柱上洗脫下來(lái)的方法：一種是維持流動(dòng)相熱力學(xué)參數(shù)不變的 等梯度洗脫法，另一種叫 梯度洗 脫法。 徑向色譜

12、填料主要有：離子交換樹(shù)脂 和 親和色譜填料 兩種。評(píng)價(jià)HPLCfe譜填料性能的主要表征指標(biāo)包括：保留值，選擇性，柱效率，填充柱的總空隙度和穿透性，分離度。請(qǐng)列舉任意四種破碎細(xì)胞的方法：高壓勻漿法，高速珠磨法，超聲破碎，酶溶法。在HPLO域內(nèi)經(jīng)?？梢杂龅降奈降葴鼐€可以有以下5種（形狀）：凸形、凹形、S形、H形、階梯形羥基磷灰石在原理上一般被認(rèn)為是一種無(wú)機(jī)基質(zhì)高效色譜。請(qǐng)列舉二種測(cè)量蛋白質(zhì)含量的方法：雙縮月尿法，考馬斯藍(lán)法。常見(jiàn)的無(wú)機(jī)色譜填料主要包括：多孔硅膠、可控孔徑玻璃、氧化鋁、氧化鈦、羥基磷灰石以及碳和石墨等基質(zhì)。無(wú)機(jī)HPLCW料最常見(jiàn)的是以多孔大硅膠為基本材料的填料；含硼的 Na2O-B

13、2O3-SiO2系玻璃經(jīng)過(guò)熱處理引起相分離，生成可溶于酸的 相及不溶于酸的高硅相。將酸可溶相浸析出來(lái)后剩下的另一相就制成了可控孔徑玻璃，可控孔徑玻璃的主要化學(xué)成份就是 SiO2。（每空1 分）不同分子量的蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移速度與其所帶的凈電荷數(shù)成正 比，與它本身的半徑及溶液的黏度成反比。溶質(zhì)保留置換理論的核心是：O18 .指出三種交聯(lián)葡聚糖的微載體：Cytodexl微載體；Cytodex 2 微載體；Cytodex 3微載體19 .指出蛋白質(zhì)復(fù)性的三種方法：稀釋法，透析法，液色色譜法等20 .固液分離的主要方式包括：離心法，微孔膜過(guò)濾法，雙水相萃取， 泡沫分離法。21 .膜的孔徑一般為微米級(jí)

14、，依據(jù)其孔徑的不同（或稱為截留分子量），可將膜分為微濾膜、超濾膜、納濾膜和反滲透膜22色譜的保留值可以用保留時(shí)間也可以用保留體積來(lái)表示。23 .色譜的峰寬可以用半峰寬、峰底寬、標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。24 .指出下列情況下色譜系統(tǒng)對(duì)容質(zhì)的柱效和分配系統(tǒng)差的關(guān)系：4K不是很大，柱效較高，峰較窄，基本上完全分離； 柱效較低，AK較大，但分離的不好；AK小，柱效低，分離效果更差。25 .線性色譜的吸附等溫線是直線， 非線性色譜的吸附等溫線的形狀 常見(jiàn)的有：凸形、凹形、S形、H形、階梯形。從吸附等溫線的形狀 可以預(yù)見(jiàn)色譜曲線的形狀，一般凸形的吸附等溫線代表色譜圖是拖尾 的，凹形吸附等溫線代表的色譜圖是吐舌頭形狀

15、、S形的色譜圖是波浪形的。26 . Shepadex G25是一種凝膠排阻色譜，主要用于脫鹽。27 .Shephadex G100是一種凝膠排阻色譜，主要用于蛋白質(zhì)的純化。28 . DEAE-Shaphdex A2鹿一種離子交換層析介質(zhì)。29 . CM纖維素是一種弱陽(yáng)離子交換介質(zhì)。30 .離子交換層析一般是通過(guò)梯度一般采用兩種方法達(dá)到分離蛋白質(zhì) 的目的。一種是增加洗脫液的離子強(qiáng)度，一種是改變洗脫液的pH值。31 . QAE葡聚糖是強(qiáng)堿陰離子交換劑，S一是強(qiáng)酸陽(yáng)離子交換劑。32 .目前徑向色譜柱使用的填料主要有離子交換樹(shù)脂和親和色譜兩種；33 .蛋白質(zhì)含量和純度測(cè)定方法。含量測(cè)定：克氏定氮法，T

16、CA比濁 度法、雙縮月尿法、福林-酚法和紫外線法，考馬斯蘭法（Bradford法）。 純度衡量：電泳法，層析法，質(zhì)譜法等。一般應(yīng)采用二種以上方法， 而且同一原理的方法不應(yīng)該采用二次。34 .細(xì)胞破碎法包括：機(jī)械力和非機(jī)械力破碎方法；機(jī)械方式又包括： 液體剪切力和固體剪切力方法，液體剪切力包括：高壓勻漿法和超聲 破碎法；固體剪切力包括：高速珠磨法和壓榨法。35 .高壓勻漿法的主要困難包括：溫控和堵塞問(wèn)題26.高壓勻漿法的破碎率決定于：勻漿閥的結(jié)構(gòu)，操作壓力，破碎次 數(shù)。34.蛋白質(zhì)的分子量測(cè)定：超離心法、光散射方法、凝膠過(guò)濾法、 SDS-PAG電泳法。三、是非題（請(qǐng)將答案填在下表中相應(yīng)的題號(hào)下面

17、，對(duì)的打 錯(cuò)的打“X”，每題1分，共10分）題號(hào)12345678910答案微波加熱法破碎細(xì)胞特別適合于對(duì)熱不穩(wěn)定的的產(chǎn)物的提取。X凝膠過(guò)濾操作中，通常上樣量越小，分辨率越高。X利用液相色譜方法對(duì)包含體蛋白質(zhì)進(jìn)行復(fù)性比稀釋復(fù)性法優(yōu)越 .V一旦液料開(kāi)始與膜接觸，膜污染就開(kāi)始發(fā)生。V濃差極化是一個(gè)可逆的過(guò)程。V膜污染是一個(gè)可逆的過(guò)程。x層析系統(tǒng)中，有效柱長(zhǎng) 最短柱長(zhǎng)是使最難分離的一對(duì)溶質(zhì)將達(dá)到完全的基線分離的必要條件.V層析系統(tǒng)中，當(dāng)實(shí)際柱長(zhǎng) 最短柱長(zhǎng)，則該分離過(guò)程不能達(dá)到物質(zhì)的有效分離.V層析過(guò)程中，有效柱長(zhǎng)是隨層析條件的變化而變化的.V層析過(guò)程中，可以通過(guò)改變洗脫劑的濃度變化梯度改變有效柱長(zhǎng)和最

18、短柱長(zhǎng).V分析色譜是線性色譜；V制備型色譜是非線性色譜。V只要樣品進(jìn)樣量足夠大，色譜過(guò)程就是一種非線性色譜。V非線性色譜的保留值是可變的，峰形是不對(duì)稱的，峰高與樣品量不成正比關(guān)系。V生化用離子交換樹(shù)脂的電荷密度越大，其分離效果越好。XHPLC填料的顆粒粒度的分布應(yīng)該是越小越好的，最好是能實(shí)現(xiàn)顆粒的單分散。V樣品中蛋白質(zhì)的純度為99%說(shuō)明該樣品中目標(biāo)蛋白質(zhì)的含量為樣品總量的99% X實(shí)驗(yàn)室可以使用SDS-PAG電泳測(cè)量蛋白質(zhì)的分子量。V所有的蛋白質(zhì)電泳都是利用不同蛋白質(zhì)帶的電荷的差異而達(dá)到分離不同蛋白質(zhì)目的的。X硅膠在pH114的范圍內(nèi)都很穩(wěn)定，因此適合于在極端pH條件下的離 子交換色譜。葡聚糖

19、凝膠排阻色譜中，上樣量越大，分辨率越高。x同一蛋白質(zhì)在不同種類的緩沖液中，只要緩沖液的pH值相同，則蛋白質(zhì)所帶的電荷數(shù)量也相同。x凝膠排阻色譜的層析柱越長(zhǎng)越好。x細(xì)胞破碎過(guò)程應(yīng)盡量徹底，使細(xì)胞碎片盡可能越小越好。xHPLCK料的顆粒分散范圍越窄越好。V利用聚賴氨酸/海藻酸系統(tǒng)進(jìn)行的細(xì)胞微囊化培養(yǎng)，所形成的微囊外膜的孔徑的大小主要是由聚賴氨酸的分子量所決定的。V非線性色譜的樣品的保留值是可變的。V非線性色譜的層析峰形一般來(lái)說(shuō)是高斯正態(tài)分布的對(duì)稱峰。X為了減小樣品在洗脫過(guò)程的軸向擴(kuò)散，可采取增大進(jìn)樣濃度減少進(jìn)樣量的方式。V動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)一定要采用貼壁培養(yǎng)的方式。x作為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)良微載體應(yīng)該是剛

20、性的。x動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)微或體的密度應(yīng)略大于培養(yǎng)基。X高速珠磨法比高壓勻漿法破碎細(xì)胞的效果好。X一般講，親水性膜及膜材料電荷與溶質(zhì)相同的膜較耐污染。V色譜過(guò)程中試樣中的各組分具有不同的 K值是分離的基礎(chǔ)。V色譜過(guò)程一定溫度下，組分的分配系數(shù) K越大，出峰越慢。V單位柱長(zhǎng)的塔板數(shù)越多，表明柱效越高。V用不同物質(zhì)計(jì)算可得到不同的理論塔板數(shù)。V色譜柱效高說(shuō)明該色譜對(duì)物質(zhì)的分離度高。分離度是由色譜柱的柱效所決定的。x分離度是由色譜柱的分配系數(shù)所決定的。x分離度是由色譜的容量因子所決定的。x分離度由色譜柱的柱效率和物質(zhì)間的分配系數(shù)的差異共同決定。V分析色譜是線性色譜；制備色譜屬于非線性色譜。V在凝膠排阻層析

21、中，流動(dòng)相的速度越慢越有利于色譜分離和分析。V無(wú)機(jī)高效液相色譜填料主要是以多孔硅膠為基本材料，還有可控孔徑玻璃，氧化鋁，氧化錯(cuò),羥基磷灰石，碳和石墨等。V兩性的生物大分子所帶電荷的性質(zhì)和數(shù)量由其等電點(diǎn)及溶液環(huán)境(pH值）所決定。V聚丙烯酰胺濃縮膠的原理包括其 pH值=6.9為甘氨酸的等電點(diǎn)。SDS-PAG電泳的遷移率主要由分子量決定，分子量小的移動(dòng)快。VSDS-PAG呼SDS的作用是消除蛋白質(zhì)間的電荷差異，也消除了分子間形狀的差異。V樣品溶解不好容易造成拖尾。VMonocK數(shù)隨菌體的濃度的變化而變化。XMonocS數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的一個(gè)對(duì)菌體性質(zhì)的特征性常數(shù)。X色譜柱效可從峰寬得到，色譜峰越

22、寬，柱效越低，峰寬相同，柱效相同。x決定柱效的因素是分配系數(shù)。X決定柱效的因素是容量因子。X理論塔板數(shù)越多，柱效越高?？梢哉f(shuō)“ A柱子的柱效高于B柱子。乂分配系數(shù)與柱效沒(méi)有關(guān)系。x容量因子與柱效有關(guān)系。V柱效不能表示被分離組分的實(shí)際分離效果。V用有效塔板數(shù)和有效塔板高度作為衡量柱效能的指標(biāo)時(shí)，應(yīng)指明測(cè)定物質(zhì)。V問(wèn)題補(bǔ)充：生物反應(yīng)器就是細(xì)胞生長(zhǎng)的場(chǎng)所。x發(fā)酵反應(yīng)器設(shè)計(jì)要求有盡量高的傳氧系數(shù)。V生物放大器的常用控制方法是反饋調(diào)節(jié)。V在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中，血清不僅有生長(zhǎng)促進(jìn)作用，而且有生長(zhǎng)抑制的活力。V動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就操作而言，深層培養(yǎng)可分為批式、流加式，半連續(xù)式、連續(xù)式和灌注式5種。V細(xì)胞生長(zhǎng)的最優(yōu)化條

23、件并不一定是表達(dá)的產(chǎn)物的最優(yōu)化條件。V分批式操作能使細(xì)胞自始至終處于最優(yōu)條件下。X放大的目的是在更大的規(guī)模重現(xiàn)某個(gè)過(guò)程并實(shí)現(xiàn)預(yù)期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。V貼壁信賴動(dòng)物細(xì)胞在微載體表面上增殖，可分為貼壁、生長(zhǎng)和擴(kuò)展成單層3個(gè)階段。V明膠涂覆的多孔微載體適應(yīng)于一切的細(xì)胞系。V微載體應(yīng)能耐高溫并且是剛性的。X微囊化的傳質(zhì)效率不受到影響。X微囊化細(xì)胞的培養(yǎng)只適應(yīng)于貼壁依賴性的細(xì)胞系。x微囊化細(xì)胞的培養(yǎng)中，微囊的大小對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)物的分泌有直接影響。V目前動(dòng)物細(xì)胞微囊化方法最常用的是聚賴氨酸 /海藻酸法。V產(chǎn)物提純過(guò)程包括初級(jí)分離階段和純化精制階段兩個(gè)階段。V細(xì)胞破碎時(shí)破碎率越高越好。乂目前幾乎所有的膜固液分離都

24、采用切向流方式。V雙水相萃取一般考慮使需要的蛋白質(zhì)盡量集中在下相。x高壓勻漿法中的破碎效率與勻漿閥結(jié)構(gòu)、操作壓力和破碎次數(shù)有關(guān)。V膜分離技術(shù)中膜結(jié)構(gòu)選擇通常原則是選擇不對(duì)稱結(jié)構(gòu)膜較耐污染。V理想的反滲透膜應(yīng)被認(rèn)為是無(wú)孔的， 它分離的原理是溶解擴(kuò)散(或毛細(xì)孔流學(xué)說(shuō))。V溶液pH對(duì)蛋白質(zhì)在水中溶解性，荷電性及構(gòu)型有很大影響。V膜分離技術(shù)中清洗過(guò)程中主要考慮膜的化學(xué)特性和污染物的特性二個(gè)因素。膜污染與濃差極化沒(méi)有區(qū)別與聯(lián)系。x氣液色譜的固定液在常溫下不一定為液體， 但在使用溫度下一定呈液體狀態(tài)。V氣相色譜流出曲線的保留值可用時(shí)間或體積表示。V用來(lái)衡量色譜峰寬度的參數(shù)有標(biāo)準(zhǔn)偏差(。)、半峰寬(Y1/2

25、)和峰底寬(Wb)三種表示法。V氣相色譜中容量因子越大，保留時(shí)間越長(zhǎng)。V離子交換色譜對(duì)于大分子和小分子的保留機(jī)理基本相同。V示差折光檢測(cè)器是除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器，此檢測(cè)器靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫。V液-固吸附色譜中非線形等溫吸附常引起峰的拖尾。V分配系數(shù)差別大的二個(gè)溶質(zhì)比差別小的二個(gè)溶質(zhì)容易被分開(kāi)。V非線性色譜基本理論包括吸附平衡熱力學(xué)、吸附平衡動(dòng)力學(xué)和色譜基本特料平衡方程。V非線性色譜的柱效與柱長(zhǎng)成比例增長(zhǎng)。X在非線性色譜中，峰高增加的速率隨濃度的增加而逐漸降低，因而峰高不能作為定量分析的指標(biāo)。X超載洗脫、前沿分析和置換展開(kāi)是非線性色譜中常用的3種操作方式。V非線性

26、色譜中只用細(xì)的顆粒。x凝膠過(guò)濾中進(jìn)樣體積和樣品的濃度將明顯地影響蛋白質(zhì)的。V膨化的凝膠可以直接高溫烘干。x凝膠層析的分離原理是分子篩作用。V一般來(lái)說(shuō)只要能溶解被洗脫物質(zhì)并不使其變性的緩沖液都可以用于凝膠層析。V離子交換用的層析柱一般粗而短，不宜過(guò)長(zhǎng)。VHPLC分離柱是色譜的中心，是最為關(guān)鍵的部分。VSuperdax是葡聚糖與交聯(lián)瓊脂糖的結(jié)合，而Superose是珠狀瓊脂糖經(jīng)兩次交聯(lián)。V反相色譜以硅膠基質(zhì)的鍵合相填料為主， 特別是鍵合C18, C8烷基以及苯基填料。V不同填料的化學(xué)結(jié)構(gòu)是通過(guò)對(duì)基質(zhì)材料的化學(xué)改性而實(shí)現(xiàn)的。V疏水性相互作用色譜是為了適應(yīng)活性生物大分子特別是蛋白質(zhì)的分離而發(fā)展起來(lái)的種

27、液相色譜方法。V通過(guò)氯硅烷可以將各種烷基鏈引入硅膠表面。V作為分離材料的硅膠，具顆粒的形狀與大小、孔的結(jié)構(gòu)、孔徑及其分布、總孔容、比表面積及機(jī)械強(qiáng)度等，均為重要的物理參數(shù)。V硅膠的化學(xué)修飾大致可以三種不同的方式進(jìn)行，即整體修飾、通過(guò)表面硅羥基的化學(xué)修飾以及涂層法。V物理吸附水的去除是硅膠衍生反應(yīng)中不可或缺的一步。V硅膠一般有而t受高壓力，耐壓能力隨孔徑及孔度而下降。V羥基磷灰石與生物組織有特異性的親和力和相容性。V羥基磷灰石是一種弱陽(yáng)離子或弱陰離子交換層析材料。V制備羥基磷灰石的方法通過(guò)有干法、水熱法和濕法三種。V羥基磷灰石作為色譜樣填充介質(zhì)能提供專一的選擇性、高的鍵合容量、低的非可逆性吸附以

28、及化學(xué)穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性好， 完全滿足HPLC樣的要求。V羥基磷灰石能精確地分離，純化結(jié)構(gòu)上只有微小差別的生物大分子。V泳動(dòng)度（遷移率）只取決于帶電質(zhì)點(diǎn)的性質(zhì)。X聚丙烯酰胺凝膠電泳具有電泳和分子篩雙重作用。V濃度和交聯(lián)劑濃度決定膠的物理狀態(tài)及分子篩的孔徑的大小。V電泳中緩沖液的種類，濃度和其他電解質(zhì)濃度影響蛋白質(zhì)所帶電荷的極性和數(shù)量，同時(shí)還影響蛋白質(zhì)分子間的相互作用。V電泳技術(shù)主要是用于蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)的分析和分離。V采用徑向流技術(shù)，可以在較小的柱床層高度時(shí)使用較大的流動(dòng)相速度。V徑向色譜在較高流動(dòng)相速度時(shí)，反壓降低。V徑向色譜可以線性地增加樣品處理量，樣品可以在完全相同的色譜條件下直接放大。

29、V 目前徑向色譜柱使用的填料主要有離子交換樹(shù)脂和親和色譜兩種。 V 選擇具高選擇的填料可以克服徑向色譜直徑短的缺點(diǎn) ，發(fā)揮徑向色譜 柱速度快，處理量大的優(yōu)點(diǎn)。V純度衡量有電泳法 層析法及質(zhì)譜法等。一般應(yīng)采用二種以上方法，而且同一原理的方法可以采用二次。X蛋白質(zhì)純度是一個(gè)相對(duì)指標(biāo)，可用百分比表示。一般指是否含有雜蛋白，而不包括是否含有鹽、離子等小分子的物質(zhì)。V蛋白質(zhì)含量可用克氏定氮法，TCAt匕濁度法以及電泳法等方法 。X 四.單選題（請(qǐng)將正確答案的字母填在下表中相應(yīng)的題號(hào)下面，每題 1分，共10分）題號(hào)12345678910答案1 .高效液相色譜設(shè)備最核心的部分是：（A）高壓輸液系統(tǒng)；（B）高

30、靈敏的檢測(cè)系統(tǒng)；（C）高效的層析柱。2 .分析型色譜一般是：（A）線性色譜；（B）非線性色譜；（C）離子交換色譜3 . DEAE-Sephadex A2鹿一種：（A）離子交換色譜填料；（B）凝膠排阻色譜填料；（C）親和色譜填料4 .顆粒表面主要含C1& C8基團(tuán)的色譜填料適合作為：(A)離子交換色譜填料；(B)正相色譜填料；(C)反相色譜填料5 .下面關(guān)于高速珠磨法和高壓勻漿法破碎細(xì)胞的提法哪種是正確的？(A)高速珠磨法比高壓勻漿法更優(yōu)越；(B)高速珠磨法和高壓勻漿法各有優(yōu)點(diǎn)；(C)高壓勻漿法比高速珠磨法效率更高；6 .多孔硅膠分子中最常見(jiàn)的硅羥基是：(A)單硅羥基；(B)二硅羥基；(

31、C)三硅羥基；7 .羥基磷灰石是一種：(A)有機(jī)色譜填料；(B)無(wú)機(jī)色譜填料；(C)親和色譜填料8 .符合下面什么條件時(shí)的層析方案是不可行的：(A)最短柱長(zhǎng) 有效柱長(zhǎng)；(B)實(shí)際柱長(zhǎng)最短柱長(zhǎng)；(C)最短柱長(zhǎng) 有效柱長(zhǎng)9,利用生物物質(zhì)生物功能的差異進(jìn)行分離的是：(A)親和層析；(B)離子交換層析；(C)羥基磷灰石層析10 .下面關(guān)于蛋白質(zhì)純度的提法哪個(gè)是正確的：(A)蛋白質(zhì)純度是指目標(biāo)蛋白質(zhì)占樣品總量的百分比；(B)蛋白質(zhì)純度是指目標(biāo)蛋白質(zhì)占樣品中總蛋白的質(zhì)量百分比；(C)蛋白質(zhì)純度可以通過(guò)考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定；11 .關(guān)于細(xì)胞破碎方法，以下提法哪種是正確的：(A)細(xì)胞破碎是以破碎率為基準(zhǔn)的；(B)高壓勻漿法比高速珠磨法更加優(yōu)越；(C)高速珠磨法比高壓勻漿法更加優(yōu)越；(D)高速珠磨法和高壓勻漿法各有特點(diǎn)；12 .在理想態(tài)下，下列哪種色譜對(duì)二種物質(zhì)的分離度可以隨柱長(zhǎng)的延長(zhǎng)而無(wú)限增加：(A)凝膠排阻色譜；(B)離子交換色譜；(C)親和色譜；(D)分配色譜；13 .下列哪種色譜填料最適合做為徑相色譜的填料：(A)凝膠排阻色譜；(B)離子交換色譜；(C)疏水色譜；(D)分配色譜；14 . Sephadex G50是一種：(A)凝膠排阻色譜填料；(B)親和色譜填料；