前列腺上皮內(nèi)瘤中微血管密度、DNA倍體、免疫表型與其生物學特

1、前列腺上皮內(nèi)瘤中微血管密度、DNA倍體、免疫表型與其生物學特性的關(guān)系         11-01-07 11:04:00     編輯：studa20           作者：侯惠蓮，張學斌，李旭，張冠軍，王鴻雁，鄧元，王敏 【摘要】  目的 探討微血管密度(MVD)、DNA倍體、免疫表型與前列腺上皮內(nèi)瘤(PIN)及其生物學特性的關(guān)系。方法 應(yīng)用

2、免疫組織化學SP法和計算機圖像分析技術(shù)，對24例前列腺增生癥(BPH)、23例低級別上皮內(nèi)瘤(LGPIN)、26例前列腺癌(PC)伴發(fā)高級別上皮內(nèi)瘤(HGPIN)的石蠟包埋標本進行CD34、34E12、P63、P504s表達的檢測，定量測定其MVD和細胞核DNA倍體。結(jié)果 不同級別的PIN中MVD和DNA平均倍體均明顯高于BPH組，但明顯低于PC組(P<0.01)，且隨PIN級別的增高，DNA倍體的異多倍體數(shù)及MVD值隨之升高(P<0.01)。DNA倍體與MVD呈正相關(guān)關(guān)系。34El2和P63在BPH和LGPIN腺體周圍的基底細胞呈連續(xù)陽性，在HGPIN中呈斷續(xù)陽性，在PC中呈陰性

3、。P504s在HGPIN中呈灶狀陽性，在PC中呈強陽性，在BPH和LGPIN中呈陰性。結(jié)論 DNA倍體、MVD與PIN密切相關(guān)，是反映其生物學特性的重要參考指標；免疫表型進一步證實PIN特別是HGPIN是PC的癌前病變。 【關(guān)鍵詞】  前列腺上皮內(nèi)瘤；前列腺癌；微血管密度；DNA倍體；免疫組織化學ABSTRACT: Objective  To study microvascular density (MVD), DNA ploidy and immunophenotype in prostatic intraepithelial neoplasia (PIN) as wel

4、l as their relationship with its biological properties. Methods  We studied paraffinembedded specimens from 24 cases of benign prostatic hyperplasia (BPH), 23 cases of lowgrade prostatic intraepithelial neoplasia (LGPIN), and 26 cases of prostatic carcinoma (PC) with highgrade prostatic intraep

5、ithelial neoplasia (HGPIN). Image analysis was used to measure the DNA average ploidy and MVD, and after that the expressions of 34El2, P63, P504s and CD34 were detected by immunohistochemistry SP. Results  DNA ploidy and MVD in PIN were higher than those in BPH, but lower than in PC, and corre

6、lation was detected among different grades of PIN. MVD had a positive correlation with DNA aneuploidy in different grades of PIN (P<0.01), and there was a significant positive correlation between expression of DNA ploidy and MVD. Acini of PC were completely negative for both basal cell markers (3

7、4E12 and p63), but were positively different in the BPH and among different grades of PIN, which were in contrast to the results for the acini cells of revealed varying degrees of expression of P504s in the PC and HGPIN, and acini of BPH and LGPIN were negative. Conclusion  MVD and DNA ploidy w

8、ere correlated to the biological properties of PIN, and thus were important parameters. HGPIN is a precancerous change of prostatic carcinoma by expression of MVD and DNA ploidy and these immunophenotypes.KEY WORDS: prostatic intraepithelial neoplsia (PIN); prostatic carcinoma (PC); microvascular de

9、nsity (MVD); DNA ploidy; immunohistochemistry前列腺上皮內(nèi)瘤(prostatic intraepithelial neoplasia, PIN)是一種較常見的病理現(xiàn)象，具有發(fā)展為浸潤癌的潛能。85%的前列腺癌(prostatic carcinoma, PC)中可以找到PIN的存在。作為前列腺癌的癌前病變，PIN已成為近年來研究的熱點，但目前尚缺乏反映其生物學特性的指標。研究認為，腫瘤微血管密度(microvascular density, MVD)是反映惡性腫瘤生物學行為的重要參數(shù)1，細胞核DNA倍體是反映腫瘤細胞增殖能力的重要生物學定量指標2，前列

10、腺基底細胞特異性標記物P63、34E12與前列腺癌特異性標記抗體P504s聯(lián)合應(yīng)用是鑒別前列腺腫瘤良惡性的最佳指標3。本研究應(yīng)用免疫組織化學SP法和計算機圖像分析技術(shù)，對24例前列腺增生癥(benign prostatic hyperplasia, BPH)、23例低級別上皮內(nèi)瘤(lowgrade prostatic intraepithelial neoplasia, LGPIN)、26例PC伴高級別上皮內(nèi)瘤(highgrade prostatic intraepithelial neoplasia, HGPIN)的石蠟包埋標本進行CD34、P63、34E12和P504s表達的檢測，并定量測

11、定其中MVD和細胞核DNA倍體，探討其與PIN發(fā)生、發(fā)展及癌變的關(guān)系。1  材料與方法1.1  研究對象收集我院1995年2月2005年1月間臨床病理資料完整的經(jīng)尿道前列腺切除或電切標本73例。其中PC伴發(fā)HGPIN 26例，在同一例該標本中，選取癌組織作為PC組，癌旁組織作為HGPIN組，患者年齡4893歲，平均(68.73±8.99)歲；同期收檢BPH伴發(fā)LGPIN(LGPIN組)23例，年齡6081歲，平均(68.35±6.53)歲；BPH 24例，作為對照組，年齡6085歲，平均(70.67±6.51)歲。1.2  主要試劑及

12、儀器CMIAS真彩色病理圖像分析系統(tǒng)購自北航圖像中心與空軍總醫(yī)院醫(yī)學圖像研發(fā)中心。免疫組織化學所用一抗(鼠抗人單克隆抗體CD34和兔抗人單克隆抗體34E12、P63、P504s)及其試劑盒購自Dako公司；Fulgen染色所用的Schiff試劑購自上海化學試劑廠。1.3  方法 組織均經(jīng)100mL/L甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，5m厚連續(xù)切片，HE染色復(fù)查。1.3.1  CD34、34E12、P63和P504s表達的檢測 采用免疫組織化學SP法。步驟如下：標本切片脫蠟、水洗，抗原修復(fù)，滴加羊血清封閉，滴加一抗，PBS洗片；滴加二抗(室溫孵育)，DAB顯色

13、，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封片。工作液濃度分別為180、170、170、130。TBS代替一抗作空白對照，用標本中間質(zhì)大血管和已知前列腺癌及其正常組織作陽性對照。1.3.2  MVD和細胞核DNA倍體的檢測 以CD34陽性標記的單個細胞和內(nèi)皮細胞簇作為一個血管標記(圖1A)，先在低倍鏡(×100)下觀察，再在高倍鏡(×200)下選擇微血管數(shù)量最多的5個視野，計數(shù)MVD，求其平均值作為測定標本的MVD值。采用Fulgen法染組織的細胞核后，在CMIAS真彩色病理圖像分析系統(tǒng)下進行DNA倍體測定。每例測定間質(zhì)淋巴細胞(參照細胞)50個，前列腺上皮細胞(分析細胞)50個，校正因子1.1。1.3.3  DNA倍體的判定標準 2C及近2C：1.82.5C