微生物學(xué)實驗指導(dǎo)-湖南農(nóng)大

1、微生物學(xué)實驗指導(dǎo)生物秀專心做生物!易生物-領(lǐng)先的生物醫(yī)藥商務(wù)平臺生物秀論壇-學(xué)術(shù)交流,資源共享,互助社區(qū)湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)實驗教學(xué)中心2006年8月目錄實驗一細菌染色技術(shù) (2實驗二細菌的芽孢染色和鞭毛染色 (6實驗三植物病源真菌的形態(tài)觀察 (7實驗四植物病原細菌及其所致病害癥狀觀察 (13實驗五接合菌門真菌基本形態(tài)及所致病害觀察 (17實驗六擔子菌門真菌的基本形態(tài)及所致病害的觀察 (22實驗七有絲分裂孢子真菌的基本形態(tài)及所致病害的觀察 (27實驗八病原物的分離培養(yǎng)與接種 (28實驗九植物的抗病性和病原菌的生理分化 (29實驗一細菌染色技術(shù)細菌個體微小,普通光學(xué)顯微鏡下不易直接觀察,故常用染

2、色技術(shù)使細菌細胞著色。包括細菌單染技術(shù)、細菌的革蘭氏染色技術(shù)、細菌的芽孢染色技術(shù)、細菌的莢膜染色技術(shù)和細菌的鞭毛染色技術(shù)、細菌的單染技術(shù)簡單染色通常只用一種染色劑,使細菌整個細胞染上顏色。但看不清結(jié)構(gòu)。所以只便于檢查細菌的形態(tài)、大小和排列方式等?！緦嶒?zāi)康摹?、掌握單染色的操作技術(shù)2、觀察細菌的基本形態(tài)【實驗原理】單染色即用單純的種染料進行染色,多數(shù)采用美藍、結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅等堿性染料。此法僅能顯示細胞的外部形態(tài),而不能辨別其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。染色前必須將細胞固定,其目的是殺死細菌,并使它粘附在載玻片上。此外,還可以增加菌體對染料的親和力。常用的有加熱和化學(xué)固定兩種方法。無論用哪種方法都應(yīng)盡量使細菌

3、維持原有的形態(tài),防止細胞膨脹或收縮。【實驗材料、藥品及器具】1、菌種大腸桿菌(Escherichia col i枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis2、染色液石炭酸品紅染色或結(jié)晶紫染色液(Stining Solutions3、無菌水4、洗瓶裝蒸餾水5、洗凈的載玻片(Slicle5片6、顯微鏡、香柏油、接種環(huán)、酒精燈、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯【實驗步驟】1、涂片:取一片干凈無油載玻片,在其中央滴一滴無菌水,然后用接種環(huán)以無菌操作方法取少許培養(yǎng)好的大腸桿菌,放在載玻片的水滴中涂勻,注意菌量不宜過多,否則,不易看清單個菌體。2、固定:將涂好的玻片在空氣中風干或火焰上通過34次,使水份蒸發(fā),

4、此時細菌菌體緊貼在玻片上。3、染色:用石炭酸品紅或結(jié)晶紫染色劑3060S,然后用洗瓶輕輕沖洗染色劑(注意不要直接沖洗染色部位,直至無多余的染液,晾干或用吸水紙從旁吸干或用微火烘干。4、用同樣方法將枯草芽孢桿菌制作一張涂片。5、鏡檢:首先在低倍鏡下找到物像,然后在涂膜中央滴一滴香柏油,換成油浸鏡觀察兩個菌種的形態(tài)和排列。6、去除油鏡上的香柏油:先用干凈的擦鏡紙擦2-3次,再換另一張擦鏡紙蘸取少許二甲苯以除去殘留的香柏油,最后用擦鏡紙擦干。擦鏡頭時應(yīng)順著鏡頭直徑方向擦,不要沿著圓周方向擦?！緦嶒灲Y(jié)果】1、繪制觀察到大腸桿菌和枯草芽孢桿菌的形態(tài)圖,并注明放大倍數(shù)。2、用文字描述兩菌株的細胞形態(tài)?！舅?/p>

5、考題】1、涂片在染色前為什么要先進行固定?固定時應(yīng)注意什么問題?2、制片為什么要完全干燥后才能用油鏡觀察?3、制片時應(yīng)注意哪些事項?為什么?、細菌的革蘭氏染色革蘭氏染色是細菌鑒定上一個最重要和廣泛應(yīng)用的方法。根據(jù)此法染色結(jié)果可將細菌分成兩大類。一類細菌能夠保留初染色劑(結(jié)晶等于細胞中,不受脫色劑(酒精的影響,而最后細菌被染成紫色或深藍色者稱為革蘭氏陽性(Gram-positive;另一類細菌可因脫色劑的作用而洗出結(jié)晶紫,然后被另一染色劑(藏紅花染成紅色,稱為革蘭氏陰性(Gram-negative。也有一些菌種革蘭氏染色是可變的?！緦嶒?zāi)康摹苛私飧锾m氏染色的原理,并掌握革蘭氏染色法的操作技術(shù)。【

6、實驗原理】革蘭氏染色法是細菌學(xué)中廣泛使用的一種重要的鑒別染色法。1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立。細菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色,再經(jīng)碘液媒染(以增加染料與細胞的親和力后,用酒精或丙酮脫色,再用復(fù)染色劑染色。不被脫色而保持原顏色者為革蘭紙陽性菌(G+;被脫色后又被染上復(fù)染劑的顏色者為革蘭氏陽性菌(G-。此法可將細菌分為兩大類。革蘭氏染色的機理主要是利用兩類細菌的細胞壁成分和結(jié)構(gòu)不同。革蘭氏陰性菌的細胞壁中含有較多的類脂質(zhì),而肽聚糖的含量較少。當用乙醇或丙酮脫色時,類脂質(zhì)被溶解,增加了細胞壁的通透性,使初染后的結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出,結(jié)果細胞被脫色,經(jīng)復(fù)染后,又染上復(fù)染液的顏色;而革蘭氏陽性菌細

7、胞壁中肽聚糖的含量多且交聯(lián)度大,類脂質(zhì)含量少,經(jīng)乙醇或丙酮洗脫后,肽聚糖層的孔徑變小,通透性降低,因此,細胞仍保留初染時的顏色?！緦嶒灢牧?、藥品及器具】1、菌種大腸桿菌(Escherichia coli枯草芽孢桿菌(Bacillus Subtilis金黃色葡萄球菌(Staphylococeus auresu2、染液草酸銨結(jié)晶紫液革蘭氏碘液95%的酒精藏花紅液3、器皿洗凈的載玻片6片、顯微鏡、酒精燈、接種環(huán)、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、鑷子、玻璃缸、瓶裝蒸餾水【實驗步驟】1、取培養(yǎng)12-24h的大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌分別涂片、固定。2、加草酸銨結(jié)晶紫染色劑一滴,染色1分鐘。3

8、、傾去染液并用洗瓶裝水輕輕沖洗。4、加碘液染1分鐘,水洗,然后用吸水紙吸干。5、將載玻片略傾斜,滴加95%酒精脫色(洗至流下的酒精中無紫色時為止,然后水洗。6、加藏花紅復(fù)染,染色30分鐘,水洗,用吸水紙吸干或烘干。7、用油鏡鏡檢觀察?！緦嶒灲Y(jié)果】1、顯微鏡下觀察,確定每個菌種的革蘭氏染色反應(yīng)。2、繪制每一細菌的菌體形態(tài)圖,注明菌種名稱,放大倍數(shù)、顏色?！舅伎碱}】1、革蘭氏染色反應(yīng)的機制什么?2、你認為操作中有哪些因素影響結(jié)果的正確性?實驗二細菌的芽孢染色和鞭毛染色細菌芽孢染色某些細菌在其發(fā)育的一定階段可以形成一個內(nèi)生孢子,即為芽孢。芽孢形成后并不脫離原細菌菌體,它的形狀、大小和在菌體的位置都是

9、一定的。老熟的芽孢可自菌體中脫落出來。芽孢結(jié)構(gòu)上的特點是壁厚和細胞質(zhì)濃厚,所以不易著色,通常多采用著色力強的染色劑和用加熱等手段促使芽孢著色,并利用復(fù)染的方法對比原細菌菌體和芽孢,才易于在顯微鏡下看到它們。但是,若用簡單染色法使菌體著色而芽孢無色也可以襯托出芽孢的形狀、大小和位置。【實驗?zāi)康摹空莆占毦挎呷旧姆椒??！緦嶒炘怼考毦难挎吆可?脂肪含量高,芽孢壁較厚,對染料的透性差,不易著色,但是一旦著色又難以脫色。通常,芽孢染色采用弱堿性染料孔雀綠在加熱的條件下進行。染色完畢,用蒸餾水沖洗。因孔雀綠是弱堿性染料,與菌體結(jié)合力較差,因此易被水沖洗掉,而進入芽孢的孔雀綠卻難于溶出。水洗后,再

10、用一種呈紅色的堿性染料復(fù)染,使菌體和芽孢呈現(xiàn)不同顏色?！緦嶒灢牧?、藥品及器具】1、菌種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium2、染液孔雀綠染液藏花紅染液3、器皿顯微鏡、酒精燈、鑷子、洗凈的載玻片4片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、玻璃紅、洗瓶裝蒸餾水、接種環(huán)。【實驗步驟】1、取培養(yǎng)24h左右的枯草芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌分別涂片、干燥、固定。2、在涂片部分用吸水紙條蓋住,然后向紙條滴加孔雀綠液至飽和。3、將涂片逐漸加熱至微冒蒸汽并不時添加染液以防止吸水紙條干燥。染色2-8分鐘。4、除去吸水紙條,用蒸餾水輕輕沖洗掉多余染液。5、用藏花

11、紅染液復(fù)染3060S。6、水洗,風干或烘干后鏡檢?！緦嶒灲Y(jié)果】1、首先用低倍鏡,再用油浸鏡檢查制片,注意芽孢的顏色和菌體的顏色。2、繪制芽孢圖。注意芽孢在菌體內(nèi)的位置、大小和形狀并繪制游離芽孢形態(tài)圖?！舅伎碱}】1、為什么經(jīng)孔雀綠染色后,水洗再復(fù)染紅色染液只能染上菌體?2、用革蘭氏染色能否看到芽孢,為什么?細菌鞭毛染色許多細菌自細胞內(nèi)長出一至許多根細絲狀附屬物稱為鞭毛。鞭毛是細菌的運動器官,有鞭毛的細菌均可運動。鞭毛細長透明,其寬度在普通光學(xué)顯微鏡波長檢驗范圍之外,所以不易觀察。但是在不染色情況下可以檢測到細菌的運動推斷鞭毛的存在?！緦嶒?zāi)康摹繉W(xué)習(xí)并掌握鞭毛染色的原理和方法?！緦嶒炘怼考毦谋?/p>

12、毛非常纖細,直徑一般在20nm左右,用電鏡才能觀察。本實驗采用特殊染色法,即在染色前先經(jīng)媒染劑處理,媒染劑吸附在鞭毛上,使鞭毛加粗,便可達到普通光學(xué)顯微鏡的辨析范圍以內(nèi)。染色后,即可利用普通光學(xué)顯微鏡進行觀察?！緦嶒灢牧?、藥品及器具】1、菌種培養(yǎng)18-24h的菌種大腸桿菌(Escherichia coli普通變形桿菌(Proteus Vulgaris熒光極毛桿菌(Pseudomonas fluorescens2、染色液鞭毛染色液甲鞭毛染色液乙(實驗前配好的新鮮染液3、器皿顯微鏡、酒精燈、洗瓶裝蒸餾水、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、干凈載玻片、玻璃缸、無菌水三管、滅菌長滴管三支?！緦嶒灢襟E】1

13、、用長滴管取無菌水輕輕移入長好菌種的試管內(nèi),培育20-30min使細菌自己慢慢游入水中并充分舒展其鞭毛,使水呈輕度混濁。2、取一滴菌懸液滴于玻片的1/3位置上,然后輕輕抬起此端,使懸液緩慢流至玻片另一端,平放使其在空氣中自然干燥固定。切忌用火焰烘干。3、在涂片部位滴甲液,染色35min。4、用蒸餾水輕輕沖洗。5、加乙液染3060s,可在酒精燈上稍稍加熱。沖洗多余的染液。6、制片干后檢查?！緦嶒灲Y(jié)果】1、顯微鏡下檢查鞭毛染成什么顏色和形狀。2、比較菌種鞭毛著生的位置、數(shù)目并繪圖?！舅伎碱}】1、菌種的培養(yǎng)時間與鞭毛染色有什么關(guān)系?2、你在顯微鏡下看到的鞭毛是否為原來的大小和形狀?3、鞭毛涂片與芽孢

14、涂片有何區(qū)別?為什么?實驗三植物病源真菌的形態(tài)觀察植物病害分為細菌病害、真菌病害和病毒病害三大類,其中真菌病害占到植物病害的95%左右。病源微生物侵染植物后,導(dǎo)致寄主植物細胞和組織的正常生理功能受到嚴重的影響,并引起病變癥狀。即植物在外形上、生理上和生長上的不正常變化,這種變化可以導(dǎo)致植物局部的損傷或全株死亡,造成植物產(chǎn)品品質(zhì)和產(chǎn)量的損失。真菌分布廣泛,種類繁多,已報導(dǎo)的將近45000多種,是植物病原生物中最主要的一大類群,它所引起的病害占植物病害的80%以上,盡管真菌形態(tài)差異很大,但基本結(jié)構(gòu)相似,大多數(shù)真菌有營養(yǎng)體和繁殖體之分,營養(yǎng)體是指吸收養(yǎng)分的器官,繁殖體是指從營養(yǎng)體上產(chǎn)生的各種類型的孢

15、子。真菌產(chǎn)生孢子的機構(gòu),無論是有形性的還是無性的,統(tǒng)稱為子實體。真菌的孢子分為無性孢子和有性孢子兩類。無性孢子有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子;有性孢子有休眠孢子囊、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子。真菌孢子的形態(tài)特征是鑒定和分類學(xué)上的重要依據(jù),其營養(yǎng)體及其變態(tài)和菌組織體則是真菌分類的重要參考依據(jù),有的還是重要的鑒別特征和分類依據(jù)?！緦嶒?zāi)康摹客ㄟ^本次實驗熟悉真菌的營養(yǎng)體和繁殖體的基本形態(tài),為以后真菌病害的病原物鑒定和真菌分類奠定初步基礎(chǔ)?！緦嶒炘怼棵咕臓I養(yǎng)體是分枝的絲狀體。其個體比細菌和放線菌大得多,分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形

16、成不同的孢子。霉菌菌絲較粗大,細胞易收縮變形,且孢子容易飛散,所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片的特點是:細胞不變形,具有殺菌防腐作用,且不易干燥,能保持較長時間,溶液本身呈藍色,有一定染色效果。利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料,可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài);也可以直接挑取生長在平板中的霉菌菌體制水浸片觀察?！緝?nèi)容、材料和方法】(一真菌的營養(yǎng)體1、菌絲和菌絲體除少數(shù)原始的類群以外,真菌典型的營養(yǎng)體是極為細小的絲狀體,這種絲狀體稱為菌絲,生長成叢的菌絲稱為菌絲體,低等真菌的菌絲是無隔的,大多數(shù)真菌是有隔的。(1挑取馬鈴薯晚疫病菌(Phytophtho

17、ra infestans或瓜果腐霉病菌(Pythium aphanidermatum制片,鏡檢無隔菌絲。(2挑取立枯絲核菌(Rhizoctonia solani制片鏡檢有隔菌絲。(3觀察各種病原真菌在平面和斜面培養(yǎng)基上形成的菌落,注意菌落大小、形狀、厚薄、質(zhì)地、顏色等形態(tài)特點。2、菌絲組織體有些真菌的菌絲體,在一定的條件下或一定的發(fā)育階段,可形成特殊的組織體,常見有菌核、子座和根狀菌索。(1菌核:菌核是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的一種休眠體,既是真菌貯藏養(yǎng)分的器官,又是真菌用以度過不良環(huán)境的休眠機構(gòu),菌核大小不一,色澤和形狀也各不相同。菌核中的菌絲組織已有分化現(xiàn)象,外皮組織細胞排列緊密,色深壁

18、厚,具有保護作用,為擬薄壁組織;內(nèi)層細胞壁薄色淡,排列疏松,仍可維持營養(yǎng)作用,為疏絲組織。肉眼觀察麥角病、油菜菌核病、黃瓜菌核病和大蔥菌核病標本,比較菌核形狀、大小、顏色;鏡檢細辛菌核病的菌核制片,注意比較表皮與內(nèi)部組織細胞的排列特點。(2子座:子座是由擬薄壁組織和疏絲組織形成的容納子實體的座墊狀結(jié)構(gòu),或由菌絲體與部分寄主組織結(jié)合而成的稱為假子座。子座是真菌從營養(yǎng)體到繁殖體的過渡機構(gòu),除可在其上或其內(nèi)形成子實體外,也有度過不良環(huán)境的作用。肉眼觀察稻曲病菌(Ustilaginoidea virens的分生孢子座;鏡檢蘋果樹腐爛病菌(Valsa mali和稻香柱菌(Epichloe typhina

19、所形成的子座制片,注意子座形狀,著生部位及內(nèi)部繁殖體類別。(3根狀菌索:少數(shù)高等真菌的菌絲體還可糾結(jié)成繩索狀的組織體,形如高等植物的根,故稱根狀菌索,其作用是幫助菌體蔓延和抵抗不良環(huán)境,根狀菌縈組織也有表皮和內(nèi)部組織的分化。肉眼觀察林木上根狀菌索的外部形狀,注意和菌核比較,找出二者區(qū)別。3 菌絲體上分化出的吸收養(yǎng)分組織(1吸器:是寄生在細胞間的真菌,特別是一些專性寄生菌在菌絲體上形成的吸收養(yǎng)分的器官,形狀有球狀、絲狀、掌狀、裂片狀等。鏡檢小麥白粉病菌(Blumeria graminis吸器制備片,注意吸器的形狀及其形成的部位。 (2假根:為伸入基物內(nèi)的菌絲體,形如高等植物的根系,故稱假根。假根

20、除用其吸收養(yǎng)分外,還有固著菌體的作用。 挑取培養(yǎng)基中培養(yǎng)的甘薯軟腐病菌(Rhizopus nigricans的菌絲(注意針尖要插入培養(yǎng)基內(nèi)制片鏡檢或鏡檢根足霉(Rhizopus sp.制備片,注意假根與普通營養(yǎng)菌絲的區(qū)別。(3附著胞:從幻燈片或照片觀察病菌侵染寄主植物形成附著胞的形態(tài)。(4菌環(huán)和菌網(wǎng):捕食性真菌常由菌絲分化成菌環(huán)和菌網(wǎng)組織來捕捉線蟲等小動物,然后再由菌絲侵入線蟲體內(nèi)吸取營養(yǎng)。( (二真菌的繁殖體孢子真菌的繁殖方式分無性和有性兩種,分別產(chǎn)生無性孢子和有性孢子兩大類型。真菌的無性繁殖包括斷裂、出芽和產(chǎn)生孢子等,真菌的有性生殖包括質(zhì)配、核配和減數(shù)分裂三個階段。1 無性孢子:不經(jīng)過性細

21、胞或性器官的結(jié)合便能產(chǎn)生孢子,稱為無性孢子。真菌產(chǎn)生的無性孢子類型很多,主要的有游動孢子、孢囊孢子、分生孢子和厚垣孢子。(1游動孢子:游動孢子為鞭毛菌亞門真菌特有的無性孢子,產(chǎn)生在由菌絲頂端細胞或由菌絲分化成的孢子囊梗的頂端細胞膨大形成的孢子囊內(nèi)、具鞭毛,能游動。制片鏡檢用線麻粒誘發(fā)的綿霉和水霉的游動孢子囊和游動孢子,鏡檢番茄晚疫病菌(Phytophthora infestans的游動孢囊梗、游動孢子囊和游動孢子。(2孢囊孢子:孢囊孢子為接合菌亞門真菌特有的無性孢子,生成方式和游動孢子相似,也是內(nèi)生的,但無鞭毛,不能游動。挑取黑根霉(Rhizopus sp.制片(或取制備片鏡檢孢子囊梗,孢子囊

22、和孢囊孢子,注意觀察孢子囊的形態(tài)及其著生位置及孢囊孢子的形態(tài),顏色和產(chǎn)生的數(shù)目。(3分生孢子:子囊菌亞門真菌和大部分半知菌亞門真菌都產(chǎn)生分生孢子,分生孢子外生在分生孢子梗上,形狀、大小、顏色不一,單生,鏈生或集生,分生孢子梗有的散生,有的束生,有的產(chǎn)生在分生孢子盤上或分生孢子器內(nèi),產(chǎn)生在分生孢子器內(nèi)的分生孢子也叫器孢子。取玉米大斑病(Exserohilum turcicum的病葉,用刀片輕輕刮取病斑上的霉狀物制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子或挑取斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)的小麥根腐病菌(Bipolaris sativum制片鏡檢分生孢子梗和分生孢子,另取蘋果灰斑病(Phyllosticta pirina制片

23、鏡檢分生孢子器和器孢子,注意分生孢子的形狀,色澤,細胞數(shù)目及著生情況。(4厚垣孢子:鏡檢厚垣孢子制備片,菌絲中或孢子中個別細胞膨大、細胞壁加厚的孢子即厚垣孢子。2 有性孢子:由兩個不同的性細胞或性器官相結(jié)合而產(chǎn)生的孢子叫有性孢子,有性孢子主要有以下4種。(1卵孢子:部分鞭毛菌亞門真菌的有性孢子,由菌絲上產(chǎn)生的兩種異形配子囊交配產(chǎn)生。 制片鏡檢谷子白發(fā)病菌(Sclerospora graminicola的卵孢子或鏡檢大豆霜霉病菌(Peronospora manshurica卵孢子制備片,注意卵孢子形狀、大小、顏色,孢壁形態(tài)。(2接合孢子:為接合菌亞門真菌的有性孢子,由兩個同形配子囊交配而成。鏡檢

24、毛霉(Mucor接合孢子制片,注意接合孢子的大小,形狀,顏色及表現(xiàn)特點。(3子囊孢子:為子囊菌亞門真菌產(chǎn)生的有性孢子,由兩個異形配子囊交配生成,子囊孢子產(chǎn)生在子囊內(nèi),多為8個,子囊除極少數(shù)子囊菌裸生外,多數(shù)子囊菌生于子囊果中。 取山楂白粉病(Podosphaera oxyacanthae病葉,用解剖針將白粉上的小黑點(閉囊殼仔細撥至載玻片上的水滴中,加蓋片并輕輕壓破閉囊殼,鏡檢閉囊殼,子囊、子囊孢子和附屬絲的形態(tài),特別注意子囊的數(shù)目和附屬絲的特點,另取油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotium132制備片,鏡檢子囊盤、子囊和子囊孢子。(4擔孢子:為擔子菌亞門真菌的有性孢子,由菌

25、絲結(jié)合后減數(shù)分裂而成,外生于擔子或先菌絲上。 挑取萌發(fā)的玉米絲黑穗病菌(Sphacelotheca reiliana制片鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態(tài),另取小麥腥黑穗病菌(Tilletia caries冬孢子萌發(fā)的制備片,鏡檢冬孢子、先菌絲及擔孢子的形態(tài),比較兩種黑粉病菌的區(qū)別。另外還有一種有性孢子為休眠孢子囊,由兩個游動配子結(jié)合而成,為二倍體,萌發(fā)時減數(shù)分裂釋放出單倍體的游動孢子。如壺菌、根腫菌可產(chǎn)生休眠孢子囊,根腫菌產(chǎn)生的休眠孢子囊萌發(fā)時通常只釋放出一個游動孢子,有時也稱為休眠孢子?！緦嶒灲Y(jié)果】1、繪有隔菌絲,無隔菌絲和菌核剖面圖。2、繪分生孢子、孢囊孢子、卵孢子及子囊孢子的形態(tài)圖?！舅?/p>

26、考題】1、菌絲有無隔膜是否反應(yīng)一定的進化關(guān)系?2、菌核和子座在形態(tài)和功能上有何不同?3、真菌吸器的有無與寄生性的強弱是否有一定關(guān)系?4、分生孢子和孢囊孢子的生成過程,形成數(shù)量(與產(chǎn)孢細胞比較及著生部位等方面有何不同?5、卵孢子、接合孢子、子囊孢子和擔子孢子在有性生殖過程中形成的時期有何不同?實驗四植物病原細菌及其所致病害癥狀觀察【實驗?zāi)康摹考毦且鹬参锊『Φ挠忠活愔匾牟≡?雖不象植物病原真菌種類那樣繁多,但因其個體微小,形態(tài)差異不夠明顯,所致病害癥狀復(fù)雜,都給細菌病害的研究帶來一定的困難,病原細菌的形態(tài)觀察和分類鑒定需要特有的實驗技術(shù),通過本次實驗,掌握植物細菌病害的分類鑒定需要特有的

27、實驗技術(shù),熟悉植物細菌病害癥狀類型和病原細菌的基本形態(tài),學(xué)習(xí)植物細菌病害簡易診斷方法及病原細菌初步鑒定的程序和技術(shù),為以后植物細菌病害的正確診斷和病原細菌的分類鑒定打下良好的基礎(chǔ)?！緝?nèi)容、材料和方法】(一植物細菌病害的癥狀觀察植物細菌病害的癥狀常作為鑒定屬的一種輔助性狀,即癥狀類型和病原屬之間有一定的相關(guān)性,如棒桿菌屬的細菌主要引起萎蔫癥狀;假單胞桿菌屬主要引起葉斑,腐爛和萎蔫癥狀;黃單胞桿菌屬主要引起葉斑和葉枯癥狀;野桿菌屬引起瘤腫等增生性癥狀;歐氏菌屬一般引起軟腐,有時也引起萎蔫。此外,多數(shù)細菌病害在發(fā)病初期,特別在潮濕的自然條件下常呈水浸狀或油漬狀;在飽和濕度下病斑上常有菌膿形成,干后成

28、為菌痂,掌握癥狀類型(附1及其形成的生態(tài)條件,對細菌病害的正確診斷是十分重要的。 觀察下列病害標本,區(qū)分癥狀類型。水稻白葉枯病(Xanthomonas oryzae棉花細菌角斑病(X.malvacearum馬鈴薯環(huán)腐病(Clavibacter sepedonicum白菜軟腐病(Erwinia carotovora黃瓜細菌角斑病(Pseudomonas lachrymans蘋果根癌病(Agrobacterium tumefaciens大豆細菌性斑點病(P.glycinea挑細菌性穿孔病(X.pruni菜豆細菌性葉燒病(X.phaseoli水稻條斑病(X.oryzicola(二植物細菌病害的簡易診

29、斷植物細菌病害的診斷和病原鑒定是比較復(fù)雜的,初步診斷是根據(jù)癥狀特點和顯微鏡檢查病組織中的細菌來完成的,細菌病害,除少數(shù)(如蘋果根癌病外,絕大多數(shù)能在受害部位的維管束或薄壁細胞組織中產(chǎn)生大量的細菌,并且吸水后形成菌溢,因此,鏡檢病組織中有無細菌的大量存在(菌溢的出現(xiàn)是診斷細菌病害簡單易行的方法。取水稻白葉枯病新病葉,在病斑病健交界處剪取2×2 mm的小塊病組織,放在載玻片上,滴加一滴蒸餾水,蓋好蓋玻片后,立即在顯微鏡下觀察,注意葉組織維管束剪斷處是否有大量的細菌,呈云霧狀溢出,如將視野調(diào)暗觀察更易見到,按同樣方法用健康組織作鏡檢反證。(三植物病原細菌形態(tài)觀察和種類鑒定細菌個體很小,無論

30、形態(tài)觀察還是種類鑒定,都須經(jīng)染色后才能在顯微鏡下觀察清楚,植物病原細菌目前發(fā)現(xiàn)的只有五個屬:屬的鑒定主要根據(jù)革蘭氏染色反應(yīng),鞭毛數(shù)目和著生位置,菌落顏色及所致病害癥狀等進行。1、培養(yǎng)性狀觀察取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的水稻白葉枯病菌(X.oyzae、馬鈴薯環(huán)腐病菌(C.sepedonicum,茄青枯病菌(Burkholderia solanacearum和白菜軟腐病菌(E.carotovora等,注意觀察菌落顏色、大小、質(zhì)地,是否產(chǎn)生熒光色素等,和植物病原真菌培養(yǎng)菌落有什么根本性的不同?2、染色反應(yīng)觀察(1革蘭氏染色反應(yīng)供試菌種:馬鈴薯環(huán)腐病菌(C.sepedonicum和白菜軟腐病菌(E.carotov

31、ora。操作步驟:A涂片方法a、取潔凈的載波片,加一滴無菌水;用移菌環(huán)按無菌操作要求取一環(huán)菌苔,在水滴中制成菌懸液;b、另取一潔凈載玻片,在中央加滴無菌水,取一環(huán)上述配制的菌懸液至水滴中,均勻涂布成薄層后,自然晾干;c、將涂片在燈焰上緩慢通過23次進行固定。B 染色步驟a、滴草酸銨結(jié)晶紫液于涂片上,染色1分鐘;b、傾去染液,水洗(亦可不用水洗;c、加碘液處理1分鐘;d、傾去碘液、水洗、吸水紙吸干;e、用95%酒精洗脫染液,時間約30秒鐘;f、吸干后,滴加復(fù)染劑藏紅復(fù)染1030秒鐘;g、水洗、吸干鏡檢。陽性反應(yīng)的細菌染成紫色,陰性反應(yīng)的染成紅色,注意涂片菌液不能太濃,其次褪色要徹底。否則是紅是紫

32、不易區(qū)分。(2鞭毛染色細菌鞭毛很細(只有0.020.03微米。不做特殊處理,一般光學(xué)顯微鏡是看不見的,鞭毛上沉積了染劑或銀鹽后才能看到,這是所有鞭毛染色的根據(jù)。但是染劑也可以在載玻片上沉積,如果載玻上沉積染劑太多,就會影響鞭毛染色效果。為此所用載玻片一定要用特殊方法嚴格洗滌(方法這里從略,此外染劑處理時間一定要嚴格掌握處理時間,處理時間太短,鞭毛上沒有足夠的沉積物看不清楚;處理時間太長,玻片上沉積物太多,也看不清楚。第三,菌齡十分重要,培養(yǎng)時間不足,或培養(yǎng)時間太長都不易染色成功,不同種類的細菌培養(yǎng)時間差異較大,白菜軟腐病菌以在2628恒溫箱中培養(yǎng)1618小時為宜,總之,鞭毛染色比較困難,必須嚴

33、格掌握每個操作環(huán)節(jié)。供試菌株:白菜軟腐病菌(E.carotovora操作步驟:A、載玻片準備用新的載玻片,經(jīng)過系列清潔處理(方法從略后,進行檢驗,合格者用于實驗。B、細菌懸液的配制供染色用的菌種,用前每隔12天轉(zhuǎn)移一次,連續(xù)轉(zhuǎn)移幾次進行活化,增強細菌的活性。在已活化并在1628恒溫箱中培養(yǎng)1618小時的白菜軟腐病菌斜面上加35毫升先在恒溫箱中經(jīng)予熱的無菌水,靜置1020分鐘,使細菌游出配成稀薄的菌懸液,注意靜置的時間不能太長,因為時間長了鞭毛可能脫落、染色固定前可在鏡下觀察其游動性。C、涂片用移置環(huán)取配好的菌懸液23環(huán)于潔凈的載玻片上,立即將玻片直立,使菌液流下展開,在玻片上遺留并形成菌懸液膜

34、,在空氣中自然干燥固定,勿用火焰固定。D、染色鞭毛染色的方法很多,大致可分為兩類,第一類是堿性品紅染色法;第二類是銀鹽沉積法,本次實驗用銀鹽沉積法或堿性品紅染色法。銀鹽沉積法:滴甲液35分鐘,用蒸餾水輕輕沖洗甲液,再加乙液,處理3060秒鐘,立即用蒸餾水輕輕沖洗乙液,空氣中自然干燥后,鏡檢(有人在加乙液后,在燈焰上微加熱,再用水洗菌體染成深褐色,鞭毛染成褐色,注意鞭毛數(shù)目及著生方式。堿性品紅染色法(Leifson賴夫生染色法:在潔凈載玻片上用尖蠟筆劃4個1.3×2.0cm的長方形小格,將載玻片斜放,用移植環(huán)在每小格頂端加一滴菌懸液,流下的菌懸液用紙吸去,干燥后,在第一個小格加5滴染劑

35、,經(jīng)過5s,10s,15s 后,分別在第二、三、四3個格中加滴染劑,仔細觀察染劑中有很細的沉淀物(鐵銹色云霧狀物產(chǎn)生,當?shù)谝弧⒌诙「褚旬a(chǎn)生沉淀時,立即用水洗去染劑,室溫下使載玻片干燥,然后直接在油鏡下鏡檢。【實驗結(jié)果】將提供的細菌病害標本的癥狀填入下表病害名稱病原菌學(xué)名癥狀描述備注【思考題】1、植物細菌病害的在癥狀鑒定方法和防治方面與植物真菌病害有什么不同?為什么?2、細菌鞭毛染色理論根據(jù)是什么?3、鞭毛染色時無菌水傾入斜面菌種后,為什么通過靜置法配制菌懸液? 涂片時,為什么用移置環(huán)從試管上層挑取菌懸液?4、試分析鞭毛染色成功與失敗的主要技術(shù)環(huán)節(jié)。實驗五接合菌門真菌基本形態(tài)及所致病害觀察【實

36、驗?zāi)康摹拷雍暇鷣嗛T的真菌叫接合菌,也是真菌中比較低等的一類,這類真菌的營養(yǎng)體為無隔菌絲體,無性繁殖產(chǎn)生孢囊孢子,有性繁殖產(chǎn)生接合孢子,接合菌分兩個綱:接合菌綱(Zygomtcetes和毛菌綱(Trichomycetes。與農(nóng)業(yè)病害關(guān)系較大的是接合菌綱中的毛霉目(Mucorales真菌,重要的有兩個屬:根霉屬(Rhizopus和毛霉屬(Mucor。本實驗的目的是熟悉與植病關(guān)系密切的接合菌的形態(tài)及其所致病害的癥狀特點,同時觀察真菌的異宗配合現(xiàn)象?！緝?nèi)容、材料和方法】毛霉目(Mucorales真菌大多是腐生菌,引起植物花、果實、塊根和塊莖的腐爛。1根足霉屬(Rhizopus(1根霉屬(Rhizopu

37、s菌絲發(fā)達,有分枝,分布在基物表面或其內(nèi),有匍匐絲和假根。孢囊梗2-3根叢生,在假根相反方向從菌絲上產(chǎn)生,一般不分枝,頂生孢子囊,產(chǎn)生大量孢囊孢子,有囊軸,鑼錘形,孢囊孢子單胞,表面有飾紋,接合孢子色深,表面有瘤狀突起。取甘薯軟腐病(R.nigricans標本,觀察癥狀特點,注意受害甘薯表面是否有白色毛狀物生出?在白色毛狀物中是否有黑點?挑取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的根足霉(帶少許培養(yǎng)基制片,鏡檢小黑點是什么器官?注意匍匐枝和假根的形態(tài),孢囊梗著生的位置,能否見到囊軸?什么形狀?2、毛霉屬(Mucor無匍匐絲與假根,孢囊梗單生,直立,其它形態(tài)同根霉,挑取培養(yǎng)皿中培養(yǎng)的毛霉制片(或取制備片020,鏡檢孢囊梗

38、,孢子囊和孢囊孢子,注意和根霉的區(qū)別。 3、笄霉屬(Choanephora形成的大小兩種類型的孢子囊,條件不適時,產(chǎn)生大型孢子囊,大型孢子囊產(chǎn)生在頂端彎曲的孢囊梗上,其內(nèi)產(chǎn)生多數(shù)孢囊孢子,孢子頂端有數(shù)根細毛。通常形成小型孢子囊,小型孢子囊聚生在孢子囊梗頂端膨大的頭狀體的小梗上,其中形成一個孢子,故也稱這種小型孢子囊為分生孢子。該菌為害花和果實,引起花腐和果腐,取制備片024,鏡檢笄霉的孢囊梗和孢子囊形態(tài),注意觀察該屬與根霉、毛霉的區(qū)別。4、犁頭霉屬(Absidia產(chǎn)生匍匐絲和假根,孢囊梗自假根間的弓形匍匐絲上長出,配囊柄上長出附屬絲包圍接合孢子。取制備片023鏡檢犁頭霉的假根,匍匐絲及配囊柄上

39、長出附屬絲包圍接合孢子的形態(tài),注意孢囊梗著生的位置和根霉有何不同。5、毛霉目真菌異宗配合現(xiàn)象觀察毛霉目真菌多具異宗配合現(xiàn)象,即當兩個不同交配型的菌株(“+”菌株和“-”菌株相遇時,則從各自菌絲上產(chǎn)生稱作原配子囊的分枝,兩個原配子囊接觸后,各自產(chǎn)生一個隔膜,將原配子囊分成兩個細胞,頂端的細胞稱作配子囊,基部的細胞稱配囊柄,“+”和“-”兩個配子囊接觸點的細胞壁消解,融合成一個細胞,以后發(fā)育成黑色,厚壁的接合孢子。每組取三個滅菌培養(yǎng)皿,分別將熔化的馬鈴薯洋菜培養(yǎng)基10毫升,在無菌操作下倒入培養(yǎng)皿中,凝固后翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,用玻璃筆在皿底外面劃一直徑,第一皿直徑兩側(cè)底內(nèi)接種“+”菌株,第二皿兩側(cè)都接種“-

40、”菌株,第三皿,一側(cè)接種“+”菌株,另一側(cè)接種“-”菌株,接種后,在25溫箱中培養(yǎng)一周,觀察兩個菌落生長的交界處,有無黑色粒點,即接合孢子的形成,挑取菌落少許制片鏡檢。觀察接合孢子的形態(tài),注意接合孢子形成的過程,三個培養(yǎng)皿中那個處理能產(chǎn)生接合孢子?為什么?【實驗結(jié)果】繪根足霉形態(tài)圖【思考題】1、接合菌和鞭毛菌在形態(tài)上有哪些異同點?2、毛霉和根霉有什么不同?3、試談異宗配合的概念。實驗六擔子菌門真菌的基本形態(tài)及所致病害的觀察【實驗?zāi)康摹繐泳鷣嗛T的真菌稱為擔子菌,是真菌中最高等的一類真菌,其特點是有性生殖產(chǎn)生擔子和擔孢子,擔孢子是一種外生孢子。由于多數(shù)擔子菌沒有明顯的單倍體營養(yǎng)階段,所以很少見到

41、分生孢子繁殖,擔子菌有兩種類型的菌絲體,一種是由擔孢子萌發(fā)形成的單倍體,每個細胞只有一個核的初生菌絲體,另一種是經(jīng)過雙核化而形成的每個細胞中有一對細胞核的次生菌絲體,常見的是后一種,擔子菌菌絲體上鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象比較普遍。通過本次試驗掌握擔子菌的形態(tài)特征及擔子菌所致病害的癥狀特點,為擔子菌的分類和病害鑒定打下初步基礎(chǔ)?！緝?nèi)容、材料和方法】根據(jù)擔子菌是否形成擔子果,以及擔子果是裸果型還是被果型等性狀特點,將擔子菌亞門分為冬孢菌綱(Teliomycotes,層菌綱(Hymenomycetes和腹菌綱(Gasteromycetes三個綱。其中寄生性較強,與植物病害關(guān)系密切的是冬孢菌綱的銹菌目的黑粉菌目,

42、冬孢菌綱真菌一般認為是低等擔子菌,沒有擔子果,形成分散或成堆的冬孢子。(一 銹菌目銹菌的特征是冬孢子從雙核菌絲的頂端細胞形成,擔子(上擔子或后擔子是由外生型的冬孢子(下?lián)踊蛟瓝用劝l(fā)而成的,擔子多產(chǎn)生三個橫隔分為四個細胞,每個細胞上產(chǎn)生一個擔孢子,銹菌的生活史可以產(chǎn)生幾種形態(tài)學(xué)和細胞學(xué)性狀不同的孢子器,并有轉(zhuǎn)主寄生現(xiàn)象,銹菌目根據(jù)冬孢子有柄或無柄分為兩個科:無柄的層銹菌科(Melampsoraceae和有柄的柄銹菌科(Pucciniaceae。銹菌都是專性寄生的。1層銹菌科(Melampsoraceae(1 柵銹菌屬(無柄銹菌屬Melampsora冬孢子無柄,單細胞,側(cè)面密結(jié)成整齊的單層,多

43、生在表皮下,取亞麻銹病(M.lini標本觀察癥狀特點,并鏡檢亞麻銹病菌制備片,注意以上形態(tài)特點。 (2層銹菌屬(Phakopsora冬孢子無柄,單細胞,彼此上下側(cè)面互相密結(jié)成多層、墊狀,埋生在寄主表皮下,取棗銹病(P.ziziphi-vulgaris標本觀察癥狀將點,并鏡檢該菌制備片225,注意上述形態(tài)特點,及與無柄銹菌的區(qū)別。 2柄銹菌科(Pucciniaceae(1單胞銹菌屬(Uromyces冬孢子有柄,單細胞,頂壁較厚,突破寄主表皮生于體外,取菜豆銹病(U.appendiculatus病葉和病莢標本觀察夏孢子堆和冬孢子堆的大小、顏色,是否穿破表皮?用解剖針挑取病葉上的冬孢子制片鏡檢,注意

44、該屬銹菌的形態(tài)特征。 (2 柄銹菌屬(雙胞銹菌屬Puccinia冬孢子有短柄,雙細胞,壁厚,遇水不膠化,取麥類稈銹病(P.graminis、葉銹病(P.recondita和條銹病(P.srriiformis的標本,注意觀察癥狀特點,比較三種銹病發(fā)生部位,夏孢子堆和冬孢子堆的大小、形狀、顏色,排列及開裂情況等有何不同,然后用解剖針挑取小麥稈銹病菌的冬孢子堆制片鏡檢,注意該屬真菌上述的形態(tài)特點。 (3膠銹菌屬(Gymnosporangium冬孢子有長柄,雙細胞,壁薄,遇水膠化,取蘋果銹病(G.yamadai和梨銹病(G.haraeanum標本,觀察癥狀特點,特別注意在轉(zhuǎn)主寄主柏樹上的癥狀,哪種孢子

45、發(fā)生在柏樹上?該菌是否有夏孢子階段?取蘋果銹病菌制備片或梨膠銹菌冬孢子制備片231,注意該屬的上述特點。(4 胞銹菌屬(Triphragmidium冬孢子有柄,3個細胞,排成倒品字形,褐色,有瘤,取落葉松銹病(T.laricinum標本觀察癥狀特點,鏡檢落葉松銹病菌制備片,注意上述特點。 (5 胞銹菌屬(Phragmidium冬孢子單生,具長柄,大而顯著,柄的下部膨大,3至多細胞,壁游動孢子鞭毛厚,表面光滑或有瘤狀突起、觀察玫瑰銹病(P.rosaemultiflorae標本,鏡檢其制備片,注意該屬菌上述特點。1、黑粉菌科(Ustilaginaceae(1黑粉菌屬(Ustilago冬孢子堆粉狀,

46、彼此分離,孢子堆外沒有由菌絲構(gòu)成的假膜包圍,冬孢子表面光滑或有紋飾。觀察小麥散黑穗病(U.tritici、玉米瘤黑粉病(U.maydis和谷子粒黑穗病(U.crameri的標本,注意受害部位及癥狀特點:取小麥散黑穗病菌制備 片201鏡檢冬孢子及冬孢子萌發(fā)的形態(tài)。(2軸黑粉菌屬(Sphacelotheca冬孢子堆粉狀,彼此分離,孢子堆外有由菌絲構(gòu)成的假膜包圍:孢子堆中間有由寄主維管束殘余組織形成的中柱,冬孢子表面光滑或有紋飾、觀察玉米絲黑穗病(S.reillana、高粱絲黑穗病(S.reiliana、高粱散黑穗病(S.cruenta和高粱堅黑穗病(S.sorghi標本,注意癥狀特點,比較高粱三種

47、黑穗病癥狀有何不同,挑取高粱或玉米絲黑穗病菌冬孢子制片,鏡檢其大小、形狀、顏色及表面特征,另取高粱絲黑穗病菌冬孢子萌發(fā)制備片204,觀察冬孢子萌發(fā)的特點。 (3團黑粉菌屬(Sorosporium冬孢子堆多產(chǎn)生在花部,冬孢子集結(jié)成球,外面往往有由菌絲構(gòu)成的假膜包圍著,成熟后呈粉狀或顆粒狀,觀察高粱長粒黑穗病(S.enrenbergii標本,注意為害特點,是否有長形囊狀物形成,取高粱長粒黑穗病菌冬孢子制備片,鏡檢由許多冬孢子組成的球形或卵圓形的孢子球,注意外面是否有膜包圍。 2腥黑粉菌科(Tilletiaceae(1腥黑粉菌屬(Tilletia冬孢子堆多生于子房內(nèi),成熟后呈粉狀或帶有膠性,大都具有

48、腥味。冬孢子表面常有網(wǎng)狀或瘤狀紋飾,少數(shù)種光滑,冬孢子萌發(fā)時,產(chǎn)生無隔膜的先菌絲,頂端產(chǎn)生成束的擔孢子,常成對作“H”形結(jié)合,觀察小麥普通腥黑穗病(包括網(wǎng)腥T. caries和光腥T. foetida標本,注意為害部位和癥狀特點,鏡檢腥黑穗病菌萌發(fā) 狀態(tài)制備片,注意先菌絲和擔孢子的形態(tài),擔孢子是否作“H”狀結(jié)合?(2尾孢黑粉菌屬(Neovossia冬孢子堆生于子房內(nèi),半黏結(jié)至粉末狀。冬孢子產(chǎn)生在菌絲末端的細胞內(nèi),孢子形成后菌絲殘余物在冬孢子外形成一柄狀結(jié)構(gòu)。冬孢子表面布滿齒狀突起, 擔孢子的數(shù)目多,一般不作“H”形結(jié)合。(3葉黑粉菌屬(Entyloma冬孢子堆成熟后長期埋生在葉片、葉柄和莖組織

49、內(nèi),不呈粉狀。觀察水稻稈黑粉病(E.oryzae標本,注意發(fā)生部位,黑腫或黑粉狀葉片,鏡檢水稻葉黑粉病菌制備片,注意堆生在葉組織中的冬孢子堆。(4 條黑粉菌屬(稈黑粉菌屬Urocystis冬孢子聚集成團,堅固而不易分離,冬孢子團外有無色不孕細胞包圍褐色冬孢子,觀察小麥稈黑粉病(U. tritici標本,注意癥狀特點,鏡檢小麥稈黑粉病菌 制備片,觀察冬孢子團和不孕細胞?！緦嶒灲Y(jié)果】1、小麥稈銹病菌、菜豆銹病菌和玫瑰銹病菌冬孢子形態(tài)圖。2、絲黑穗病菌,小麥腥黑穗病菌和水稻葉黑粉病菌冬孢子及擔子形態(tài)圖。3、實驗所見幾種黑粉病菌的形態(tài)特點,編制黑粉病菌分類檢索表?！舅伎碱}】1、子菌亞門真菌劃分為哪幾個

50、綱?是根據(jù)什么劃分的?2、子菌在菌絲體,無性繁殖體和有性繁殖體的形態(tài)和發(fā)生上與子囊菌相比較有何特點?3、3、較銹菌和黑粉菌的異同點。實驗七有絲分裂孢子真菌的基本形態(tài)及所致病害的觀察【實驗?zāi)康摹勘緦嶒灥闹饕康氖鞘煜び薪z分裂孢子真菌的形態(tài)特征和分類概況,熟悉有絲分裂孢子真菌所致病害的基本癥狀,為有絲分裂孢子真菌的分類和病害鑒定打下良好的基礎(chǔ)?！緝?nèi)容、材料和方法】認識有絲分裂孢子真菌的基本形態(tài)和分類依據(jù)。1、絲核菌屬、小核菌屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察。2、粉孢屬、梨孢屬、輪枝孢屬、葡萄孢屬、尾孢屬、鏈格孢屬、黑星孢屬、內(nèi)臍蠕孢屬、離蠕孢屬、突臍蠕孢屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察。3、鐮

51、刀菌屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察。4、擬棒束孢屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察。5、炭疽菌屬、痂圓孢屬、擬盤多毛孢屬、盤二孢屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察。6、葉點霉屬、莖點霉屬、大莖點霉屬、殼針孢屬、殼囊孢屬、殼二孢屬、色二孢屬的病原菌形態(tài)和所致病害的癥狀觀察?！緦嶒灲Y(jié)果】繪梨孢、鏈格孢、尾孢、青霉、鐮孢、炭疽菌、莖點和殼二孢屬等病原菌的形態(tài)特征圖?！舅伎碱}】在顯微鏡下你能分辨出分生孢子器和子囊殼嗎? 如何區(qū)別?實驗八病原物的分離培養(yǎng)與接種【實驗?zāi)康摹客ㄟ^本次實驗學(xué)習(xí)植物病原菌分離培養(yǎng)的原理和常用方法,學(xué)習(xí)常用的接種方法,掌握根據(jù)柯赫氏法則鑒定植物病原物的方法?！緝?nèi)容、材料和方法】1、學(xué)習(xí)田間采樣的方法。2、學(xué)習(xí)PDA培養(yǎng)基的制作方法、濕熱滅菌方法、干熱滅菌方法和無菌平皿的制作方法。3、學(xué)習(xí)病原物的組織分裂方法和稀釋分離方法。4、學(xué)習(xí)噴霧、針刺、摩擦接種的方法并觀察接種的結(jié)果?！緦嶒灲Y(jié)果】提交分離培養(yǎng)、接種試驗報告一份。要求:以一種病害分離、接種結(jié)果為題材,試按試驗的目的意義,試驗材料和方法、試驗結(jié)果及結(jié)果分析和討論等格式來寫。實驗九植物的抗病性和病原菌的生理分化【實驗?zāi)康摹坷煤团嘤共∑贩N,是防治病害的根本性措施,要搞好抗病育種工作,必須熟練掌握植物抗病性和病原物致病性分化的測定方法,病害的性質(zhì)不同,其寄主抗病性和病原物生