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1、第四章第四章 抗體技術(shù)抗體技術(shù)第七章第七章 抗體工程技術(shù)抗體工程技術(shù)11 1 、抗體類型、抗體類型1 1、多克隆抗體、多克隆抗體( (polyclonal antibody) ) 早期人工制備抗體的早期人工制備抗體的主要主要方法,以方法,以相應(yīng)抗原免疫動(dòng)物,由此產(chǎn)生的抗體相應(yīng)抗原免疫動(dòng)物,由此產(chǎn)生的抗體是針對(duì)多種抗原決定簇(表位)的混是針對(duì)多種抗原決定簇(表位)的混合抗體,故稱之為多克隆抗體。合抗體,故稱之為多克隆抗體。 第第一一節(jié)節(jié) 抗體制備抗體制備2優(yōu)點(diǎn):來源廣泛、制備容易優(yōu)點(diǎn):來源廣泛、制備容易缺點(diǎn):特異性不高、易發(fā)生交叉反應(yīng)缺點(diǎn):特異性不高、易發(fā)生交叉反應(yīng)3多克隆抗體l1890年Beh
2、ring和Kitasato發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素,建立免疫療法,開創(chuàng)了抗體制藥之先河。 白喉外毒素免疫動(dòng)物抗毒素治白喉Behring (德,18541917)4目前治療性抗體產(chǎn)品:精制破傷風(fēng)毒目前治療性抗體產(chǎn)品:精制破傷風(fēng)毒素、精制白喉毒素、精制肉毒毒素。素、精制白喉毒素、精制肉毒毒素。 綠膿免疫血漿抗體制劑綠膿免疫血漿抗體制劑5多克隆抗體的制備多克隆抗體的制備n根據(jù)不同的免疫原,選擇不同的免疫方案。n免疫方案免疫途徑免疫程序動(dòng)物選擇6 細(xì)胞融合細(xì)胞融合,又稱體細(xì)胞雜交是指兩個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞通過膜融合形成單個(gè)細(xì)胞的過程。 在適當(dāng)?shù)臈l件下,細(xì)胞融合在一起,產(chǎn)生具有在適當(dāng)?shù)臈l件下,細(xì)胞融合在一起,
3、產(chǎn)生具有原來原來兩個(gè)細(xì)胞基因信息的單個(gè)核細(xì)胞兩個(gè)細(xì)胞基因信息的單個(gè)核細(xì)胞,稱為,稱為雜交細(xì)胞雜交細(xì)胞(hybrid cell)。)。2、細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體、細(xì)胞融合技術(shù)和單克隆抗體7顯微鏡下細(xì)胞融合過程顯微鏡下細(xì)胞融合過程8uMuller于1838年觀察到脊椎動(dòng)的腫瘤細(xì)胞能在體內(nèi)自發(fā)地融合產(chǎn)生多核的腫瘤細(xì)胞。uVirchow于1858年描述了正常組織、發(fā)炎組織以及腫瘤組織中的多核細(xì)胞現(xiàn)象。uLuginbuhl于1873年觀察到天花病人的血液中也有多核的血細(xì)胞存在。uLange于1875年第一個(gè)觀察到脊椎動(dòng)物(蛙類)的血液細(xì)胞發(fā)生融合的過程。uCienkawski(1876)、Buck(1
4、877)、Geddes(1880)在無脊椎動(dòng)中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞合并現(xiàn)象。u1958年日本學(xué)者岡田(Okada)發(fā)現(xiàn)仙臺(tái)病毒具有觸發(fā)動(dòng)物細(xì)胞融合的效應(yīng)。u1974年華裔加拿大學(xué)者高國(guó)楠?jiǎng)?chuàng)立了聚乙二醇(PEG)化學(xué)融合法。u1975年Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞而產(chǎn)生能分泌預(yù)定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。u20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了電融合技術(shù)。細(xì)胞融合研究進(jìn)展細(xì)胞融合研究進(jìn)展9n19751975年,年,KohlerKohler和和MilsteinMilstein應(yīng)用應(yīng)用小鼠小鼠骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞和綿羊細(xì)胞致敏和綿羊細(xì)胞致敏的小鼠的小鼠脾細(xì)胞脾細(xì)胞融合,得到的一部融合,
5、得到的一部分融合雜交細(xì)胞既能繼續(xù)生長(zhǎng),分融合雜交細(xì)胞既能繼續(xù)生長(zhǎng),又能分泌抗羊紅細(xì)胞抗體,將這又能分泌抗羊紅細(xì)胞抗體,將這種雜交細(xì)胞系統(tǒng)稱為雜交瘤細(xì)胞,種雜交細(xì)胞系統(tǒng)稱為雜交瘤細(xì)胞,應(yīng)用這種方法可制備單一抗原決應(yīng)用這種方法可制備單一抗原決定簇的單克隆抗體。定簇的單克隆抗體。10一、何謂單克隆抗體?一、何謂單克隆抗體?11 由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位的由一個(gè)識(shí)別一種抗原表位的B細(xì)胞克細(xì)胞克隆產(chǎn)生的同源抗體,稱單克隆抗體隆產(chǎn)生的同源抗體,稱單克隆抗體12131415 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞(myeloma cell)與與經(jīng)特定抗源免疫刺激的經(jīng)特定抗源免疫刺
6、激的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞(antigen stimulated B lymphoblast)融合得到雜交瘤細(xì)胞融合得到雜交瘤細(xì)胞(hybridoma cell),雜交瘤,雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無限增殖,又具有細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無限增殖,又具有B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此,單克隆抗體技術(shù)又稱為雜胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此,單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)交瘤技術(shù)(hybridoma technology )。)。16Niels K. Jerne G. Kohler C. Milstein 17雜交瘤技術(shù)的基本原理雜交瘤技術(shù)的基本原理18 3 3、基因工程抗體
7、、基因工程抗體 基因工程抗體即將抗體的基因按基因工程抗體即將抗體的基因按不同需要進(jìn)行加工、改造和重新裝不同需要進(jìn)行加工、改造和重新裝配,然后導(dǎo)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中進(jìn)配,然后導(dǎo)入適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)的抗體分子。行表達(dá)的抗體分子。 19基因工程抗體與單克隆抗體相比的優(yōu)點(diǎn):基因工程抗體與單克隆抗體相比的優(yōu)點(diǎn): 通過基因工程技術(shù)的改造,可以通過基因工程技術(shù)的改造,可以降低降低甚至消除甚至消除人體對(duì)抗體的排斥反應(yīng)。人體對(duì)抗體的排斥反應(yīng)?;蚬こ炭贵w的分子量較小,可以基因工程抗體的分子量較小,可以部部分降低抗體的鼠源性分降低抗體的鼠源性,更有利于穿透,更有利于穿透血管壁,進(jìn)入病灶的核心部位;根據(jù)血管壁,
8、進(jìn)入病灶的核心部位;根據(jù)治療的需要,制備新型抗體。治療的需要,制備新型抗體。可以采用原核細(xì)胞、真核細(xì)胞和植物可以采用原核細(xì)胞、真核細(xì)胞和植物等等多種表達(dá)方式多種表達(dá)方式,大量表達(dá)抗體分子,大量表達(dá)抗體分子,大大降低生產(chǎn)成本。大大降低生產(chǎn)成本。2021 經(jīng)過免疫的哺乳類動(dòng)物經(jīng)過免疫的哺乳類動(dòng)物單一的單一的B B淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞,可以合成分泌單一性的抗,可以合成分泌單一性的抗體,我們稱這種具有體,我們稱這種具有特異性特異性的的、同、同質(zhì)性質(zhì)性的抗體為單克隆抗體。的抗體為單克隆抗體。 二、二、McAbMcAb技術(shù)基本原理技術(shù)基本原理22 改變改變B淋巴細(xì)胞遺傳特性淋巴細(xì)胞遺傳特性建立建立永久生長(zhǎng)永久
9、生長(zhǎng)和和能分泌能分泌McAb細(xì)胞系的途徑細(xì)胞系的途徑 病毒轉(zhuǎn)化病毒轉(zhuǎn)化 細(xì)胞雜交細(xì)胞雜交23骨髓瘤細(xì)胞選擇骨髓瘤細(xì)胞選擇骨髓瘤細(xì)胞本身不能分泌抗體骨髓瘤細(xì)胞本身不能分泌抗體選擇次黃嘌呤鳥嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖激酶缺陷選擇次黃嘌呤鳥嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖激酶缺陷型(型(HGPRT-)胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型(胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型(TK-)24*融合細(xì)胞的選擇原理l l 1964年Litterlefield首先發(fā)明 HAT 選擇性培養(yǎng)基。 H:Hypoanthine 次黃嘌呤 A:Aminopterin 氨基喋呤 T:Thymidine 胸腺嘧啶脫氧核苷 原理:正常細(xì)胞不但具有利用培養(yǎng)液中的谷酰胺和尿核苷單磷酸合
10、成DNA的能力,且當(dāng)這條主要途徑被氨基喋呤(A)阻斷時(shí),還具有利用培養(yǎng)液中現(xiàn)成的次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶脫氧核苷(T)在次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)的作用下,借此替代通路來合成DNA的能力。25三、三、 McAb技術(shù)的特點(diǎn)技術(shù)的特點(diǎn)1、 高度特異性高度特異性2 、高度穩(wěn)定性、高度穩(wěn)定性 3 、高抗體活性、高抗體活性 4 4、 不可知性不可知性 5 5、 過于單一性過于單一性26四四 、McAMcA制備的基本方法制備的基本方法 (一)一) 抗原提純與動(dòng)物免疫抗原提純與動(dòng)物免疫 27(二)(二) 骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞及飼養(yǎng)細(xì)胞的制備的制備 n對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的骨髓瘤細(xì)胞SP20(
11、HGPRT缺陷株)的準(zhǔn)備n脾細(xì)胞的準(zhǔn)備28融合前骨髓瘤細(xì)胞:細(xì)胞狀態(tài)渾圓透亮、大小均一、邊緣清晰、排列整齊、呈半致密分布29(三)(三) 細(xì)胞融合細(xì)胞融合n融合過程須注意問題融合過程須注意問題n1 1、細(xì)胞比例:、細(xì)胞比例:骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞比例為1:4n2 2、反應(yīng)時(shí)間:、反應(yīng)時(shí)間:混合細(xì)胞的離心管中30s內(nèi)加入1ml 37預(yù)溫的50PEG,邊加邊輕輕搖動(dòng)離心管,作用90s,然后加入預(yù)溫的37的DMEM不完全培養(yǎng)液終止PEG作用,800r/min離心6min,棄上清。n3 3、培養(yǎng)液成分、培養(yǎng)液成分30(四)篩選和克隆(四)篩選和克隆有限稀釋法有限稀釋法( (稀釋至稀釋至0.80.8個(gè)細(xì)胞個(gè)
12、細(xì)胞/ /孔孔) )(五)(五) 單克隆抗體的制備和凍存單克隆抗體的制備和凍存(六)(六) 單克隆抗體的純化單克隆抗體的純化(制備方法:體內(nèi)培養(yǎng)、體外培養(yǎng))(制備方法:體內(nèi)培養(yǎng)、體外培養(yǎng))(鹽析、凝膠過濾、離子交換層析、(鹽析、凝膠過濾、離子交換層析、 親和層析、酸沉淀)親和層析、酸沉淀)31四四 、McAMcA制備的基本方法制備的基本方法 32五五 、單克隆抗體的應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用1 1、作為親合層析的配體、作為親合層析的配體2 2、 作為生物治療的導(dǎo)向武器作為生物治療的導(dǎo)向武器3 3、 作為免疫抑制劑作為免疫抑制劑 通過親和層析可從復(fù)雜的混合物中通過親和層析可從復(fù)雜的混合物中分離、純化
13、某一特定成分分離、純化某一特定成分McAbMcAb所帶藥物只作用于靶組織器官所帶藥物只作用于靶組織器官 抗人的抗人的T T淋巴細(xì)胞單抗用于臨床治療自身淋巴細(xì)胞單抗用于臨床治療自身免疫疾病和抗器官移植的排斥反應(yīng)免疫疾病和抗器官移植的排斥反應(yīng)334 4、作為研究工作中的探針、作為研究工作中的探針5 5、增強(qiáng)抗原的免疫原性、增強(qiáng)抗原的免疫原性6 6、作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑、作為醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)試劑(1 1)診斷各類病原體)診斷各類病原體(2 2)腫瘤特異性抗原和相關(guān)抗原檢測(cè))腫瘤特異性抗原和相關(guān)抗原檢測(cè)(3 3)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志)檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志(4 4)機(jī)體微量成分的測(cè)定)機(jī)體微量成分的測(cè)定34CJ P
14、EB1CJ PEB1重組蛋白的表達(dá)及重組蛋白的表達(dá)及單克隆單克隆/多克隆抗體的制備鑒定多克隆抗體的制備鑒定35 課題的思路及目的課題的思路及目的誘導(dǎo)培養(yǎng)基因工程菌E.coli BL21(DE3)高效表達(dá)CJ PEB1重組蛋白鎳瓊脂糖層析柱純化表達(dá)后的重組蛋白免疫BALB/C小鼠制備單抗免疫新西蘭兔制備多抗為建立血清學(xué)方法檢測(cè)CJ創(chuàng)造條件 36一、SDS-PAGE鑒定純化后的PEB1蛋白1 2 3 4 5 6 M 7 8 9 101 2 3 4 5 6 M 7 8 9 10圖圖1. SDS1. SDS PAGEPAGE鑒定純化后的鑒定純化后的PEB1PEB1蛋白蛋白 表達(dá)的蛋白通過表達(dá)的蛋白通過
15、鎳瓊脂糖凝膠層鎳瓊脂糖凝膠層析柱純化后,經(jīng)析柱純化后,經(jīng)SDS-PAGESDS-PAGE鑒定,鑒定,蛋白質(zhì)分子量大蛋白質(zhì)分子量大小與預(yù)計(jì)的理論小與預(yù)計(jì)的理論值相符,和本室值相符,和本室前期的研究結(jié)果前期的研究結(jié)果一致,一致, PEB1PEB1重組重組蛋白純度高蛋白純度高 。1 12 2:咪唑濃度為:咪唑濃度為50mmol/L50mmol/L時(shí)洗脫的蛋白時(shí)洗脫的蛋白3 34 4:咪唑濃度為:咪唑濃度為100mmol/L100mmol/L時(shí)洗脫的蛋白時(shí)洗脫的蛋白5 56 6:咪唑濃度為:咪唑濃度為200mmol/L200mmol/L時(shí)洗脫的蛋白時(shí)洗脫的蛋白M M :蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子
16、量7 78:8:咪唑濃度為咪唑濃度為300mmol/L300mmol/L時(shí)洗脫的蛋白時(shí)洗脫的蛋白9 910:10:咪唑濃度為咪唑濃度為400mmol/L400mmol/L時(shí)洗脫的蛋白時(shí)洗脫的蛋白97.4kd66.2kd42.7kd31kd14.4kd37 PEB1 PEB1蛋白單克隆抗體的制備及鑒定蛋白單克隆抗體的制備及鑒定 常規(guī)免疫常規(guī)免疫BALB/C小鼠制備單克隆抗體小鼠制備單克隆抗體38X- -a a- -b b- -c c- -d d -a -b -c -d抗原抗原決決定定簇簇BALB/BALB/C Ca ab bb bc cd d 脾脾臟產(chǎn)生各種臟產(chǎn)生各種 B B 細(xì)胞細(xì)胞與佐劑乳化
17、與佐劑乳化免免疫疫采采血血收集收集血清血清作為篩選時(shí)陽性對(duì)照作為篩選時(shí)陽性對(duì)照無菌取無菌取脾脾臟臟收集收集B B細(xì)細(xì)胞胞抗原通常有多抗原通常有多個(gè)個(gè)抗原抗原決決定定簇簇免免疫疫后后的脾的脾臟臟約約在在兩兩月內(nèi)月內(nèi)注射注射四四次次PEB1PEB1蛋白蛋白39- -d d- -a a- -b b- -c c- -d dPEB1PEB1蛋白蛋白ELISAELISAHATHATPEG PEG 細(xì)胞融合細(xì)胞融合雜交瘤細(xì)雜交瘤細(xì)胞胞(亞克隆亞克?。?( (確確定只有定只有單個(gè)細(xì)單個(gè)細(xì)胞胞) )- -d d- -c c- -b b- -a a- -d dSP2/0SP2/0骨骨髓髓瘤瘤細(xì)細(xì)胞胞B cellB
18、 cell脾脾細(xì)細(xì)胞胞培培養(yǎng)篩選養(yǎng)篩選只識(shí)別一個(gè)抗原決定簇只識(shí)別一個(gè)抗原決定簇 a ab bb bc cd d40 單克隆抗體的獲得及鑒定單克隆抗體的獲得及鑒定 細(xì)胞克隆的形成和雜交瘤細(xì)胞的篩選細(xì)胞克隆的形成和雜交瘤細(xì)胞的篩選 圖圖2. 2. 融合后第二天骨髓融合后第二天骨髓瘤細(xì)胞對(duì)照孔瘤細(xì)胞對(duì)照孔圖圖3. 3. 融合后第二天融合后第二天 細(xì)胞融合孔細(xì)胞融合孔41圖圖4. 4. 融合后第三天融合后第三天細(xì)胞融合孔細(xì)胞融合孔圖圖5. 5. 融合后第八天融合后第八天 細(xì)胞融合孔細(xì)胞融合孔42 圖圖6.6.間接間接ELISAELISA篩選抗體陽性孔篩選抗體陽性孔 43 通過有限稀釋法和通過有限稀釋法
19、和ELISAELISA法進(jìn)行連續(xù)克隆篩法進(jìn)行連續(xù)克隆篩選后獲得兩株穩(wěn)定分泌單抗的雜交瘤細(xì)胞選后獲得兩株穩(wěn)定分泌單抗的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為株,分別命名為1D1D7 7A A5 5株和株和5G5G2 2B B3 3株。株。44 圖圖8. 1D8. 1D7 7A A5 5株分泌抗體的亞型株分泌抗體的亞型 圖圖9. 5G9. 5G2 2B B3 3株分泌抗體的亞型株分泌抗體的亞型45 1D1D7 7A A5 5株和株和5G5G2 2B B3 3株雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水株雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水經(jīng)間接經(jīng)間接ELISAELISA法檢測(cè),腹水中的抗體效價(jià)分別法檢測(cè),腹水中的抗體效價(jià)分別為為1:81:81010
20、4 4和和1:51:510104 4。 兩株雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水經(jīng)雙向瓊脂擴(kuò)兩株雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水經(jīng)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè),腹水中的抗體效價(jià)均為散試驗(yàn)檢測(cè),腹水中的抗體效價(jià)均為1:81:8。46運(yùn)用小鼠單抗分型試劑盒確定雜交瘤細(xì)胞所分運(yùn)用小鼠單抗分型試劑盒確定雜交瘤細(xì)胞所分泌的單抗的亞型。泌的單抗的亞型。將建株的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔誘生腹水。將建株的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔誘生腹水。應(yīng)用間接應(yīng)用間接ELISAELISA法和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)的法和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)的腹水中單抗的效價(jià)。通過腹水中單抗的效價(jià)。通過Western-blotWestern-blot和玻和玻片凝集試驗(yàn)檢測(cè)單抗的特異性
21、。片凝集試驗(yàn)檢測(cè)單抗的特異性。47n免疫印跡試免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果顯示:驗(yàn)結(jié)果顯示:2 2株雜交瘤株雜交瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞分泌的單抗,可以單抗,可以與與PEB1PEB1蛋白蛋白特異性結(jié)合。特異性結(jié)合。通過通過DABDAB顯顯色出現(xiàn)特異色出現(xiàn)特異性條帶并且性條帶并且無雜帶出現(xiàn)無雜帶出現(xiàn)。 1 2 3 4 M 1 12 2:未經(jīng)純化的:未經(jīng)純化的PEB1PEB1蛋白與單抗特異性結(jié)合蛋白與單抗特異性結(jié)合3 3 4 4:純化的:純化的PEB1PEB1蛋白與單抗特異性結(jié)合蛋白與單抗特異性結(jié)合M M :蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量:蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)分子量圖圖10.western-blot10.western-blot檢測(cè)單抗特異
22、性檢測(cè)單抗特異性97.4kd66.2kd43kd31kd20kd14.4kd48細(xì)菌名稱細(xì)菌名稱雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞誘生的腹水誘生的腹水SP2/0細(xì)胞細(xì)胞誘生的腹水誘生的腹水空腸彎曲菌空腸彎曲菌+大腸桿菌大腸桿菌痢疾桿菌痢疾桿菌傷寒桿菌傷寒桿菌產(chǎn)氣莢膜桿菌產(chǎn)氣莢膜桿菌變形桿菌變形桿菌葡萄球菌葡萄球菌表表1.玻片凝集試驗(yàn)檢測(cè)單抗的特異性結(jié)果玻片凝集試驗(yàn)檢測(cè)單抗的特異性結(jié)果49三、PEB1PEB1蛋白多克隆抗體的制備及鑒定蛋白多克隆抗體的制備及鑒定 免疫新西蘭兔制備多克隆抗體。免疫新西蘭兔制備多克隆抗體。501 12 23 34 41 12 24 43 31 12 23 34 4XPEB1PEB1
23、蛋白蛋白與佐劑完與佐劑完全乳化全乳化待血凝完全離待血凝完全離心收集血清心收集血清鹽析法粗提兔鹽析法粗提兔IgG抗體抗體51應(yīng)用間接應(yīng)用間接ELISAELISA法和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)法和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)多克隆抗體抗體的效價(jià)。多克隆抗體抗體的效價(jià)。通過通過Western-blotWestern-blot和玻片凝集試驗(yàn)檢測(cè)多和玻片凝集試驗(yàn)檢測(cè)多克隆抗體的特異性??寺】贵w的特異性。52 多克隆抗體的效價(jià)檢測(cè)及鑒定多克隆抗體的效價(jià)檢測(cè)及鑒定動(dòng)物動(dòng)物編號(hào)編號(hào)0W0W2W2W4W4W6W6W7W7W8W8W兔兔1 10 01:101:101: 101: 10 2 2 1:61:610103 31:81:810103 31:1.51:1.5 10 104 4兔兔2 20 01:101:101:51:51010 2 2 1:81:810103 31:11:110104 41:21:210104 4兔兔3 30 01:101:101:51:51010 2 21:81:810103 31:1.21:1.210104 41:2.51:2.510104 4 表表2.2.間接間接ELISAELISA檢測(cè)兔血清的效價(jià)變化檢測(cè)兔血清的效價(jià)變化 間接間接ELISAELISA檢測(cè)兔血清的效價(jià)變化檢測(cè)兔血清的效價(jià)變化 53表表3. 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)免疫后的抗體效價(jià)變化雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢測(cè)免疫后的抗
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