白血病基因篩查

1、白血病基因篩查白血病基因篩查WH0血液腫瘤分類方案（1999年）v新分類方案的基本原則是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來鑒定疾病的“真實本質(zhì)”。v提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷的較明確關(guān)聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案的新時代。形態(tài)學(xué)免疫學(xué)細胞遺傳學(xué)WH0血液腫瘤分類方案（2008年）組織蛋白細胞基因基因檢測 融合基因 基因突變?nèi)诤匣虻男纬葿cr/Abl融合基因fish探針白血病分子診斷的意義精確診斷準確預(yù)后指導(dǎo)治療科研資料白血病初發(fā)MICM診斷系統(tǒng)診斷異常標記殘留監(jiān)測靶向治療分子診斷在白血病診斷中的應(yīng)用分子診斷在白血病診斷中的應(yīng)用提供早期輔助診斷及預(yù)后判斷提供早期

2、輔助診斷及預(yù)后判斷;對治療過程進行跟蹤對治療過程進行跟蹤;進行白血病治療后的微小殘留檢測進行白血病治療后的微小殘留檢測.白血病常見融合基因vCBFB/MYH11vAML1/ETOvPML/RARavE2A/PBX1vMLL/AF4vBCR/ABLvTEL/AML1vSIL/TAL1vEVI1vHOX11vMLL/AF10vMLL-AF9vMLL/ENLvNPM1/ALKvNPM/MLF1MLL/ELLMLL/AFXMLL/AF1q MLL/AF1p PLZF/RARaMLL/AF6MLL/MLL（dupMLL）TLS/ERGTEL/PDGFRTEL/ABLSET/CANDEK/CANMLL/A

3、F17E2A/HLFNPM/RARaAML1/MDS1CBFB/MYH11v是Inv(16)(p13q22)形成；v是急性髓系白血病(AML)特征性染色體異常，通常見于AML-M4Eo亞型，占總AML患者的10%，其中50發(fā)生在AML-M4Eo中。v帶有Inv(16)(p13q22)的病人通常有較好的預(yù)后。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。AML1/ETOvt(8,21)(q22;q22)形成，在1973年首次報道。vAML1/ETO融合基因出現(xiàn)在所有的t(8,21)陽性的AML中， 同時也出現(xiàn)在具有復(fù)雜移位的t(8,21)陰性的AML病例中。 t(8,21)出現(xiàn)在大約7%的A

4、ML病例中，在年輕的患者中更為常見。其主要出現(xiàn)在AML-M2這一亞型中，大約有20-40%病例具有t(8,21)。在非常少見的AML-M1，AML-M4和t-AML中也有報道。vt(8,21)異位是一個較好的標志，它的存在使這類病例對一些藥物有較好的反應(yīng)。因此基于細胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的檢測結(jié)果，可以為病人選擇風險低的較好的治療方案。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。PML/RARavt(15,17)易位形成；v是APL的一個典型標志，其易位造成了15號染色體上的PML基因和17號染色體上的RARa基因的融合，產(chǎn)生了一個融合基因PML/RARa。由于PML基因上融合位點的不同，

5、PML/RARa有三種融合型，即:bcr1(55%),bcr2(5%),bcr3(40%)。v檢測PML/RARa融合基因的存在與否，對APL的診斷，判斷ATRA的療效和預(yù)后復(fù)發(fā)都非常重要。vPML/RARa陽性強烈預(yù)示著復(fù)發(fā)的可能，而其持續(xù)性陰性則預(yù)示病人有更長的生存期。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。E2A/PBX1vt(1:19)導(dǎo)致了19號染色體上的E2A基因和1號染色體上的PBX1基因的融合，產(chǎn)生了融合基因E2A/RBX1；v5-6%的兒童ALL和3%的成人ALL檢測到，幾乎全部出現(xiàn)在前B細胞ALL病例中。v攜帶有該易位的病人，其臨床癥狀都比較兇險。該基因陽性的病人

6、，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。MLL/AF4v在50-70%的嬰幼兒ALL和將近5%的小兒和成人ALL病例中有MLL/AF4融合基因。t(4,11)(q21;q23)與前B-ALL(CD79A+,CD19+,CD10-,CD24-)相關(guān)，同時與粒系分化抗原CD16和CD65以及NG2抗原共表達。MLL/AF4融合基因在所有t(4;11)移位的病例中存在，也存在于相當一部分細胞遺傳學(xué)沒有檢測到t(4;11)移位的病例中。v在嬰幼兒ALL中MLL/AF4融合基因被認為是預(yù)后不良的標志。在成人ALL中也是一個不良的標志，但對于成人ALL，該融合基因的存在似乎能增強高劑量的Ara-C的療效。該基因

7、陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。BCR/ABLv在超過95%的CML病人的白血病細胞中，30%（20-50%）的成人ALL和2-10%的兒童ALL中，以及小于2%的AML（淋巴瘤和骨髓瘤）的病例中有BCR/ABL融合基因。v在CML中BCR/ABL融合基因都是p210型的，在CML病例中有55%的b3-a2型，40%的b2-a2型。在5%的病例中b3-a2和b2-a2型由于剪接的不同同時存在。另外，在非常少的ph+的CML病人中存在一種大的BCR/ABL融合基因e19-a2，即u-bcr,p230型BCR/ABL融合基因。v在30-50%的成人ph+的ALL，20-30%兒童ph+

8、的ALL病例中BCR/ABL融合基因是p210型的。還有60%的ph+的ALL患者的BCR/ABL融合基因是p190型的 。v在ALL中，Ph陽性和隨之出現(xiàn)的BCR/ABL融合基因是一個非常不好的標志，它影響著病人血相的完全緩解率和可能的生成率。該基因陽性的病人，可用格列衛(wèi)進行治療，并可進行療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。CML病例中的應(yīng)用 BCR-ABL融合基因檢測： t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p210 t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p230 BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測BCR-ABL融合基因 超過95%的CML病例中存在BCR-ABL融合基

9、因 P210型 M-bcr（絕大多數(shù)） b3-a2（ 55% ） b2-a2（ 40% ） b3-a2和b2-a2 （ 5% ） b3-a3 （罕見） b2-a3 （罕見）p230型 u-bcr e19-a2（罕見）BCR-ABL融合基因融合基因ABL激酶突變檢測激酶突變檢測 ABL激酶突變會引起伊馬替尼治療耐藥 T315I 耐藥機制: T315突變后不能與伊馬替尼形成關(guān)鍵性的氫鍵，可完全阻斷伊馬替尼與ABL激酶區(qū)的結(jié)合,從而耐藥。 P環(huán)的突變環(huán)的突變(244-255) 耐藥機制：如 Y253FH、E255KV、Q252H、G250E等通過改變ABL激酶的空間構(gòu)象，亦可阻礙伊馬替尼與之結(jié)合。

10、A環(huán)突變環(huán)突變(381-402) 一般提高用藥量可以降低耐藥程度。 其它突變其它突變 對于耐藥程度較弱的突變，如M244V、G250E、F317L、E355G、F359V及V379I等，通過提高藥物劑量，可以克服耐藥。TEL/AML1vt(12;21)(p13;q22)易位最早在1995年被報道。隨后的報道發(fā)現(xiàn)這種普通遺傳學(xué)無法檢測的易位，是兒童ALL中最為常見的易位。幾乎25%的小兒ALL有該易位。其主要的陽性病人出現(xiàn)在1-12歲之間，其中最多的在2-5歲的這個年齡段。所有的病例其免疫分型都是前B細胞ALL。另外，這類病人的另一個特征是其白細胞比較低。vt (12;21)陽性的病人都有較好的

11、預(yù)后，其復(fù)發(fā)的時間也會較晚。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。SIL/TAL1v位于染色體1p32上的TAL1基因可以通過多種遺傳變異導(dǎo)致在T細胞中異常表達。其中最常見的重組方式是TAL1基因上游約90kb的DNA缺失，導(dǎo)致SIL與TAL1融合，這種染色體內(nèi)微缺失全部出現(xiàn)在T-ALL病例中。 SIL/TAL1融合基因與T-ALL的免疫表型密切相關(guān)。 SIL/TAL1融合基因可以在26%的兒童T-ALL病例和16%的成人（主要是年輕成人）T-ALL病例檢測到。vSIL/TAL1融合基因與T-ALL預(yù)后的關(guān)系還不是很清楚。該融合基因可以用于T-ALL的輔助診斷，該融合基因還可以用于

12、療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。EVI1v定位于染色體3q26。在小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒誘發(fā)的急性髓系白血病模型中，EVI1是病毒常見的插入位點。EVI1編碼一個能結(jié)合DNA的鋅指蛋白，其過度表達在髓系惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重要作用。與其表達相關(guān)的還有MDS和CML。v現(xiàn)階段的研究表明EVI1高表達的患者的預(yù)后不良，但其機制尚未清晰。HOX11v據(jù)細胞基因?qū)W研究，4-7%的T-ALL中涉及染色體10q24的易位。HOX11正是定位在10q24上，并被t(10;14)(q24;q11)易位以及t(7;10)(q35;q24)易位激活。B-ALL中無HOX11的發(fā)現(xiàn)。v在現(xiàn)階段的文獻報道中，HOX11高表達的

13、兒童T-ALL的預(yù)后較陰性者有優(yōu)勢1。成人中也有相似的論斷2。低表達的HOX11與陰性者無統(tǒng)計學(xué)差異3。1、 Expression of HOX11 in childhood T-lineage acute lymphoblastic leukaemia can occur in the absence of cytogenetic aberration at 10q24: a study from the Childrens Cancer Group (CCG) . UR Kees, NA Heerema et,20032、 Prognostic importance of TLX1 (HO

14、X11) oncogene expression in adults with T-cell acute lymphoblastic leukaemia. Adolfo A Ferrando MD et,20043、 Prognostic and oncogenic relevance ofTLX1/HOX11 expression level in T-ALLs. Julie Bergeron et,2007vMLL/AF10:MLL/AF10與AML相關(guān)，染色體上表現(xiàn)為t(10;11)(p12;q23)的易位，主要見于AML-M5型患者，兒童多見，80%的患者小于3歲。vMLL/AF10陽

15、性的患者的預(yù)后差1。1 、AML with 11q23/MLL abnormalities as defined by the WHO classification: incidence, partner chromosomes, FAB subtype, age distribution, and prognostic impact in an unselected series of 1897 cytogenetically analyzed AML cases. Claudia Schoch, Susanne Schnittger et,2003vMLL-AF9:t(9;11)(p22;

16、q23)易位主要發(fā)生在AML中,是AML中t(11q23)最常見的易位形式。vMLL-AF9的病人的預(yù)后較差1,2。1、 Microenvironment Determines Lineage Fate in a Human Model of MLL-AF9 Leukemia. Junping Wei,Mark Wunderlich et,20082、 The prognostic value of MLL-AF9 detection in patients with t(9;11)(p22;q23)-positive acute myeloid leukemia. Claudia Schol

17、l et,2005vMLL/ENL:t(11;19)(q23;p13.3)易位可見于ALL，AML-M4,M5,M1,M2。以小于1歲的嬰兒多見，中位生存期為17.6月。易位導(dǎo)致MLL-ENL融合基因形成。v預(yù)后尚無確切說明，與年齡，免疫表型相關(guān)1。1 、Childhood acute lymphoblastic leukemia with the MLL-ENL fusion and t(11;19)(q23;p13.3) translocation. Rubnitz JE et,1999vMLL/ELL: t(11;19)(q23;p13.1)占11q23異常的3.8%，為AML特征性異常

18、，年齡以成人為主。白細胞 20109/L，F(xiàn)AB分型M4或M5，免疫表型為CD13CD33，CD14CD15，CD11，HLA-DR表達陽性。易位導(dǎo)致MLL-ELL融合基因形成。v預(yù)后不良，2年無病生存率50%。vMLL/AFX:t(X;11)(q13;q23)易位僅有體外分子的一些研究研究表明MLL-AFX可以增強造血干細胞的自我更新并阻止它們成熟1。v無預(yù)后相關(guān)資料。1、 MLL-AFX Requires the Transcriptional Effector Domains of AFX To Transform Myeloid Progenitors and Transdominan

19、tly Interfere with Forkhead Protein Function. Chi Wai So and Michael L. Cleary,2002vMLL/AF1q:t(1;11)(q21;q23)易位，多發(fā)于AML。v關(guān)于MLL/AF1q的預(yù)后說法存在爭論2：在一項研究中，高表達的AF1q是一個獨立的不良預(yù)后因子1；另一項研究表明MLL-AF1q陽性的患者預(yù)后良好，是否因為MLL-AF1q的形成改變了AF1q的表達還不得而知2。1 、Elevated expression of the AF1q gene, an MLL fusion partner, is an ind

20、ependent adverse prognostic factor in pediatric acute myeloid leukemia. William Tse et,20042、 Novel prognostic subgroups in childhood 11q23/MLL-rearranged acute myeloid leukemia: results of an international retrospective study. Brian V et,2009vMLL/AF1p:t(1;11)(p32;q23)易位，ALL,AML,MDS中均有發(fā)現(xiàn)。v中位生存期為15個月

21、。預(yù)后與性別及分型相關(guān)，女性的中位生存期可達28個月，而男性為11個月。缺乏關(guān)于預(yù)后的相關(guān)文獻。vPLZF/RARa：t(11;17)(q23;q21)易位，特定的在急性早幼粒白血病或急性非淋巴細胞白血病M3型中發(fā)現(xiàn)。功能尚不明確。v預(yù)后明顯差與有t(15;17)易位的ANLL M3型，其對ATRA的化療無反應(yīng)。vMLL/AF6：t(6;11)(q27;q23)是11q23中常見的易位，長發(fā)與AML，特別是M4，M5中，在T-ALL中也有發(fā)現(xiàn)。v預(yù)后非常差1，幾乎無緩解，生存期短。1、 Monitoring of minimal residual disease in patients wit

22、h MLL-AF6-positive acute myeloid leukaemia by reverse transcriptase polymerase chain reaction. Gerlinde Mitterbauer et,2000vMLL/MLL:11q23的部分串聯(lián)重復(fù)（MLL-PTD），已經(jīng)在10%的正常核型的AML中檢測出MLL-PTD，可以作為穩(wěn)定的MRD的監(jiān)測標記。v預(yù)后差，臨床緩解率低1,2,3。1、 Clinical and biological implications of partial tandem duplication of the MLL gene

23、in acute myeloid leukemia without chromosomal abnormalities at 11q23. H-S Shiah et,20022 、Prognostic Significance of Partial Tandem Duplications of the MLL Gene in Adult Patients 16 to 60 Years Old With Acute Myeloid Leukemia and Normal Cytogenetics: A Study of the Acute Myeloid Leukemia Study Group

24、 Ulm. Konstanze Dohner et,20023、 Risk assessment by monitoring expression levels of partial tandem duplications in the MLL gene in acute myeloid leukemia during therapy. Martin Weisser et,2005vTLS/ERG:t(16;21)(p11;q22)易位多見于年輕患者，F(xiàn)AB各亞型均見。v預(yù)后不良1，可能不能達到完全緩解，一年內(nèi)的復(fù)發(fā)率高，中位生存期為22個月。1、 Relapse of Acute Myelo

25、id Leukemia with t(16;21)(p11;q22) Mimicking Autoimmune Pancreatitis after Second Allogeneic Bone Marrow Transplantation.Yuhei Kamada et，2011vTEL/PDGFR:t(5;12)(q33;p13)易位形成的融合基因，與Ras/ERK和STAT5信號傳導(dǎo)通路相關(guān)，誘導(dǎo)干細胞的分化1.v預(yù)后尚不明確，中位生存期20個月（n=11）v1、 Tel/PDGFR induces stem cell differentiation via the Ras/ERK an

26、d STAT5 signaling pathways. Edwina Dobbin et,2008vTEL/ABL:t(9;12)(q34;p13)易位罕見，至2010年只有19例被報道于CML,AML,ALL中。v數(shù)量少，從報道的病例上看，預(yù)后不良1。v1、 Acute leukemias with ETV6/ABL1 (TEL/ABL) fusion: Poor prognosis and prenatal origin. Jan Zuna et,2010vSET/CAN:t(9;9)(q34;q34)易位，罕見，作用不明；v有文獻報道稱SET-CAN可以抑制增生，促分化1.1、 Effe

27、cts of SET and SET-CAN on the differentiation of the human promonocytic cell line U937. A Kandilci et,2004vDEK/CAN:t(6;9)(p23;q34)易位，由位于9q34的CAN基因與6q23的DEK基因融合，CAN基因是產(chǎn)物核孔復(fù)合物的一部分，能夠運送RNA及蛋白質(zhì)穿過核膜。在AML中占2%，主要為M2型，其次為M4。最初描述是以骨髓中正常嗜堿粒細胞增多為特征20%患者有既往MDS病史。年輕患者(2030歲)。v預(yù)后差1,2。1 、DEK-CAN molecular monitori

28、ng of myeloid malignancies could aid therapeutic stratification. L Garon et,20052、 Development of a D-FISH method to detect DEK/CANfusion resulting from t(6;9)(p23;q34) in patients with acute myelogenous leukemia. L Garon et,2005vMLL/AF17:t(11;17)(q23;q12-21)易位，發(fā)現(xiàn)于AML中。v數(shù)據(jù)不足，無預(yù)后相關(guān)文獻。vE2A/HLF:t(17;19

29、)(q22;p13)易位產(chǎn)生E2A/HLF融合基因，發(fā)生在其少數(shù)的ALL病例中。v預(yù)后差，對密集化療無反應(yīng)，生存期短1,2。1、 Adult Precursor-B Acute Lymphoblastic Leukemia with Translocations Involving Chromosome Band 19p13 is Associated with Poor Prognosis. Hasan S Khalidi et,19992、 E2A/HLF fusion gene in an acute lymphoblastic leukemia patient with dissemi

30、nated intravascular coagulation and a normal karyotype. Laurence Daheron et,2002vNPM/MLF1： t(3;5)(q25.1;q34)易位，在MPS,MDS,ANLL（M2,M4,M6）中有發(fā)現(xiàn)。v預(yù)后非常差1，中位生存期少于1年。1、 NPM1 deletion is associated with gross chromosomal rearrangements in leukemia. R La Starza et,2010vNPM/RARa:t(5;17)(q35;q22)易位發(fā)生于急性非淋巴細胞白血病，

31、見于M3，即急性早幼粒細胞白血病。v病例少，有記載的只有2例兒童病例，2例的復(fù)發(fā)時間都短，預(yù)后可能不樂觀。vNPM1/ALK：t(2;5)(p23;q35)易位，2p23的易位發(fā)生在超過一半的間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)中，一種高級的非霍奇森淋巴瘤。v雖然發(fā)生于高等級的侵襲性腫瘤中，但80%患者的生存期長于5年。vAML1/MDS1 ： t(3;21)(q26;q22)易位發(fā)生于CML(約占1%)，ANLL和MDS中，通常與治療相關(guān)。v預(yù)后不良，生存率低。WT1定量檢測 MDS/AML監(jiān)測指標 WT1基因在AML和MDS病人中經(jīng)常異常高表達，與AML和MDS的發(fā)生和進展，以及兇險判斷，療效跟

32、蹤和預(yù)后復(fù)發(fā)判斷有非常密切的關(guān)系。 通過定量PCR檢測WT1的表達能夠有助于AML和MDS病人的風險判斷，療效跟蹤和預(yù)后復(fù)發(fā)的判斷。WH0血液腫瘤分類方案（1999年）v新分類方案的基本原則是：結(jié)合形態(tài)學(xué)、免疫表型、遺傳改變和臨床特征來鑒定疾病的“真實本質(zhì)”。v提供了疾病分類與治療選擇和預(yù)后判斷的較明確關(guān)聯(lián)性，開啟了血液腫瘤靶向性治療和個性化方案的新時代。形態(tài)學(xué)免疫學(xué)細胞遺傳學(xué)E2A/PBX1vt(1:19)導(dǎo)致了19號染色體上的E2A基因和1號染色體上的PBX1基因的融合，產(chǎn)生了融合基因E2A/RBX1；v5-6%的兒童ALL和3%的成人ALL檢測到，幾乎全部出現(xiàn)在前B細胞ALL病例中。v攜

33、帶有該易位的病人，其臨床癥狀都比較兇險。該基因陽性的病人，可用于療效監(jiān)測和微小殘留的檢測。CML病例中的應(yīng)用 BCR-ABL融合基因檢測： t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p210 t(9;22)(q34;q11) BCR-ABL p230 BCR-ABL融合基因ABL激酶突變檢測HOX11v據(jù)細胞基因?qū)W研究，4-7%的T-ALL中涉及染色體10q24的易位。HOX11正是定位在10q24上，并被t(10;14)(q24;q11)易位以及t(7;10)(q35;q24)易位激活。B-ALL中無HOX11的發(fā)現(xiàn)。v在現(xiàn)階段的文獻報道中，HOX11高表達的兒童T-ALL的預(yù)后較陰性者有優(yōu)勢1。成人中也有相似的論斷2。低表達的HOX11與陰性者無統(tǒng)計學(xué)差異3。1、 Expression of HOX11 in childhood T-lineage acute lymphoblastic leukaemia can occur in the absence of cytogenetic aberration at 10q24: a study from the Childrens Cancer Group (CCG) . UR Kees, NA Heerema et,20032、 Prognostic importance of TLX1 (HOX