培養(yǎng)基驗(yàn)收作業(yè)指導(dǎo)書刪減版

1、培養(yǎng)基質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書1、目的：為加強(qiáng)我微生物實(shí)驗(yàn)室的工作管理，保證實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量，特制定此作業(yè)指導(dǎo)書;2、范圍：本規(guī)范適用于實(shí)驗(yàn)室微生物檢測(cè)中所使用培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。3、職責(zé)：3.1 檢驗(yàn)人員：按照本規(guī)程規(guī)對(duì)培養(yǎng)基使用前及使用過程中進(jìn)行質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。3.2 科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制。4、控制措施：4.1培養(yǎng)基的購置和驗(yàn)收4.1.1 培養(yǎng)基的購置試劑管理員在接到批準(zhǔn)的采購信息后，從合格供應(yīng)商中選擇廠商采購，同時(shí)要求廠商提供每批培養(yǎng)基的批號(hào)、使用前的pH值、儲(chǔ)藏信息、有效期、性能評(píng)價(jià)記錄（包括測(cè)試菌株、技術(shù)數(shù)據(jù)清單、質(zhì)控證書及必要的安全

2、危害數(shù)據(jù)）。4.1.2 培養(yǎng)基的驗(yàn)收購買培養(yǎng)基到貨后，由試劑管理員和微生物檢測(cè)人員共同核對(duì)生產(chǎn)企業(yè)提供的資料、培養(yǎng)基名稱、規(guī)格數(shù)量、外觀特征、批號(hào)、保質(zhì)期是否符合要求。同時(shí)應(yīng)填寫“培養(yǎng)基驗(yàn)收檢查記錄單”驗(yàn)收符合要求后，交由檢測(cè)人員接受保管，填寫培養(yǎng)基入庫記錄和建立試劑臺(tái)帳。4.2培養(yǎng)基的儲(chǔ)存干粉培養(yǎng)基應(yīng)保存在陰涼干燥處，要避免陽光直射；開瓶后的干粉培養(yǎng)基易吸濕，應(yīng)注意防潮并在有效期或6個(gè)月內(nèi)用完。應(yīng)每月對(duì)儲(chǔ)存中的培養(yǎng)基進(jìn)行常規(guī)檢查，如容器密閉性復(fù)查、首次開封日期、內(nèi)容物的感官檢查，如果培養(yǎng)基發(fā)生結(jié)塊、顏色異常和其他變質(zhì)跡象就不能再使用。開封的脫水培養(yǎng)基，每次使用前應(yīng)對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行檢查，通過粉末的

3、流動(dòng)性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷培養(yǎng)基的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng)再使用。即用性培養(yǎng)基按照產(chǎn)品標(biāo)識(shí)要求進(jìn)行儲(chǔ)存。4. 3培養(yǎng)基的使用4.1.1 配制培養(yǎng)基用水和玻璃器皿培養(yǎng)基制備用水應(yīng)使用電阻率不小于30萬Qcm的蒸儲(chǔ)水或與其同質(zhì)的水，每周檢測(cè)電阻率，每三個(gè)月檢測(cè)一次重金屬離子含量。制備培養(yǎng)基所用的玻璃器皿（如吸管、試管、燒杯等）新的玻璃器皿（首次使用）和再次使用的玻璃器皿按規(guī)定方法洗滌、干燥4.1.2 稱量稱量時(shí)要用專用的角匙，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；干粉培養(yǎng)基易吸潮，如房間環(huán)境濕度較大時(shí)，應(yīng)提高稱量速度，完畢后及時(shí)蓋緊瓶蓋。4.1.3 復(fù)水復(fù)水時(shí)應(yīng)注

4、意以下事項(xiàng)：a）不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養(yǎng)基中，影響微生物的生長(zhǎng)；b）容器的大小需大于復(fù)水后培養(yǎng)基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養(yǎng)基溢出；c）加熱培養(yǎng)基時(shí)一定要進(jìn)行攪拌，特別是瓊脂類培養(yǎng)基；d）為避免燒焦和沸騰溢出，對(duì)于少量的培養(yǎng)基最好使用沸水浴進(jìn)行加熱；e）含有瓊脂粉的培養(yǎng)基，在加熱溶解之前可以浸泡數(shù)分鐘；f）對(duì)于瓊脂類培養(yǎng)基進(jìn)行再融化時(shí)應(yīng)使用沸水浴或流動(dòng)蒸汽進(jìn)行加熱，最多只能加熱兩次，第二次再融化后仍未用完的培養(yǎng)基應(yīng)棄去；g）燒糊的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被破壞，并可產(chǎn)生有毒物質(zhì)，如發(fā)現(xiàn)焦化，或未溶解均勻前培養(yǎng)基有溢出，該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。4.1.4 滅菌培養(yǎng)基采用

5、高壓蒸汽滅菌（濕熱滅菌），通常是121c15min,含糖或特殊培養(yǎng)基，按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或生產(chǎn)商提供的說明滅菌。已配制好的培養(yǎng)基必須在15分鐘內(nèi)滅菌，避免微生物生長(zhǎng)繁殖而消耗養(yǎng)分，改變培養(yǎng)基的酸堿度。為避免高溫破壞培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分，降低瓊脂的凝膠強(qiáng)度，必須嚴(yán)格控制滅菌溫度和時(shí)間，不可重復(fù)滅菌。4.1.5 pH測(cè)定在初次使用每批培養(yǎng)基時(shí)，均需隨同檢測(cè)配制一個(gè)測(cè)試培養(yǎng)基，在滅菌或消毒后應(yīng)在25c溫度下采用精密PH試紙測(cè)試PH值，并判斷是否符合要求；使用過程中，如果需要調(diào)整培養(yǎng)基的pH,應(yīng)用1mol/LNaOH或lmol/LHCL調(diào)整，注意不可反復(fù)調(diào)pH,否則會(huì)影響培養(yǎng)基的滲透壓。4.1.6 配制好的培養(yǎng)

6、基標(biāo)識(shí)和保存滅菌以后培養(yǎng)基應(yīng)該迅速冷卻至所需溫度，避免長(zhǎng)時(shí)間保存在滅菌鍋內(nèi)，造成過度滅菌，影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分或選擇性效果。同時(shí)填寫配制記錄。內(nèi)容：名稱、配制量、配方（比）、操作中的重要參數(shù)（時(shí)間、壓力、溫度）、配制日期、配制者、截止使用日期。在每個(gè)已滅菌的培養(yǎng)基容器外做好標(biāo)記，注明名稱、配制日期、使用期限和配制人。培養(yǎng)基保存注意事項(xiàng)：1）環(huán)境條件：各種培養(yǎng)基均應(yīng)在潔凈的普通冰箱內(nèi)保存，以2-8C左右為宜，不得凍結(jié)。2）保存時(shí)限:基礎(chǔ)培養(yǎng)基應(yīng)在30天內(nèi)用完。鑒別培養(yǎng)基應(yīng)在21天內(nèi)用完。選擇性分離鑒別培養(yǎng)基制成平板后當(dāng)日用完，置保鮮膜（袋）密閉保存期限可延長(zhǎng)至一周。從外單位購買的培養(yǎng)基保存時(shí)限按

7、照產(chǎn)品標(biāo)注的時(shí)限執(zhí)行4. 4培養(yǎng)基批號(hào)的的管理培養(yǎng)基的批號(hào)由6位阿拉伯?dāng)?shù)字組成，批號(hào)為年、月、日，各取2位，年份取后2位，月和日不足2位時(shí)，分別在數(shù)字前加0,表明是本日配制的批號(hào)。如2004年6月4日配制的培養(yǎng)基，批號(hào)為040604。4.5 質(zhì)量檢查購置的同一批次培養(yǎng)基其質(zhì)量檢查應(yīng)能通過無菌檢查（制備好的培養(yǎng)基經(jīng)30-35c培養(yǎng)48小時(shí)，真菌培養(yǎng)基經(jīng)2025c培養(yǎng)72小時(shí)候后，應(yīng)無菌生長(zhǎng)）、新購的不同批次的商品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基性能測(cè)試，經(jīng)檢查合格的該批次培養(yǎng)基方準(zhǔn)許使用，否則不準(zhǔn)使用，做好檢查記錄。成品培養(yǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)包括物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)的測(cè)試，根據(jù)測(cè)試結(jié)果及時(shí)填寫“實(shí)驗(yàn)

8、室培養(yǎng)基質(zhì)量控制性能測(cè)試記錄及評(píng)估報(bào)告4.6 培養(yǎng)基的性能測(cè)試新購的不同批次的商品化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基性能測(cè)試，包括物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)的測(cè)試，根據(jù)測(cè)試結(jié)果及時(shí)填寫“實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基質(zhì)量控制性能測(cè)試記錄及評(píng)估報(bào)告，菌株的選擇參考SN/T1538.2-2007培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能測(cè)試實(shí)用指南。4.6.1 物理指標(biāo)控制1） 測(cè)試20c25c的pH值2）瓊脂層厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見雜質(zhì)；4.5.2微生物污染的控制從每批制備好的培養(yǎng)基中選取至少一個(gè)（或1%平板或試管，置于35-37c或按特定標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溫度培養(yǎng)48h應(yīng)無菌生長(zhǎng)，真菌培養(yǎng)基經(jīng)2025c培養(yǎng)72小時(shí)候

9、后，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。4. 5.3微生物學(xué)指標(biāo)控制可根據(jù)要求選用定量方法、半定量方法或定性方法（詳見表1-表）對(duì)培養(yǎng)基性能進(jìn)行測(cè)試，具體操作方法如下：（1）生長(zhǎng)率將適量測(cè)試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固體和液體培養(yǎng)基中，每種培養(yǎng)基上菌株的生長(zhǎng)率應(yīng)達(dá)規(guī)定的最低限值。1）定量方法生長(zhǎng)率Pr的計(jì)算：PR=Ns/NoNs：從一個(gè)或多個(gè)待測(cè)培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。Nb:從一個(gè)或多個(gè)規(guī)定的參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)（該菌落總數(shù)應(yīng)100cfu)要求：非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率最低應(yīng)為0.7,該類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長(zhǎng)；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長(zhǎng)率最低應(yīng)為0.1;每平板（或每試管）的接種水平為10CF

10、5100CFU2）半定量方法半定量方法采用生態(tài)測(cè)量技術(shù)在平板上劃線，平板板連續(xù)劃線區(qū)域得分的總和即為生長(zhǎng)指數(shù)G,G值不應(yīng)超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的允許范圍。3）定性方法定性方法采用劃線法觀察。選擇性將濃度為104CFU/md106CFU/mL的非目標(biāo)菌工作菌株懸浮液接種至選擇培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。定量方法選擇因子Sf：Sf=Do-DSDb:能在參考培養(yǎng)基上生長(zhǎng)至少10個(gè)菌落的最高稀釋度DS:能在測(cè)試培養(yǎng)基上顯示生長(zhǎng)的最高稀釋度要求：非目標(biāo)菌在選擇性培養(yǎng)基上的Sf至少為2;半定量和定量法中，非目標(biāo)菌應(yīng)部分或全部被抑制。生理生化特性（選擇性和特異性）規(guī)定培養(yǎng)基的基本特性，使用一套適

11、當(dāng)?shù)臏y(cè)試菌株對(duì)培養(yǎng)基上的目標(biāo)菌的生理生化特性（菌落形態(tài)、大小等）和非目標(biāo)菌的被抑制程度進(jìn)行測(cè)試。（2）性能評(píng)價(jià)和結(jié)果解釋按照規(guī)定得到的所有測(cè)試菌株的性能均符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基品質(zhì)優(yōu)良；若只有物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)符合規(guī)定，則該批培養(yǎng)基可被接收。表1計(jì)數(shù)用選擇性培養(yǎng)基卬加昆用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株參英培控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)Baird-Parker生長(zhǎng)率37C2448h金黃色葡萄球菌TSAalmPr>0.5黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外有透明SATCC6538/25923帶卬加昆培養(yǎng)條37曲8hAT(CC25l22/873參英培M控制專售特征反應(yīng)VRBG（結(jié)晶紫中性大腸桿菌疑屋里37C

12、24374824hATCC25蹦f73ATC(912228iSA建糧PQ0.5黑色/灰色菌落，周圍為螢"帶區(qū)第鹿B藉色或紅色菌落鼠傷寒沙門菌,紅膽鹽葡萄糖瓊肺PS牛長(zhǎng)率30c24-膿tCCi而里TSA人卜里Pr>0.7具沉淀帶的粉色菌落48hATCC1菌78八L弋加上區(qū)郵催37620hatCC292施/194ATCC25922益酬鹿隼37C48h30C20h枯英麻地菌ATACCC6638；TSA14almPr>0.5m麻做ft娜藤*LL*t.t-4-VRBL（紫紅膽汁乳糖）S9紫但困洛選擇性30C20h糞鏈球菌ATCC29212/19433定性全部抑制特異性30C20h銅

13、綠假單胞菌ATCC27853定性-無色至淺棕色菌落CT-SMA（改良山梨醇麥康凱瓊脂）S、生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌O157:H7ATCC43894/43895,TSAalmPr>0.5透明菌落，表面淡黃棕色，菌落直徑約1mm選擇性37C24h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特異性37C24h大腸桿菌ATCC11775/259定性粉色菌落22BGBLB（煌綠乳糖膽鹽肉湯）L生長(zhǎng)率30C2448h大腸桿菌ATCC25922/8739弗氏檸檬酸桿菌ATCC25922/8739TSA半定量濁度2+,導(dǎo)管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁選擇性糞鏈球菌ATCC29212/19433定性不

14、生長(zhǎng)ECL生長(zhǎng)率44C2448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+,導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁選擇性44C2448h銅綠假單胞菌bATCC27853定性不生長(zhǎng)EC-MUGLS-MUGL/生長(zhǎng)率44C2448h大腸桿菌ATCC25922半定量濁度2+,導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁，產(chǎn)生熒光選擇性44C2448h銅綠假單胞菌ATCC27853定性不生長(zhǎng)乳糖膽鹽發(fā)酹L生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并變黃色選擇性37C24h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性不產(chǎn)氣、仍為紫色LST（月桂酸肉湯）L生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌ATCC25922半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)

15、氣選擇性37C24h福氏志賀氏國(guó)CMCC51572定性表2計(jì)數(shù)用非選擇性培養(yǎng)基基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株經(jīng)支培控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)PCA（平板計(jì)數(shù)瓊脂）S生長(zhǎng)率30C72h大腸桿菌ATCC25922/8739金黃色葡萄球菌ATCC6538TSA定量Pr>0.7枯草芽抱桿菌ATCC6633表3選擇性增菌培養(yǎng)基基用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)EEL生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739業(yè)士M牛Ah里VRBGh>10CFU粉紅至紅色菌落，有或沒有沉淀帶鼠傷寒沙門菌ATCC14028選擇性糞腸球菌ATCC29212全部抑制RVSL生長(zhǎng)率41.5C24h鼠傷寒沙

16、門菌ATCC14028業(yè)士M牛Ah里XLD或其他選擇性培芥基上10CFU腸炎沙門氏菌ATCC13076銅綠假單胞菌ATCC27853選擇性41.5C24h大腸桿菌ATCC25922業(yè)士MTSA上全抑制糞鏈球菌ATCC29212TSA上V10CFUSC（亞硒酸鹽胱氨酸）L生長(zhǎng)率37c24h鼠傷寒沙門菌ATCC14028業(yè)士M牛Ah里XLD或其他選擇性培芥基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）+大腸桿菌ATCC25922+銅綠假單胞菌ATCC27853選擇性37c24h大腸桿菌ATCC25922業(yè)士M牛Ah里TSA上V10CFU糞鏈球菌ATCC29212TTB（四硫磺酸鈉煌綠增菌液）L生

17、長(zhǎng)率37c24h鼠傷寒沙門菌ATCC14028業(yè)士M牛Ah里XLD或其他選擇性培芥基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）傷寒沙口菌CMCC50071選擇性37c24h大腸桿菌ATCC25922TSA上V10CFU堿性蛋白生長(zhǎng)率37c24h霍亂弧菌CMCC16109業(yè)士M牛Ah里TCBSe具他選擇性不同培養(yǎng)基上菌落特征月東水L副溶血性弧菌CMCC20001>10CFU不同（見標(biāo)準(zhǔn)）選擇性37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739福氏志賀氏菌CMCC51572TSA上V10CFU7.5%氯化鈉肉湯L生長(zhǎng)率37C24h金黃色葡萄球菌ATCC6538業(yè)士M牛Ah里B-P平板或其他

18、籍亦基上10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）表4非選擇性增菌培養(yǎng)基卬加昆用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)BHI生長(zhǎng)率37C24h金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12蛋白陳鹽L稀釋2025C45min大腸桿菌ATCC25922Ab里+/-50%菌落數(shù)/至（+/-50%M始菌落數(shù)金黃色葡萄球菌ATCC25923表4非選擇性增菌培養(yǎng)基（續(xù)）卬加昆用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)乳糖蛋白月東肉湯L生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌ATCC25922定性導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣選擇性37C24h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性SCDLP液體培L生長(zhǎng)率37c24h銅綠假單胞菌ATC

19、C27853大腸桿菌ATCC25922金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12液體沙氏培養(yǎng)基L生長(zhǎng)率26c5天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12真菌培L生長(zhǎng)率26c5天白色念珠菌CMCC98001定性濁度12表5選擇性分離培養(yǎng)基卬加昆用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)亞硫酸酸輪瓊脂3S生長(zhǎng)率37c48h鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)(2)菌落呈黑色，有金屬光澤福氏志賀氏國(guó)CMCC51572菌落呈棕色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制(0-1)無典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制(0)-XLDS生長(zhǎng)率37C24h鼠傷寒沙門菌

20、ATCC14028定性良好生長(zhǎng)(2)菌落呈黑色福氏志賀氏國(guó)CMCC51573菌落呈無色選擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制(0-1)無典型菌落糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制(0)-血瓊脂平板S生長(zhǎng)率37c2448h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生長(zhǎng)B溶血，透明溶血環(huán)糞鏈球菌ATCC29212定性良好生長(zhǎng)a溶血，草綠色溶血環(huán)TCBSS生長(zhǎng)率37c2448h霍亂弧菌CMCC16109定性良好生長(zhǎng)菌落較大，呈黃色副溶血性弧菌CMCC20001定性良好生長(zhǎng)菌落較大，呈綠色4號(hào)瓊脂S生長(zhǎng)率37c2448h霍亂弧菌CMCC16109定性良好生長(zhǎng)菌落較大、扁平透明、濕潤(rùn)、中心帶有黑色非O1群霍亂弧菌CMCC17045定性良好生長(zhǎng)菌落較大、扁平透明、濕潤(rùn)、中心帶有黑色選擇性37c24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制(01)表5選擇性分離培養(yǎng)基(續(xù))卬加昆用途培養(yǎng)條件測(cè)試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)伊紅美蘭瓊脂S生長(zhǎng)率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長(zhǎng)菌落紫黑色帶金屬光澤鼠傷寒沙門菌ATCC14028定性良好生長(zhǎng)菌落灰白色半透明福氏志賀氏國(guó)CMCC51