免疫細胞的分離及其表面標志檢測技術(shù)

1、關(guān)于免疫細胞的分離及其表面標志檢測技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習的是第一頁，共40頁第一節(jié) 免疫細胞的分離 一、 外周血單個核細胞分離 二、 淋巴細胞的分離 三、 T細胞和B細胞的分離 四、 T細胞亞群的分離現(xiàn)在學(xué)習的是第二頁，共40頁第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細胞標志及亞群分類淋巴細胞標志及亞群分類 一、一、 細胞表面標志及亞群細胞表面標志及亞群 二、二、 B B細胞表面標志細胞表面標志 三、三、 NKNK細胞表面標志細胞表面標志第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細胞其他的免疫細胞第四節(jié)第四節(jié) 免疫細胞表面標志的檢測及應(yīng)用免疫細胞表面標志的檢測及應(yīng)用 一、一、免疫細胞表面標志的檢測方法免疫細胞表面標志的檢測方法 二、二、 淋巴

2、細胞表面標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義思考題小結(jié) 現(xiàn)在學(xué)習的是第三頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習的是第四頁，共40頁第一節(jié)第一節(jié) 免疫細胞的分離免疫細胞的分離 外周血單個核細胞分離外周血單個核細胞分離 淋巴細胞的分離淋巴細胞的分離 T T細胞和細胞和B B細胞的分離細胞的分離 T T細胞亞群的分離細胞亞群的分離現(xiàn)在學(xué)習的是第五頁，共40頁一、外周血單個核細胞分離一、外周血單個核細胞分離 外周血單個核細胞外周血單個核細胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細胞和單核細胞包括淋巴細胞和單核細胞（monocyte）。）。 Ficoll分離液法主要用于分離

3、外周血中的單個核細胞，分離液法主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。是一種單次差速密度梯度離心的分離法。 現(xiàn)在學(xué)習的是第六頁，共40頁細胞分離基本原理細胞分離基本原理不同細胞密度不同不同細胞密度不同不同細胞表面生物學(xué)特性不同不同細胞表面生物學(xué)特性不同不同細胞表面分化抗原不同不同細胞表面分化抗原不同現(xiàn)在學(xué)習的是第七頁，共40頁不同細胞密度不同不同細胞密度不同人的紅細胞密度為1.093 粒細胞密度為1.092 單個核細胞（淋巴細胞和單核細胞）的密度為1.075-1.090 現(xiàn)在學(xué)習的是第八頁，共40頁不同細胞密度不同現(xiàn)在學(xué)習的是第九頁，共40頁用1.0770.001

4、的分層液可將細胞分離 現(xiàn)在學(xué)習的是第十頁，共40頁密度梯度離心(Ficoll)離心現(xiàn)在學(xué)習的是第十一頁，共40頁二二、淋巴細胞分離、淋巴細胞分離貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續(xù)密度梯度離心）（連續(xù)密度梯度離心）（去單核細胞）現(xiàn)在學(xué)習的是第十二頁，共40頁E E花環(huán)沉降法花環(huán)沉降法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 三、三、T T細胞和細胞和B B細胞的分離細胞的分離現(xiàn)在學(xué)習的是第十三頁，共40頁四、四、T T細胞亞群的分離細胞亞群的分離 親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法 磁性微球分離法磁性微球分離法 熒光

5、激活細胞分離儀分離法熒光激活細胞分離儀分離法 現(xiàn)在學(xué)習的是第十四頁，共40頁熒光激活細胞分離儀分離法 現(xiàn)在學(xué)習的是第十五頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習的是第十六頁，共40頁磁珠大小可以選擇現(xiàn)在學(xué)習的是第十七頁，共40頁大小免疫磁珠分離細胞的特點比較 比較項目大磁珠小磁珠對細胞的影響對細胞造成機械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。對細胞溫和，不影響分離細胞的后續(xù)培養(yǎng)。對流式細胞儀的影響阻塞流式細胞儀的噴嘴，影響散射光?？芍苯由狭魇郊毎麅x檢測，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。需要很強的磁場來分離細胞。 收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時間分離速度快。分離速度慢。

6、分離成本成本低。需要很強的磁場來分離細胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進行?，F(xiàn)在學(xué)習的是第十八頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習的是第十九頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習的是第二十頁，共40頁免疫磁珠法細胞分選過程現(xiàn)在學(xué)習的是第二十一頁，共40頁免疫磁珠細胞分選裝置現(xiàn)在學(xué)習的是第二十二頁，共40頁全自動細胞分選系統(tǒng)現(xiàn)在學(xué)習的是第二十三頁，共40頁流式細胞分析儀現(xiàn)在學(xué)習的是第二十四頁，共40頁第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細胞標志及亞群分類淋巴細胞標志及亞群分類 常用于鑒定和檢測淋巴細胞表面標志是常用于鑒定和檢測淋巴細胞表面標志是簇分化抗原（簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiation

7、differentiation，CDCD）。）。 現(xiàn)在學(xué)習的是第二十五頁，共40頁細胞表面分化抗原（細胞表面分化抗原（CDCD抗原抗原）適用于T、B細胞的分離已知CD抗原細胞亞群的分離未知CD抗原細胞亞群的分離（陰性分選）現(xiàn)在學(xué)習的是第二十六頁，共40頁一、一、T T細胞表面標志及其亞群細胞表面標志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細胞細胞（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+細胞毒性細胞毒性T細胞細胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T細胞細胞（regulatoryTcell,TrorTreg）現(xiàn)在學(xué)習的是第二十七頁

8、，共40頁二、二、B B細胞表面標志細胞表面標志 SmIgSmIg、FcFc受體、補體受體、受體、補體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分子是分子是B B細胞的重要表面標志，其中以細胞的重要表面標志，其中以SmIgSmIg為為B B細胞細胞所特有，是鑒定所特有，是鑒定B B細胞可靠的指標。細胞可靠的指標。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細胞區(qū)分為細胞區(qū)分為B1B1細胞和細胞和B2B2細胞，細胞，B1B1細胞為細胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽性，而雙陽性，而B2B2細胞僅為細胞僅為CD19CD19陽性，陽性，B2B2細胞為通常所指的細胞為通常

9、所指的B B細胞細胞。 現(xiàn)在學(xué)習的是第二十八頁，共40頁三、三、NKNK細胞表面標志細胞表面標志 人類人類NK細胞表面標志主要以細胞表面標志主要以CD16、CD56來認定，臨床上將來認定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細胞認定為淋巴細胞認定為NK細胞。細胞?，F(xiàn)在學(xué)習的是第二十九頁，共40頁T細胞及NK細胞現(xiàn)在學(xué)習的是第三十頁，共40頁第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細胞其他的免疫細胞抗原提呈類細胞表面標志抗原提呈類細胞表面標志現(xiàn)在學(xué)習的是第三十一頁，共40頁第四節(jié)第四節(jié) 免疫細胞表面標志的檢測及應(yīng)用免疫細胞表面標志的檢測及應(yīng)用 免疫細胞表面標志的檢測方法免疫細胞表面標志的檢測方法淋巴細胞表面

10、標志檢測的臨床意義淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義現(xiàn)在學(xué)習的是第三十二頁，共40頁一、免疫細胞表面標志的檢測一、免疫細胞表面標志的檢測抗體致敏細胞花環(huán)法抗體致敏細胞花環(huán)法 免疫細胞化學(xué)法免疫細胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細胞分析法流式細胞分析法 現(xiàn)在學(xué)習的是第三十三頁，共40頁二、淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義二、淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義 淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功能的淋巴細胞表面標志檢測是評價免疫功能的重要指標。重要指標。 對對CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細胞的測定，有助于免疫缺細胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)陷疾病、自身免疫性疾病和

11、移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測。的監(jiān)測。 現(xiàn)在學(xué)習的是第三十四頁，共40頁臨床常見疾病中的T 淋巴細胞的變化 現(xiàn)在學(xué)習的是第三十五頁，共40頁思考題思考題1.1.免疫細胞都包括哪些細胞？為什么要將其分離純化？免疫細胞都包括哪些細胞？為什么要將其分離純化？2.2.淋巴細胞有哪幾類細胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)淋巴細胞有哪幾類細胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？別嗎？3.3.將細胞分離的原理有哪些？各有什么特點？將細胞分離的原理有哪些？各有什么特點？4.4.形態(tài)學(xué)相同的一類細胞為什么還要分亞群？形態(tài)學(xué)相同的一類細胞為什么還要分亞群？5.T5.T細胞和細胞和B B細胞進一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？細胞進一步區(qū)分亞群的

12、依據(jù)是什么？現(xiàn)在學(xué)習的是第三十六頁，共40頁6.6.什么是細胞表面標志？其作用是什么？什么是細胞表面標志？其作用是什么？7.7.細胞表面標志的檢測方法有哪些？細胞表面標志的檢測方法有哪些？8.8.利用細胞表面標志（利用細胞表面標志（CDCD抗原）分離細胞的方法有哪幾抗原）分離細胞的方法有哪幾種？種？9.T9.T細胞、細胞、B B細胞、細胞、NKNK細胞、單核細胞的主要生物標細胞、單核細胞的主要生物標志是什么？志是什么？10.10.淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義是什么？淋巴細胞表面標志檢測的臨床意義是什么？現(xiàn)在學(xué)習的是第三十七頁，共40頁小小 結(jié)結(jié)淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在淋巴細胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對其進行進一步的分類和觀察就不能采要對其進行進一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對其表面標志用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對其表面標志的檢測。常用于鑒定和檢測計數(shù)淋巴細胞的檢測。常用于鑒定和檢測計數(shù)淋巴細胞的表面標志是的表面標志是CDCD抗原。抗原?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十八頁，共40頁進一步區(qū)分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴進一步區(qū)分淋巴細胞亞群可使某一類淋巴細胞的功能趨向