第7節(jié)液相色譜法ppt課件

1、第七章第七章色譜分析法色譜分析法一、高效液相色譜法一、高效液相色譜法 的特點的特點二、流程及主要部件二、流程及主要部件三、影響分離的因素三、影響分離的因素四、高效液相色譜法四、高效液相色譜法 的主要分離的主要分離類型類型第七節(jié)第七節(jié)高效液相色譜法高效液相色譜法液相色譜儀液相色譜儀1）液相色譜儀液相色譜儀2）液相色譜儀液相色譜儀3）液相色譜儀液相色譜儀4）一、高效液相色譜法的特點一、高效液相色譜法的特點 特點：高壓、高效、高速 高沸點、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。二、流程及主要部件二、流程及主要部件1.1.流程流程2.主要部件主要部件(1) 高壓輸液泵高壓輸液泵主要部件之一，壓力：

2、主要部件之一，壓力：150350105 Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力），液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性等特性(2) 梯度淋洗裝置梯度淋洗裝置外梯度外梯度: 利用兩臺高壓輸液泵，利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱

3、?；旌虾筮M(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度內(nèi)梯度: 一臺高壓泵一臺高壓泵, 通過比例通過比例調(diào)節(jié)閥調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。入高壓泵中混合。(3) 進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示：(4) 高效分離柱高效分離柱 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長540 cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。(5) 高效液相色譜檢測器高效液相色譜檢測器 紫外光度檢測器UV）：最小檢測量10-9gmL-1，對流量和溫度的波動不敏感，可用于梯度洗脫。 最常用的檢測器。光電二極管陣列

4、檢測器光電二極管陣列檢測器 光電二極管陣列檢測器：光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，各檢測特個二極管陣列，各檢測特定波長，計算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如下圖。定波長，計算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如下圖。三、影響分離的因素三、影響分離的因素 在高效液相色譜中, 速率方程中的分子擴(kuò)散項B/U較小，可以忽略不計，而只有兩項，即： H = A + C u 故液相色譜H-u曲線與氣相色譜的形狀不同，如下圖： 影響分離的主要因素有流動相的流量、性質(zhì)和極性。影響分離的主要因素有流動相的流量、性質(zhì)和極性。1. 影響分離的因素影響分離的因素流速流速 流速大于0.5 cm/s時, Hu曲線是一段斜率

5、不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實際操作中，流量仍是一個調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。2. 固定相及分離柱固定相及分離柱 氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。 選擇合適的固定相，降低填料粒度可顯著提高柱效，但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。 選擇短柱、細(xì)內(nèi)徑提高分析速度； 研制高效柱填料是一活躍領(lǐng)域。3. 流動相及流動相的極性流動相及流動相的極性 （1可顯著改變組分分離狀況的流動相選擇在液相色譜中顯得特別重要。 液相色譜的流動相又稱為：淋洗液，洗脫劑。 （2親水性固定液常采用疏水性流動相，即流動相

6、的極性小于固定相的極性，稱為正相液液色譜法，極性柱也稱正相柱。 （3若流動相的極性大于固定液的極性，則稱為反相液液色譜，非極性柱也稱為反相柱。組分在兩種類型分離柱上的出峰順序相反。 流動相組成流動相組成 流動相按組成不同可分為單組分和多組分；流動相按組成不同可分為單組分和多組分； 按極性可分為極性、弱極性、非極性；按極性可分為極性、弱極性、非極性； 按使用方式有固定組成淋洗和梯度淋洗。按使用方式有固定組成淋洗和梯度淋洗。常用溶劑常用溶劑: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、乙腈、水。 采用二元或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相采用二元

7、或多元組合溶劑作為流動相可以靈活調(diào)節(jié)流動相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時間。的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時間。選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題：選擇流動相時應(yīng)注意的幾個問題：（1盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累盡量使用高純度試劑作流動相，防止微量雜質(zhì)長期累積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。積損壞色譜柱和使檢測器噪聲增加。（2避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞避免流動相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶劑破壞氧化鋁固定相等。相等。（3試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉

8、試樣在流動相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。淀并在柱中沉積。（4流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)使用紫外流動相同時還應(yīng)滿足檢測器的要求。當(dāng)使用紫外檢測器時，流動相不應(yīng)有紫外吸收。檢測器時，流動相不應(yīng)有紫外吸收。四、四、 高效液相色譜法的主要分離類型高效液相色譜法的主要分離類型1. 1. 吸附色譜液吸附色譜液- -固吸附色譜）固吸附色譜） 以固體吸附劑為固定相，如硅膠、氧化以固體吸附劑為固定相，如硅膠、氧化鋁等，較常使用的是鋁等，較常使用的是5 510m10m的硅膠吸附劑。流的硅膠吸附劑。流動相可以是各種不同極性的一元或多元溶劑。動相可以是各種不同極性的一元或多元溶劑。2. 2.

9、 分配色譜液分配色譜液- -液分配色譜）液分配色譜）早期通過在擔(dān)體上涂漬一薄層固定液制備固定相早期通過在擔(dān)體上涂漬一薄層固定液制備固定相, , 現(xiàn)多為化學(xué)鍵合固定相，即用化學(xué)反應(yīng)的方法通現(xiàn)多為化學(xué)鍵合固定相，即用化學(xué)反應(yīng)的方法通過化學(xué)鍵將固定液結(jié)合在擔(dān)體表面。過化學(xué)鍵將固定液結(jié)合在擔(dān)體表面。3. 3. 離子交換色譜離子交換色譜 固定相為離子交換樹脂，流動相為無機(jī)酸或無機(jī)堿的水溶液。各種離子根據(jù)它們與樹脂上的交換基團(tuán)的交換能力的不同而得到分離。4. 4. 凝膠色譜空間排阻色譜）凝膠色譜空間排阻色譜） 以凝膠為固定相。凝膠是一種經(jīng)過以凝膠為固定相。凝膠是一種經(jīng)過交聯(lián)的、具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和不同孔徑的多聚體交聯(lián)的、具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和不同孔徑的多聚體的通稱。如葡聚糖凝膠、瓊脂糖等軟質(zhì)凝膠；多的通稱。如葡聚糖凝膠、瓊脂糖等軟質(zhì)凝膠；多孔硅膠、聚苯乙烯凝膠等硬質(zhì)凝膠；孔硅膠、聚苯乙烯凝膠等硬質(zhì)凝膠；請選擇內(nèi)容：請選擇內(nèi)容：第一節(jié)第一節(jié) 色譜法概述色譜法概述第二節(jié)第二節(jié) 氣相色譜儀氣相色譜儀第三節(jié)第三節(jié) 色譜理論基礎(chǔ)色譜理論基礎(chǔ)第四節(jié)