生化實驗-血糖的測定

1、血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖：指血液中的單糖：葡萄糖血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖水平：血漿中葡萄糖濃度血糖總維持在恒定水平：血糖總維持在恒定水平： 3.96.7mmol/Lv調(diào)節(jié)血糖水平的激素：胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。v血糖水平異常：高血糖及糖尿??；低血糖臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾臨床：血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)。病的主要依據(jù)?？蒲校涸诖x疾病的研究中，常測定血糖。在科研：在代謝疾病的研究中，常測定血糖。在某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。某些藥物的研究中，也涉及血糖的測定。體液糖的測定項目：體液糖的測定項目：血糖濃度測定口服糖耐量試

2、驗 糖化血紅蛋白試驗糖化血清白蛋白測定胰島素測定C-肽測定等測定測定方法方法無機(jī)化學(xué)法：無機(jī)化學(xué)法： Folin-Wu法法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法有機(jī)化學(xué)法：鄰甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -過氧化物酶法原理過氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 紅色醌式物質(zhì)紅色醌式物質(zhì)505nm分光光度計的原理分光光度計的原理生物化學(xué)的四大研究技術(shù)生物化學(xué)的四大研究技術(shù)：分光光度計的工作原理分光光度計的工作原理朗伯朗伯- -比爾定律比爾定律朗伯定律朗伯定律：A=k1L 比爾定律

3、比爾定律：A=k2C朗伯朗伯-比爾定律比爾定律：如同時考慮液：如同時考慮液層厚度和溶液濃度對吸光度的層厚度和溶液濃度對吸光度的影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度影響，則吸光度與溶質(zhì)的濃度和溶液的厚度的乘積成正比。和溶液的厚度的乘積成正比。 A=KLC 9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-42022-5-42022-5-45/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-42022-5-42022-5-4May-224-May-2212、人亂于心，

4、不寬余請。2022-5-42022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-5-42022-5-42022-5-42022-5-45/4/202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月4日星期三2022-5-42022-5-42022-5-415、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月2022-5-42022-5-42022-5-45/4/202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。2022-5-42022-5-4May 4, 202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。2022-5-420

5、22-5-42022-5-42022-5-4朗伯-比爾定律應(yīng)用A標(biāo)=KC標(biāo)LA樣=KC樣L 標(biāo)準(zhǔn)品法測定未知樣品含量標(biāo)準(zhǔn)品法測定未知樣品含量C樣=A樣A標(biāo)C標(biāo)1. 接通電源，接通電源，調(diào)整波長調(diào)整波長。2. 比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計中比色杯中加入空白及待測樣品，并放入分光光度計中，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的，注意：加入樣品量不超過比色杯體積的2/3。3. 調(diào)模式為調(diào)模式為“透射比透射比”，對空白對照進(jìn)行調(diào)對空白對照進(jìn)行調(diào)“0”（開蓋（開蓋）和調(diào)）和調(diào)“100”（閉蓋）。（閉蓋）。4. 調(diào)模式為調(diào)模式為“吸光度吸光度”，將空白對照調(diào)將空白對照調(diào)“0”，測定待測，測定待

6、測樣品的吸光度值。樣品的吸光度值。（1）取取4支試管，按下表加入試劑支試管，按下表加入試劑: :試劑試劑標(biāo)準(zhǔn)管標(biāo)準(zhǔn)管(ml)測定管測定管1(ml)測定管測定管2(ml)空白管空白管(ml)血清樣品血清樣品0.020.02葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液0.02蒸餾水蒸餾水0.02酶酚混合試劑酶酚混合試劑3.003.003.003.00充分混勻，充分混勻，37 水浴中保溫水浴中保溫20min；冷卻至室溫后冷卻至室溫后，505nm處比色處比色比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管光密度值。比色方法：以空白管調(diào)零，讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管光密度值。（2）計算計算： 依據(jù)依據(jù)朗伯朗伯-比爾定律比爾定律： A=K

7、LC 標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：標(biāo)準(zhǔn)管葡萄糖濃度：5mmol/L 測定管測定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）測定管光密度測定管光密度 標(biāo)準(zhǔn)管光密度標(biāo)準(zhǔn)管光密度5正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液正確使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液應(yīng)占比色皿的應(yīng)占比色皿的2/3。血糖測定應(yīng)在取血后血糖測定應(yīng)在取血后2小時內(nèi)完成，放置太久，血小時內(nèi)完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。酶酚混合液一般現(xiàn)用現(xiàn)配。 補(bǔ)充實驗補(bǔ)充實驗測2-3名同學(xué)早餐后和空腹血糖的水平，并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。1 1、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶-

8、-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法測定血糖的原理。測定血糖的原理。2 2、分光光度計的正確使用。、分光光度計的正確使用。3 3、實驗操作中存在的問題。、實驗操作中存在的問題。葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法原理原理 葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后，可使 Cu2+還原成還原成Cu+ ，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過，后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過比色法測定藍(lán)色化合物，計算出血糖的含量。比色法測定藍(lán)色化合物，計算出血糖的含量。評價評價 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對葡萄糖無特異性，受血中非

9、糖穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對葡萄糖無特異性，受血中非糖還還 原物質(zhì)原物質(zhì)的影響。的影響?？崭拐Ｑ菂⒖贾悼崭拐Ｑ菂⒖贾?4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法過氧化物酶比色法Folin-Wu法法鄰鄰-甲苯胺法甲苯胺法原理原理 葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后，與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿，顏色的深淺與葡萄糖含量堿，顏色的深淺與葡萄糖含量成正比，可通過比色法測得血糖含量。成正比，可通過比色法測得血糖含量。評價評價 結(jié)果較可靠、但鄰結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性

10、。甲苯胺須蒸餾后使用，有毒性。空腹正常血糖參考值空腹正常血糖參考值 3.96.1mmol/L或或70-110mg/dL葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能該法特異性高，反應(yīng)條件溫和，能反映血中葡萄糖的真實含量，且已推廣出試劑盒，反映血中葡萄糖的真實含量，且已推廣出試劑盒，廣泛應(yīng)用與臨床。廣泛應(yīng)用與臨床。 Folin-Wu法：法：該法對葡萄糖無特異性，一切還原物質(zhì)該法對葡萄糖無特異性，一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考物質(zhì)，但仍存在其他非糖還原物質(zhì)，故該法其參考

11、值較其他方法略高。值較其他方法略高。鄰鄰-甲苯胺法：甲苯胺法：該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件，不便于大規(guī)模檢測，且使用的試劑具有毒性，臨床和便于大規(guī)模檢測，且使用的試劑具有毒性，臨床和科研上已很少采用?？蒲猩弦押苌俨捎谩Ｋ伎碱}思考題1、為何不同檢測方法所提供的空腹正常血糖、為何不同檢測方法所提供的空腹正常血糖參考值存在差異？參考值存在差異？ 葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法： 3.96.1mmol/L Folin-Wu法：法： 4.46.7mmol/L 鄰鄰-甲苯胺法：甲苯胺法： 3.96.1mmol/L2、腎上腺素使血糖升高的機(jī)理是什么？能夠、腎上腺素使血糖升高的

12、機(jī)理是什么？能夠升高血糖的激素有哪些？升高血糖的激素有哪些？ 9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.422.5.4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.4*May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請。*Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。22.5.422.5.4*May 4, 202214、抱最大的希望，作最大的努力。2022年5月4日星期三*22.5.415、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5

13、月*22.5.4*May 4, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/4/202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。*22.5.4謝謝大家謝謝大家9、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。22.5.422.5.4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。*5/4/2022 2:27:47 AM11、人總是珍惜為得到。22.5.4*May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請。*Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。22.5.422.5.4*May 4, 202214、抱最大的希望，作

14、最大的努力。2022年5月4日星期三*22.5.415、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。2022年5月*22.5.4*May 4, 202216、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。*5/4/202217、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強(qiáng)不息。*22.5.4謝謝大家謝謝大家2021/4/26309、 人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202210、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2022-5-42022-5-42022-5-45/4/2022 2:27:48 AM11、人總是珍惜為得到。2022-5-42022-5-42022-5-4May-224-May-2212、人亂于心，不寬余請。2022-5-42022-5-42022-5-4Wednesday, May 04, 202213、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2022-5-42022-5-42022-5-42022-5-4