高速逆流色譜法原理與應(yīng)用

1、高速逆流色譜法高速逆流色譜法高速逆流色譜（高速逆流色譜（HSCCCHSCCC）High-speed countercurrent chromatography建立在一種特殊的流體動力學(xué)平衡基礎(chǔ)上，利用螺旋管的高速行星式運(yùn)動產(chǎn)生的不對稱離心力場，實現(xiàn)兩相溶劑體系的充分保留和有效混合及分配，從而實現(xiàn)物質(zhì)在兩相溶劑中高效分離。二、基本原理現(xiàn)代逆流色譜儀器體系：流體靜力學(xué)平衡體系流體靜力學(xué)平衡體系流體動力學(xué)平衡體系（流體動力學(xué)平衡體系（HSCCCHSCCC體系）體系）儀器的兩個特征特征：a 有一個或多個纏繞有多層聚四氟乙烯管的線軸；b 沒有旋轉(zhuǎn)密封接頭，有一個安裝有兩個旋轉(zhuǎn)軸的齒輪傳動裝置，能產(chǎn)生一個

2、可變的離心力場。 通過公轉(zhuǎn)、自轉(zhuǎn)（同步行星式運(yùn)動）產(chǎn)生的二維力場，保留兩相中的其中一相作為固定相；離心力場的強(qiáng)度和方向都可以變化；傾析和混合交替出現(xiàn)，兩相液體在螺旋管柱中總是處在接觸狀態(tài)，沒有死體積存在；流體動力學(xué)CCC中壓力小，固定相保留值大。高速逆流色譜正是利用了兩相的這種單向性分布特征，在高的螺旋管轉(zhuǎn)動速高的螺旋管轉(zhuǎn)動速下，如果從尾端送入首端相，它將穿過尾端相而移向首端，同樣，如果從首端相送入尾相，它將穿過首端相而移向螺旋管的尾端。分離時，在螺旋管內(nèi)首先注入其中的一相(固定相)，然后從合適的一端泵入移動相，讓它載著樣品在螺旋管中無限次的分配。儀器轉(zhuǎn)速越快，固定相保留越多，分離效果越好，且

3、大大地提高了分離速度，故稱高速逆流色譜。 高速逆流色譜與高效液相色譜比較HPLC和HSCCC的固定相體積不同 理論塔板數(shù)的工作范圍不同；到目前為止，逆流色譜的最高分離效率低于5000理論塔板數(shù)。HSCCC中溶質(zhì)可以進(jìn)入并接觸到液態(tài)固定相的整個體積；HPLC中，溶質(zhì)不能進(jìn)入到固體支撐體內(nèi)部，僅涂漬在表面的有機(jī)層的液-固界面 HPLC有過載現(xiàn)象；HSCCC進(jìn)樣體積可達(dá)到柱體積的20%，廣泛用于制備性分離。 HSCCC HSCCC與與HPLCHPLC是互補(bǔ)的分離技術(shù)是互補(bǔ)的分離技術(shù)參數(shù)參數(shù)HSCCCHSCCCHPLCHPLC固定相液體固體機(jī)理液-液分配（簡單）分配、吸附、離子交換、體積排阻等（復(fù)雜）

4、溶質(zhì)與固定相作用與液體固定相的整個體積相接觸在固定相與固體支撐體的界面相互作用上樣量高中等分離效率低高操作容易復(fù)雜費(fèi)用便宜昂貴危險性高速運(yùn)轉(zhuǎn)產(chǎn)生機(jī)械故障安全結(jié)構(gòu)組成結(jié)構(gòu)組成應(yīng)用領(lǐng)域與拓展雙水相逆流色譜在蛋白質(zhì)分離純化中的應(yīng)用離心沉淀色譜在蛋白質(zhì)等分離中的應(yīng)用逆流色譜在手性分離中的應(yīng)用逆流色譜在天然藥物工業(yè)中的應(yīng)用總結(jié)HSCCC利用兩相溶劑體系在高速旋轉(zhuǎn)的螺旋管內(nèi)建立起一種特殊的單向性流體動力學(xué)平衡，其中一相作為固定相，另一相作為流動相，在連續(xù)洗脫過程中能保留大量固定相。由于不需要固體支撐體，物質(zhì)的分離依據(jù)其在兩相中分配系數(shù)不同而實現(xiàn)，避免了因不可逆吸附而引起的樣品失活、損失、變性等，不僅能使樣品全部回收，更能反映其本來的特性，特