化學(xué)發(fā)光免疫分析與其他方法對比

1、免疫學(xué)檢測發(fā)展簡介免疫學(xué)檢測主要是利用抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測的一種手段，由于其可以利用同位素、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等對檢測信號進(jìn)行放大和顯示，因此常被用于檢測蛋白質(zhì)、激素等微量物質(zhì)。免疫分析經(jīng)歷了放射免疫檢驗、熒光免疫檢殮、酶標(biāo)免疫檢驗等不同時期，化學(xué)發(fā)光免疫檢驗是免疫分析發(fā)展的一個新階段,它環(huán)保、快速、確的特點已得到人們的普遍認(rèn)識。因此化學(xué)發(fā)光免疫分析是通往免疫檢驗完美境界的必經(jīng)之路。中國國際(歐美為主)放射免疫法(RIA).興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍普遍使用于縣級以上醫(yī)院；產(chǎn)品處于衰退期；.廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。.興起于20世紀(jì)60年代，現(xiàn)己基本退出臨床應(yīng)用；產(chǎn)品生命周

2、期已終結(jié)；廠商試劑和儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化。酶聯(lián)免疫法(ELISA)興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)普遍使用于各級臨床機構(gòu)，為我國臨床免疫診斷的基本方法；產(chǎn)品處于成熟期；.廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑尚未系列化。興起于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)仍在臨床應(yīng)用；產(chǎn)品處于衰退期；廠商試劑與儀器共同開發(fā)，試劑基本系列化?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法(CLIA).導(dǎo)入于20世紀(jì)90年代，現(xiàn)個別較大醫(yī)院開展個別項目；產(chǎn)品處于導(dǎo)入期或成長期；無廠商開發(fā)生產(chǎn)，完全依賴進(jìn)口興起于20世紀(jì)80年代，現(xiàn)己被臨床普遍使用，成為臨床免疫診斷的支柱方法；產(chǎn)品處于成熟期；廠商試劑與儀器共同開發(fā)，儀器自動化程度高，試劑系列化狀態(tài).化學(xué)發(fā)光免疫分

3、析技術(shù)原理化學(xué)發(fā)光免疫分析（ChemiluminesceneeImmunoassay,CL1AJ是將化學(xué)發(fā)光或生揚發(fā)光體糸與免疫反應(yīng)相結(jié)合,用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標(biāo)記免疫測定技術(shù)。化i學(xué)發(fā)光I是在常溫下由化學(xué)4應(yīng)產(chǎn)生的光的發(fā)射。其機制為禁些化合揚（發(fā)光劑或發(fā)光底揚丿可以利用一個化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的能量使其產(chǎn)物分子或反應(yīng)中間態(tài)分子上升至電子激態(tài)。當(dāng)此產(chǎn)楊分子或中間態(tài)分子衰退至基態(tài)肘,以發(fā)射光子的形式釋放能量（即發(fā)光丿O免疫測（immunoassay）是利用抗原體反應(yīng)來測定標(biāo)本中微量楊質(zhì)的方區(qū)?；瘜W(xué)發(fā)光免疫檢測原理1使抗原或抗體結(jié)合到禁種固相我體蔻面，并保持其免疫活性。2使抗原或抗體與禁種酶連

4、接成酶才示抗原或抗體這種酶標(biāo)抗原或抗體既保霧其免疫活性，又保霧酶的活性。3. 洗滌后加入發(fā)光底物，酶促使發(fā)光底揚發(fā)光，通過專用的儀器檢測光子的數(shù)量，從而反算出未知抗原或抗體的濃度。在化學(xué)發(fā)光免疫分析，其基本原理同酶聯(lián)免疫技術(shù)（ELISA）,底物圖1.2雙抗體夾心法反應(yīng)原理示意圖固相抗體標(biāo)本（含抗原）酶標(biāo)抗體酶標(biāo)境原標(biāo)本（含抗原）圖13競爭法反應(yīng)原理示意圖待測管常采用雙抗體夾心法、競爭法、等反應(yīng)模式，歷史發(fā)展產(chǎn)品的對比:1、化學(xué)發(fā)光與酶免的對比2、化學(xué)發(fā)光與放免的對比3, 化學(xué)發(fā)光與肘間分辯吳光檢測的對比4、化學(xué)發(fā)光的突出優(yōu)點化學(xué)發(fā)光與酶免的對比酶免原理：1使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并

5、保持其免疫活性。 2使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 3洗滌后加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。化學(xué)發(fā)光免疫檢測的靈敏度與可測范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于酶免產(chǎn)品，兼具ELISA法簡便的操作方法與較短的反應(yīng)時間。化學(xué)發(fā)光與酶免的對比表:nrArX酶標(biāo)化學(xué)發(fā)光測量精度定性/半定量測量定量測量人體傷害底物有致癌性無有效期較長長干擾因素較多極少測試項目少多化學(xué)發(fā)光與放免的對比晉鏗製的穩(wěn)定性譽，導(dǎo);試剤盒枇間、內(nèi)需密議:驕野次定標(biāo)'造成痕軌化學(xué)發(fā)光與放免的對

6、比表:放免化學(xué)發(fā)光測量精度較高高人體傷害放射性無有效期較長長干擾因素較多極少測試項目較多多化學(xué)發(fā)光與時間分辨的對比：對i可分辨免疫檢測原理和化學(xué)發(fā)光基本樽，只是標(biāo)記暢改為種土無素，不用發(fā)光底物但包要吒1豐定光源照射，光的歡枚產(chǎn)生st。血住移，并有一個對同漳后以便于檢測歡長改吏后的光孑數(shù)量。1、化學(xué)發(fā)光成本低于對同分辨吳光免疫分析。2、化學(xué)發(fā)光比時間分辦吳丸免疫洪利盒更穩(wěn)走3、化學(xué)發(fā)光免疫分析試?yán)袑y試環(huán)疣年件要求低°4、化學(xué)發(fā)丸不需要外丸源，儀爰可靠性更高化學(xué)發(fā)光與肘間分辯炎光的對比:化學(xué)發(fā)光時間分辯熒光標(biāo)記物酶-發(fā)光底揚兩級放丸稀土富子，如術(shù)穩(wěn)定性穩(wěn)定性非常好影響彼棟記揚的生揚

7、活性與免疫活性靈敏度靈敘稍嘉于化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系接近中性酸性，易引起蛋勺質(zhì)雯性包被技術(shù)不透朗微量孔壁吸附，提嘉分析靈斂度，陣低本底采用透朗微量孔壁吸附，孔壁的透朗度會引起，本底干擾技術(shù)性新技術(shù)，很成熟新技術(shù)，不成熟干擾因素干擾極小家易受內(nèi)外嫄稀土富子的干擾測試項目項目齊全（見試劑報價單）缺少部分項目。如：貧血（葉酸，鐵蛋勺，維生素B12丿化學(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)點：1.靈敏度高：這是CLIA關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達(dá)10-16mol/L(RIA為10-12mol/L)。又如化學(xué)發(fā)光底物(如AMPPD)可檢測出的堿性磷酸酶的濃度比顯色底物要靈敏5X105倍。2.寬的線性動力學(xué)范圍：發(fā)光強度在46個量級

8、之間與測定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度(OD值)為2.0的范圍相比，優(yōu)勢明顯。雖然RIA也有較寬的線性動力學(xué)范圍，但放射性限制了其應(yīng)用。3.光信號持續(xù)時間長：輝光型(glowtype)的CLIA產(chǎn)生的光信號持續(xù)時間可達(dá)數(shù)小時甚至一天。簡化了實驗操作及測量?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析的優(yōu)點:4.分析方法簡便快速：絕大多數(shù)分析測定均為僅需加入一彳申試齊！j（戰(zhàn)復(fù)合試劑）的一步概丸。5.結(jié)果穩(wěn)定、誤差?。簶悠废抵苯幼约喊l(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。6.安全性好及使用期長：在上述優(yōu)點前提下，更免除了使

9、用放射性物質(zhì)。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)CLIA的危害性。有效期可長達(dá)1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰變，一般有效期只有一個月，而酶聯(lián)的底黠膵：豔娜鬍光相比有效期長可以提總結(jié)綜合以上優(yōu)點，目前已有的各種免疫分析尚沒有出其右者，現(xiàn)在國外發(fā)達(dá)國家在CLIA的研究和開發(fā)方面進(jìn)展很快，已有全自動的化學(xué)發(fā)光（閃光型和輝光型）與電化學(xué)發(fā)光免疫分析等系列產(chǎn)品。我國在化學(xué)發(fā)光免疫分析方面的研究還比較落后，這就是我國急需研究和發(fā)展CLIA的原因。RIAMtM<io12gy|測量范>io'測量時間短穩(wěn)定性好安全衛(wèi)生應(yīng)用范圍廣【化學(xué)發(fā)光免疫分析種類】1.直接化學(xué)發(fā)光A卩丫噪酯發(fā)光原理：納米磁

10、珠分離后的叮噪酯標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，彳含企02的強酸、強堿激發(fā)底物的作用下，快速發(fā)出可見7通過光電倍增管進(jìn)行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗0濃度成函數(shù)關(guān)系。特點：發(fā)光過程在5秒內(nèi)完成，激發(fā)發(fā)光程序簡單，測試戈度快，但發(fā)光標(biāo)記物卩丫噪酯在緩沖液中不穩(wěn)定，易水解，I響試劑穩(wěn)定性。代表儀器：拜耳公司的ACS180o【化學(xué)發(fā)光免疫分析種類】B異魯米諾發(fā)光原理：發(fā)光過程和原理與葉噪酯完全相同，但激發(fā)發(fā)光速度更快，在3秒內(nèi)完成整個過程，測試速度最快，而且克服了葉噪酯在緩沖液不穩(wěn)定、易水解的缺點。代表儀器：德國Byk-Sangtec公司的LIAISONC電化學(xué)發(fā)光原理：納米磁珠分離后的三聯(lián)毗噪釘標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物，在三丙胺的作用下，發(fā)生氧化還原反應(yīng)，發(fā)出可見光,通過光電倍增管進(jìn)行光子計數(shù)，相對光強度RLU與待測抗原濃度成函數(shù)關(guān)系。特點：激發(fā)發(fā)光過程復(fù)雜，時間長，每一個發(fā)光過程約需25秒，測試速度慢。代表