[免疫學]實驗1

1、1.免疫血清的制備與應用（一）：家兔皮內(nèi)注射羊紅細胞懸液免疫血清的制備與應用（一）：家兔皮內(nèi)注射羊紅細胞懸液2.吞噬細胞吞噬功能檢測吞噬細胞吞噬功能檢測3.免疫器官的組織免疫器官的組織結構觀察結構觀察 分組、組長 課代表聯(lián)系方式實驗室規(guī)則實驗室規(guī)則1上實驗課時，穿好隔離衣。上實驗課時，穿好隔離衣。2實驗室內(nèi)要保持肅靜和秩序，不得談笑或隨處走動，實驗室內(nèi)要保持肅靜和秩序，不得談笑或隨處走動，少說、少說、 多做、多想多做、多想。3實驗室內(nèi)禁止飲食和吸煙，關閉通訊工具。實驗室內(nèi)禁止飲食和吸煙，關閉通訊工具。4用過的實驗材料，放于指定地點，不得隨意拋置。用過的實驗材料，放于指定地點，不得隨意拋置。5注

2、意節(jié)約實驗試劑，愛護實驗器材（顯微鏡、組織切片的使注意節(jié)約實驗試劑，愛護實驗器材（顯微鏡、組織切片的使用）。用）。6易燃物品（如酒精等）不準接近火源。易燃物品（如酒精等）不準接近火源。7實驗結束后，以小組為單位將實驗臺整理清潔，值日同學打?qū)嶒灲Y束后，以小組為單位將實驗臺整理清潔，值日同學打掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、電等開關是否關好，離開實驗室要關掃好室內(nèi)衛(wèi)生并檢查水、電等開關是否關好，離開實驗室要關好門窗。好門窗。養(yǎng)成良好的習慣養(yǎng)成良好的習慣Part I 免疫血清的制備與應用免疫血清的制備與應用（一一）：）：免疫注射免疫注射【原理原理】 將適當?shù)目乖镔|(zhì)注入動物體內(nèi)，經(jīng)過一定時間將適當?shù)目乖镔|(zhì)注

3、入動物體內(nèi)，經(jīng)過一定時間后，動物血清中可以產(chǎn)生大量的特異性抗體，這種含后，動物血清中可以產(chǎn)生大量的特異性抗體，這種含有特異性抗體的血清稱為免疫血清。有特異性抗體的血清稱為免疫血清。 優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生，主要取決于優(yōu)質(zhì)免疫血清的產(chǎn)生，主要取決于抗原的純度抗原的純度和和免疫原性免疫原性，以及，以及動物的應答能力動物的應答能力。此外，尚需考慮免。此外，尚需考慮免疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時間間隔、有無佐劑疫途徑、抗原劑量、注射次數(shù)、時間間隔、有無佐劑等因素。等因素。抗體（抗體（Ab、溶血素）、溶血素）漿細胞漿細胞B細胞細胞流程：流程：制備抗原制備抗原免疫動物免疫動物采血、分離血清采血、分離血清純化

4、、鑒定純化、鑒定分裝、保存分裝、保存【步驟步驟】1.備皮：家兔背部剪毛。備皮：家兔背部剪毛。2.消毒：碘酒、酒精。消毒：碘酒、酒精。3.抽取抽取0.51.0mL綿羊紅細胞懸液。綿羊紅細胞懸液。4.針頭斜面向上，刺入針頭斜面向上，刺入皮內(nèi)皮內(nèi)后平行進針使針頭沒入，推注后平行進針使針頭沒入，推注0.1ml羊紅細胞懸液。羊紅細胞懸液。56點注射。點注射。5.注射器以及消毒棉球棄掉，將家兔放回籠子。注射器以及消毒棉球棄掉，將家兔放回籠子。Part II 吞噬細胞吞噬功能檢測吞噬細胞吞噬功能檢測 【原理原理】： 機體內(nèi)的吞噬細胞具有吞噬大顆粒異物的特性，受到趨化機體內(nèi)的吞噬細胞具有吞噬大顆粒異物的特性，

5、受到趨化因子的趨化作用可以到達炎癥部位，對細菌等異物進行吞噬和因子的趨化作用可以到達炎癥部位，對細菌等異物進行吞噬和消化。消化。巨噬細胞：大吞噬細胞（長壽）巨噬細胞：大吞噬細胞（長壽）中性粒細胞：小吞噬細胞（短壽）中性粒細胞：小吞噬細胞（短壽）1.動物：小白鼠。動物：小白鼠。2.試驗器材：剪刀、鑷子、注射器、解剖板、瑞氏染試驗器材：剪刀、鑷子、注射器、解剖板、瑞氏染液、載玻片、顯微鏡等。液、載玻片、顯微鏡等。3.抗原：白葡菌菌液?？乖喊灼暇?。【材料材料】Mouse handling and manual restraintIntraperitoneal injection of mous

6、e 1. 取已注射過淀粉肉湯的小白鼠一只，取白葡菌菌液取已注射過淀粉肉湯的小白鼠一只，取白葡菌菌液1ml注注入其入其左下腹腔左下腹腔，輕揉腹部。，輕揉腹部。2. 30min后，將小白鼠拉頸處死，固定，打開腹腔，用玻片后，將小白鼠拉頸處死，固定，打開腹腔，用玻片在暴露的腸管上印片，自然晾干。在暴露的腸管上印片，自然晾干。3. 滴加滴加3滴瑞氏染液于印片上，滴瑞氏染液于印片上，20秒秒后加等量蒸餾水，混勻后加等量蒸餾水，混勻染色染色3min（一直保持濕潤）。自來水沖洗，濾紙吸干。（一直保持濕潤）。自來水沖洗，濾紙吸干。4. 顯微鏡下觀察。顯微鏡下觀察。5. 交回實驗器材，最后將小鼠，玻片棄掉。交回

7、實驗器材，最后將小鼠，玻片棄掉?！静襟E步驟】吞噬有細菌的吞噬細胞吞噬有細菌的吞噬細胞吞噬細胞的百分率吞噬細胞的百分率100個吞噬細胞個吞噬細胞100吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)100個吞噬細胞中所吞噬的細菌總數(shù)個吞噬細胞中所吞噬的細菌總數(shù)1002.計算：計算：1. 巨噬細胞的吞噬現(xiàn)象：油鏡下可見大量巨噬細胞，胞漿巨噬細胞的吞噬現(xiàn)象：油鏡下可見大量巨噬細胞，胞漿內(nèi)數(shù)量不等的藍色細菌。淀粉肉湯已經(jīng)注射內(nèi)數(shù)量不等的藍色細菌。淀粉肉湯已經(jīng)注射23天，游走至天，游走至腸管外的中性粒細胞因為壽命短多已死亡。腸管外的中性粒細胞因為壽命短多已死亡?！窘Y果結果】1. 小鼠的抓法，拉頸處死手法，不能傷害動物；小鼠的抓法，拉頸

8、處死手法，不能傷害動物；2. 右側腹腔注射易傷及肝臟；開腹時正中皮膚剪開，沿腹白線，右側腹腔注射易傷及肝臟；開腹時正中皮膚剪開，沿腹白線，避免傷及血管避免傷及血管；印片時避免印到肝臟上；印片時避免印到肝臟上；3. 瑞氏染液與蒸餾水等量，染液完全覆蓋印跡，并瑞氏染液與蒸餾水等量，染液完全覆蓋印跡，并防止干片防止干片；4. 顯微鏡的使用。顯微鏡的使用。5. 用品放入指定地點用品放入指定地點，注意個人防護。，注意個人防護。【注意事項注意事項】瑞氏染色瑞氏染色 10 40瑞氏染色瑞氏染色 10 40Part 免疫器官的組織結構觀察免疫器官的組織結構觀察 免疫系統(tǒng)：機體執(zhí)行免疫應答和免疫功能的重要系統(tǒng)。

9、免疫系統(tǒng)：機體執(zhí)行免疫應答和免疫功能的重要系統(tǒng)。 免疫器官免疫器官 骨髓、骨髓、胸腺、淋巴結、脾臟胸腺、淋巴結、脾臟等；等； 免疫組織免疫組織 淋巴小結、彌散的淋巴組織等；淋巴小結、彌散的淋巴組織等； 免疫細胞免疫細胞 T細胞、細胞、B細胞、細胞、NK細胞等；細胞等； 免疫分子免疫分子 抗原、抗體、細胞因子等。抗原、抗體、細胞因子等。免疫器官免疫器官法氏囊（法氏囊（Bursa of Fabricius）免疫細胞免疫細胞1.胸腺（胸腺（Thymus）:位于胸腔縱隔上部、胸骨后方，分左右兩葉，青春期后開始緩位于胸腔縱隔上部、胸骨后方，分左右兩葉，青春期后開始緩慢退化。慢退化。胎兒胸腺胎兒胸腺成人胸

10、腺成人胸腺胸腺的結構胸腺小葉胸腺的結構胸腺小葉 皮質(zhì)皮質(zhì) 深皮質(zhì)區(qū)和淺皮質(zhì)區(qū)深皮質(zhì)區(qū)和淺皮質(zhì)區(qū) 胸腺細胞（未成熟胸腺細胞（未成熟T細胞）細胞） 8590% 胸腺上皮細胞（胸腺上皮細胞（TEC） 巨噬細胞（巨噬細胞（M ） 胸腺基質(zhì)細胞（胸腺基質(zhì)細胞（TSC） 樹突狀細胞（樹突狀細胞（DC） 髓質(zhì)髓質(zhì) 較成熟的胸腺細胞較成熟的胸腺細胞 胸腺上皮細胞（胸腺上皮細胞（TEC） 單核巨噬細胞單核巨噬細胞 樹突狀細胞（樹突狀細胞（DC） 胸腺小體（赫氏小體）胸腺小體（赫氏小體）胸腺基質(zhì)細胞（胸腺基質(zhì)細胞（TSC）胸腺的結構胸腺的結構HE 100胸腺小體的結構胸腺小體的結構HE 4002.淋巴結（淋巴結（

11、lymph node）皮質(zhì)區(qū)：皮質(zhì)區(qū)： 初級淋巴濾泡：初級淋巴濾泡： 淺皮質(zhì)區(qū)：淺皮質(zhì)區(qū)： 淋巴濾泡淋巴濾泡 靜止靜止B細胞細胞 （淋巴小結）（非胸腺依賴區(qū)）（淋巴小結）（非胸腺依賴區(qū)） 次級淋巴濾泡：次級淋巴濾泡： 生發(fā)中心，生發(fā)中心， 增殖分化增殖分化B細胞細胞 深皮質(zhì)區(qū)：深皮質(zhì)區(qū)： T細胞，巨噬細胞，內(nèi)皮細胞；細胞，巨噬細胞，內(nèi)皮細胞；（胸腺依賴區(qū)）（胸腺依賴區(qū)） 高內(nèi)皮小靜脈（高內(nèi)皮小靜脈（HEV），淋巴細胞再循環(huán)），淋巴細胞再循環(huán)髓質(zhì)區(qū)：髓質(zhì)區(qū)： 髓索：髓索：B細胞，漿細胞，部分細胞，漿細胞，部分T細胞和細胞和M 髓竇：大量髓竇：大量M 淋巴結的結構淋巴結的結構深（副）皮質(zhì)區(qū)深（副）

12、皮質(zhì)區(qū)淋巴小結淋巴小結被膜下淋巴竇被膜下淋巴竇被膜被膜淋巴結的結構淋巴結的結構HE染色染色 100小結帽小結帽：小淋巴：小淋巴細胞為主細胞為主明區(qū)明區(qū)：中淋巴：中淋巴細胞為主細胞為主暗區(qū)暗區(qū)：大淋巴：大淋巴細胞為主細胞為主淋巴小結的結構淋巴小結的結構-生發(fā)中心生發(fā)中心淋巴結髓質(zhì)的結構淋巴結髓質(zhì)的結構髓索髓索髓竇髓竇淋巴結深皮質(zhì)區(qū)的高內(nèi)皮小靜脈模式圖淋巴結深皮質(zhì)區(qū)的高內(nèi)皮小靜脈模式圖3.脾的基本結構脾的基本結構脾臟的基本結構脾臟的基本結構:白髓白髓脾小體（脾小體（B細胞區(qū)）細胞區(qū)）中央動脈與動脈周圍淋巴鞘中央動脈與動脈周圍淋巴鞘紅髓紅髓邊緣區(qū)（邊緣區(qū)（T、B、M ）脾血竇脾血竇脾索（脾索（B，漿

13、細胞，漿細胞， M ，DC）脾臟的基本結構脾臟的基本結構:紅髓紅髓試驗報告：試驗報告：1.免疫血清的制備與應用：免疫血清制備的原理、注射步驟。免疫血清的制備與應用：免疫血清制備的原理、注射步驟。2.吞噬細胞吞噬功能檢測的原理、步驟及鏡下觀察結果吞噬細胞吞噬功能檢測的原理、步驟及鏡下觀察結果（紅藍鉛筆畫圖）。（紅藍鉛筆畫圖）。 （標注典型結構（標注典型結構 瑞氏染色瑞氏染色 觀察倍數(shù)觀察倍數(shù)1000/400 ） 3.繪制免疫器官（脾臟，胸腺，淋巴結）的鏡下觀察結果繪制免疫器官（脾臟，胸腺，淋巴結）的鏡下觀察結果 （紅藍鉛筆畫圖）。（標注典型結構（紅藍鉛筆畫圖）。（標注典型結構 HE染色染色 觀察倍數(shù)觀察倍數(shù)100）值日：值日： 請班干部排好值日生，清理實驗桌面，清理顯微鏡，關掉顯請班干部排好值日生，清理實驗桌面，清理顯微鏡，關掉顯微鏡