第三節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證

1、第三節(jié) 藥品質量標準分析方法驗證 一、目的 證明所采用的分析方法適合于相應的檢測要求。 二、用途（一）藥品質量標準起草時，分析方法需經驗證。（二）藥物生產方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進行修訂時，分析方法需經驗證。三、需驗證的分析項目 1. 鑒別試驗； 2. 雜質定量或限度檢查； 3. 原料或制劑中有效成分含量測定； 4. 制劑中其它成分（降解產物、防腐劑等）的測定； 5. 溶出度、釋放度等功能檢查中的溶出量等的測試方法。 四、驗證內容 驗證內容有：準確度、精密度（重復性、中間精密度和重現性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性 （一） 準確度（accuracy） 準確度是指用該

2、方法測定的結果與真實值或參考值接近的程度，用百分回收率表示。 測定回收率R（recovery）的具體方法可采用“回收試驗法”和“加樣回收試驗法”。 回收試驗 空白+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M%100AMR空白回收率 加樣回收試驗 已準確測定藥物含量P的真實樣品+已知量A的對照品（或標準品）測定，測定值為M%100APMR 數據要求 規(guī)定的范圍內，至少用9次測定結果評價，如制備高、中、低三個不同濃度樣品各測三次。1. 1. 含量測定方法的準確度含量測定方法的準確度 原料藥原料藥可用已知純度的對照品或可用已知純度的對照品或樣品進行測定，或用本法所得結果與樣品進行測定，或用本法所得

3、結果與已建立準確度的另一方法測定的結果已建立準確度的另一方法測定的結果進行比較。進行比較。 制劑制劑可用含己知量被測物的各組可用含己知量被測物的各組分混合物進行測定，即采用在空白輔分混合物進行測定，即采用在空白輔料中加入原料藥對照品的方法。料中加入原料藥對照品的方法。 如不能得到制劑的全部組分，可如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測物進行測向制劑中加入已知量的被測物進行測定，或與另一個已建立準確度的方法定，或與另一個已建立準確度的方法比較結果。比較結果。 中藥分析的準確度一般用加樣回中藥分析的準確度一般用加樣回收試驗衡量。中藥回收率一般要求在收試驗衡量。中藥回收率一般要求在95

4、95105%105%范圍內，有些方法操作步驟范圍內，有些方法操作步驟繁多時，可要求在繁多時，可要求在9090110%110%范圍內。范圍內。RSDRSD一般在一般在2%2%以內。以內。 2 2雜質定量測定的準確度雜質定量測定的準確度 可向原料藥或制劑中加入已知量可向原料藥或制劑中加入已知量雜質進行測定。如果不能得到雜質或雜質進行測定。如果不能得到雜質或降解產物，可用本法測定結果與另一降解產物，可用本法測定結果與另一成熟的方法進行比較。成熟的方法進行比較。 （二）精密度（二）精密度（precisionprecision） 精精密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻密度是指在規(guī)定條件下，同一個均勻樣品，

5、經多次取樣測定所得結果之間樣品，經多次取樣測定所得結果之間的接近程度。用偏差（的接近程度。用偏差（d d）、標準偏差）、標準偏差( (SDSD) )、相對標準偏差、相對標準偏差( (RSDRSD) )（變異系數，（變異系數，CVCV）表示。）表示。 偏差（d）：測量值與平均值之差xxdi相對偏差允許差：容量分析（中和法、非水滴定法、銀量法、絡合滴定法、重氮化法、氧化還原法）0.3%；重量法 0.5%；氧瓶燃燒法 0.5%；儀器分析 3%、凱氏定氮法 1%00BAB-A00100100平均值平均值A標準（偏）差（SD或S）12nxxSi相對標準（偏）差（RSD），也稱變異系數（CV）%100 x

6、SRSD 1. 1. 重復性重復性(repeatability):(repeatability):在在相同條件下，由同一個分析人員測定相同條件下，由同一個分析人員測定所得結果的精密度；在規(guī)定的范圍內，所得結果的精密度；在規(guī)定的范圍內，至少用至少用9 9次測定結果評價，如制備三次測定結果評價，如制備三個不同濃度樣品各測三次或把被測物個不同濃度樣品各測三次或把被測物濃度當作濃度當作100%100%，至少測，至少測6 6次進行評價。次進行評價。 2. 2. 中間精密度中間精密度 同一實驗室，同一實驗室，不同時間由不同分析人員用不同設不同時間由不同分析人員用不同設備所得結果的精密度。備所得結果的精密度

7、。 3. 3. 重現性重現性(reproducibility)(reproducibility)不不同實驗室，不同分析人員測定結果同實驗室，不同分析人員測定結果的精密度。的精密度。 數據要求：需報告數據要求：需報告RDRD，RSDRSD和可和可信限。信限。 （三）檢測限（三）檢測限（limit of detectionlimit of detection， LODLOD） 檢測限系指試樣在確定的實驗檢測限系指試樣在確定的實驗條件下，被測物能被檢測出的最低條件下，被測物能被檢測出的最低濃度或含量。濃度或含量。 是限度檢驗效能指標，無需定是限度檢驗效能指標，無需定量測定，只要指出高于或低于該規(guī)量測

8、定，只要指出高于或低于該規(guī)定濃度即可。定濃度即可。 1 1非儀器分析目視法非儀器分析目視法 用已知濃度的被測物，試驗出能用已知濃度的被測物，試驗出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。被可靠地檢測出的最低濃度或量。 2 2信噪比法信噪比法 用于能顯示基線噪音的分析方法用于能顯示基線噪音的分析方法（儀器分析方法），是把已知低濃度（儀器分析方法），是把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進行比較，算出能被可靠地檢測出號進行比較，算出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。一般以信噪比（的最低濃度或量。一般以信噪比（S/NS/N）3131或或2121時的相應濃度或注入儀器時

9、的相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。的量確定檢測限。 （1）空白值0時；測定背景10次以上，求出標準差b。將b乘以三倍；在工作曲線上求出3b相對應的濃度Xb；即為方法的檢出值；（2）空白值不等于0；測定背景10次以上，求出標準差b ；將b 乘以三倍；在工作曲線上求出3 b 相對應的濃度Xb ；將求得的對應濃度值加上空白值即得該方法的檢出限。（四）定量限（1imit of quantitation，LOQ） 指樣品中被測物能被定量測定的最低量，結果應具有一定準確度和精密度要求。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為101時相應的濃度或注入儀器的量進行確定，也可按1984年國際純粹和應

10、用化學聯合會(IVPAC)規(guī)定：用儀器所測空白背景響應標準差（SD）的10倍為估計值，再經試驗確定方法的實際測定下限。 儀器分析：通過測定一組空的樣品的背景信號后計算標準差S。以1OS來估算定量限度。（以定量限度制備的樣品來驗證） 非儀器分析：通過分析己知被測物濃度的樣品并確定一個樣品中被測物可被準確和精密測定出的最低濃度（量）。 （五）專屬性（五）專屬性（specificity specificity ） （選擇（選擇性）：性）： 指有其他成分（雜質、降解物、輔料指有其他成分（雜質、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性，能反映該

11、方法在有共定出被測物的特性，能反映該方法在有共存物時對供試物準確而專屬的測定能力，存物時對供試物準確而專屬的測定能力，是指該法用于復雜樣品分析時是否受到相是指該法用于復雜樣品分析時是否受到相互干擾程度的度量?；ジ蓴_程度的度量。 通常通過分析含有加了雜質、降解產物、有關化學物質或安慰劑成分的樣品，將所獲分析結果與未加前述成分之樣品的測試結果進行比較，兩組測試結果之差即專屬性。1鑒別反應 應能與可能共存的物質或結構相似化合物區(qū)別，不含被分析的樣品，以及結構相似或組分中的有關化合物，均應呈負反應。2含量測定和雜質測定 色譜法和其他方法，應附代表性圖譜，亦說明專屬性。圖中應標明各組份的位置，色譜法中的

12、分離度應符合要求。 （六） 線性（Linearity） 在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。 線形通常用最小二乘法處理數據求得回歸曲線的斜率（Slope）來表示。數據要求：至少需要五個濃度考察線形，需提供相關系數、y截距（是檢定的可能偏差）、回歸斜率及方差等參數，應列出回歸方程數和線性圖。 （七）范圍（Range）： 指達到一定精密度、準確度和線性的條件下，測試方法適用的高、低限濃度或量的區(qū)間。 范圍的確定可因測定項目不同而有不同要求： 含量測定范圍為80%-120%；含量均勻度范圍為70%-130%；雜質測定應為被測雜質限度的50%-120%；溶出度應為測定范圍的

13、20%。 （八）（八） 耐用性耐用性 指測定條件稍有變動時，指測定條件稍有變動時，結果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提結果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗提供依據。是衡量實驗室和工作人員之間在供依據。是衡量實驗室和工作人員之間在正常情況下實驗結果重現性的尺度。正常情況下實驗結果重現性的尺度。 分析方法重現性的測定是通過在不同分析方法重現性的測定是通過在不同的實驗室內不同的實驗者對同一樣品的分的實驗室內不同的實驗者對同一樣品的分別測試而獲得的。（獲得的這種再與正常別測試而獲得的。（獲得的這種再與正常檢定下的精密度進行比較，從而確定該法檢定下的精密度進行比較，從而確定該法的耐用性，或稱粗放度）的耐用

14、性，或稱粗放度） （九）應用（九）應用 1. 1. 鑒別試驗除專屬性、耐用性外，其鑒別試驗除專屬性、耐用性外，其它都不要求。它都不要求。 2. 2. 雜質的限量檢查除專屬性、檢測限、雜質的限量檢查除專屬性、檢測限、耐用性外，其它都不要求。耐用性外，其它都不要求。 雜質的含量測定除檢測限外，其它雜質的含量測定除檢測限外，其它都要求。都要求。 3. 含量測定及溶出量測定除檢測限、含量測定及溶出量測定除檢測限、定量限外，其它都要求。定量限外，其它都要求。（十）各種含量測定方法對效能指標的要（十）各種含量測定方法對效能指標的要求求 1. 1. 容量分析法：用原料藥精制品容量分析法：用原料藥精制品( (

15、含量含量99.599.5) )或對照品考察方法的精密度，相或對照品考察方法的精密度，相對標準差一般應不大于對標準差一般應不大于0.20.2；進行回收；進行回收率試驗。率試驗?；厥章室话阍诨厥章室话阍?9.799.7100.3100.3之之間間。 2. 2. UVUV法：用適當濃度的精制品進行法：用適當濃度的精制品進行測定，其測定，其RSDRSD一般不大于一般不大于1 1。制劑的。制劑的測定，回收率一般應在測定，回收率一般應在9898102102之間。之間。 線性：吸光度線性：吸光度A A一般在一般在0.20.20.70.7，濃度點濃度點n n5 5。用濃度。用濃度c c對對A A作線性回歸作線

16、性回歸處理，得一直線方程，處理，得一直線方程，r r應達到應達到0.9999(n0.9999(n5)5)，方程的截距應近于零。，方程的截距應近于零。 3. HPLC3. HPLC法：要求法：要求RSD2RSD2，回收率回收率9898102102之間。之間。 線性范圍：用精制品配制一系線性范圍：用精制品配制一系列標準溶液，濃度點列標準溶液，濃度點n n應為應為5 57 7，用，用濃度濃度c c對峰高對峰高h h或被測物的響應值之比或被測物的響應值之比進行回歸處理，建立回歸方程，進行回歸處理，建立回歸方程，r r應應大于大于0.9990.999，截距應趨于零。，截距應趨于零。99：73. 精密度是

17、指（B） A. 測得的測量值與真值接近的程度 B. 測得的一組測量值彼此符合的程度 C. 表示該法測量的正確性 D. 在各種正常試驗條件下，對同一樣品分析所得結果的準確程度 E. 對供試物準確而專屬的測定能力99x：76精密度是指該法（D） A. 測得的測量值與真值接近的程度 B. 測得的測量值與回收率接近的程度 C. 測量的正確性 D. 測得的一組測量值彼此符合的程度 E. 對供試物準確而專屬的測定能力 96：138在藥物分析中，精密度是表示該法的（BD） A. 測量值與真值接近程度 B. 一組測量值彼此符合程度 C. 正確性 D. 重現性 E. 專屬性 95：106110應要求的效能指標：

18、 A. 檢測限 B. 定量限 C. 兩者均要求 D. 兩者均不要求95：106. 含量測定方法評估（D）95：107. 雜質限量檢查（A）95：108. 雜質定量測定（B）95：109. 溶出度測定（D）95：110. 中間體含量測定（D）97：126藥物雜質檢查所要求的效能指標為（CDE） A. 準確度 B. 精密度 C選擇性 D. 檢測限 E. 耐用性 98：138評價藥物分析所用的測定方法的效能指標有（BCD） A. 含量均勻度 B. 精密度 C. 準確度 D. 粗放度 E. 溶出度例例1155A A精密度精密度 B B定量限定量限C C兩者皆是兩者皆是 D D兩者皆不是兩者皆不是1. 某法測得一組測量值間彼此符合程度（A）2. 測量值和真值接近的程度（D）3. 測定結果的重