自身抗體檢測及應(yīng)用說課材料

1、自身抗體檢測及應(yīng)用 自身抗體自身抗體自身免疫性疾病的重要標(biāo)志自身免疫性疾病的重要標(biāo)志高滴度存在于自身免疫性疾病患者高滴度存在于自身免疫性疾病患者與疾病的活動性相關(guān)性與疾病的活動性相關(guān)性參與免疫病理性改變損傷參與免疫病理性改變損傷常用的檢測方法常用的檢測方法間接免疫熒光法（間接免疫熒光法（IIFIIF）ELISAELISA免疫印跡法免疫印跡法（Western-blotWestern-blot）酶免疫斑點法酶免疫斑點法常檢測的自身抗體常檢測的自身抗體 類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（RFRF） 抗核抗體（抗核抗體（ANAANA） 抗可提取性核抗原抗體（抗可提取性核抗原抗體（ENAENA） 抗中性粒細(xì)胞胞漿

2、抗體（抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCAANCA） 抗環(huán)瓜氨酸抗體（抗環(huán)瓜氨酸抗體（CCPCCP） 抗心磷脂抗體（抗心磷脂抗體（ACAACA） 類風(fēng)濕因子類風(fēng)濕因子 （RHEUMATOID FACTOR, RFRHEUMATOID FACTOR, RF） 抗變性抗變性IgG FcIgG Fc的自身抗體，主要類型是的自身抗體，主要類型是IgMIgM型型 檢測方法：檢測方法： 1. 膠乳顆粒凝集實驗?zāi)z乳顆粒凝集實驗 定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定定性、半定量，敏感性和特異性不高，測定IgM-RF 2. 速率散射比濁法（速率散射比濁法（ARRAY、IMAGE） 定量、準(zhǔn)確、快速，測定定量、準(zhǔn)確、

3、快速，測定IgM-RF 3. ELISA 定量、準(zhǔn)確，可測定不同類型的定量、準(zhǔn)確，可測定不同類型的RF 臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： （1 1）RFRF在多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。在多種自身免疫性疾病患者中均可被檢出。疾病疾病陽性率陽性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度與滴度與RA患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，患者臨床表現(xiàn)呈正相關(guān)，IgM-RF效價效價80IU/ml并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時通常提示并伴有嚴(yán)重關(guān)節(jié)功能障礙時通常提示患者預(yù)后不良。患者預(yù)后不良?？购丝贵w抗核抗體（ANTINUCLEAR ANTIBODYANTINUCLEAR ANTIBO

4、DY，ANAANA）真核細(xì)胞（如真核細(xì)胞（如HEp-2HEp-2細(xì)胞、肝細(xì)胞）的各種細(xì)胞、肝細(xì)胞）的各種細(xì)胞核成分為靶抗原細(xì)胞核成分為靶抗原檢測的自身抗體的總稱。檢測的自身抗體的總稱。ANAANA概念概念 指抗細(xì)胞核成分（指抗細(xì)胞核成分（DNADNA，RNARNA，蛋白質(zhì)和酶），蛋白質(zhì)和酶）的抗體。的抗體。 廣義：抗核酸（廣義：抗核酸（Nucleic acidNucleic acid）和核蛋白）和核蛋白（NucleoproteinNucleoprotein）抗體的總稱）抗體的總稱 某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更某些核抗原成分在核仁和胞漿內(nèi)比核質(zhì)內(nèi)更豐富豐富ANAANA中性粒細(xì)胞DNP(

5、DNA-Histone)+抗DNP+補體均質(zhì)體LE細(xì)胞LE細(xì)胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等結(jié)締組織病，藥物過敏，慢活肝等亦可陽性?？笵NP取代LE細(xì)胞的檢測+間接免疫熒光法間接免疫熒光法+抗原HEp-2HEp-2細(xì)胞肝組織切片細(xì)胞肝組織切片待檢抗體（血清）抗原抗體第二抗體間接免疫熒光法間接免疫熒光法HEp-2細(xì)胞細(xì)胞肝組織切片肝組織切片熒光標(biāo)記抗體熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）病人血清（待檢抗體）分類和命名分類和命名以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗以首先檢出該抗體的患者名字命名，如抗SmSm、 抗抗Sa Sa 抗體等；抗體等；以相關(guān)疾病命名，如抗以相關(guān)疾病命名，如抗Scl-

6、70Scl-70、抗抗SS-ASS-A、抗抗SS-B SS-B 抗體等；抗體等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒以抗原的部位命名，如抗核仁抗體、抗線粒體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；體抗體、抗核膜抗體、抗細(xì)胞漿抗體等；以抗原的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類命名，如抗以抗原的化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分類命名，如抗DNADNA、抗抗RNPRNP、抗組蛋白抗體等?？菇M蛋白抗體等?？购丝贵w檢測方法抗核抗體檢測方法間接免疫熒光法間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence, IIFindirect immunofluorescence, IIF）酶免疫斑點法酶免疫斑點法 ELISA ELISA

7、 免疫印跡法免疫印跡法 （Western-blotWestern-blot） ANA譜條法譜條法ENA斑點法斑點法 細(xì)胞核細(xì)胞核 細(xì)胞漿細(xì)胞漿 細(xì)胞骨架細(xì)胞骨架 細(xì)胞周期細(xì)胞周期 均質(zhì)型均質(zhì)型 核糖體型核糖體型 肌蛋白型肌蛋白型 中心體型中心體型 斑點型斑點型 線粒體型線粒體型 波形纖維蛋白型波形纖維蛋白型 紡綞體型紡綞體型 核仁型核仁型 高爾基體型高爾基體型 細(xì)胞角蛋白型細(xì)胞角蛋白型 紡綞絲型紡綞絲型 著絲點型著絲點型 溶酶體型溶酶體型 原肌球蛋白型原肌球蛋白型 中間體型中間體型 周邊型周邊型 顆粒型顆粒型 紐帶蛋白型紐帶蛋白型 PCNA型型 核點型核點型(dots) 結(jié)蛋白結(jié)蛋白(橋粒橋粒

8、)型型 IIFIIF檢測檢測ANAANA熒光染色模型熒光染色模型斑點型（斑點型（nRNP/SmnRNP/Sm） 高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNP為為MCTD的特征。的特征?？箍筍mSm抗體對抗體對SLESLE具有高度特具有高度特異性。異性。斑點型（斑點型（SSA/SSBSSA/SSB） 抗抗SSA最常出現(xiàn)于最常出現(xiàn)于SS及新生兒紅及新生兒紅斑狼瘡斑狼瘡 （100%）。）?？箍筍SB抗體幾乎僅抗體幾乎僅見于女性，可出現(xiàn)于見于女性，可出現(xiàn)于SS和和SLE。均質(zhì)型均質(zhì)型 抗抗dsDNA抗體抗體 抗組蛋白抗體抗組蛋白抗體(histone)抗抗ssDNA抗體抗體 抗核小體抗體抗核小體抗體(nucleo

9、some) 抗抗dsDNA抗體抗體SLE特異性抗體，與病情活動度相關(guān)。特異性抗體，與病情活動度相關(guān)。周邊型周邊型 可見于可見于膠原病、膠原病、PBC、CAH等患者等患者 核點型（核點型（DOTSDOTS） 見于見于SLE、SS、PBC、風(fēng)濕病。風(fēng)濕病。 抗著絲點型抗著絲點型 PSS局限型標(biāo)志抗體。局限型標(biāo)志抗體?？箍筆M-SclPM-Scl（PM-1PM-1）抗體抗體 見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎見于重疊綜合征（多發(fā)性肌炎PM /皮肌炎皮肌炎 DM / 彌漫性彌漫性PSS ） 抗核糖體抗核糖體P P蛋白蛋白（rib-Prib-P）抗體抗體抗線粒體抗體抗線粒體抗體（AMAAMA）SLE標(biāo)志抗體標(biāo)志

10、抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化標(biāo)志抗體抗抗Jo-1Jo-1抗體抗體抗高爾基體抗體抗高爾基體抗體多發(fā)性肌炎（多發(fā)性肌炎（PM）標(biāo)志抗體標(biāo)志抗體偶見于偶見于SLE和和SS抗肌動蛋白抗體抗肌動蛋白抗體見于自身免疫性慢性活動型肝炎見于自身免疫性慢性活動型肝炎 抗抗ENAENA抗體譜抗體譜ENA (extractable nuclear antigen)ENA (extractable nuclear antigen)： 可提取核抗原的總稱可提取核抗原的總稱臨床常檢測的抗臨床常檢測的抗ENAENA抗體譜主要包括：抗體譜主要包括： 抗抗SmSm 抗抗U1-U1-RNPRNP 抗抗SSAS

11、SA 抗抗SSBSSB 抗抗Jo-1Jo-1 抗抗Scl-70Scl-70 抗抗rib-Prib-P蛋白蛋白 檢測方法檢測方法 雙向免疫擴(kuò)散（雙向免疫擴(kuò)散（IDID） 對流免疫電泳（對流免疫電泳（CIECIE） 免疫印跡法（免疫印跡法（Western-blotWestern-blot） ELISAELISA 酶免疫斑點法酶免疫斑點法 免疫印跡法免疫印跡法 SDS-PAGE電泳電泳轉(zhuǎn)移電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測酶免疫檢測 是一組以是一組以人中性粒細(xì)胞人中性粒細(xì)胞胞漿成分為靶抗胞漿成分為靶抗原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的原，與臨床多種小血管炎性疾病密切相關(guān)的自身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病

12、等自身抗體，對系統(tǒng)性血管炎、炎癥性腸病等疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。疾病的診斷與鑒別診斷具有重要意義。 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies, ANCA） 熒光染色型熒光染色型 靶抗原靶抗原 胞漿型胞漿型(cANCA) 蛋白酶蛋白酶3（PR3） 殺菌殺菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI） 核周型核周型(pANCA) 髓過氧化物酶（髓過氧化物酶（MPO）組織蛋白酶組織蛋白酶G（Cath-G）乳鐵蛋白（乳鐵蛋白（LF）白細(xì)胞彈性蛋白酶（白細(xì)胞彈性蛋白酶（HLE） 非典型型非典型型(aANCA)兼

13、有兩種特性兼有兩種特性 ANCAANCA熒光染色型與靶抗原熒光染色型與靶抗原周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體周邊型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（pANCApANCA）主要見于炎癥性腸病（潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩?。┲饕娪谘装Y性腸?。冃越Y(jié)腸炎和克羅恩?。┌麧{型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體胞漿型抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體(cANCA)(cANCA)主要見于主要見于Wegeners肉芽腫及微小多動脈炎肉芽腫及微小多動脈炎 ANCAANCA臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 髓過氧化物酶（髓過氧化物酶（MPO）與顯微鏡下多血管炎、壞死性新與顯微鏡下多血管炎、壞死性新 月體型腎小球腎炎月體型腎小球腎炎、過敏性肉芽腫性血管炎相關(guān)過敏性肉芽腫性血管炎

14、相關(guān)、殺菌殺菌/通透性增高蛋白（通透性增高蛋白（BPI）主要見于肺部炎癥性疾病主要見于肺部炎癥性疾病 并與長并與長 期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系期慢性綠膿桿菌感染有一定關(guān)系 蛋白酶蛋白酶3（PR3）與與Wegeners肉芽腫（肉芽腫（WG）密切相關(guān)。密切相關(guān)。 僅僅cANCA診斷診斷WG的特異性大于的特異性大于90%，聯(lián)合，聯(lián)合PR3 可超過可超過95%， 活動期幾乎活動期幾乎100%陽性。陽性。 組織蛋白酶組織蛋白酶G (Cath-G) 白細(xì)胞彈性蛋白酶白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)乳鐵蛋白乳鐵蛋白(LF)可見于可見于SLE、IBD、PBC、PSC等等 AKA主要見于主要見于RA，陽性率陽性率3

15、6%59%，特，特異性異性95%99%，其出，其出現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；現(xiàn)可以先于臨床表現(xiàn)；高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的高滴度可預(yù)示較嚴(yán)重的RA類型。類型?？菇堑鞍卓贵w抗角蛋白抗體（AKAAKA） 一組針對含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗一組針對含有磷脂結(jié)構(gòu)抗原物質(zhì)的自身抗體，主要包括體，主要包括抗心磷脂抗體抗心磷脂抗體、抗磷脂酸抗體和、抗磷脂酸抗體和抗磷脂酰絲氨酸抗體。抗磷脂酰絲氨酸抗體。類型：類型：IgG、A、M型，型，IgG型最常見，其次是型最常見，其次是IgM型，型，IgA型與自身免疫性疾病的關(guān)系較小。型與自身免疫性疾病的關(guān)系較小?？沽字贵w抗磷脂抗體（anti-phospholipid antib

16、ody, APLAanti-phospholipid antibody, APLA）檢測方法：檢測方法： 常用常用ELISAELISA臨床應(yīng)用：臨床應(yīng)用： 在在SLESLE中總陽性檢出率達(dá)中總陽性檢出率達(dá)70%80%70%80%，與病情活動顯，與病情活動顯著相關(guān)；著相關(guān)；ACAACA陽性者發(fā)生血管炎、溶血性貧血、心陽性者發(fā)生血管炎、溶血性貧血、心臟及中樞神經(jīng)精神系統(tǒng)損傷的幾率明顯。臟及中樞神經(jīng)精神系統(tǒng)損傷的幾率明顯。 在在RARA患者陽性率為患者陽性率為33%49%33%49%。 ACA ACA陽性是腦出血及腦梗塞的危險因素。陽性是腦出血及腦梗塞的危險因素。 與反復(fù)自然流產(chǎn)和胎兒發(fā)育遲緩有一定

17、的相關(guān)性與反復(fù)自然流產(chǎn)和胎兒發(fā)育遲緩有一定的相關(guān)性 部分自身免疫性疾病中部分自身免疫性疾病中 自身抗體的檢出率自身抗體的檢出率自身免疫性疾病自身免疫性疾病ANAANA陽性率（陽性率（% %）SLE80100MCTD95100RA2040PSS8595PM/DM3050SS7080潰瘍性結(jié)腸炎潰瘍性結(jié)腸炎26慢性活動性肝炎慢性活動性肝炎3040其它風(fēng)濕病其它風(fēng)濕病2050ANAANA在自身免疫性疾病中的檢出率在自身免疫性疾病中的檢出率 疾病類型疾病類型 抗原類型抗原類型陽性率陽性率% %SLE dsDNA 3090 U1-nRNP1540 Sm530 SSA2060 SSB1020 PCNA3

18、核糖體核糖體（rib）520 心磷脂心磷脂2040 新生兒新生兒LE SSA 100藥物誘導(dǎo)藥物誘導(dǎo)LE 組蛋白組蛋白 95 單鏈單鏈DNA80系統(tǒng)性紅斑狼瘡系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE) 抗原類型抗原類型陽性率（陽性率（%) U1-nRNP 95100 單鏈單鏈DNA 2050混合性結(jié)締組織?。ɑ旌闲越Y(jié)締組織?。∕CTDMCTD） 抗原類型抗原類型 陽性率（陽性率（%） IgM-RF 6590抗角蛋白抗體（抗角蛋白抗體（AKA） 3659 單鏈單鏈DNA 8 組蛋白組蛋白 少見少見類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RARA）抗原類型抗原類型陽性率（陽性率（%） SSA 4095 SSB 4095 s

19、sDNA 3060 唾液腺流出道唾液腺流出道 4060 RF 6080原發(fā)性干燥綜合征（原發(fā)性干燥綜合征（SSSS）PSSPSS類型類型相對應(yīng)的抗原相對應(yīng)的抗原 陽性率（陽性率（% %）彌漫型彌漫型 原纖維蛋白原纖維蛋白 510PM-Scl（PM-1）3Scl-702575RNA多聚酶多聚酶4局限型局限型 著絲點著絲點 8095進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥（PSSPSS） 抗原類型抗原類型陽性率（陽性率（%） PM-Scl（PM-1） 8 Jo-1 2535 Mi-1 10 Mi-2 5 Ku（重疊綜合征）重疊綜合征） 3055 單鏈單鏈DNA 4050 PL-7 4 PL-12 3多發(fā)性肌炎多發(fā)性肌炎/ /皮肌炎皮肌炎( (PM/DM)PM/DM)自身免疫性慢性活動性肝炎自身免疫性慢性活動性肝炎(AIH)抗原類型抗原類型陽性率（陽性率（%） 肌動蛋白（肌動蛋白（Actin）4090 ANA(板層素，板層素，SSA等等) 3040 肝腎微粒體（肝腎微粒體（LKM-1） 7可溶性肝抗原（可溶性肝抗原（SLA） 100 線粒體線粒體2型（型（AMA-M2） 510 線粒體線粒體9型（型（AMA-M9） 10原發(fā)性膽汁性肝硬化原發(fā)性膽汁性肝硬化(PBC)抗原類型抗原類型陽性率（陽性率（%）線粒體線粒體2型（型（M2