分子考試docx

1、1. 什么叫基因？何謂基因的新概念？其主要功能是什么？基因是編碼蛋白質(zhì)或RNA分子遺傳信息的基本遺傳單位,，從化學角度看， 基因則是具有特定功能和結(jié)構(gòu)的連續(xù)的脫氧核糖核苷酸序列， 是構(gòu)成染色體的重要組成部分，是構(gòu)成DNA的功能單位。沒有基因就沒有生命，因此機體的生命活動與基因的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)。隨著分子生物學實驗技術(shù)的發(fā)展，通過DNA分子克隆快速準確的核苷酸序列分析、核酸分子雜交等現(xiàn)代實驗手段，使人們能夠從分子水平上研究基因的結(jié)構(gòu)和功能，發(fā)現(xiàn)了移動基因、斷裂基因、重疊基因、假基因等，提出了有關(guān)基因的新概念。功能：基因有控制遺傳性狀和活性調(diào)節(jié)的功能?；蛲ㄟ^復制把遺傳信息傳遞給下一代，并通過控

2、制酶的合成來控制代謝過程，從而控制生物的個體性狀表現(xiàn)?；蜻€可以通過控制結(jié)構(gòu)蛋白的成分，直接控制生物性狀。2. 真核細胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細胞中表達？能，為什么？不能，為什么？不能，因為原核細胞缺乏對真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)，若將含有內(nèi)含子的真核基因移入原核細胞,則原核細胞會把內(nèi)含子也表達出來,就破壞了原有的基因結(jié)構(gòu)。原核生物必須有相應的原核RNA聚合酶可識別原核細胞的啟動子，以催化RNA的合成?；虮磉_是以操縱子為單位，操縱子由數(shù)個相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達載體時必須有1個強的原核啟動子及其兩側(cè)的調(diào)控序列。3. 試述DNA

3、分子的結(jié)構(gòu)及其意義。DNA分子結(jié)構(gòu)的主要特點： DNA分子由兩條鏈組成，這兩條鏈按反向平行方式盤旋成雙螺旋結(jié)構(gòu)。 DNA分子中的脫氧核糖和磷酸交替連接，排列在外側(cè)，構(gòu)成基本骨架；堿基排列在內(nèi)側(cè)； 兩條鏈上的堿基通過氫鍵連接成堿基對，并且堿基配對有一定的規(guī)律：A T，C-G；DNA分子在雙螺旋結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上進一步折疊、扭曲和壓縮形成更緊密的三級結(jié)構(gòu)。意義：DNA分子雙鏈中的四種堿基組合千變?nèi)f化，貯存著生物的遺傳性息，是生物物種多樣性和特異性的遺傳基礎(chǔ)；DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)提示了DNA的復制機制：只需以其中的一條鏈為模版，即可合成復制出另一條鏈。4.試述cDNA文庫的構(gòu)建過程及其意義。意義：通過構(gòu)建cD

4、NA文庫能直接分離到生命活動過程中的一些調(diào)控基因及了解這些基因所編碼的蛋白質(zhì)的相互作用關(guān)系因此cDNA文庫的構(gòu)建是基因克隆的重要方法之一，從cDNA文庫中可以篩選到所需的目的基因，并直接用于該目的基因的表達。它是發(fā)現(xiàn)新基因和研究基因功能的工具。常用載體是質(zhì)粒（噬菌體）。過程：1.制備mRNA 1)取材：mRNA約占總RNA的15，所以應選用目的基因mRNA表達最豐富的組織細胞為材料來源，如獲胰島素基因，由應以胰島細胞為原始生物材料，細胞因子基因應選用經(jīng)抗原或絲裂原刺激培養(yǎng)的淋巴細胞為材料；2)從總的RNA中分離mRNA：將提取的mRNA在寡聚脫氧胸苷酸 oligo(dT) 纖維素中進行親和層析

5、 2.第一股 cDNA合成 1）以O(shè)ligo(dT) 為引物：從模板3末端開始，沿模板的35方向合成, 對于較長的mRNA分子很難得到全長cDNA ；2）隨機引物：以68個核苷酸為隨機引物，從mRNA的不同結(jié)合點合成全長cDNA第一鏈（RNA-DNA）3.第二股cDNA的合成 自身引導法； 置換合成法； 外加引物合成法 4.cDNA與載體連接和導入宿主細胞4. 試述基因組文庫的構(gòu)建過程及其意義。建立基因組文庫的過程就是DNA重組的過程, 包括以下基本步驟： 分離純化基因組DNA, 制備帶有供體全部基因組的酶解DNA片斷。 將分離出的DNA片段與載體連接包裝。 將攜帶基因組DNA片段的噬菌體感染

6、受體細胞（如大腸桿菌）進行擴增，即得到克隆，如果有足夠數(shù)量的克隆，也就說明基因庫中帶有整個基因組遺傳信息，這一群插入基因組片段的克隆群體即為基因組文庫。 用相應的基因探針的分子雜交即可從基因組文庫中篩選出帶有目的基因的克隆, 進而可得到需分離的目的基因。意義：構(gòu)建基因文庫的意義不只是使生物的遺傳信息以穩(wěn)定的重組體形式貯存起來，更重要的是它是分離克隆目的基因的主要途徑。提供全套遺傳信息, 即完整的基因組DNA,可以研究基因組中5端控制基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控序列, 內(nèi)含子的分布和作用, 以及重復序列的數(shù)量分布及大小5. 什么是限制性核酸內(nèi)切酶？限制性核酸內(nèi)切酶，是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷

7、酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。它們主要是從原核生物中分離純化出來的，到目前為止，已經(jīng)從近300種不同的微生物中分離出了約2300種限制性核酸內(nèi)切酶。在限制性核酸內(nèi)切酶的作用下，侵入細菌的“外源”DNA分子被切割成不同大小的片斷，而細菌本身的DNA由于修飾酶（通常是一種甲基化酶）的保護作用，可免受限制酶的降解。由于限制酶的發(fā)現(xiàn)和應用，才使得DNA分子的體外切割成為可能，才使得體外重組DNA技術(shù)的誕生成為可能，使我們有可能對真核染色體基因的結(jié)構(gòu)、組織、表達及進化等問題進行深入的研究。6. 試述雙脫氧末端終止DNA測序法的原理及過程。雙脫氧鏈的末端終止法是F.Sanger于1977年

8、發(fā)明的, 故又稱Sanger雙脫氧鏈末端終止DNA測序法?；驹恚涸趩捂淒NA合成鏈延伸過程中，若以dNTP為原料，新?lián)饺氲拿撗鹾塑账?POH與前一個核苷酸戊糖的3OH以磷酸二酯鍵相連，可使鏈不斷延長，合成準確的DNA互補鏈。若在反應體系中加入ddNTP（23雙脫氧核苷酸），則ddNTP可代替相同堿基的dNTP。盡管能以磷酸二酯鍵方式摻入入DNA，但因參入的ddNTP不具有3OH，下一個核苷酸不能與之連接，使得DNA鏈的合成到此終止。過程：步驟1：單鏈DNA片段與引物退火后進行聚合反應；步驟2：在sanger法中，加入Klenow酶和放射標記的dATP；步驟3：然后分四部進行反應；步驟4：分

9、別加入其余的3中dNTP和加入ddATP、ddTTP、ddGTP和ddCTP其中的一種；步驟5：DNA合成進行至攝入ddNTP后被終止。追加dNTP使未被終止的鏈再延伸以產(chǎn)生更高分子量的DNA。8.試繪圖并說明大引物PCR定點誘變法的過程。P183第一輪PCR擴增產(chǎn)物作為第二輪PCR擴增的大引物。第一輪以引物2和引物3擴增出短片段DNA，引物2含有預先設(shè)計的突變序列。待PCR產(chǎn)物經(jīng)純化后除去原來的引物，然后以上一輪PCR擴增的產(chǎn)物作為大引物，并與引物1一起再對靶基因作第二輪PCR擴增，其PCR產(chǎn)物即為突變的DNA。7. 何謂基因工程的四大里程碑和三大技術(shù)發(fā)明？1944年，Oswald Aver

10、y在美國首次（1928年）報道了肺炎球菌轉(zhuǎn)化實驗，這不僅證明了生物的遺傳物質(zhì)是DNA，而且還證明了DNA可以轉(zhuǎn)移。1953年James Waston和Francis Crick闡明了DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)；遺傳密碼子的破譯；基因轉(zhuǎn)移載體的發(fā)現(xiàn)為基因工程開創(chuàng)了新局面三大技術(shù)發(fā)明：工具酶的發(fā)明；基因合成和測序；PCR基因擴增儀的應用8. 基因工程常用的載體有哪些？其共同特性如何？常用載體主要有5大類：（1）質(zhì)粒，主要指人工構(gòu)建的質(zhì)粒；（2）噬菌體的衍生物；（3）Cosmid(柯斯質(zhì)粒)；(4)單鏈DNA噬菌體M13；(5)動物病毒。 作為基因工程所用的載體，有以下共同特性：在寄主細胞內(nèi)能夠自我復制，即

11、本身是復制子；容易從寄主細胞中分離純化；載體DNA分子中有一段不影響他們擴增的非必需區(qū)域，插在其中的外源基因可以像載體的正常組份一樣進行復制和擴增；有限制性酶切的克隆位點，以便于目的基因的組裝；能賦予細胞特殊的遺傳標記，以便于對導入的重組體進行鑒定和檢測；用于表達目的基因的載體還應具有啟動子（強啟動子）、增強子、SD序列、終止子等。9. 作為理想質(zhì)粒載體的基本條件有哪些？作為理想的質(zhì)粒載體，應具備以下幾個條件（1）能自主復制，即本身是復制子（2）具有一種或多種限制酶的單一切割位點，并在此位點中插入外源基因片段，不影響本身的復制功能；（3）在基因組中有1-2個篩選標記，為寄主細胞提供易于檢測的表

12、型特征，（4）分子量要小，多拷貝，易于操作。10. 什么叫插入失活，舉例說明之？在含某個基因的載體中，將目的基因DNA片段插入該基因，導致該基因的功能失活。如：抗性基因的插入失活篩選，含Tetr和Ampr基因的載體，若將目的基因插入Tetr基因，導致Tetr基因失活，形成重組質(zhì)粒Tets和Ampr。10.如何從所克隆到基因重組體中鑒定目的基因的存在和正確性？篩選方法的選擇和設(shè)計主要依據(jù)載體、目的基因和宿主細菌不同的遺傳學特性和分子生物學特性來進行。DNA重組技術(shù)中常用的篩選和鑒定的方法可分為兩大類：一類是利用宿主細胞遺傳學表型的改變直接進行篩選；另一類是通過分析重組子的結(jié)構(gòu)特征進行鑒定。前者常

13、用抗藥性、營養(yǎng)缺陷型顯色反應和噬菌斑形成能力等遺傳表型來篩選；后者常采用限制性內(nèi)切酶酶切及電泳、探針雜交和核苷酸序列分析來鑒定目的基因的結(jié)構(gòu)。（1）重組子大小鑒別篩選：重組子中裝有一段較大分子量的外源性基因，其分子量明顯比原載體大很多，因此可將提取的重組載體和原載體，用一種限制性內(nèi)切酶消化后，直接進行凝膠電泳，從而據(jù)其電泳特性而初步篩選重組子中是否插入外源基因片段。（2）酶切鑒定：對于篩選出的具有重組子的菌株，經(jīng)小量培養(yǎng)后，再分別提取原載體或重組載體DNA，根據(jù)已知重組時外源基因兩端的酶切位點，用相應的兩種內(nèi)切酶進行酶解，經(jīng)瓊脂糖電泳后，就可以看出載體中是否含有目的基因片段，以及有DNAmar

14、ker條帶對比分析可得知插入基因片段的大小。（3）PCR篩選法：利用能與插入基因片段兩端互補的特異引物，以少量抽提的重組子DNA為模板進行PCR分析，能擴增出特異片段的轉(zhuǎn)化子為攜有目的基因的重組子（4）原位雜交：在培養(yǎng)基平板上的菌落或噬菌斑按照其原來的位置原位不變的轉(zhuǎn)移到濾膜上，并在原位溶菌裂解，DNA變性和用特異探針進行雜交，從而鑒定出含有重組子的菌落或噬菌斑。11. 質(zhì)粒單酶切點的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5-P以抑制DNA的自我環(huán)化。在連接反應中, 具有5-P的目的基因DNA片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒DNA

15、載體通過粘性末端發(fā)生互補連接, 盡管產(chǎn)生的重組DNA分子于連接點含有兩個缺口的開環(huán)分子,盡管在轉(zhuǎn)化時其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉和環(huán), 但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復。12. 如何利用抗性標記基因篩選陽性克隆？抗生素抗性標記篩選；大多數(shù)質(zhì)粒載體均帶有抗生素抗性基因，常見的有抗氨芐西林基因、抗四環(huán)素基因、抗卡那霉素基因等。當帶有完整抗性基因的載體轉(zhuǎn)化無抗性細胞（細菌）后，所有轉(zhuǎn)入載體的細菌都獲得了抗性，能夠在含有該種抗生素的瓊脂平板上生長，并形成菌落，而未被轉(zhuǎn)化的原宿主菌則不能生長?？剐曰虻牟迦胧Щ詈Y選；-半乳糖苷酶（LacZ）基因失活篩選。13. 真核表達調(diào)控的順式作用元件和反式作用

16、因子有哪些？其作用特點是什么？1）順式作用元件包括啟動子、增強子、沉默子、衰減子和終止子等。作用特點：同一DNA序列可被不同蛋白質(zhì)識別；同一蛋白質(zhì)因子可與多種不同DNA序列發(fā)生聯(lián)系，多以蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合后再影響DNA；蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)或DNA-蛋白質(zhì)的結(jié)合，是由構(gòu)象變化實現(xiàn)調(diào)控功能的分子基礎(chǔ)；在反式作用因子的自身生物合成過程中，有較大可變性和可塑性。2）反式作用因子種類多，大多數(shù)有DNA序列結(jié)合特異性，如識別TATAbox的DBP為TFD，可與RNA聚合酶結(jié)合而起轉(zhuǎn)錄起始作用; 識別GCbox的DBP為SP1，可調(diào)控轉(zhuǎn)錄效率，這些都是通用轉(zhuǎn)錄因子。其中有些DBP則具有組織特異性，目前發(fā)現(xiàn)反式作

17、用因子有如下主要作用規(guī)律：同一DNA序列可被不同蛋白質(zhì)識別; 同一蛋白質(zhì)因子可與多種不同DNA序列發(fā)生聯(lián)系，但屬于直接結(jié)合的僅為少數(shù)，多數(shù)是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)先互相結(jié)合，然后再影響DNA；蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)或DNA蛋白質(zhì)的結(jié)合，均導致構(gòu)象上的細微變化，構(gòu)象變化常是實現(xiàn)調(diào)控功能的分子基礎(chǔ)；在反式作用因子的自身生物合成過程中，有相當大的可變性和可塑性。反式作用因子都有與順式作用元件特定的DNA序列結(jié)合的特定結(jié)構(gòu)域。該特定結(jié)構(gòu)域有兩種：通用轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)域，為識別結(jié)合特異DNA序列的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（如：鋅指結(jié)構(gòu)、亮氨酸拉鏈、螺旋轉(zhuǎn)角螺旋、螺旋環(huán)螺旋）；轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的結(jié)構(gòu)域，又稱轉(zhuǎn)錄活化結(jié)構(gòu)域（如酸性螺旋結(jié)構(gòu)域

18、、富含谷氨酰胺結(jié)構(gòu)域、富含脯氨酸結(jié)構(gòu)域）。有些DBP只有兩個氨基酸殘基，不同的結(jié)構(gòu)域均有自己的特征性結(jié)構(gòu)。14. 目的基因表達系統(tǒng)有哪幾種？其特點如何？通常有如下4個宿主表達系統(tǒng)用于基因表達。（1）細菌表達系統(tǒng)。一般采用大腸桿菌（原核生物），但必須在目的基因上（N端）引入起始啟動子（ATG），才能使目的基因由載體調(diào)控轉(zhuǎn)錄mRNA，進而合成目的蛋白。通常表達水平高，不能糖基化，產(chǎn)物穩(wěn)定性差，表達產(chǎn)物不具有天然蛋白質(zhì)構(gòu)型，大多聚積在細菌的包涵體中，產(chǎn)物分離純化較復雜；（2）酵母表達系統(tǒng)。采用啤酒酵母或畢氏酵母，表達水平介于細菌與哺乳動物細胞之間，表達產(chǎn)物接近天然蛋白構(gòu)型，雖能糖基化，但糖基化結(jié)構(gòu)及

19、數(shù)量有一定差異，多數(shù)能分泌到細胞外培養(yǎng)液內(nèi)，分離純化較簡易，無需進行“復性”加工；（3）昆蟲細胞多角體病毒表達系統(tǒng)。是采用對昆蟲細胞敏感的多角體病毒DNA與攜有目的基因的載體質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染昆蟲細胞，通過篩斑可以選擇克隆，分離出重組病毒體，通過感染昆蟲細胞后在細胞內(nèi)大量合成所需的蛋白質(zhì)，表達水平1500mg/L，具有良好的翻譯后修飾功能，表達產(chǎn)物接近天然的蛋白質(zhì)構(gòu)型，但糖基化的結(jié)構(gòu)及數(shù)量稍有差異。產(chǎn)物的抗原性、免疫原性與功能接近天然蛋白；（4）哺乳動物細胞表達系統(tǒng)。常用中國倉鼠卵巢細胞為表達系統(tǒng)，表達水平僅為細菌表達量的5%，但其表達產(chǎn)物更接近于天然蛋白質(zhì)構(gòu)型，有正確的糖基化結(jié)構(gòu)與數(shù)量，通常分泌與胞

20、外培養(yǎng)液內(nèi)，分離純化相對較簡易，無需進行“復性”加工可獲得高活性生物活性產(chǎn)品。15. 基因工程疫苗研究開發(fā)常用的途徑是什么？基因工程疫苗主要包括基因重組活疫苗，基因重組的亞單位疫苗，重組牛痘病毒多價活疫苗和基因修飾減毒活疫苗。其開發(fā)途徑如下： 病 毒細 菌 寄生蟲基因重組 活疫苗 體外基因重組 cDNA或 基因組DNA 抗原 表達 分子克隆 減毒株重建基因修飾減毒活疫苗基因工程亞單位疫苗 痘 苗 病毒插入基因工程多價活疫苗16. 基因治療展望和應用如何？ 盡管基因治療目前還存在著許多問題，但它是人類治療疑難疾病的新方法、新技術(shù)，隨著研究和應用的不斷發(fā)展、不斷深入，技術(shù)不斷完善成熟，基因治療將會

21、在人類常見病和多發(fā)病及疑難病的有效治療中發(fā)揮巨大作用，許多原來視為“不治之癥”的疾病將可運用這一先進技術(shù)得到治愈，其應用前景極為廣闊：遺傳性疾?。?如ADA缺乏引起的嚴重聯(lián)合免疫缺陷癥（SCID）、鐮刀狀貧血、血友病、地中海貧血、帕金森氏癥、苯丙酮尿癥等。 惡性腫瘤：采用反義技術(shù)抑制和封閉癌基因，也可增補抑癌基因的作用。常用基因修飾的TIL（tumor infiltrating lymphocyte）回體法、基因修飾的腫瘤細胞、自殺基因的應用。病毒性疾?。?肝炎、AIDS等，應用基因轉(zhuǎn)導分泌抗病毒因子或用反義技術(shù)封閉病毒基因的表達。17.有哪幾種反義核苷酸基因失活療法？簡述其原理。1，將特異的

22、反義基因重組到表達載體上，導入靶細胞中轉(zhuǎn)錄出反義RNA， 形成雙鏈RNA,阻礙基因的翻譯。2，人口合成寡聚脫氧核糖核酸經(jīng)過化學修飾導入細胞，與mRNA與 DNA結(jié)合，形成RNA/DNA雜鏈或DNA核苷酸三聚體，影響基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄。3，特異性的核酸，根據(jù)癌基因設(shè)計出特異的“錘頭”或“發(fā)夾”結(jié)構(gòu)，它能夠催化切割，降解異常表達基因的mRNA而影響基因的翻譯。原理：反義RNA是一種與mRNA互補的RNA分子，它是雙鏈DNA中無意義鏈轉(zhuǎn)錄的RNA，因此腫瘤癌基因活化表達的mRNA的起始翻譯部位就會被相應的反義RNA互補結(jié)合形成RNA/RNA雙鏈體，進而就阻止了核糖體與后動子結(jié)合，或阻止核糖體mRNA上

23、移，以抑制mRNA的翻譯，起到了抑癌基因過高表達癌蛋白的效果。17. 何謂動物克隆技術(shù)？有何應用價值？動物克隆技術(shù)是核移植的一種無性繁殖法，把經(jīng)過處理的成年動物體細胞和另一個動物的去核卵細胞進行細胞融合，短期培養(yǎng)以后形成胚胎細胞，再植入借腹懷孕的寄養(yǎng)的母體子宮內(nèi)，使發(fā)育成提供體細胞遺傳的那只動物的克隆。應用價值：克隆技術(shù)是研究發(fā)育生物學的有力工具。動物克隆技術(shù)是畜牧業(yè)繁育優(yōu)良品種的有效手段?？寺〖夹g(shù)用于生物反應器及異種移植器官的制備。把動物克隆技術(shù)用于拯救瀕危動物?？傊寺〖夹g(shù)是人們探索生命發(fā)展規(guī)律而產(chǎn)生的技術(shù)；高等動物體細胞克隆的成功是生物科學技術(shù)的重大突破；在生命科學研究中，增加了人們認

24、識生命和改造生命的手段。盡管克隆技術(shù)還不成熟，還存在這樣或那樣的問題；但鑒于該技術(shù)的廣闊應用前景和巨大的潛在經(jīng)濟價值，各國政府都十分重視克隆技術(shù)的研究，加大了研究經(jīng)費的投入。可以確信，隨著技術(shù)的不斷改進和研究的不斷深入，克隆技術(shù)在推動經(jīng)濟發(fā)展和提高人們生活水平方面將展現(xiàn)其巨大潛能。18. PCR基本原理PCR是在試管中進行的DNA復制反應，基本原理是依據(jù)細胞內(nèi)DNA半保留復制的機理，以及體外DNA分子于不同溫度下雙鏈和單鏈可以互相轉(zhuǎn)變的性質(zhì)，人為地控制體外合成系統(tǒng)的溫度，以促使雙鏈DNA變成單鏈，單鏈DNA與人工合成的引物退火，然后耐熱DNA聚合酶以dNTP為原料使引物沿著單鏈模板延伸為雙鏈D

25、NA。PCR全過程每一步的轉(zhuǎn)換是通過溫度的改變來控制的。需要重復進行DNA模板解鏈、引物與模板DNA結(jié)合、DNA聚合酶催化新生DNA的合成，即高溫變性、低溫退火、中溫延伸個步驟構(gòu)成PCR反應的一個循環(huán)，此循環(huán)的反復進行，就可使目的DNA得以迅速擴增。DNA模板變性：模板雙鏈DNA 單鏈DNA，94。退火：引物單鏈DNA 雜交鏈，引物的Tm值。引物的延伸：溫度至70 左右， Taq DNA聚合酶以種dNTP為原料，以目的DNA為模板，催化以引物末端為起點的53DNA鏈延伸反應，形成新生DNA鏈。新合成的引物延伸鏈經(jīng)過變性后又可作為下一輪循環(huán)反應的模板PCR，就是如此反復循環(huán)，使目的DNA得到高效

26、快速擴增。14、原核生物復制中所涉及酶的種類及作用。 （1）拓撲異構(gòu)酶：通過切斷并連接DNA雙鏈中的一股或雙股，改變DNA分子拓撲構(gòu)象，避免DNA分子打結(jié)、纏繞、連環(huán)，在復制的全程中都起作用。其種類有：拓撲異構(gòu)酶I和拓撲異構(gòu)酶II，拓撲異構(gòu)酶I能切斷DNA雙鏈中一股并再連接斷端，反應不需ATP供能；拓撲異構(gòu)酶II能使DNA雙鏈同時發(fā)生斷裂和再連接，需ATP供能，并使DNA分子進入負超螺旋。 （2） 解螺旋酶： DNA進行復制時，需親代DNA的雙鏈分別作模板來指導子代DNA分子的合成，解螺旋酶可以將DNA雙鏈解開成為單鏈。大腸桿菌中發(fā)現(xiàn)的解螺旋酶為DnaB。 （3） 單鏈結(jié)合蛋白（SSB）：在復

27、制中模板需處于單鏈狀態(tài)，SSB可以模板的單鏈狀態(tài)并保護模板不受核酸酶的降解。隨著DNA雙鏈的不斷解開，SSB能不斷的與之結(jié)合、解離。 （4） 引物酶： 是一種RNA聚合酶，在復制的起始點處以DNA為模板，催化合成一小段互補的RNA。DNA聚合酶不能催化兩個游離的dNTP聚合反應，若沒有引物就不能起始DNA合成。引物酶能直接在單鏈DNA模板上催化游離的NTP合成一小段RNA，并由這一小段RNA引物提供3-OH， 經(jīng)DNA聚合酶催化鏈的延伸。 （5） DNA聚合酶：是依賴DNA的DNA聚合酶，簡稱為DNA pol，以DNA為模板，dNTP為原料，催化脫氧核苷酸加到引物或DNA鏈的3-OH末端，合成

28、互補的DNA新鏈，即53聚合活性。原核生物的DNA聚合酶有DNA polI、DNA pol II和DNA pol III，DNA pol III是復制延長中真正起催化作用的，除具有53聚合活性，還有3 5 核酸外切酶活性和堿基選擇功能，能夠識別錯配的堿基并切除，起即時校讀的作用；DNA pol I具有53聚合活性、3 5和53核酸外切酶活性，53核酸外切酶活性可用于切除引物以及突變片段，起切除、修復作用。另外，klenow片斷是DNA pol I體外經(jīng)蛋白酶水解后產(chǎn)生的大片段，具有DNA 聚合酶和3 5外切酶活性，是分子生物學的常用工具酶。DNA pol II 在無DNA pol I和DNA

29、pol III時起作用，也具有53和3 5 核酸外切酶活性。 （6） DNA連接酶：DNA連接酶用于連接雙鏈中的單鏈缺口，使相鄰兩個DNA片段的3-OH末端和5-P末端形成3,5磷酸二酯鍵。DNA連接酶在DNA復制、修復、重組、剪接中用于縫合缺口，是基因工程的重要工具酶。3試述DNA復制過程，總結(jié)DNA復制的基本規(guī)律。 以Ecoli為例，DNA復制過程分三個階段；起始：從DNA上控制復制起始的序列即起始點開始復制，形成復制叉，復制方向多為雙向，也可以是單向，若以雙向進行復制，兩個方向的復制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能從無到有合成新鏈，所以DNA復制需要有含3-OH的引物，引物由含有引物

30、酶的引發(fā)體合成一段含3一10個核苷酸的RNA片段；延長：DNA復制時，分別以兩條親代DNA鏈為模板，當復制叉沿DNA移動時，以親代35鏈為模板時，子鏈的合成方向是5'3'，可連續(xù)進行，以親代53鏈為模板時，子鏈不能以35方向合成，而是先合成出許多53方向的岡崎片段，然后連接起來形成一條子鏈；終止：當一個岡崎片段的3'-OH與前一個岡崎片段的5-磷酸接近時，復制停止，由DNA聚合酶I切除引物，填補空隙，連接酶連接相鄰的DNA片段。 DNA復制時，由DNA解旋酶(又稱解鏈酶)通過水解ATP獲得能量來解開DNA雙鏈，并沿復制叉方向移動，所產(chǎn)生的單鏈很快被單鏈結(jié)合蛋白所覆蓋，防

31、止DNA的變性并保護其單鏈不被降解，復制叉前進過程中，雙螺旋產(chǎn)生的應力在拓撲異構(gòu)酶作用下得到調(diào)整。 DNA復制基本規(guī)律：復制過程為半保留方式；原核生物單點起始，真核生物多點起始，復制方向多為雙向，也有單向；復制方式呈多樣性，(直線型、Q型、滾動環(huán)型等)；新鏈合成需要引物，引物RNA長度般為幾個10個核苷酸，新鏈合成方向5 3，與模板鏈反向，堿基互補；復制為半不連續(xù)的，以解決復制過程中，兩條不同極性的鏈同時延伸問題，即條鏈可按5 3方向連續(xù)合成稱為前導鏈，另一條鏈先按5 3方向合成許多不連續(xù)的岡崎片段(原核生物一般長1000-2000個核苷酸，真核生物一般長100-200個核苷酸)，再通過連接酶

32、連接成完整鏈，稱后隨鏈，且前導鏈與后隨鏈合成速度不完全致，前者快，后者慢；復制終止時，需切除前導鏈、岡崎片段的全部引物，填補空缺，連接成完整DNA鏈；修復和校正DNA復制過程出現(xiàn)的損傷和錯誤，以確保DNA復制的精確性。（4） 工具酶是什么？常用的工具酶有哪些？工具酶（tool enzymes） ：指能用于DNA和RNA分子的切割、連接、聚合、反轉(zhuǎn)錄等有關(guān)的各種酶系統(tǒng)。工具酶的種類:1.限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonadease)【、型它們識別與切割順序不在一個地方，不產(chǎn)生特異性的DNA片段，與基因工程意義不大。型也就是基因工程說到的限制酶核酸內(nèi)切酶，型酶分子量小，僅需Mg

33、2+作為催化反應的輔因子，識別與切割位點相同，產(chǎn)生特異的DNA片段。同裂酶:指來源不同但識別相同靶序列的核酸內(nèi)切酶。同裂酶進行同樣的切割，產(chǎn)生同樣的末端。但有些同裂酶對甲基化位點的敏感性不同。同尾酶:指來源不同、識別靶序列不同但產(chǎn)生相同的粘性末端的核酸內(nèi)切酶】、 DNA連接酶（DNA ligase)【催化有互補順序的兩個dsDNA分子的粘性末端或平頭末端3-OH、5-P連接作用?！?、逆轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)逆轉(zhuǎn)錄酶是一種多功能酶，它的酶活性有：逆轉(zhuǎn)錄酶：以mRNA為模板合成cDNA；DNA依賴DNApol：以ssDNA為模板，3-OH DNA片段為引物，合成DNA

34、鏈。RnaseH ：外切RNA酶活性，底物是RNADNA雜交分子RNA鏈，有兩種：53外切RNA，稱53外切RNA酶； 35外切RNA，稱35外切RNA酶，也稱RnaseH。、DNA聚合酶(DNA polymerase) 5 3 聚合活性； 3 5 外切酶活性； 在無dNTP時，可以從任何3 -OH端外切； 在只有一種dNTP時，外切至互補核苷暴露時為止； 在有4種dNTP均存在時，聚合酶活性占主導地位。、核酸酶(nuclease) 降解ssDNA或ssRNA形成5p末端的單或寡核苷酸，對DNA活性強于>RNA; 中量S1可從切口或小缺口處降解dsDNA; 極大量的S1才能降解dsDNA

35、或DNA-RNA雜交鏈，原因是后者對S1降解有抗性，所以S1又稱單鏈特異的核酸酶。、末端轉(zhuǎn)移酶 催化一個單核酸（dNTP）加到另一個DNA分子的3OH末端； 平端或帶延伸3OH末端的dsDNA需要Co2存在才能作模板，(terminal transferase)、堿性磷酸酶 去除DNA、RNA和dNTP的5磷酸根； 去除5p ，防止DNA片段或載體自身環(huán)化。 32p標記5p末端前，先用其去除DNA或RNA上的5p(BAP或CIP)。一、名詞解釋：1. 移動基因（movable gene）：又叫轉(zhuǎn)位因子（transposable elements）,由于它可以在染色體基因上移動，甚至可以在不同染

36、色體間躍遷，故又稱跳躍基因。2. 斷裂基因（Split gene）：在真核細胞中的核苷酸序列中間插入與氨基酸編碼無關(guān)的DNA間隔區(qū)段，使一個有功能的結(jié)構(gòu)基因分隔成不連續(xù)的若干區(qū)段，將該間隔區(qū)段的DNA片斷稱為斷裂基因。3. 重疊基因(overlapping genes)：不同基因的核苷酸序列有時為相鄰兩個基因共用，將核苷酸彼此重疊的兩個基因稱為重疊基因。4. 假基因(gene cluster)：在基因序列中除了有正常的功能基因之外，還有無表達功能的畸變核苷酸序列片斷，稱為假基因。5. 同尾酶：即識別順序不同，但酶切后產(chǎn)生同樣黏性末端的兩種限制性核酸內(nèi)切酶。6. 質(zhì)粒（plasmid）：是一種裸

37、露的、結(jié)構(gòu)比病毒簡單的、有自主復制能力的DNA（少數(shù)為RNA）分子。7. 柯斯（COS）質(zhì)粒：Cosmid，黏性質(zhì)粒，是一種用基因工程技術(shù)組建的特殊大腸桿菌質(zhì)粒，它帶有噬菌體的Cos位點和整個pBR322的DNA順序。8. 基因組文庫：是指包含有細胞全部基因組DNA的克隆株，這種克隆株群體稱基因組文庫。9. cDNA文庫：是指包含著細胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合稱為該組織或細胞的cDNA文庫。10. 轉(zhuǎn)化transformation：將質(zhì)粒等外源DNA制劑引入細胞的過程，稱為轉(zhuǎn)化。11. 轉(zhuǎn)染transfection：病毒（含噬菌）的DNA及其重組子導入受體細胞稱轉(zhuǎn)染。12. 轉(zhuǎn)導tr

38、ansduction：特指以噬菌體顆粒為媒介轉(zhuǎn)移遺傳物質(zhì)的過程。13. 啟動子：啟動子是起動基因轉(zhuǎn)錄所必需的一段DNA順式調(diào)控元件 ，位于轉(zhuǎn)錄起始點上游，是DNA鏈上一段能與RNA聚合酶特異結(jié)合并能啟動mRNA合成的序列。14. 起始密碼子：規(guī)定多肽鏈的第一位氨基酸的密碼子為起始密碼子。15. 終止子：是與基因轉(zhuǎn)錄終止有關(guān)的DNA序列，是位于一個基因編碼區(qū)下游提供終止信號的DNA序列，它可以被RNA聚合酶識別并發(fā)出停止mRNA合成的信號。16. 粘性末端：是指DNA分子在限制酶切割后產(chǎn)生一條鏈多出幾個堿基的互補對稱的凸出末端，若5凸出稱5黏性末端。17. 終止密碼子：使蛋白質(zhì)合成終止的密碼子，

39、分別為UAA、UAG、UGA。18. 鋅指結(jié)構(gòu)：是由兩個半胱氨酸（Cys）殘基和兩個組氨酸（His）殘基通過位于中心的鋅離子結(jié)合成的一個穩(wěn)定的指狀結(jié)構(gòu)，并以鋅輔基螯合形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)作為活性單位，在指狀突出區(qū)表面暴露的殘基及極性氨基酸與DNA有關(guān)。19. 載體vector：是指可以攜帶目的基因進入宿主細胞的運載工具。20. PCR：聚合酶鏈式反應，是體外酶促合成、擴增DNA片段的一種方法，該方法可以使目標DNA在幾個小時內(nèi)擴增千百萬倍，為最常用的分子生物學技術(shù)之一。21. Genomic DNA：基因組DNA，又稱染色體DNA。同一物種的基因組DNA總是恒定的。22. Intron：內(nèi)含子，在前

40、體mRNA切割加工過程中，被剪除掉的相應的DNA部分，叫做間隔序列或稱內(nèi)含子，最終不存在于成熟RNA分子中。23. Exon：表達子，前體mRNA加工過程中被保留下來的相應的DNA分子叫做編碼序列或表達子,實際上就是有功能的結(jié)構(gòu)基因DNA序列。24. 轉(zhuǎn)錄Transcription：是遺傳信息由DNA轉(zhuǎn)換到RNA的過程，作為蛋白質(zhì)生物合成的第一步，轉(zhuǎn)錄是mRNA以及非編碼RNA（tRNA、rRNA等）的合成步驟。25. 翻譯：在蛋白質(zhì)合成期間，將存在于mRNA上代表一個多肽的核苷酸殘基序列轉(zhuǎn)換為多肽鏈氨基酸殘基序列的過程。26. 順式作用元件（CAE）：真核生物結(jié)構(gòu)基因上游的調(diào)控區(qū)，這些區(qū)域存

41、在特有的相似或一致的序列，這些序列稱為順式作用元件。27. 反式作用因子（TAF）：真核生物結(jié)構(gòu)基因上游的調(diào)控區(qū)存在有的能與順式作用元件相結(jié)合的、對基因表達起調(diào)控作用的DNA結(jié)合蛋白質(zhì)。大部分非組蛋白的DNA結(jié)合蛋白（DBP）是反式作用因子。28. transcription factor轉(zhuǎn)錄因子，反式作用因子是一組核內(nèi)蛋白質(zhì)，能直接或間接地與DNA上各種順勢作用元件的特定序列結(jié)合而發(fā)揮調(diào)控作用，激活或阻遏基因表達，反式作用因子為DNA結(jié)合蛋白（DBP），又稱轉(zhuǎn)錄因子。29. 瞬時表達：含病毒復制子的病毒載體可攜帶外源基因?qū)胨拗骷毎诩毎麅?nèi)不與細胞染色體整合，是獨立于染色體以外，在進行復制

42、的同時，而使外源性基因獲表達。外源性染色體表達后存在的時間不長，為瞬時表達。30. 穩(wěn)定表達：病毒載體攜帶外源基因?qū)胨拗骷毎螅蓪⑼庠椿蛘系郊毎旧w上，且可隨細胞轉(zhuǎn)錄表達和傳代。31. 亮氨酸拉鏈：AP-1，for，jun等DBP具有亮氨酸的拉鏈，在蛋白質(zhì)C末端約有30個氨基酸組成，為兩組走形平行、帶亮氨酸的-螺旋形成的對稱二聚體。每2個亮氨酸之間相隔6個氨基酸，這樣在-螺旋的每2圈就出現(xiàn)了一個亮氨酸，排成一排，使2個-螺旋的蛋白質(zhì)分子之間形成一條拉鏈。32. tk基因：胸腺嘧啶核苷激酶(thymidine kinase，TK)基因，它可將抗病毒藥物核苷類似物Ganciclovir(

43、GCV)磷酸化，這種磷酸化產(chǎn)物可以阻斷DNA的合成而使細胞死亡。是比較常用的自殺基因。33. 基因突變gene mutation：是基因組DNA分子在結(jié)構(gòu)上發(fā)生堿基對組成或排列順序的改變（通常它只涉及基因中部分序列的變化），并引起個體表型的改變，而使生物體發(fā)生遺傳性變異。34. 無義突變：是指某個堿基的改變可使某種氨基酸的密碼子突變?yōu)榻K止子。35. 錯義突變：是指堿基序列的改變引起了產(chǎn)物氨基酸的序列改變。36. 同義突變：堿基被替代后，沒有改變產(chǎn)物氨基酸序列，這是與密碼子的簡并性有關(guān)，因此這種突變不會產(chǎn)生突變效應。37. 限制性核酸內(nèi)切酶：是一類能夠識別雙鏈DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并

44、由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。38. 基因拼接：將有共同限制性內(nèi)切酶切點的基因連接起來形成多種基因雜合體。39. 基因缺失：基因缺失突變是指基因組DNA鏈中缺失1個或數(shù)個甚至小片斷的堿基對。這種突變也可引起其后DNA序列的讀框發(fā)生改變。重組病毒載體：去除非必需區(qū)基因插入外源基因與野生型病毒(感染性)共轉(zhuǎn)染細胞發(fā)生同源重組后再篩選重組病毒。40.重組質(zhì)粒型載體：又稱擴增子，外源基因插入質(zhì)粒型載體，轉(zhuǎn)化細菌后可在體外擴增質(zhì)粒，在輔助病毒存在下可在感染的細胞內(nèi)復制裝配形成假病毒。41.基因工程多肽疫苗：使微生物對人體距保護作用的抗原基因經(jīng)體外重組表達后所制備的生物活性多肽類疫苗稱基因工程多肽或

45、亞單位疫苗。42.基因置換：是指將致病基因整個的被有功能的正?；蛩脫Q，使致病基因永久的得到更正。43.基因修正：是指將致病基因的突變堿基序列得以糾正，而正常序列部分予以保留，使突變的致病基因恢復正常的功能。44.基因修飾：是指將目的基因?qū)肴毕菁毎蚱渌毎康幕虻谋磉_產(chǎn)物可修飾和改變?nèi)毕菁毎墓δ芑蚴乖械墓δ艿玫郊訌姟?5.基因失活：就是應用反義技術(shù)特異封閉某些基因的表達，以達到抑制某些有害基因的表達。46.轉(zhuǎn)基因動物：所謂轉(zhuǎn)基因動物就是把外源性目的基因?qū)雱游锏氖芫鸦蚱淠遗呒毎校⒃诩毎蚪M中穩(wěn)定整合，再將合格的重組受精卵或囊胚細胞篩選出來，采用借腹懷孕的方法寄養(yǎng)在雌性動物

46、的子宮內(nèi)，使之發(fā)育成具表達目的基因的胚胎動物，并能傳給下一代。這樣生育的動物為轉(zhuǎn)基因動物。47.動物克隆：是核移植的一種無性繁殖法，把經(jīng)過處理的成年動物體細胞（如羊乳腺細胞）和另一只動物的去核卵細胞（如羊卵細胞）進行細胞融合，短期培養(yǎng)以后形成胚胎細胞，再植入借腹懷孕的寄養(yǎng)母體的子宮內(nèi)，使發(fā)育成提供體細胞遺傳的那只動物的克隆。48.基因敲除：基因敲除是向正常生物個體內(nèi)引入某個突變的基因位點而選擇性地使某個特定基因功能失活的技術(shù)。49.ES細胞：胚胎干細胞，embryo stem cell，ESC,簡稱ES細胞。50.SD序列(Shine-Dalgarno sequence,SD sequence

47、) 是mRNA能在細菌核糖體上產(chǎn)生有效結(jié)合和轉(zhuǎn)譯所需要的序列。SD序列與16S rRNA的3末端堿基(AUUCCUCCAC-UAG-5)互補，以控制轉(zhuǎn)譯的起始51.基因診斷：就是利用現(xiàn)代分子生物學和分子遺傳學的技術(shù)方法，直接檢測基因結(jié)構(gòu)（DNA水平）及其表達水平（RNA水平）是否正常，從而對疾病做出診斷的方法。53.基因治療就是將有功能的基因轉(zhuǎn)移到病人的細胞中以糾正或置換致病基因的一種治療方法，是指有功能的目的基因?qū)氚屑毎笥械目膳c宿主細胞內(nèi)的基因發(fā)生整合，成為宿主細胞遺傳物質(zhì)的一部分，目的基因的表達產(chǎn)物起到對疾病的治療作用。54,限制性片段長度多肽性分析(RFLP):DNA片段長度多態(tài)性分

48、析（restriction fragment length polymer-phism,RFLP）基因突變導致的基因堿基組成或(和)順序發(fā)生改變,會在基因結(jié)構(gòu)中產(chǎn)生新的限制性內(nèi)切酶位點或使原有的位點消失. 用限制酶對不同個體基因組進行消化時，其電泳條帶的數(shù)目和大小就會產(chǎn)生改變，根據(jù)這些改變可以判斷出突變是否存在。55.限制性核酸內(nèi)切酶：限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease）是一類專門切割DNA的酶，它們能特異結(jié)合一段被稱為限制酶識別順序的特殊DNA序列并切割dsDNA。56.多基因家族：是由某一祖先基因經(jīng)過重復和變異產(chǎn)生的一組基因?？煞譃閮深悾撼纱氐姆植荚谀骋粭l染

49、色體上；家族中的不同成員成簇的分布于不同的染色體上。57.衰減子：在色氨酸操縱子中，當mRNA合成起始以后，除非培養(yǎng)基中完全沒有色氨酸，否則，只會轉(zhuǎn)錄生成一段長162bp的前導mRNA，并形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)使得轉(zhuǎn)錄終止，表現(xiàn)為轉(zhuǎn)錄的衰減，故將這段前導序列稱為衰減子。58復制叉(replication fork)：復制中的DNA分子，末復制的部分是親代雙螺旋，而復制好的部分是分開的，由兩個子代雙螺旋組成，復制正在進行的部分呈丫狀叫做復制叉。59岡崎片段(Okazaki fragment)、后隨鏈(1agging strand)：在DNA復制過程中，以親代鏈(5 3)為模板時，子代鏈的合成不能以3 5方

50、向進行，而是按5 3方向合成出許多小片段，因為是岡崎等人研究發(fā)現(xiàn)，因此稱岡崎片段。由許多岡崎片段連接而成的子代鏈稱為后隨鏈。60藍-白斑篩選：含LacZ基因（編碼半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-D-半乳糖苷)產(chǎn)生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍-白斑篩選。61重組修復(recombination repair)：DNA在有損傷的情況下也可以復制，復制時子代鏈躍過損傷部位并留下缺口，通過分子間重組，從完整的另一條母鏈上將相應的核苷酸序列片段移至子鏈缺口處，然后用再合成的多核苷酸的序列補上母

51、鏈的空缺，此過程稱重組修復。62.Cistron 順反子，即編碼一條多肽鏈的核苷酸序列，對應于一條多肽鏈的DNA片段加上起始信號、終止信號稱也稱順反子，既可以是DNA，也可以用于mRNA。63.RNAi RNA干擾，是指一種分子生物學上由雙鏈RNA誘發(fā)的基因沉默現(xiàn)象，其機制是通過阻礙特定基因的翻譯或轉(zhuǎn)錄來抑制基因表達。當細胞中導入與內(nèi)源性mRNA編碼區(qū)同源的雙鏈RNA時，該mRNA發(fā)生降解而導致基因表達沉默。64.Klenow fragment Klenow片段，E. coli DNA聚合酶I經(jīng)過枯草芽孢桿菌蛋白酶酶切后去除了的5到3外切酶活性，保留3到5的外切酶活性和5到3的聚合功能的大片段

52、即為Klenow片段，而可用于DNA雙鏈末端3突出端切平和5突出端補平反應。65.Rho-dependent terminator依賴的終止子，即需要特異的因子和RNA聚合酶相互作用，才能使轉(zhuǎn)錄終止，該終止子的特點是在轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物實際終止位點上游有一個富含C的5090的堿基序列。66.Rho-independent terminator不依賴因子的終止子，即RNA聚合酶終止轉(zhuǎn)錄并不需要輔助因子，而依靠轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成特殊的發(fā)夾式二級結(jié)構(gòu)，其特征是具有反向重復序列和3末端具有46個U。1.DNA復制與轉(zhuǎn)錄的異同。相同點：模板是DNA；遵守堿基互補規(guī)律；新鏈合成方向為5'3'；催化核苷酸以磷酸二酯鏈連接；合成部位在細胞核。不同點：復制的原材料是dNTP，轉(zhuǎn)錄的原料是NTP；復制的主要酶類是DNA聚合酶，轉(zhuǎn)錄酶是RNA聚合酶；復制需要RNA引物，轉(zhuǎn)錄不需要引物；復制的產(chǎn)物是雙鏈DNA，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是單鏈RNA；復制的模板是DNA雙鏈（半保留復制），轉(zhuǎn)錄的模板是