第三章液相色譜解析

1、3.1 3.1 概述概述3.2 3.2 儀器結(jié)構(gòu)及分離原理儀器結(jié)構(gòu)及分離原理3.3 3.3 高效液相色譜分類(lèi)及原理高效液相色譜分類(lèi)及原理3.4 3.4 色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化3.5 3.5 高效液相色譜方法的建立和應(yīng)用高效液相色譜方法的建立和應(yīng)用第三章第三章 高效液相色譜法高效液相色譜法 流動(dòng)相是液體的色譜法稱(chēng)為液相色譜法。液相色譜可分為平板色譜和流動(dòng)相是液體的色譜法稱(chēng)為液相色譜法。液相色譜可分為平板色譜和柱色譜，在液相柱色譜中，采用顆粒十分細(xì)的高效固定相，并采用高壓泵柱色譜，在液相柱色譜中，采用顆粒十分細(xì)的高效固定相，并采用高壓泵輸送流動(dòng)相，全部工作通過(guò)儀器來(lái)完成輸

2、送流動(dòng)相，全部工作通過(guò)儀器來(lái)完成,這種色譜法稱(chēng)為高效液相色譜法這種色譜法稱(chēng)為高效液相色譜法. 1、高效液相色譜（、高效液相色譜（HPLC）和氣相色譜）和氣相色譜GC的比較的比較 HPLCGC1、幾乎可以分析各種化合物、幾乎可以分析各種化合物只能分析揮發(fā)性物質(zhì)，約只能分析揮發(fā)性物質(zhì)，約20%的化合物的化合物2、可用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析、可用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析不能用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析不能用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析3、柱效不會(huì)很高、柱效不會(huì)很高可得到很高的柱效可得到很高的柱效4、流動(dòng)相有毒，費(fèi)用較高、流動(dòng)相有毒，費(fèi)用較高流動(dòng)相為氣體，無(wú)毒、易處理流動(dòng)相為氣體，無(wú)毒、易處理5、儀器制造難度較大、儀器制

3、造難度較大儀器制造難度較小儀器制造難度較小3.1 概述概述概述概述概述概述 3.2 3.2 3.2 儀器結(jié)構(gòu)儀器結(jié)構(gòu)儀器結(jié)構(gòu)儀器結(jié)構(gòu)儀器結(jié)構(gòu)儀器結(jié)構(gòu)1.1.結(jié)構(gòu)流程結(jié)構(gòu)流程2. 2. 2.主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件(1) 高壓輸液泵高壓輸液泵 要求：( ( (2) 2) 2) 進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示：( ( (3) 3) 3) 高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長(zhǎng)柱長(zhǎng)540 cm。發(fā)

4、展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效，現(xiàn)在已經(jīng)有超發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效，現(xiàn)在已經(jīng)有超高速高效液相色譜。高速高效液相色譜。( ( (4) 4) 4) 液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器按檢測(cè)對(duì)象分類(lèi)按檢測(cè)對(duì)象分類(lèi) 溶質(zhì)型檢測(cè)器：對(duì)組分的物理或物理化學(xué)特性有響溶質(zhì)型檢測(cè)器：對(duì)組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)：紫外、熒光、電化學(xué)應(yīng)：紫外、熒光、電化學(xué) 總體檢測(cè)器：對(duì)試樣或洗脫液總的物理或物理化學(xué)總體檢測(cè)器：對(duì)試樣或洗脫液總的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)：示差折光、介電常數(shù)、激光散射檢測(cè)器特性有響應(yīng)：示差折光、介電常數(shù)、激光散射檢測(cè)器 a.

5、 紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。 特點(diǎn)： 1、靈敏度高；靈敏度高； 2、線形范圍高；、線形范圍高； 3、流通池可做的很?。?、流通池可做的很小（1mm 10mm ，容積容積 8L）；）； 4、對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫；、對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感，可用于梯度洗脫； 5、波長(zhǎng)可選，易于操作；、波長(zhǎng)可選，易于操作； b. b. b. b. b. b. 光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器 紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)

6、展； 光電二極管陣列檢測(cè)器：光電二極管陣列檢測(cè)器：1024個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器c. c. c. 示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器 除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器；除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器； 連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；指數(shù)差值。差值與濃度呈正比； 通用型檢測(cè)器通用型檢測(cè)器(每種物質(zhì)具有不

7、同的折光指數(shù)每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù))； 靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫；靈敏度低、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫； d. d. d. 熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器熒光檢測(cè)器 高靈敏度、高選擇性；高靈敏度、高選擇性； 對(duì)多環(huán)芳烴，維生素對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、氨基酸、甾類(lèi)化合物農(nóng)藥、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)；等有響應(yīng)；e. e. e.電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器電化學(xué)檢測(cè)器特點(diǎn)：特點(diǎn)：特點(diǎn)：1. 1. 1. 靈敏度高，可測(cè)至靈敏度高，可測(cè)至靈敏度高，可測(cè)至靈敏度高，可測(cè)至靈敏度高

8、，可測(cè)至靈敏度高，可測(cè)至101010-15-15-15 mol mol mol L L L-1-1-1； 2. 2. 2. 選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)；選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)；選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)；選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)；選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)；選擇性好，只響應(yīng)電活性物質(zhì)； 3. 3. 3.線性范圍寬，可達(dá)線性范圍寬，可達(dá)線性范圍寬，可達(dá)線性范圍寬，可達(dá)線性范圍寬，可達(dá)線性范圍寬，可達(dá)4 4 4 5 5 5個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。個(gè)數(shù)量級(jí)。 HPLC-ECDHPLC-ECDHPLC-ECD法是目前多組分復(fù)雜樣品分析中的一個(gè)重法是目前多組分復(fù)雜樣品分析

9、中的一個(gè)重法是目前多組分復(fù)雜樣品分析中的一個(gè)重法是目前多組分復(fù)雜樣品分析中的一個(gè)重法是目前多組分復(fù)雜樣品分析中的一個(gè)重法是目前多組分復(fù)雜樣品分析中的一個(gè)重要手段要手段要手段要手段要手段要手段, , ,尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的尤其在分析低濃度生物樣品中具有不可替代的優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析科學(xué)工作者的關(guān)注優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析科學(xué)工作者的關(guān)注優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析科學(xué)工作者的關(guān)注優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析

10、科學(xué)工作者的關(guān)注優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析科學(xué)工作者的關(guān)注優(yōu)勢(shì)，逐漸受到生命科學(xué)和分析科學(xué)工作者的關(guān)注f. f. f.質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀質(zhì)譜儀特點(diǎn)：特點(diǎn)：特點(diǎn)：1. 1. 1. 靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息靈敏度高，可獲得待測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)信息(5)(5)(5)附屬部件附屬部件附屬部件附屬部件附屬部件附屬部件 脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，梯度洗脫裝脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，梯度洗脫裝脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，梯度洗脫裝脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置

11、，梯度洗脫裝脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，梯度洗脫裝脫氣裝置，自動(dòng)進(jìn)樣裝置，梯度洗脫裝置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及置，柱溫箱，衍生系統(tǒng)，餾分收集裝置以及數(shù)據(jù)處理等裝置數(shù)據(jù)處理等裝置數(shù)據(jù)處理等裝置數(shù)據(jù)處理等裝置數(shù)據(jù)處理等裝置數(shù)據(jù)處理等裝置如使用得當(dāng)，會(huì)大大提高儀器的功能和提高如使用得當(dāng)，會(huì)大大提高儀器的功能和提高如使用得當(dāng)，會(huì)大大提高儀器的功能和提高如使用得當(dāng)，會(huì)大大提高儀器的功能和提高如使用得當(dāng)，會(huì)大大提高儀器的功能和提高如使用得當(dāng)，會(huì)大大

12、提高儀器的功能和提高工作效率工作效率工作效率工作效率工作效率工作效率 高效液相色譜法的類(lèi)型按組分在兩相間分離機(jī)理的不同高效液相色譜法的類(lèi)型按組分在兩相間分離機(jī)理的不同主要分為：主要分為：液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法及分子排阻色譜法反相）、離子交換色譜法及分子排阻色譜法。其中：以反相的其中：以反相的化學(xué)鍵合相色譜應(yīng)用最為廣泛化學(xué)鍵合相色譜應(yīng)用最為廣泛3.3 高效液相色譜分類(lèi)及原理高效液相色譜分類(lèi)及原理 液固吸附色譜法液固吸附色譜法固定相為固體固定相為固體硅膠硅膠silica 和和 alumina（氧化鋁）氧化鋁） 是最常用的固

13、定相是最常用的固定相 通過(guò)一系列的吸附通過(guò)一系列的吸附/脫附步驟形成分離脫附步驟形成分離 樣品分子對(duì)固定相的吸附程度不同而形成分離樣品分子對(duì)固定相的吸附程度不同而形成分離 固定相流動(dòng)相 液液分配色譜法液液分配色譜法固定液易流失固定液易流失 化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相aqorgiiKi固定相流動(dòng)相涂布式固定相涂布式固定相缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：固定液易流失，重現(xiàn)性差，且不適合固定液易流失，重現(xiàn)性差，且不適合梯度洗脫和采用高速流動(dòng)相梯度洗脫和采用高速流動(dòng)相 采用化學(xué)鍵合相的液相色譜稱(chēng)為化學(xué)鍵合相色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相采用化學(xué)鍵合相的液相色譜稱(chēng)為化學(xué)鍵合相色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)鍵合相色譜。用來(lái)制備鍵合固定相的載體，幾乎都用

14、硅膠。利用硅膠表面的色譜。用來(lái)制備鍵合固定相的載體，幾乎都用硅膠。利用硅膠表面的硅醇基（硅醇基（Si-OH)與有機(jī)分子成鍵，利用化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合到載與有機(jī)分子成鍵，利用化學(xué)反應(yīng)將有機(jī)分子鍵合到載體表面上，形成均一的、牢固的單分子薄層而構(gòu)成各種性能的固定相體表面上，形成均一的、牢固的單分子薄層而構(gòu)成各種性能的固定相。采用的鍵合反應(yīng)有酯化鍵合。采用的鍵合反應(yīng)有酯化鍵合(SiOR型型)、硅烷化鍵合、硅烷化鍵合(Si-O-Si-R型型)和硅氮鍵合和硅氮鍵合(Si-N型型)等。以硅烷化鍵合反應(yīng)最為常用等。以硅烷化鍵合反應(yīng)最為常用.化學(xué)鍵合相具有以下特點(diǎn)：化學(xué)鍵合相具有以下特點(diǎn)：1）固定相不易流失，

15、柱的穩(wěn)定性和壽命較高。）固定相不易流失，柱的穩(wěn)定性和壽命較高。2）能耐受各種溶劑，可用于梯度洗脫。）能耐受各種溶劑，可用于梯度洗脫。3）表面較為均一，沒(méi)有液坑，傳質(zhì)快，柱效高。）表面較為均一，沒(méi)有液坑，傳質(zhì)快，柱效高。4）能鍵合不同基團(tuán)以改變其選擇性，例如鍵合氰基、氨基等）能鍵合不同基團(tuán)以改變其選擇性，例如鍵合氰基、氨基等極性基團(tuán)用于正相色譜法，鏈合離子交換基團(tuán)用于離子色極性基團(tuán)用于正相色譜法，鏈合離子交換基團(tuán)用于離子色譜法，鍵合譜法，鍵合C2， C4， C6， C8， C16， C18， C22烷基和苯基等烷基和苯基等非極性基團(tuán)用于反相色譜法等。因此，它是非極性基團(tuán)用于反相色譜法等。因此，它

16、是HPLC較為理較為理想的固定相。想的固定相。 離子交換色譜法離子交換色譜法固定相表面帶與被分析物相反電荷 一般使用弱離子交換樹(shù)脂 根據(jù)電荷相互作用力的強(qiáng)弱產(chǎn)生分離 固定相流動(dòng)相分子排阻色譜法分子排阻色譜法依照分子大小分離 固定相材質(zhì)具有不同大小孔徑 大分子因其經(jīng)過(guò)的路徑短，所以先流出 主要應(yīng)用于聚合物、蛋白質(zhì)等分子量范圍的測(cè)定 3.4 3.4 3.4 色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化色譜分離條件的選擇與優(yōu)化分離條件的選擇：分離條件的選擇：樣品、固定相、流動(dòng)相、洗脫方式樣品、固定相、流動(dòng)相、洗脫方式一、分離

17、類(lèi)型選擇一、分離類(lèi)型選擇一、分離類(lèi)型選擇一、分離類(lèi)型選擇一、分離類(lèi)型選擇一、分離類(lèi)型選擇 1. 1. 流動(dòng)相的基本要求流動(dòng)相的基本要求 （1）與色譜柱不發(fā)生不可逆化學(xué)變化，即保留柱效或柱）與色譜柱不發(fā)生不可逆化學(xué)變化，即保留柱效或柱子的保留性質(zhì)長(zhǎng)期不變；子的保留性質(zhì)長(zhǎng)期不變； （2）能溶解被分離的樣品；）能溶解被分離的樣品； （3）與所用的檢測(cè)器匹配；）與所用的檢測(cè)器匹配； （4）黏度盡可能小，以獲得高的柱效；）黏度盡可能小，以獲得高的柱效； （5）價(jià)格便宜、毒性小、易于純化；）價(jià)格便宜、毒性小、易于純化； 二、流動(dòng)相的選擇二、流動(dòng)相的選擇二、流動(dòng)相的選擇二、流動(dòng)相的選擇二、流動(dòng)相的選擇二、流

18、動(dòng)相的選擇 2. 流動(dòng)相選擇的基本原則流動(dòng)相選擇的基本原則原則：原則： 與固定相極性越接近的流動(dòng)相，其洗脫能力越與固定相極性越接近的流動(dòng)相，其洗脫能力越強(qiáng)。強(qiáng)。例：例：采用正相液采用正相液-液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，液分配分離時(shí)：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。若組分的保留時(shí)間太短，降低溶劑極性，反之增加。 也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。保留時(shí)間縮短。 常用溶劑的極性順序：常用溶劑的極性順序： 水水(最大最大) 甲酰胺甲酰胺 乙腈乙腈 甲醇甲醇 乙醇乙醇 丙醇丙醇 丙酮丙酮

19、 二氧六環(huán)二氧六環(huán) 四氫呋喃四氫呋喃 甲乙酮甲乙酮 正丁醇正丁醇 乙酸乙酯乙酸乙酯 乙醚乙醚 異丙醚異丙醚 二氯甲烷二氯甲烷氯仿氯仿溴乙烷溴乙烷苯苯四氯化碳四氯化碳二硫化碳二硫化碳環(huán)己烷環(huán)己烷己烷己烷煤油煤油(最小最小)3. 3. 3. 3. 3. 3. 流動(dòng)相處理流動(dòng)相處理流動(dòng)相處理流動(dòng)相處理流動(dòng)相處理流動(dòng)相處理 （1）用）用0.45m的微孔濾膜過(guò)濾，以防不溶物的微孔濾膜過(guò)濾，以防不溶物磨損高壓泵和堵塞流路、色譜柱等磨損高壓泵和堵塞流路、色譜柱等； （2）對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理，否則，溶于流）對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理，否則，溶于流動(dòng)相中的氣體形成氣泡會(huì)影響泵、檢測(cè)器的使動(dòng)相中的氣體形成氣泡會(huì)影響泵

20、、檢測(cè)器的使用；用； 洗脫方式：等度洗脫和梯度洗脫洗脫方式：等度洗脫和梯度洗脫 等度洗脫等度洗脫：流動(dòng)相組成不隨分析時(shí)間變化，始終是均一的：流動(dòng)相組成不隨分析時(shí)間變化，始終是均一的流動(dòng)相洗脫，適合于較簡(jiǎn)單樣品分析流動(dòng)相洗脫，適合于較簡(jiǎn)單樣品分析梯度洗脫梯度洗脫：洗脫方式可以是線性的或非線性的，也可以是：洗脫方式可以是線性的或非線性的，也可以是二元的或多元的，采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可二元的或多元的，采用二元或多元組合溶劑作為流動(dòng)相可以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)以靈活調(diào)節(jié)流動(dòng)相的極性或增加選擇性，以改進(jìn)分離或調(diào)整出峰時(shí)間整出峰時(shí)間三、三、三、三、三、三、洗脫方式的選

21、擇洗脫方式的選擇3.5 色譜的應(yīng)用色譜的應(yīng)用1. 藥學(xué)：藥學(xué)：藥物質(zhì)量控制、藥材最佳采收期、炮制工藝確定、藥物質(zhì)量控制、藥材最佳采收期、炮制工藝確定、 新藥研發(fā)；新藥研發(fā)；2. 環(huán)境檢測(cè)：環(huán)境檢測(cè)：大氣、土壤、水體等中污染物的定性定量分析；大氣、土壤、水體等中污染物的定性定量分析；3. 食品分析：食品分析：農(nóng)殘分析、獸殘分析、營(yíng)養(yǎng)成分定性定量分析；農(nóng)殘分析、獸殘分析、營(yíng)養(yǎng)成分定性定量分析；4. 化工：化工：工藝研究、反應(yīng)進(jìn)度確定、產(chǎn)品質(zhì)量控制；工藝研究、反應(yīng)進(jìn)度確定、產(chǎn)品質(zhì)量控制；5. 臨床、臨床、藥物代謝：藥物體內(nèi)代謝研究、臨床病例研究。藥物代謝：藥物體內(nèi)代謝研究、臨床病例研究。標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)

22、標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)GB/T 18294.4-2007 火災(zāi)技術(shù)鑒定方法 第4部分:高效液相色譜法 GB/T 18397-2001 復(fù)合預(yù)混合飼料中泛酸的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 18872-2002 飼料中維生素K3的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 18932.18-2003 蜂蜜中羥甲基糠醛含量的測(cè)定方法 液相色譜-紫外檢測(cè)法 GB/T 18932.25-2005 蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧萘青霉素、苯唑青霉素、鄰氧青霉素、雙氧青霉素殘留量的測(cè)定方法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 GB/T 18932.26-2005 蜂蜜中甲硝噠唑、洛硝噠唑、二甲硝咪唑殘留量的測(cè)定方法 液相色譜法 GB/T

23、 18932.3-2002 蜂蜜中鏈霉素殘留量的測(cè)定方法 液相色譜法 GB/T 18932.4-2002 蜂蜜中土霉素、四環(huán)素、金霉素、強(qiáng)力霉素殘留量的測(cè)定方法 液相色譜法 GB/T 18932.5-2002 蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲氧嘧啶殘留量的測(cè)定方法 液相色譜法 GB/T 18932.7-2002 蜂蜜中苯酚殘留量的測(cè)定方法 液相色譜法 GB/T 19182-2003 咖啡 咖啡因含量的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 19267.11-2003 刑事技術(shù)微量物證的理化檢驗(yàn) 第11部分:高效液相色譜法 GB/

24、T 19371.2-2003 飼料中液態(tài)蛋氨酸羥基類(lèi)似物的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 19423-2003 飼料中尼卡巴嗪的測(cè)定 高效液相色譜法 標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)號(hào)標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)GB/T 19427-2003 蜂膠中蘆丁、楊梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松屬素、苛因、高良姜素含量的測(cè)定方法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法和液相色譜-紫外檢測(cè)法 GB/T 19542-2004 飼料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 19681-2005 食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)方法 高效液相色譜法 GB/T 19684-2005 飼料中金霉素的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 20189-2

25、006 飼料中萊克多巴胺的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 20362-2006 雞蛋中氯羥吡啶殘留量的檢測(cè)方法 高效液相色譜法 GB/T 20365-2006 硫酸軟骨素和鹽酸氨基葡萄糖含量的測(cè)定 液相色譜法 GB/T 20379-2006 淀粉衍生物 葡萄糖漿、果糖漿和氫化葡萄糖漿成分的測(cè)定 高效液相色譜法 GB/T 20741-2006 畜禽肉中地塞米松殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 GB/T 20742-2006 牛甲狀腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、巰基苯并咪唑殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 GB/T 20743-2006 豬肉、豬肝和豬腎中桿菌肽殘留

26、量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 GB/T 20744-2006 蜂蜜中甲硝唑、洛硝噠唑、二甲硝咪唑殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 1） HPLC-DAD方法的建立方法的建立 1、丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮I和丹參酮和丹參酮IIA的測(cè)定的測(cè)定HPLC-DAD提取條件提取條件洗脫條件洗脫條件檢測(cè)條件檢測(cè)條件方法學(xué)考察方法學(xué)考察1） HPLC-DAD方法的建立方法的建立 1、丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮丹參營(yíng)養(yǎng)器官中丹參酮I和丹參酮和丹參酮IIA的測(cè)定的測(cè)定HPLC-DAD提取條件提取條件洗脫條件洗脫條件檢測(cè)條件檢測(cè)條件方法學(xué)考察方法學(xué)考察提取條件的選擇：提取條件的選擇：分別考察了回流提取

27、法和超聲分別考察了回流提取法和超聲提取法，結(jié)果顯示：回流提取法和超聲提取法均可達(dá)提取法，結(jié)果顯示：回流提取法和超聲提取法均可達(dá)到同樣的提取效率，但超聲提取法提取時(shí)間明顯縮短到同樣的提取效率，但超聲提取法提取時(shí)間明顯縮短，提取操作簡(jiǎn)單方便，故本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法。然，提取操作簡(jiǎn)單方便，故本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法。然后，分別考察了不同比例的二氯甲烷后，分別考察了不同比例的二氯甲烷 - 甲醇溶劑及不甲醇溶劑及不同提取時(shí)間同提取時(shí)間2種成分的提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：采用二種成分的提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：采用二氯甲烷氯甲烷 - 甲醇甲醇(1 9) 作提取溶劑效果最好，超聲提取作提取溶劑效果最好，超聲提取0.5

28、h，丹參酮，丹參酮I和丹參酮和丹參酮IIA的提取率均達(dá)到最大的提取率均達(dá)到最大 提取條件：提取條件：二氯甲烷甲醇（二氯甲烷甲醇（v/v = 1/9）混合溶劑超）混合溶劑超聲提取聲提取0.5 h色譜洗脫條件色譜洗脫條件:美國(guó)美國(guó)Zorbax SB - C18（150 mm 4.6 mm, 5.0 m）色）色譜柱；流動(dòng)相：甲醇譜柱；流動(dòng)相：甲醇 水，梯度洗脫，其時(shí)間程序?yàn)樗荻认疵摚鋾r(shí)間程序?yàn)?1013 min，甲醇，甲醇體積分?jǐn)?shù)相應(yīng)為體積分?jǐn)?shù)相應(yīng)為72%87%72%，流速：，流速：1.0 mLmin-1甲醇甲醇/水水色譜柱色譜柱流速流速等度洗脫等度洗脫柱溫柱溫梯度洗脫梯度洗脫洗脫條件洗脫條件色譜洗脫條件的優(yōu)化色譜洗脫條件的優(yōu)化檢測(cè)條件的選擇檢測(cè)條件的選擇 用用DAD對(duì)丹參酮對(duì)丹參酮I和丹參酮和丹參酮IIA進(jìn)行進(jìn)行190 400 nm全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果丹參酮全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果丹參酮I和丹參酮和丹參酮IIA的最大吸收的最大吸收波長(zhǎng)分別為波長(zhǎng)分別為246和和