細(xì)胞工程復(fù)習(xí)課課件學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1細(xì)胞工程復(fù)習(xí)細(xì)胞工程復(fù)習(xí)(fx)課課件課課件第一頁(yè)，共29頁(yè)。植物體細(xì)胞植物體細(xì)胞(xbo)雜交和動(dòng)物細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞(xbo)融合比較融合比較最終最終(zu zhn)(zu zhn)目的目的誘導(dǎo)誘導(dǎo)(yudo)(yudo)方法方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法原理原理比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目獲得雜種植株獲得雜種植株物理（離心、振蕩物理（離心、振蕩、電刺激）、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）去除細(xì)胞壁后去除細(xì)胞壁后誘誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體物理、化學(xué)

2、方法物理、化學(xué)方法（滅活的仙臺(tái)病毒）（滅活的仙臺(tái)病毒）使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性動(dòng)物細(xì)胞融動(dòng)物細(xì)胞融合合生物方法：生物方法：第2頁(yè)/共29頁(yè)第二頁(yè)，共29頁(yè)。幾種雜交技術(shù)幾種雜交技術(shù)(jsh)(jsh)的比較的比較項(xiàng)項(xiàng)目目雜交育雜交育種技術(shù)種技術(shù)植物體細(xì)胞植物體細(xì)胞雜交技術(shù)雜交技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)融合技術(shù)分子雜分子雜交技術(shù)交技術(shù)原原理理方方法法用用途途基因基因(jyn)(jyn)重組重組細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)膜的流動(dòng)性、膜的流動(dòng)性、細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)的全能性的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞增殖性、細(xì)胞增殖堿基互補(bǔ)

3、配堿基互補(bǔ)配對(duì)原則對(duì)原則植物母本植物母本去雄去雄套袋套袋人工傳粉人工傳粉后后, ,套袋隔套袋隔離離物理法：離心電物理法：離心電刺激振蕩等刺激振蕩等 化學(xué)法：化學(xué)法：PEGPEG物化法：同左物化法：同左 生物法：生物法：滅活的仙臺(tái)滅活的仙臺(tái)病毒病毒標(biāo)記的單標(biāo)記的單鏈鏈DNADNA或或RNARNA探針探針培養(yǎng)新品種培養(yǎng)新品種克服遠(yuǎn)緣雜交不克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性的障礙親和性的障礙制備單克隆制備單克隆抗體抗體用于克隆基因用于克隆基因的篩選、基因的篩選、基因組中序列的定組中序列的定性、基因診斷等性、基因診斷等第3頁(yè)/共29頁(yè)第三頁(yè)，共29頁(yè)。幾種類(lèi)型幾種類(lèi)型(lixng)(lixng)生物的培養(yǎng)生物的培養(yǎng)

4、比較比較生物生物微生物培養(yǎng)微生物培養(yǎng)植物植物動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)無(wú)土栽培無(wú)土栽培培養(yǎng)培養(yǎng)對(duì)象對(duì)象培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分成分培養(yǎng)基培養(yǎng)基類(lèi)型類(lèi)型培養(yǎng)培養(yǎng)條件條件微生物個(gè)體微生物個(gè)體(gt)(gt)離體植物離體植物(zhw)(zhw)細(xì)胞細(xì)胞完整植物個(gè)體完整植物個(gè)體幼齡動(dòng)物幼齡動(dòng)物器官或胚胎器官或胚胎水、無(wú)機(jī)鹽、水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子水、無(wú)機(jī)鹽、水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、維生素、維生素、植物激素植物激素水、無(wú)機(jī)鹽水、無(wú)機(jī)鹽水、無(wú)機(jī)鹽、水、無(wú)機(jī)鹽、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、有機(jī)營(yíng)養(yǎng)、維生素、維生素、動(dòng)物血清動(dòng)物血清固體、半固體固體、半固體或液體或液體固體固體液體液體

5、液體液體無(wú)菌、適宜無(wú)菌、適宜的溫度等的溫度等無(wú)菌、離體、無(wú)菌、離體、適宜的溫度等適宜的溫度等光照、光照、COCO2 2、適宜的溫度等適宜的溫度等無(wú)菌、適宜的無(wú)菌、適宜的溫度等溫度等第4頁(yè)/共29頁(yè)第四頁(yè)，共29頁(yè)。右圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程（只考慮兩個(gè)細(xì)胞的右圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程（只考慮兩個(gè)細(xì)胞的融合），請(qǐng)據(jù)圖回答：融合），請(qǐng)據(jù)圖回答：若若A、B是基因型分別為是基因型分別為rrHH、RRhh兩個(gè)煙草品兩個(gè)煙草品種細(xì)胞的花粉，且這兩對(duì)基因位于非同源染色體上種細(xì)胞的花粉，且這兩對(duì)基因位于非同源染色體上，由于一對(duì)隱性純合基因，由于一對(duì)隱性純合基因(rr或或hh) 的作用，在光照的作用，在光照強(qiáng)度大于

6、強(qiáng)度大于800勒克斯時(shí)，都不能生長(zhǎng)。勒克斯時(shí)，都不能生長(zhǎng)。（1）實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)必須用）實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)必須用 除去除去不利于原生質(zhì)體融合的物質(zhì)。不利于原生質(zhì)體融合的物質(zhì)。（2）實(shí)驗(yàn)中除獲得）實(shí)驗(yàn)中除獲得(hud)雜種細(xì)胞外，還有基雜種細(xì)胞外，還有基因型為因型為 的融合細(xì)胞。的融合細(xì)胞。（3）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)）設(shè)計(jì)一方法（不考慮機(jī)械方法），從培養(yǎng)液中分離出雜種細(xì)胞，方法：液中分離出雜種細(xì)胞，方法： 纖維素酶纖維素酶(或果膠酶或果膠酶) rrHH、RRhh 置大于置大于800勒克斯光照勒克斯光照(gungzho)下培養(yǎng)，收集分化的細(xì)胞團(tuán)下培養(yǎng)，收集分化的細(xì)胞團(tuán) 第5頁(yè)/共29頁(yè)第五頁(yè)，共

7、29頁(yè)。5、（、（2006 年江蘇卷）年江蘇卷）(9分分)下圖是單克隆抗體制備下圖是單克隆抗體制備(zhbi)流程階段示意圖。流程階段示意圖。（1 1） 技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2 2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類(lèi)，圖中）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類(lèi)，圖中HATHAT培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基屬于 培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。（3 3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是 . . （4 4）動(dòng)物細(xì)胞融合除了）動(dòng)物細(xì)胞融合除了(ch le)(ch le)采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)劑外，還可以采采用植物細(xì)胞原生質(zhì)體融合常用的誘導(dǎo)劑外，還

8、可以采用用 。（5 5）選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的）選出的雜交瘤細(xì)胞既具備骨髓瘤細(xì)胞的 特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的特點(diǎn)，又具備淋巴細(xì)胞的 特點(diǎn)。特點(diǎn)。（6 6）淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體）淋巴細(xì)胞是由動(dòng)物體 中的中的 細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)。細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)。（7 7）雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是）雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是 。動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng) 選擇選擇 特異性強(qiáng)，靈敏度高特異性強(qiáng)，靈敏度高 滅活的病毒滅活的病毒 在體外大量增殖在體外大量增殖 分泌特異性抗體分泌特異性抗體 骨髓骨髓 造血干造血干 主動(dòng)運(yùn)輸主動(dòng)運(yùn)輸 第6頁(yè)/共29頁(yè)第六

9、頁(yè)，共29頁(yè)。外植體外植體愈傷組織愈傷組織根、芽根、芽植物體植物體脫分化脫分化(fnhu)再分化再分化(fnhu)一、植物一、植物(zhw)組織培養(yǎng)的過(guò)程組織培養(yǎng)的過(guò)程（分化）（分化）（未分化）（未分化）（分化）（分化）幼芽或幼根？幼芽或幼根？條條件件？?jī)?yōu)優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)？特點(diǎn)？特點(diǎn)？繁殖速度快繁殖速度快不受季節(jié)限制不受季節(jié)限制工廠化生產(chǎn)工廠化生產(chǎn)幼苗無(wú)毒幼苗無(wú)毒保持優(yōu)良性狀保持優(yōu)良性狀適宜溫度、光照、適宜溫度、光照、 pH和無(wú)菌環(huán)境。和無(wú)菌環(huán)境。無(wú)機(jī)物、有機(jī)物和無(wú)機(jī)物、有機(jī)物和植物激素（植物激素（生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素，細(xì)胞分裂素，細(xì)胞分裂素）無(wú)定形狀態(tài)無(wú)定形狀態(tài)薄壁細(xì)胞薄壁細(xì)胞高度液泡化高度液泡化排列疏松、無(wú)

10、規(guī)則排列疏松、無(wú)規(guī)則分化程度低分化程度低脫分化較易脫分化較易第7頁(yè)/共29頁(yè)第七頁(yè)，共29頁(yè)?？键c(diǎn)(ko din)胡蘿卜的組織培養(yǎng)技術(shù)(jsh)及植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用1細(xì)胞的全能性(1)細(xì)胞全能性的基礎(chǔ)：生物體的每一個(gè)細(xì)胞都含有本物種的全套遺傳物質(zhì)，都有發(fā)育成完整個(gè)體的全套基因。(2)細(xì)胞全能性實(shí)現(xiàn)的條件：離體、提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素及其他適宜(shy)條件。(3)細(xì)胞全能性高低的比較：受精卵卵細(xì)胞體細(xì)胞；植物體細(xì)胞動(dòng)物體細(xì)胞；胚胎干細(xì)胞其他干細(xì)胞體細(xì)胞。第8頁(yè)/共29頁(yè)第八頁(yè)，共29頁(yè)。2胡蘿卜的組織培養(yǎng)技術(shù)(jsh)(1)實(shí)驗(yàn)原理：離體的植物組織實(shí)驗(yàn)原理：離體的植物組織(zzh)、器官、細(xì)胞

11、表現(xiàn)出植物細(xì)、器官、細(xì)胞表現(xiàn)出植物細(xì)胞的全能性，發(fā)育胞的全能性，發(fā)育(fy)成新個(gè)體。成新個(gè)體。(2)實(shí)驗(yàn)流程：制備外植體實(shí)驗(yàn)流程：制備外植體接種接種脫分化培養(yǎng)脫分化培養(yǎng)再分化培再分化培養(yǎng)養(yǎng)移栽培養(yǎng)成正常植株移栽培養(yǎng)成正常植株。(3)注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)選材：根尖、莖尖、形成層等最容易誘導(dǎo)脫分化。選材：根尖、莖尖、形成層等最容易誘導(dǎo)脫分化。無(wú)菌：培養(yǎng)基一旦污染，迅速生長(zhǎng)的各種雜菌不僅會(huì)與無(wú)菌：培養(yǎng)基一旦污染，迅速生長(zhǎng)的各種雜菌不僅會(huì)與培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，而且還會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)。培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，而且還會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)。光照：脫分化過(guò)程不需要光照，再分化過(guò)程一定要有光光照：脫分化過(guò)

12、程不需要光照，再分化過(guò)程一定要有光照照。第9頁(yè)/共29頁(yè)第九頁(yè)，共29頁(yè)。激素激素(j s)的使用的使用a生長(zhǎng)素類(lèi)細(xì)胞分裂素類(lèi)：誘導(dǎo)生長(zhǎng)素類(lèi)細(xì)胞分裂素類(lèi)：誘導(dǎo)(yudo)植物組織脫分化和根原植物組織脫分化和根原基形成基形成(xngchng)。b生生長(zhǎng)素類(lèi)細(xì)胞分裂素類(lèi)：誘導(dǎo)愈傷組織再分化和芽原長(zhǎng)素類(lèi)細(xì)胞分裂素類(lèi)：誘導(dǎo)愈傷組織再分化和芽原基形成?；纬?。c赤赤霉素類(lèi)：促進(jìn)分化的叢芽和小植株快速生長(zhǎng)。霉素類(lèi)：促進(jìn)分化的叢芽和小植株快速生長(zhǎng)。3植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用植物細(xì)胞工程的實(shí)際應(yīng)用第10頁(yè)/共29頁(yè)第十頁(yè)，共29頁(yè)。植物植物(zhw)(zhw)細(xì)胞細(xì)胞 A A（大豆）大豆）植物細(xì)胞植物細(xì)胞(xb

13、o) B(xbo) B（花（花生）生）原生質(zhì)體原生質(zhì)體 A A原生質(zhì)體原生質(zhì)體 B B再生出細(xì)胞壁再生出細(xì)胞壁方法？方法？促融方法？促融方法？類(lèi)型？類(lèi)型？遺傳物質(zhì)？遺傳物質(zhì)？?jī)?yōu)點(diǎn)？?jī)?yōu)點(diǎn)？去除細(xì)胞壁去除細(xì)胞壁原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜種植株雜種植株( (大豆花生大豆花生) )細(xì)胞分裂細(xì)胞分裂愈傷組織愈傷組織雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞第11頁(yè)/共29頁(yè)第十一頁(yè)，共29頁(yè)。植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交(zjio)的過(guò)程：的過(guò)程： 小小 結(jié)結(jié)D.篩選篩選(shixun)和組和組織培養(yǎng)?？椗囵B(yǎng)。C. 植物細(xì)胞植物細(xì)胞A和植物細(xì)胞和植物細(xì)胞B雜交時(shí)，產(chǎn)生雜交時(shí)，產(chǎn)生(chnshng)了了AB和和AA、BB型融合細(xì)胞

14、。型融合細(xì)胞。B.誘導(dǎo)融合：注意物理方法的類(lèi)型和化學(xué)方法的藥誘導(dǎo)融合：注意物理方法的類(lèi)型和化學(xué)方法的藥劑劑聚乙二醇。聚乙二醇。A.制備原生質(zhì)體：用纖維素酶、果膠酶分解細(xì)胞壁。制備原生質(zhì)體：用纖維素酶、果膠酶分解細(xì)胞壁。E.打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培打破生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種。育作物新品種。第12頁(yè)/共29頁(yè)第十二頁(yè)，共29頁(yè)?？键c(diǎn)(ko din)植物體細(xì)胞(xbo)雜交技術(shù)細(xì)胞融合完成的標(biāo)志：新的細(xì)胞壁的生成。植物體細(xì)胞雜交的終點(diǎn)是培育成雜種植株，而不是形成雜種細(xì)胞就結(jié)束。雜種植株特征：具備(jbi)兩種植物的遺傳特征。原因是雜種植株中含有兩種植物的

15、遺傳物質(zhì)。第13頁(yè)/共29頁(yè)第十三頁(yè)，共29頁(yè)。(1)體細(xì)胞雜交即兩個(gè)細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，不管染色體、基因組還是(hi shi)染色體組都采用直接相加的方法。若一植物細(xì)胞含有 2X 條染色體，2 個(gè)染色體組，基因型為 Aabb，另一植物細(xì)胞含有 2Y 條染色體，2 個(gè)染色體組，基因型為 ccDd，則新植株應(yīng)為四倍體，其體細(xì)胞中染色體數(shù)為 2X 2Y ，基因型為AabbccDd。(2)該培育新品種的過(guò)程中，遺傳物質(zhì)的傳遞不遵循孟德?tīng)柕倪z傳定律，只有有性生殖進(jìn)行(jnxng)減數(shù)分裂過(guò)程中才符合遺傳定律，而體細(xì)胞雜交未有此過(guò)程。第14頁(yè)/共29頁(yè)第十四頁(yè)，共29頁(yè)。（2006年重慶卷）植物甲、乙是

16、兩種瀕危藥用植物（二倍體）。請(qǐng)按要求年重慶卷）植物甲、乙是兩種瀕危藥用植物（二倍體）。請(qǐng)按要求回答問(wèn)題回答問(wèn)題(wnt)：(1)以植物甲、乙的莖尖和葉片為材料，通過(guò)組織培養(yǎng)獲得了再生植株，解以植物甲、乙的莖尖和葉片為材料，通過(guò)組織培養(yǎng)獲得了再生植株，解決了自然繁殖率低的問(wèn)題決了自然繁殖率低的問(wèn)題(wnt)。這表明植物細(xì)胞具有。這表明植物細(xì)胞具有_。由葉。由葉片等材料形成的愈傷組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是片等材料形成的愈傷組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)是_。（2）題）題31圖圖1和題和題31圖圖2分別是植物甲、乙的萌發(fā)花粉粒和未受精胚珠的示分別是植物甲、乙的萌發(fā)花粉粒和未受精胚珠的示意圖。意圖。在分離在分離(fnl

17、)珠被細(xì)胞的原生質(zhì)體時(shí)，通常使用纖維素酶和果膠酶破除細(xì)胞壁珠被細(xì)胞的原生質(zhì)體時(shí)，通常使用纖維素酶和果膠酶破除細(xì)胞壁。其原理是利用了酶的。其原理是利用了酶的_性質(zhì)。性質(zhì)。 全能性全能性 排列排列(pili)疏松無(wú)規(guī)則疏松無(wú)規(guī)則,高度液泡化而無(wú)定型狀態(tài)的薄壁細(xì)胞高度液泡化而無(wú)定型狀態(tài)的薄壁細(xì)胞專(zhuān)一性專(zhuān)一性 第15頁(yè)/共29頁(yè)第十五頁(yè)，共29頁(yè)。 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng)按細(xì)胞的來(lái)源不同細(xì)胞培養(yǎng)按細(xì)胞的來(lái)源不同(b tn)可以分為原代培養(yǎng)和可以分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)。1.為什么將組織取出后，要用胰蛋白酶處理分散為什么將組織取出后，要用胰蛋白酶處理分散(fnsn)成成單個(gè)細(xì)胞？單個(gè)

18、細(xì)胞？第16頁(yè)/共29頁(yè)第十六頁(yè)，共29頁(yè)。卵細(xì)胞卵細(xì)胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細(xì)胞乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核細(xì)胞核細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植(yzh)(yzh)早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊娠妊娠多莉羊的培育多莉羊的培育(piy)過(guò)程過(guò)程融合后的卵細(xì)胞融合后的卵細(xì)胞第17頁(yè)/共29頁(yè)第十七頁(yè)，共29頁(yè)。滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通通細(xì)胞膜連接細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞第18頁(yè)/共29頁(yè)第十八頁(yè)，共29頁(yè)。骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞(xbo)？選出能產(chǎn)特定

19、抗體細(xì)胞選出能產(chǎn)特定抗體細(xì)胞(xbo)群、繼續(xù)培群、繼續(xù)培養(yǎng)養(yǎng)體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)(piyng)從培養(yǎng)液從培養(yǎng)液中獲取中獲取促融方法？促融方法？單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程抗原？抗原？淋巴細(xì)胞？淋巴細(xì)胞？體內(nèi)培養(yǎng)體內(nèi)培養(yǎng)從腹水中提取從腹水中提取單克隆抗體單克隆抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合、篩選、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒第19頁(yè)/共29頁(yè)第十九頁(yè)，共29頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用克隆器官：皮膚、耳朵克隆器官：皮膚、耳朵(r du)(r du)檢測(cè)有毒物質(zhì)檢測(cè)有毒物質(zhì) 細(xì)胞治療：干細(xì)胞細(xì)胞治療：干細(xì)胞蛋白質(zhì)

20、生物制品：病毒疫苗、干擾素、酶、激素蛋白質(zhì)生物制品：病毒疫苗、干擾素、酶、激素、生長(zhǎng)因子、單抗、生長(zhǎng)因子、單抗單抗的應(yīng)用和特點(diǎn)單抗的應(yīng)用和特點(diǎn)診斷、治療和預(yù)防疾病診斷、治療和預(yù)防疾病治療癌癥治療癌癥(i zhn)等病（生物導(dǎo)等?。ㄉ飳?dǎo)彈）彈）特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高特異性強(qiáng)、靈敏度高、純度高第20頁(yè)/共29頁(yè)第二十頁(yè)，共29頁(yè)?？键c(diǎn)(ko din)動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)和動(dòng)物(dngw)細(xì)胞克隆1動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)(1)流程幼齡動(dòng)物組織或胚胎幼齡動(dòng)物組織或胚胎細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液細(xì)胞株或細(xì)胞系選用幼齡動(dòng)物組織或胚胎的原因：它們的細(xì)胞分化程度選用幼齡動(dòng)物組

21、織或胚胎的原因：它們的細(xì)胞分化程度低，增殖能力很強(qiáng)，更易于培養(yǎng)。低，增殖能力很強(qiáng)，更易于培養(yǎng)。第21頁(yè)/共29頁(yè)第二十一頁(yè)，共29頁(yè)。進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞傳代培養(yǎng)時(shí)用胰蛋白酶(y dn bi mi)分散細(xì)胞，不用胃蛋白酶的原因：胃蛋白酶作用的適宜pH 約為 2，當(dāng) pH 大于 6時(shí)，胃蛋白酶就會(huì)失去活性。而胰蛋白酶(y dn bi mi)作用的適宜pH 為7.28.4，多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的適宜 pH 為7.27.4，因此胰蛋白酶(y dn bi mi)適用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞間質(zhì)(主要為蛋白質(zhì))的分解。(2)細(xì)胞細(xì)胞(xbo)貼壁和接觸抑制貼壁和接觸抑制細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。細(xì)胞貼壁

22、：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上。接觸抑制：細(xì)胞數(shù)目不斷接觸抑制：細(xì)胞數(shù)目不斷(bdun)增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖的現(xiàn)象。表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖的現(xiàn)象。第22頁(yè)/共29頁(yè)第二十二頁(yè)，共29頁(yè)。(3)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件營(yíng)養(yǎng)(yngyng)：微量元素、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。適宜的溫度：36.5 0.5 。適宜的 pH：7.27.4。氣體氣體(qt)環(huán)境環(huán)境O2：有氧呼吸、細(xì)胞代謝：有氧呼吸、細(xì)胞代謝(95%的空氣的空氣(kngq)CO2：維持：維持 pH(5%)無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境：培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具殺菌消毒，培無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境：培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具殺菌消毒，培養(yǎng)過(guò)程加抗生素殺菌，定期更換培養(yǎng)液，清除代謝產(chǎn)養(yǎng)過(guò)程加抗生素殺菌，定期更換培養(yǎng)液，清除代謝產(chǎn)物。物。第23頁(yè)/共29頁(yè)第二十三頁(yè)，共29頁(yè)。(4)動(dòng)物細(xì)胞