局部刺激實(shí)驗(yàn)

1、急性毒性試驗(yàn)綜合分析與評價(jià)第四實(shí)驗(yàn)室第三小組人員名單：唐劍波 陳杰 楊文超 唐凱 張業(yè)芳 熊興菊第三部分局部刺激實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對哺乳動物皮膚、眼睛的局部刺激性和腐蝕性，估計(jì)人體接觸該農(nóng)藥時(shí)可能出現(xiàn)的類似危害，為農(nóng)藥生產(chǎn)和使用中的安全防護(hù)提供依據(jù)。局部刺激實(shí)驗(yàn)眼刺激實(shí)驗(yàn)皮膚刺激實(shí)驗(yàn)皮膚致敏實(shí)驗(yàn)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗(yàn) 了解試驗(yàn)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對眼睛的刺激作用和程度，為農(nóng)藥生產(chǎn)和使用中的安全防護(hù)提供依據(jù)。一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?實(shí)驗(yàn)原理 選擇健康的成年白色家兔，受試物以一次劑量滴入每只實(shí)驗(yàn)動物的眼睛結(jié)膜囊內(nèi)，以未做處理的另一側(cè)眼睛作為自身對

2、照。在規(guī)定的時(shí)間間隔內(nèi)，觀察對動物眼睛的刺激和腐蝕作用程度并評分，以此評價(jià)受試物對眼睛的刺激作用。觀察期限應(yīng)能足以評價(jià)刺激效應(yīng)的可逆性或不可逆性。三、實(shí)驗(yàn)動物及飼養(yǎng)環(huán)境 首選健康成年白色家兔，至少4只，雌雄各半，體重2-3Kg，試驗(yàn)前家兔要在實(shí)驗(yàn)動物房至少適應(yīng)3d時(shí)間，在開始前的24h內(nèi)對動物的兩只眼睛進(jìn)行檢查，有眼睛刺激癥狀，角膜缺陷和結(jié)膜損傷的動物不能用于實(shí)驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)動物及實(shí)驗(yàn)動物房應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。四、實(shí)驗(yàn)步驟 1、輕輕拉開家兔一側(cè)眼睛的下眼瞼，將受試物0.1ml滴入結(jié)膜囊中，使上、下眼瞼被動閉合1min，以防止受試物丟失。另一側(cè)眼睛不處理作自身對照。滴入受試

3、物后24h不沖洗眼睛。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗(yàn)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗(yàn) 2、記錄給藥后1、24、48、72小時(shí)角膜、虹膜、結(jié)膜以及其它所觀察到的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗(yàn)評分表示。觀察時(shí)應(yīng)用熒光素鈉檢查角膜損害，用裂隙燈檢查角膜透明度和虹膜紋理改變。若在72小時(shí)內(nèi)未見任何刺激癥狀，該試驗(yàn)即可結(jié)束。 3、若在72小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)刺激癥狀，應(yīng)進(jìn)行眼部清洗試驗(yàn)：試驗(yàn)設(shè)3組，每組3只動物，受試藥物的給藥方法同上。第1組不予清洗，第2組在眼部給受試藥4秒鐘后用20ml溫水或生理鹽水清洗受試眼，第3組在給受試藥30秒鐘后用20ml溫水或生理鹽水清洗受試眼。觀察滴眼后

4、24、48、72小時(shí)，4天，7天的眼部反應(yīng)情況，直至眼部恢復(fù)正常。（該試驗(yàn)的意義在于評價(jià)溫水或生理鹽水清洗可否改善藥物所致的眼部刺激，亦即反映該受試藥物的眼部刺激性是否可逆。）40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的眼刺激試驗(yàn)五、結(jié)果判斷及評價(jià) 按表1將每只動物的角膜、虹膜和結(jié)膜的刺激反應(yīng)的分值相加，即是一只動物眼刺激反應(yīng)的總積分。每個動物的刺激反應(yīng)積分的總和除以動物數(shù)，就是該試驗(yàn)農(nóng)藥對眼刺激性的最后分值。再按表2評定眼刺激程度。 按上述分級評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)評定，如一次或多次接觸受試物，不引起角膜、虹膜和結(jié)膜的炎癥變化，或雖引起輕度反應(yīng)，但這種改變是可逆的，則認(rèn)為該受試物可以安全使用。 在許多情況下，哺乳動物

5、眼的反應(yīng)較人敏感，從動物試驗(yàn)結(jié)果外推到人可提供較有價(jià)值的依據(jù)。表1 Draize眼刺激試驗(yàn)中眼損傷嚴(yán)重程度的評分標(biāo)準(zhǔn)續(xù)表 Draize眼刺激試驗(yàn)中眼損傷嚴(yán)重程度的評分標(biāo)準(zhǔn)表2 眼刺激強(qiáng)度評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗(yàn)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?測定40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑對哺乳動物皮膚是否有刺激或腐蝕作用，估計(jì)人體接觸該農(nóng)藥時(shí)可能出現(xiàn)的類似危害。二、 實(shí)驗(yàn)原理 將受試樣品一次（或多次）涂（敷）于健康無破損的一側(cè)皮膚，并以對側(cè)皮膚作自身對照，在規(guī)定時(shí)限內(nèi)觀察和評價(jià)刺激反應(yīng)的程度，并作詳細(xì)的記錄。觀察時(shí)間應(yīng)足以進(jìn)行可逆或不可逆效應(yīng)的觀察，以便進(jìn)行完整的評價(jià)，但一般不超過14d。40

6、.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗(yàn)三、 實(shí)驗(yàn)材料 1、實(shí)驗(yàn)動物、實(shí)驗(yàn)動物 首選健康成年白色家兔，至少4只，體重2kg左右，雌雄兼可，實(shí)驗(yàn)動物應(yīng)單籠飼養(yǎng)，試驗(yàn)前家兔要在實(shí)驗(yàn)動物房至少適應(yīng)3d時(shí)間。實(shí)驗(yàn)動物及實(shí)驗(yàn)動物房應(yīng)符合國家相關(guān)規(guī)定。選用常規(guī)飼料，飲水不限制。 2、受試物、受試物 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑四、 實(shí)驗(yàn)步驟 1、試驗(yàn)前24小時(shí)將動物背部脊柱兩側(cè)毛脫掉，不可損傷毛皮，脫毛面積左右各4cmX4cm。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗(yàn) 2、取受試樣品0.5ml直接涂布在皮膚上，用4層紗布（3cmX3cm）和一層玻璃紙或類似物覆蓋，再用無刺激膠布和繃帶加以固定。對側(cè)皮

7、膚作為對照。采用封閉實(shí)驗(yàn)，敷用時(shí)間為4h。試驗(yàn)結(jié)束后，用溫水或無刺激性溶劑清除殘留受試樣品。 3、如懷疑受試樣品可能引起嚴(yán)重刺激或腐蝕作用，可采用分段實(shí)驗(yàn)，將三個涂布受試樣品的紗布快同時(shí)或先后敷貼于一只家兔背部脫毛區(qū)皮膚上，分別于涂敷后3min，60min和4h取下一塊紗布，皮膚部位在任一時(shí)間點(diǎn)積分等于8分，即可停止試驗(yàn)。 4、觀察時(shí)間的確定應(yīng)足以觀察到可逆和不可逆刺激作用的全過程，一般不超過14d。 于清除受試樣品后的1h、24h、48h和72h各觀察受試部位的皮膚反應(yīng)，按表3進(jìn)行皮膚反應(yīng)評分，以受試物積分的平均值進(jìn)行綜合評價(jià)，根據(jù)24h、48h和72h各觀察時(shí)點(diǎn)最高積分均值，按表4判定皮膚

8、刺激強(qiáng)度。 皮膚刺激評價(jià)除根據(jù)表4的評分外，還應(yīng)結(jié)合刺激作用的性質(zhì)、恢復(fù)程度等進(jìn)行化學(xué)品刺激作用的綜合評價(jià)。單獨(dú)的積分值不能作為受試樣品的刺激性質(zhì)的最后評判，可以作為參考值。 急性皮膚刺激試驗(yàn)結(jié)果從動物外推到人的可靠性很有限。白色家兔在大多數(shù)情況下對有刺激性或腐蝕性的物質(zhì)較人類敏感。若用其他品系動物進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)也得到類似結(jié)果，則會增加從動物外推到人的可靠性。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚刺激試驗(yàn)五、 結(jié)果判斷及評價(jià)表3 皮膚刺激反應(yīng)評分表4 皮膚刺激強(qiáng)度評價(jià)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗(yàn)一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?測試動物在反復(fù)接觸40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑后，機(jī)體產(chǎn)生免疫傳遞的皮膚

9、反應(yīng)的可能性，從而確定該農(nóng)藥的變態(tài)反應(yīng)性（致敏）。二、 實(shí)驗(yàn)原理 具有致敏作用的化學(xué)物經(jīng)一定途徑進(jìn)入機(jī)體，與組織蛋白結(jié)合形成完全抗原，刺激免疫活性細(xì)胞產(chǎn)生致敏淋巴細(xì)胞或體液抗體；經(jīng)1-2周致敏期，使體內(nèi)免疫反應(yīng)得到充分發(fā)展，形成一定數(shù)量的致敏淋巴細(xì)胞或特異抗體。當(dāng)再次接觸（激發(fā)）時(shí)使機(jī)體對該化合物產(chǎn)生感受性增高的狀態(tài)，以一定的異常形式表現(xiàn)出來。三、 實(shí)驗(yàn)材料 1、實(shí)驗(yàn)動物 成年白色豚鼠，體重200-300g，雌雄均可，雌性動物不能發(fā)生過性行為。在同一次試驗(yàn)中，應(yīng)使用同一性別動物。如果使用兩種性別動物，則應(yīng)雌、雄各半。試驗(yàn)前動物應(yīng)在實(shí)驗(yàn)動物室至少喂養(yǎng)3d，以適應(yīng)環(huán)境和淘汰不合格動物。 2、受試物

10、 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑。 3、 陽性致敏物 2,4一二硝基氯代苯制成1的致敏濃度和0.1的激發(fā)濃度。 4、賦形劑 水或無刺激性表面活性劑40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗(yàn)四、 實(shí)驗(yàn)步驟 1、用23只動物進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，尋找能引起皮膚輕度刺激反應(yīng)的最高濃度（劑量）。激發(fā)濃度一般低于致敏濃度，不得引起原發(fā)刺激性炎癥反應(yīng)。 2、實(shí)驗(yàn)分組：將豚鼠按體重性別隨機(jī)分成三組，第一組20只（雌雄各半），二、三組各10只（雌雄各半）。第一組給農(nóng)藥，第二組空白對照（給賦形劑），第三組陽性對照（給陽性致敏物）。 3、致敏接觸：實(shí)驗(yàn)前24h將動物背部左側(cè)去毛3cm3cm。試驗(yàn)組：將試驗(yàn)農(nóng)藥0.10.2

11、ml涂在2cm2cm濾紙上，并將其敷貼在去毛區(qū)，以1層油紙或玻璃紙和2層大于備皮面積的紗布覆蓋，再以無刺激膠布封閉固定，持續(xù)6h。用清水或無刺激性溶劑洗去殘留的受試物。第7d和第14d以同樣方法重復(fù)一次?？瞻讓φ战M與陽性對照組方法同上。 40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗(yàn) 4、激發(fā)接觸：實(shí)驗(yàn)前24h將動物背部右側(cè)去毛3cm3cm。試驗(yàn)組和對照組：末次致敏后第14天，將0.10.2mL或低于誘導(dǎo)濃度的試驗(yàn)農(nóng)藥斑貼于右側(cè)去毛區(qū)，覆蓋方法同2的步驟，持續(xù)6h，去掉去掉斑貼及試驗(yàn)農(nóng)藥后，每日觀察皮膚過敏反應(yīng)情況至第12d，主要觀察有無紅斑、水腫。如無致變，可再次激發(fā)以確定試驗(yàn)農(nóng)藥能否引起過敏反應(yīng)。 陽性對照組給陽性致敏物，方法同上。40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗(yàn)五、結(jié)果判斷及評價(jià)40.6%阿維菌素炔螨特微乳劑的皮膚致敏試驗(yàn) 在24h、48h后分別觀察局部皮膚反應(yīng)。用盲法觀察對照組和試驗(yàn)組。按表5對局部皮膚反應(yīng)評分。當(dāng)受試樣品組出現(xiàn)皮膚反應(yīng)積分不小于2時(shí)，判為該動物出現(xiàn)皮膚致敏反應(yīng)陽性，并計(jì)算致敏率