動物細(xì)胞培養(yǎng)

1、動物細(xì)胞培養(yǎng) 2001年年2月，一只特別的活老鼠在北京引起轟月，一只特別的活老鼠在北京引起轟動動這是有著一對紅眼睛的、尾巴長長的、這是有著一對紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。與眾不同的是，這只小白鼠渾身沒毛的小白鼠。與眾不同的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的“人人耳耳”。這只老鼠背上的。這只老鼠背上的“人耳人耳”，展示的是我國，展示的是我國“863”計劃的一項科研成果。這只老鼠身上的計劃的一項科研成果。這只老鼠身上的“人耳人耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)

2、復(fù)制出來外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)復(fù)制出來的。的。 背上長背上長“人耳人耳”的老鼠從上?？者\至北京后，的老鼠從上?？者\至北京后，住進(jìn)了一家大飯店。住進(jìn)了一家大飯店?！叭硕笕硕蟆闭钩鰰r，被放到展出時，被放到一個透明的盒子里，里面沒有水，沒有飼料，也一個透明的盒子里，里面沒有水，沒有飼料，也沒有過濾空氣的裝置，因此，每次展出時間不過沒有過濾空氣的裝置，因此，每次展出時間不過一兩個小時。長一兩個小時。長“人耳人耳”的老鼠亮相京城，透露的老鼠亮相京城，透露了一條信息了一條信息隨著人類生命奧秘的揭曉，有隨著人類生命奧秘的揭曉，有朝一日人體就會像一輛汽車一樣，哪個零件壞了，朝一日人體就會像一輛

3、汽車一樣，哪個零件壞了，可再買一個新的換上。可再買一個新的換上。 1991年，曹誼林教授在美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)年，曹誼林教授在美國哈佛大學(xué)醫(yī)學(xué)院和麻省大學(xué)醫(yī)學(xué)中心學(xué)習(xí)期間，取得在院和麻省大學(xué)醫(yī)學(xué)中心學(xué)習(xí)期間，取得在國際醫(yī)學(xué)界引起震撼的國際醫(yī)學(xué)界引起震撼的“老鼠背上長人耳老鼠背上長人耳”這一軟骨細(xì)胞移植術(shù)的新成就。曹誼林教這一軟骨細(xì)胞移植術(shù)的新成就。曹誼林教授說，授說，“人耳鼠人耳鼠”的制作關(guān)鍵在的制作關(guān)鍵在“人耳人耳”，先用一種高分子化學(xué)材料聚羥基乙酸做成先用一種高分子化學(xué)材料聚羥基乙酸做成人耳的模型支架，讓細(xì)胞在這個支架上繁人耳的模型支架，讓細(xì)胞在這個支架上繁殖生長，然后，在裸鼠的背上割開一個口

4、殖生長，然后，在裸鼠的背上割開一個口子，將已經(jīng)培養(yǎng)好的子，將已經(jīng)培養(yǎng)好的“人耳人耳”植入后縫合。植入后縫合?！叭硕硕敝Ъ茏詈髸约航到庀В谑?，支架最后會自己降解消失，于是，“人耳人耳”便與老鼠渾然成為一體。便與老鼠渾然成為一體。為什么要進(jìn)行動物細(xì)胞培養(yǎng)?1.1.動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)?培養(yǎng)時又需要提供哪些必要條件呢？2.2.12.2.1動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)和核移植技術(shù) 從動物機體中取出相關(guān)組織，將它們分散從動物機體中取出相關(guān)組織，將它們分散成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這成單個細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長和增殖。些細(xì)胞生長和增殖

5、。1.1概念概念1.2 1.2 動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)過程過程 胚胎或幼齡動物的組織器官胚胎或幼齡動物的組織器官細(xì)胞懸液細(xì)胞懸液10代細(xì)胞代細(xì)胞50代細(xì)胞代細(xì)胞剪碎胰蛋白酶洗滌、稀釋、分離原代培養(yǎng)用用胰蛋白酶胰蛋白酶分散分散細(xì)胞，說明細(xì)胞細(xì)胞，說明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)。動物細(xì)。動物細(xì)胞培養(yǎng)適宜的胞培養(yǎng)適宜的PH為為7.27.4，此環(huán)境下胃蛋白此環(huán)境下胃蛋白酶（酶（2.0）沒有）沒有活性，而胰蛋白活性，而胰蛋白酶酶(7.2-8.4)的活的活性較高。性較高。比老比老齡動齡動物的組織物的組織細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖能力強，能力強，有絲有絲分裂分裂旺盛旺盛。分分化程度化程度越越低，低

6、，增殖增殖能力越強，能力越強，越越容易培容易培養(yǎng)。養(yǎng)。動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體成生物體細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖緩慢，核緩慢，核型可能變型可能變化化動物組織細(xì)胞間隙中含有一定動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。和韌性的組織和器官。貼壁生長接觸抑制10代以內(nèi)，保持正常二倍體核型代以內(nèi)，保持正常二倍體核型傳代培養(yǎng) 多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，多細(xì)胞動物和人體的細(xì)胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識，思考以下問題：根據(jù)你所學(xué)的內(nèi)環(huán)境的知識，思考以

7、下問題： 1.體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細(xì)胞時需要提供哪些物質(zhì)？ 2.體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 討討 論論葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子和葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、促生長因子和動物血清等。動物血清等。適宜溫度、適宜溫度、PH和氣體環(huán)境；無菌無毒環(huán)境和氣體環(huán)境；無菌無毒環(huán)境獲得細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞的全能性細(xì)胞的全能性細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)品新的個體或細(xì)胞產(chǎn)品新的個體或細(xì)胞產(chǎn)品培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞產(chǎn)物或細(xì)胞產(chǎn)物快速繁殖、培育快速繁殖、培育無病毒植株等無病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清葡萄糖、動物血清促促生長

8、因子生長因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原原 理理動物細(xì)胞培動物細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物細(xì)胞和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較 大規(guī)模的生產(chǎn)有重要價值的生物制品大規(guī)模的生產(chǎn)有重要價值的生物制品 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體為基因工程技術(shù)提供受體細(xì)胞為基因工程技術(shù)提供受體細(xì)胞 培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植培養(yǎng)健康細(xì)胞用于燒傷病人皮膚移植有毒物質(zhì)的檢測有毒物質(zhì)的檢測細(xì)胞的生理、藥理、病理研究細(xì)胞的生理、藥理、病理研究

9、 如用于篩選抗癌藥物等，為治療和預(yù)如用于篩選抗癌藥物等，為治療和預(yù)防癌癥及其他疾病提供依據(jù)防癌癥及其他疾病提供依據(jù)動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用2.2.動物細(xì)胞動物細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物核移植技術(shù)和克隆動物 將動物的一個細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核將動物的一個細(xì)胞核，移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體（克隆動物）動物個體（克隆動物）分分類類胚胎細(xì)胞核移植：胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低，恢復(fù)全能性容易細(xì)胞分化程度低，恢

10、復(fù)全能性容易 細(xì)胞分化程度細(xì)胞分化程度高高，恢復(fù)全能性，恢復(fù)全能性不不容易容易2.1 動物細(xì)胞動物細(xì)胞核移植概念：核移植概念：2.2體細(xì)胞核移植的過程：體細(xì)胞核移植的過程：請看教材請看教材P48圖圖2-21思考：思考：1.核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時期？核移植的受體細(xì)胞是什么？處在什么時期？2.通過什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？通過什么手段激活受體細(xì)胞，構(gòu)建重組胚胎？ M中期卵母細(xì)胞中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成誘導(dǎo)方法：物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞，完成細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。細(xì)胞分裂和發(fā)育進(jìn)程。主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植

11、株用用 途途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電刺激）蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性細(xì)胞膜的流動性、細(xì)胞膜的流動性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性原原 理理動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項目比較項目植物、動物細(xì)胞融合的比植物、動物細(xì)胞融合的比較較討論：討論：1.在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體

12、卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？ 為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來為使核移植的胚胎或動物的遺傳物質(zhì)全部來自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體自有重要利用價值的動物提供的體細(xì)胞，在供體細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)細(xì)胞的細(xì)胞核移至受體細(xì)胞之前，必須將受體細(xì)胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐?。胞的遺傳物質(zhì)去掉或?qū)⑵淦茐摹?培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至培養(yǎng)的動物細(xì)胞一般當(dāng)傳代至1050代代左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其左右時，部分細(xì)胞核型可能會發(fā)生變化，其細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而細(xì)胞遺傳物質(zhì)可能會發(fā)生突變，而10代以代

13、以內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因內(nèi)的細(xì)胞一般能保持正常的二倍體核型。因此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞此，在體細(xì)胞核移植中，為了保證供體細(xì)胞正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代正常的遺傳基礎(chǔ)，通常采用傳代10代以內(nèi)代以內(nèi)的細(xì)胞。的細(xì)胞。2.用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？代以內(nèi)的細(xì)胞，想一想，這是為什么？3.你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是你認(rèn)為用上述體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了對體細(xì)胞供體動物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？的復(fù)制嗎？為什么？絕大部分絕大部分DNA來自于供

14、體細(xì)胞核，但其核外還有少來自于供體細(xì)胞核，但其核外還有少量的量的DNA，即線粒體中的，即線粒體中的DNA是來自于受體卵母是來自于受體卵母細(xì)胞。細(xì)胞。此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些此外，即便動物的遺傳基礎(chǔ)完全相同，但動物的一些行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動行為、習(xí)性的形成與所處環(huán)境有很大關(guān)系，核供體動物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，物生活的環(huán)境與克隆動物所生活的環(huán)境不會完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，其形成的行為、習(xí)性也不可能和核供體動物完全相同，從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物從這一角度看，克隆動物不會是核供體動物

15、100%的復(fù)制。的復(fù)制。2.3體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景：1、在畜牧業(yè)中可以加、在畜牧業(yè)中可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程速家畜遺傳改良的進(jìn)程2、保護瀕危物種、保護瀕危物種3、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)、醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官醫(yī)用蛋白質(zhì)及組織器官的移植的移植4、了解胚胎發(fā)育和衰老過程；追、了解胚胎發(fā)育和衰老過程；追蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病蹤研究疾病的發(fā)展過程和治療疾病 1、成功率比較低2、大多存在健康問題3、克隆動物食品安全問題2.4體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問題：思考與探究思考與探究2.動物細(xì)胞培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？動物細(xì)胞

16、培養(yǎng)要經(jīng)過脫分化的過程嗎？為什么？動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化動物細(xì)胞培養(yǎng)不需經(jīng)過脫分化過程。因高度分化的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個的動物細(xì)胞發(fā)育潛能變窄，失去了發(fā)育成完整個體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組體的能力，所以，動物細(xì)胞也就沒有類似植物組織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的織或細(xì)胞培養(yǎng)時的脫分化過程了。要想使培養(yǎng)的動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)動物細(xì)胞定向分化，通常采用定向誘導(dǎo)動物干細(xì)胞，使其分化成所需要的組織或器官。胞，使其分化成所需要的組織或器官。3.1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（年，美國威斯康星州

17、的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達(dá)（Lucinda）的奶牛，年產(chǎn)奶量為的奶牛，年產(chǎn)奶量為30.8 t，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世，創(chuàng)造了世界奶牛產(chǎn)奶量最高新紀(jì)錄。目前世界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量界各國高產(chǎn)奶牛場奶牛，年平均產(chǎn)奶量一般為十幾噸，而我國奶牛產(chǎn)奶量年平均水平僅為年平均水平僅為34 t。（1）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理由。）能利用體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)嗎？請說明理由。可以。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，可以。盧辛達(dá)的產(chǎn)奶量很高，有高產(chǎn)奶的遺傳基礎(chǔ)，利用盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上利用

18、盧辛達(dá)的體細(xì)胞克隆的奶牛其遺傳物質(zhì)基本上全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，全部來自該奶牛，其克隆牛具有高產(chǎn)的遺傳基礎(chǔ)，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，如果精心培育和飼養(yǎng)，有可能在世界范圍內(nèi)推廣，克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)克隆牛再與高產(chǎn)的公牛自然繁殖，可得到很多高產(chǎn)的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。的后代，從而加快奶牛改良進(jìn)程。該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤該克隆牛不能無限制地推廣，其數(shù)量不宜過多，尤其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出其是在小范圍內(nèi)不能無限的繁殖，以避免奶牛群出現(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退?，F(xiàn)近親繁殖而引起種質(zhì)衰退。（2）如

19、果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何）如果將克隆高產(chǎn)奶牛盧辛達(dá)的任務(wù)交給你，你將如何對它進(jìn)行克?。繉λM(jìn)行克??？從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體從盧辛達(dá)耳朵（也可用別的組織、器官，耳朵在活體上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組上容易?。┥霞羧∫恍K組織，在體外培養(yǎng)獲得該組織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，織（如軟骨組織）的細(xì)胞。從屠宰場取廢棄的牛卵巢，抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞抽取卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)成熟。用顯微針去除卵母細(xì)胞的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵的核，再將耳細(xì)胞注入卵母細(xì)胞，用電刺激方法使卵母細(xì)胞與體細(xì)胞融

20、合，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母母細(xì)胞與體細(xì)胞融合，這時供體核就進(jìn)入了受體卵母細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的細(xì)胞，再用電刺激或化學(xué)物質(zhì)激活注入了體細(xì)胞核的卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程。核移植胚卵母細(xì)胞，使其完成減數(shù)分裂和發(fā)育過程。核移植胚胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)胎在體外短時間培養(yǎng)后，挑選正常卵裂的胚胎植入經(jīng)同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。同期發(fā)情處理的受體母牛體內(nèi)。4.體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么體細(xì)胞核移植技術(shù)在研究和應(yīng)用上還存在什么問題？請你查閱資料，了解這方面的前沿動態(tài)。問題？請你查閱資料，了解這方面的前沿動態(tài)。研究方面研究方面：克隆動

21、物基因組重新編程的機制尚不清克隆動物基因組重新編程的機制尚不清楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率楚，克隆技術(shù)效率低，克隆動物畸形率高、死亡率高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。高、易出現(xiàn)早衰等問題。這些問題尚在研究中。應(yīng)用上應(yīng)用上：生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還生產(chǎn)克隆動物費用昂貴，距大規(guī)模應(yīng)用還有一定距離。有一定距離。一、動物細(xì)胞融合一、動物細(xì)胞融合 細(xì)胞融合是正常的生命活動兩個細(xì)胞正在融合兩個細(xì)胞正在融合 受精作用受精作用動動物物細(xì)細(xì)胞胞融融合合細(xì)胞細(xì)胞A細(xì)胞細(xì)胞B雜種細(xì)胞雜種細(xì)胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒

22、新城雞瘟病毒用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程細(xì)胞核細(xì)胞核病毒顆粒病毒顆粒細(xì)胞核細(xì)胞核二、單克隆抗體二、單克隆抗體什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。B淋巴細(xì)胞與抗體淋巴細(xì)胞與抗體B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。動物體內(nèi)的動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原

23、具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。體。單克隆抗體單克隆抗體 由單個由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，（克?。纬苫蛐拖嗤募?xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。異性強的抗體稱為單克隆抗體。 特點：特點：特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？ 利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技

24、術(shù)將兩種細(xì)胞融利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞性的雜交瘤細(xì)胞 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，

25、細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體。單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體