臨床常見病原體檢查(1)

1、第九章第九章 臨床病原體檢測臨床病原體檢測 提提 綱綱第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測教學(xué)目的與要求：教學(xué)目的與要求：了解掌握臨床病原體檢查的主要內(nèi)容（標本采集、標本驗收、藥敏檢查、耐藥性檢測、臨床常見病原體、病毒性肝炎、性傳播疾病、醫(yī)院感染）、檢測原理以及臨床實際應(yīng)用的重要

2、意義。重點與難點重點與難點標本采集的原則及各種檢查方法的適用范圍及其優(yōu)缺點藥物敏感的常用試驗方法及其特點耐藥菌檢測試驗各種類型臨床常見病原體的檢查甲、乙、丙型肝炎的檢測方法各種性傳播疾病病原體的檢測方法、篩選試驗、確診試驗及金標準院內(nèi)感染定義提提 綱綱第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病

3、原體檢測臨床細菌學(xué)檢驗的特殊性臨床細菌學(xué)檢驗的特殊性依賴于細菌生長依賴于細菌生長l采集時間采集時間 （發(fā)燒？）（發(fā)燒？）l運送方式運送方式 （密閉與否，保溫與否？）（密閉與否，保溫與否？）l感染的細菌種類及生長特征感染的細菌種類及生長特征 （苛養(yǎng)菌）（苛養(yǎng)菌）l病人是否使用抗生素病人是否使用抗生素 （抗生素的影響）（抗生素的影響）l其他：消毒劑，白細胞吞噬等其他：消毒劑，白細胞吞噬等容易受環(huán)境中的細菌污染容易受環(huán)境中的細菌污染l采集方法采集方法 （無菌操作，避免污染）（無菌操作，避免污染）l放置時間放置時間 （及時運送，避免細菌死亡）（及時運送，避免細菌死亡）基本原則基本原則1：正確的標本類型

4、和采集部位以反映有效病程：正確的標本類型和采集部位以反映有效病程2：采集和運送應(yīng)無菌操作，避免污染：采集和運送應(yīng)無菌操作，避免污染3：盡快送檢：盡快送檢4：視所有標本為傳染品，高度污染標本要有明顯標識：視所有標本為傳染品，高度污染標本要有明顯標識5：注意生物安全，標本用后要做消毒處理：注意生物安全，標本用后要做消毒處理一、標本采集和運送一、標本采集和運送（一）血液標本的采集（一）血液標本的采集適應(yīng)癥：疑似菌血癥、敗血癥或適應(yīng)癥：疑似菌血癥、敗血癥或膿毒血癥的病人膿毒血癥的病人酒精棉球消毒，防止污染。靜脈酒精棉球消毒，防止污染。靜脈采血后，將血液注入培養(yǎng)瓶內(nèi)采血后，將血液注入培養(yǎng)瓶內(nèi) 。采集時間

5、：一般在抗生素使用前，采集時間：一般在抗生素使用前，于發(fā)熱初期或高峰期采血。于發(fā)熱初期或高峰期采血。采集頻率：采集頻率：24小時內(nèi)采血小時內(nèi)采血23次可提高陽性率，且在不同部位。次可提高陽性率，且在不同部位。采血量：血液與培養(yǎng)基的比例為采血量：血液與培養(yǎng)基的比例為1：5-10，一般成人血量，一般成人血量510ml，嬰兒，嬰兒1-5ml。（二）尿液標本的采集（二）尿液標本的采集首次晨尿，無菌采集中段尿首次晨尿，無菌采集中段尿10-20ml。排尿困難者考慮導(dǎo)尿采集標本。排尿困難者考慮導(dǎo)尿采集標本。如考慮厭氧菌感染，采取膀胱如考慮厭氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集標本穿刺法采集標本。（三）糞便標本采集（

6、三）糞便標本采集自然排便者：挑取膿、血或粘液部分于清自然排便者：挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢。潔容器中送檢。排便困難者：采用直腸拭子采集。排便困難者：采用直腸拭子采集。懷疑霍亂弧菌感染引起的腹瀉，立即接種懷疑霍亂弧菌感染引起的腹瀉，立即接種或?qū)吮局糜趬A性蛋白胨水或卡或?qū)吮局糜趬A性蛋白胨水或卡-布運送布運送培養(yǎng)液送檢。培養(yǎng)液送檢。傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢傳染性腹瀉應(yīng)連續(xù)送檢3次。次。（四）呼吸道標本采集（四）呼吸道標本采集類型：鼻咽拭、痰和經(jīng)氣類型：鼻咽拭、痰和經(jīng)氣管采集的標本。管采集的標本。采集時間：晨痰，且在取采集時間：晨痰，且在取痰前用清水反復(fù)漱口。痰前用清水反復(fù)漱口。方法：（方法

7、：（1）自然咳痰法：）自然咳痰法：（2）氣管鏡下采集法；）氣管鏡下采集法；（3）氣管穿刺法。）氣管穿刺法。WBC 25/lp,上皮上皮10/lp。上呼吸道存在正常菌群，上呼吸道存在正常菌群，在采集標本與結(jié)果分析時在采集標本與結(jié)果分析時應(yīng)予考慮。應(yīng)予考慮。（五）腦脊液與其它無菌體液采集（五）腦脊液與其它無菌體液采集臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取臨床醫(yī)生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置，置于無菌容器中立即送檢，不得保存于冰箱于無菌容器中立即送檢，不得保存于冰箱中。中。腦膜炎的主要病原體：腦膜炎奈瑟菌、肺腦膜炎的主要病原體：腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌。炎鏈球菌、流感嗜血桿菌。（六）眼、耳標本

8、采集（六）眼、耳標本采集（七）泌尿生殖道標本采集（七）泌尿生殖道標本采集性傳播性疾病取尿道口分泌物、外陰糜爛性傳播性疾病取尿道口分泌物、外陰糜爛面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和面病灶邊緣分泌物、陰道宮頸口分泌物和前列腺液等。前列腺液等。 生殖道皰疹常穿刺抽取皰疹液。生殖道皰疹常穿刺抽取皰疹液。盆腔膿腫患者則于直腸子宮凹陷處穿刺取盆腔膿腫患者則于直腸子宮凹陷處穿刺取膿液。膿液。所有標本收集后于所有標本收集后于4保存直至培養(yǎng)保存直至培養(yǎng) （八）創(chuàng)傷、組織和膿腫標本（八）創(chuàng)傷、組織和膿腫標本損傷范疇較大的創(chuàng)傷，從不同部位采集多損傷范疇較大的創(chuàng)傷，從不同部位采集多份標本份標本 . 清除污物，以碘酒

9、、酒精消毒皮清除污物，以碘酒、酒精消毒皮膚膚.開放性膿腫：無菌棉拭子采集膿液及病灶開放性膿腫：無菌棉拭子采集膿液及病灶深部分泌物。深部分泌物。封閉性膿腫：無菌干燥注射器抽取。封閉性膿腫：無菌干燥注射器抽取。疑為厭氧菌感染，取膿液后立即排凈注射疑為厭氧菌感染，取膿液后立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢。器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢。標本送檢標本送檢標本要求盡快送檢，否則影響陽性率。標本要求盡快送檢，否則影響陽性率。烈性傳染病標本需專人護送。烈性傳染病標本需專人護送。二、標本的實驗室質(zhì)量評估標準二、標本的實驗室質(zhì)量評估標準 1標本必須注明姓名、年齡、性別、采集日期、臨床診斷、檢驗項目

10、等基本信自。 2仔細核對標本采集日期和送檢日期。延誤的標本，一般情況下不接收。通常用于細菌學(xué)檢驗的標本的存放不要超過24h。而病毒檢測的標本可于4存放23天。 3檢查送檢容器是否完整，有無破損或滲漏等情況，若有則不予接收。 4標本儲存、運送方式不當，不予接收。 5明顯被污染的標本不予接收。6標本量明顯不足的標本，不予接收。 7同一天申請做同一實驗的重復(fù)送檢標本(血培養(yǎng)除外)，不予接收。 8對于烈性傳染病標本的采集和運送應(yīng)嚴格執(zhí)行相關(guān)規(guī)定，要有完善的防護措施，按規(guī)定包裹及冷藏，附有詳細的采樣及送檢紀錄，由專人護送。 標本是否合格，以保證檢測結(jié)果的準確性！標本是否合格，以保證檢測結(jié)果的準確性！三、

11、檢查方法三、檢查方法（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查（二）病原體特異性抗原檢查（二）病原體特異性抗原檢查（三）病原體核酸檢查（三）病原體核酸檢查（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（五）血清學(xué)試驗（五）血清學(xué)試驗（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查不染色標本不染色標本不染色標本：不染色標本：適用于檢查適用于檢查生活狀態(tài)下病原體的動力生活狀態(tài)下病原體的動力及運動狀況及運動狀況。方法：方法：壓滴法、懸滴法壓滴法、懸滴法。意義：在不染色狀態(tài)下借意義：在不染色狀態(tài)下借助暗視野顯微鏡或相差顯助暗視野顯微鏡或相差顯微鏡觀察病原菌的動力、微鏡觀察病原菌的動力、活動方式。部分病

12、原體可活動方式。部分病原體可借此初步診斷，如梅毒螺借此初步診斷，如梅毒螺旋體。旋體。（一）直接顯微鏡檢查（一）直接顯微鏡檢查染色標本染色標本染色標本目的：了解細菌的形態(tài)、染色性或觀察宿主細胞內(nèi)包涵體。方法：革蘭染色、墨汁染色、抗酸染色、熒光染色革蘭染色革蘭染色陽性球菌（陽性球菌（GS）真菌孢子真菌孢子革蘭染色革蘭染色墨汁染色墨汁染色莢膜抗吞噬30%-50%的患者伴有免疫功能低下等疾病， 8%左右的AIDS患者伴有隱球菌性腦膜炎，預(yù)后極差。中樞神經(jīng)系統(tǒng)存活與腦脊液中缺乏抗體和補體激活系統(tǒng)有關(guān)抗真菌治療:兩性霉素B,氟康唑?qū)捄袂v膜寬厚莢膜熒光染色熒光染色SARS（severe acute resp

13、iratory syndrome ）病原體的確定。病原體的確定。直接顯微鏡檢查直接顯微鏡檢查電鏡檢查電鏡檢查電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)為電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)為某種冠狀病毒某種冠狀病毒1.無菌體液的直接鏡檢對病原體診斷具有一定意義。2.對正常菌群寄居腔道的分泌物圖片鏡檢可提示進一步檢查的步驟、采取的方法和確定分離鑒定病原體所需的培養(yǎng)基。3.由于臨床標本中常含有一定的抗菌物質(zhì)，以致分離培養(yǎng)可為陰性，此時的鏡檢往往可能在診斷是起作用。4.熒光顯微鏡用于標本經(jīng)熒光染色后直接檢出某些病原微生物5.電鏡檢查不常規(guī)用于臨床，對某些病毒感染卻有確診的價值。(二)病原體特異性抗原檢查 利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)，用已知抗體檢測

14、患者血清及其他體液中的待測抗原，借助免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、膠乳凝集試驗、對流免疫電泳等技術(shù)檢測標本中未知的病原體抗原，其診斷價值常以標本不同而各異。 標本中如果存在多種正常寄居微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定診斷。檢測細菌不同的抗原構(gòu)造，還可分析細菌的菌群和血清型，如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬等O1群霍亂弧菌的血清分型型別別名O抗原成份原型稻葉型A、C異型小川型A、B中間型彥島型A、B、C細菌的血清分型：細菌的血清分型：O1群霍亂弧菌的菌體抗原由群霍亂弧菌的菌體抗原由A、B、C三個抗原三個抗原成份組成成份組成利用抗原抗體之間的特異性反應(yīng)，用已知抗體檢測患者血清及其他體液

15、中的待測抗原檢測細菌不同的抗原構(gòu)造，檢測細菌不同的抗原構(gòu)造，還可分析細菌的菌群和血清型，還可分析細菌的菌群和血清型，如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬如沙門菌屬、志賀菌屬和霍亂菌屬（三）病原體核酸的檢測（三）病原體核酸的檢測常用試驗方法有：常用試驗方法有：1.PCR。polymerase chain reaction聚合酶聚合酶鏈式反應(yīng)，簡稱鏈式反應(yīng)，簡稱PCR技術(shù)。技術(shù)。2.核酸探針雜交技術(shù)核酸探針雜交技術(shù)3.Realtime PCR4.基因芯片等基因芯片等PCR技術(shù)簡史DNA的復(fù)制核酸體外擴增的設(shè)想聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明1985年，美國PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PC

16、R）基本原理是在試管中模擬細胞內(nèi)的DNA復(fù)制最初采用E-coli DNA聚合酶進行PCR，由于該酶不耐熱，使這一過程耗時，費力，且易出錯耐熱DNA聚合酶的應(yīng)用使得PCR能高效率的進行，隨后PE-Cetus公司推出了第一臺PCR自動化熱循環(huán)儀1993年，Mullis等因此項技術(shù)獲諾貝爾化學(xué)獎PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點標準的標準的PCRPCR反應(yīng)體系反應(yīng)體系4種dNTP混合物 各200umol/L引物 各10100pmol模板DNA 0. .12ugTaq DNA聚合酶 2. .5uMg2+ 1. .5mmol/L1234522557294時間（min）溫度（）PCR的基

17、本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性DNA變性形成2條單鏈子鏈延伸DNA加倍PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點1234522557294時間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復(fù)13步2530輪目的DNA片段擴增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復(fù)性子鏈延伸DNA加倍DNA變性形成2條單鏈模板DNA95PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點9550引物1引物2DNA引物PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點5

18、0引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點72第1輪結(jié)束95第2輪開始PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點955072TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點72第2輪結(jié)束PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點模板DNA第1輪擴增第2輪擴增第3輪擴增第4輪擴增第5輪擴增第6輪擴增PCR擴增產(chǎn)物電泳擴增產(chǎn)物電泳PCR的基本原理PCR反應(yīng)條件PCR過程PCR的特點靈敏度高1.皮克(pg=10-12)量級擴增到微克(ug=10-6)水平2.能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞3.病毒

19、檢測的靈敏度可達3個RFU4.細菌檢測的最小檢出率為3個細菌簡便、快速1.一次性加好反應(yīng)液，24 小時完成擴增2.擴增產(chǎn)物一般用電泳分析對標本的純度要求低u血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活組織等組織的粗提DNA皮克(pg=10-12)量級擴增到微克(ug=10-6)水平能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞病毒檢測的靈敏度可達3個RFU細菌檢測的最小檢出率為3個細菌PCR的類型和應(yīng)用 研究基因克隆，DNA測序，分析突變 診斷細菌、病毒、寄生蟲檢測，診斷 人類基因組工程遺傳圖譜的構(gòu)建，DNA測序，表達圖譜 法醫(yī)犯罪現(xiàn)場標本分析 腫瘤各種腫瘤檢測 其他（三）病原體核酸的檢測（三）病原體核酸的檢測P

20、CRPCR：一種體外基因擴：一種體外基因擴增技術(shù)，對目的基因組增技術(shù)，對目的基因組DNA的信號進行放大。的信號進行放大。（三）病原體核酸的檢測（三）病原體核酸的檢測Realtime PCR實時熒光定量實時熒光定量PCR：通過：通過起始點定量和熒光檢測系起始點定量和熒光檢測系統(tǒng)實時監(jiān)測統(tǒng)實時監(jiān)測累積熒光強度累積熒光強度而而實現(xiàn)核酸定量實現(xiàn)核酸定量的一種技的一種技術(shù)。術(shù)。廣泛應(yīng)用于結(jié)核和麻風(fēng)分廣泛應(yīng)用于結(jié)核和麻風(fēng)分枝桿菌、乙型肝炎病毒、枝桿菌、乙型肝炎病毒、丙型和戊型肝炎病毒、丙型和戊型肝炎病毒、HIV、巨細胞病毒的檢查、巨細胞病毒的檢查（三）病原體核酸的檢測（三）病原體核酸的檢測Realtime

21、 PCR將大量核酸片段將大量核酸片段(寡核苷酸、寡核苷酸、PNA、cDNA、基因、基因組組DNA)以預(yù)先設(shè)計的方式固定在載玻片、尼龍膜以預(yù)先設(shè)計的方式固定在載玻片、尼龍膜和纖維素膜等載體上組成密集分子陣列，與熒光素和纖維素膜等載體上組成密集分子陣列，與熒光素或其他方式標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信或其他方式標記的樣品進行雜交，通過檢測雜交信號的強弱進而判斷樣品中靶分子的有無和數(shù)量。該號的強弱進而判斷樣品中靶分子的有無和數(shù)量。該技術(shù)具有高通量、自動化程度高、快速、樣品用量技術(shù)具有高通量、自動化程度高、快速、樣品用量少、靈敏度高、特異性強、污染少等特點。病原微少、靈敏度高、特異性強、污染少等特

22、點。病原微生物的生物的16S rDNA及及23S rDNA序列近幾年被作序列近幾年被作為一個較理想的基因分類靶序列，其在進化壓力下為一個較理想的基因分類靶序列，其在進化壓力下保持了高度的保守性，同時又具有一定的變異性，保持了高度的保守性，同時又具有一定的變異性，基因芯片技術(shù)通常利用病原微生物的這一分子生物基因芯片技術(shù)通常利用病原微生物的這一分子生物學(xué)特性，實現(xiàn)多樣本多病原微生物的同時檢測。學(xué)特性，實現(xiàn)多樣本多病原微生物的同時檢測。（三）病原體核酸的檢測（三）病原體核酸的檢測基因芯片基因芯片意義意義靈敏度高，是檢測病原體微生物最靈敏的靈敏度高，是檢測病原體微生物最靈敏的方法，但具有一定的假陽性與

23、假陰性。方法，但具有一定的假陽性與假陰性。特異性強，陽性只表明存在某種病原體的特異性強，陽性只表明存在某種病原體的核酸，是否正被感染應(yīng)結(jié)合臨床具體分析。核酸，是否正被感染應(yīng)結(jié)合臨床具體分析。特別適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分特別適用于目前尚不能分離培養(yǎng)或很難分離培養(yǎng)的微生物。離培養(yǎng)的微生物。適用于核酸變異的病原微生物，如病毒適用于核酸變異的病原微生物，如病毒（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定明確感染病原體明確感染病原體提供體外抗微生物藥提供體外抗微生物藥物敏感試驗結(jié)果物敏感試驗結(jié)果1.細菌感染性疾病病原體的分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)是微生物學(xué)檢驗中確診的關(guān)鍵步驟分離培養(yǎng)是微生物學(xué)

24、檢驗中確診的關(guān)鍵步驟 根據(jù)臨床癥狀、體征和鏡下檢查特征做出病原學(xué)初根據(jù)臨床癥狀、體征和鏡下檢查特征做出病原學(xué)初步診斷，選擇最合適的培養(yǎng)方法，主要是選擇適當步診斷，選擇最合適的培養(yǎng)方法，主要是選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基、接種前的標本處理和確定孵育條件，然的培養(yǎng)基、接種前的標本處理和確定孵育條件，然后根據(jù)菌落性狀后根據(jù)菌落性狀(大小、色澤、氣味、邊緣、光滑大小、色澤、氣味、邊緣、光滑度、色素、溶血情況等度、色素、溶血情況等)和細菌的形態(tài)、染色性，和細菌的形態(tài)、染色性，檢測細菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)實驗、動物接種實檢測細菌生化反應(yīng)結(jié)果和血清學(xué)實驗、動物接種實驗驗(白喉桿菌白喉桿菌)，對分離菌作出鑒定，也可借助于

25、微，對分離菌作出鑒定，也可借助于微量鑒定系統(tǒng)快速簡便鑒定分離菌量鑒定系統(tǒng)快速簡便鑒定分離菌 （四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定細菌分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評價：細菌分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評價：正常人群的無菌體液中檢測到細菌，應(yīng)考慮細菌為感染的病原體。正常人群的無菌體液中檢測到細菌，應(yīng)考慮細菌為感染的病原體。存在正常菌群的標本檢測到細菌，應(yīng)結(jié)合細菌的量考慮是否為致病菌。存在正常菌群的標本檢測到細菌，應(yīng)結(jié)合細菌的量考慮是否為致病菌。如臨床表現(xiàn)支持感染，但培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮為標本不合格、培養(yǎng)不恰當?shù)纫蛉缗R床表現(xiàn)支持感染，但培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮為標本不合格、培養(yǎng)不恰當?shù)纫蛩?。素。直接鏡檢找到

26、病原體，而培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮有直接鏡檢找到病原體，而培養(yǎng)陰性，應(yīng)考慮有L細菌、厭氧菌或苛氧菌感染。細菌、厭氧菌或苛氧菌感染。2.不能人工培養(yǎng)的病原體感染性疾病將標本接種易感動物、雞胚或行細胞培養(yǎng)將標本接種易感動物、雞胚或行細胞培養(yǎng)（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定（四）病原體的分離培養(yǎng)和鑒定病毒分離培養(yǎng)與鑒定的結(jié)果評價：從組織、血液以及腦脊液中分離到病毒可明確診斷。從呼吸道、腸道等分離到病毒，如該病毒人體不能長期攜帶，有診斷價值，如麻疹病毒、流感病毒等。反之需相應(yīng)的臨床表現(xiàn)，才有病原學(xué)意義，如巨細胞病毒，腸道病毒等。陰性不能排除病毒感染。必須結(jié)合流行病學(xué)資料、臨床表現(xiàn)、標本來源及病毒種類加以分析。（五

27、）血清學(xué)試驗（五）血清學(xué)試驗 用已知病原體的抗原檢測患者血清中相應(yīng)抗體以診斷感染性疾病。 人體感染病原體后經(jīng)過一定時間產(chǎn)生特異性抗體，在體內(nèi)可維持數(shù)月或更長時間。 雙份血清檢查：病程早期和晚期分別采血清2-3份檢查，雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體感染單份血清檢查：特異性 IgM可作為感染性疾病的早期診斷指標，且可區(qū)分原發(fā)與復(fù)發(fā)感染。方法有：凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、間接免疫熒光、放射免疫、酶聯(lián)免疫吸附試驗。適用范圍血清學(xué)診斷可用于現(xiàn)癥診斷，還可以用于疾病追溯調(diào)查。血清學(xué)診斷對于某些病原體不能培養(yǎng)或難以培養(yǎng)的疾病，可以提供診斷的依據(jù)， 抗原結(jié)構(gòu)O抗原抗原：化學(xué)成分為脂多糖

28、；耐：化學(xué)成分為脂多糖；耐熱；是沙門菌分群依據(jù)；相應(yīng)熱；是沙門菌分群依據(jù)；相應(yīng)抗體為抗體為IgM抗體；與相應(yīng)抗體結(jié)抗體；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)顆粒狀凝集；。合出現(xiàn)顆粒狀凝集；。H抗原抗原：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)；不耐：化學(xué)成分為蛋白質(zhì)；不耐熱；有雙相鞭毛；沙門菌分型依據(jù)；熱；有雙相鞭毛；沙門菌分型依據(jù)；與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)絮狀凝集；相與相應(yīng)抗體結(jié)合出現(xiàn)絮狀凝集；相應(yīng)抗體為應(yīng)抗體為IgG抗體?？贵w。Vi抗原：不耐熱；抗原：不耐熱；能阻止能阻止O抗原與相抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合應(yīng)抗體結(jié)合血清學(xué)診斷肥達反應(yīng)原理原理：用已知傷寒沙門菌：用已知傷寒沙門菌O、H抗原和甲、抗原和甲、乙、丙型副傷寒沙門菌乙、丙型副傷寒沙門菌H

29、抗原與病人血清抗原與病人血清作半定量凝集試驗，以測定受檢血清中有作半定量凝集試驗，以測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價。無相應(yīng)抗體及其效價。意義意義：協(xié)助診斷腸熱癥（傷寒與副傷寒）：協(xié)助診斷腸熱癥（傷寒與副傷寒）幾種沙門菌抗原構(gòu)造組型O抗原H抗原第1相第2相A組甲型副傷寒沙門菌1，2，12a-B組乙型副傷寒沙門菌1，4，5，12b1，2鼠傷寒沙門菌1，4，5，12i1，2C組 丙型副傷寒沙門菌Vi6，7，c1，5豬霍亂沙門菌6，7，c1，5D組傷寒沙門菌Vi9，12，d-腸炎沙門菌1，9，12g.m-腸熱癥病人血清抗體出現(xiàn)情況100908070605040302010陽性檢出率陽性檢出率1 2

30、 3 4 5 6 7 8發(fā)病周數(shù)發(fā)病周數(shù)肥達反應(yīng)正常值O凝集效價凝集效價1：80H凝集效價凝集效價1：160副傷寒副傷寒H凝集效價凝集效價1：80 大于正常值具有診斷意義大于正常值具有診斷意義O與H抗體的診斷意義：O、H效價均升高效價均升高：已感染傷寒：已感染傷寒O、H效價均低于正常值效價均低于正常值：未感染沙門菌或免：未感染沙門菌或免疫力低下疫力低下生理鹽水生理鹽水 待檢血清待檢血清 診斷抗原診斷抗原傷寒傷寒O傷寒傷寒H甲型副傷寒甲型副傷寒H肖沙門菌肖沙門菌H反應(yīng)反應(yīng)6小時小時4545觀察結(jié)果觀察結(jié)果1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640傷寒傷寒O效價效價 1:32

31、0傷寒傷寒H效價效價 1:640甲型副傷寒甲型副傷寒H效價效價 1:20肖沙門菌肖沙門菌H效價效價 1:20診斷意義：感染傷寒沙門菌診斷意義：感染傷寒沙門菌1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280最終稀釋最終稀釋 倍數(shù)倍數(shù)傷寒帶菌者的檢測從標本中分離出病原菌從標本中分離出病原菌血清中檢出血清中檢出Vi抗體，效價抗體，效價1：10第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測1922年他發(fā)現(xiàn)了一種叫“溶菌酶”的物質(zhì)，發(fā)表了皮膚組織和分泌物中所發(fā)現(xiàn)的奇特細菌的報告。 但他自己無法發(fā)明一種提純青霉素的技術(shù)，致使此藥十幾年一直未得以使用 。1939年，瓦爾特弗洛和鮑利斯錢

32、恩，重復(fù)了弗萊明的工作，證實了他的結(jié)果，然后提純了青霉素 1945年，弗萊明、弗洛里和錢恩共獲諾貝爾生理學(xué)及醫(yī)學(xué)獎。 第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測抗菌藥物是目前臨床使用最為廣泛的藥物，抗菌藥物是目前臨床使用最為廣泛的藥物，它的發(fā)現(xiàn)、研制和臨床應(yīng)用是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)史它的發(fā)現(xiàn)、研制和臨床應(yīng)用是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)史上的重要里程碑，使絕大多數(shù)微生物感染，上的重要里程碑，使絕大多數(shù)微生物感染，尤其是細菌感染成為可治性疾病尤其是細菌感染成為可治性疾病 抗生素壓力抗生素壓力耐藥菌株極少xx耐藥菌株為耐藥菌株為主主抗生素暴露抗生素暴露xxxxxxxxxx體外抗菌藥物敏感試驗的目的體外抗菌藥物敏感試驗的目的

33、臨床分離菌株，如不能對抗生素敏感性進臨床分離菌株，如不能對抗生素敏感性進行預(yù)測，必須常規(guī)進行藥敏試驗。行預(yù)測，必須常規(guī)進行藥敏試驗。臨床治療效果差而考慮調(diào)整抗菌藥物時。臨床治療效果差而考慮調(diào)整抗菌藥物時。了解細菌耐藥的流行病學(xué)情況。了解細菌耐藥的流行病學(xué)情況。評價新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等。評價新抗菌藥物的抗菌譜和抗菌活性等。抗微生物藥物敏感試驗抗微生物藥物敏感試驗(antimicrobial susceptibility test, AST)對敏感性不對敏感性不能預(yù)測的臨床分離株進行藥敏試驗，以指能預(yù)測的臨床分離株進行藥敏試驗，以指導(dǎo)臨床選擇治療藥物。導(dǎo)臨床選擇治療藥物。體外抗菌藥物敏感

34、試驗的方法體外抗菌藥物敏感試驗的方法 常用的檢查細菌是否對藥物耐藥的方法有定性測常用的檢查細菌是否對藥物耐藥的方法有定性測定的紙片擴散法、定量測定的稀釋法和定的紙片擴散法、定量測定的稀釋法和E試驗法。對試驗法。對某些特定耐藥菌株的檢測除藥物敏感試驗外還要附某些特定耐藥菌株的檢測除藥物敏感試驗外還要附加特殊的酶檢測試驗、基因檢測等方法。加特殊的酶檢測試驗、基因檢測等方法。常用方法有常用方法有:紙片擴散法紙片擴散法（Kirby-Bauer test）稀釋法稀釋法（dilution test）E試驗法（試驗法（E test） 耐藥篩選試驗?zāi)退幒Y選試驗折點敏感試驗折點敏感試驗含有定量抗菌藥物的紙片貼在

35、已接種測試菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后便不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的濃度梯度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)的細菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度。KB紙片瓊脂擴散法紙片瓊脂擴散法 試驗程序按敏感(susceptible，S)、中度敏感(intermediate，I)、耐藥(resistant，R)報告。S：測試菌能被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制或殺滅。I：測試菌能被測定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制，或在測定藥物濃集部位的體液(如尿)中被抑制。R：測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達到的抗菌藥物

36、濃度所抑制。細菌藥敏試驗-液體稀釋法Minimal inhibitory concentration (MIC)，最低抑菌濃度：能夠抑制檢測菌肉眼可見生長的：能夠抑制檢測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。移液管2抗抗藥物藥物倍稀釋倍稀釋抗生素移液管1先以水解酪蛋白液體培養(yǎng)基將抗生素作不同濃度稀釋，再種入待檢菌，置35溫箱，培養(yǎng)24h。結(jié)果判讀：肉眼觀察，以不出現(xiàn)肉眼可見生長（混濁現(xiàn)象）的最低藥物濃度為該藥對測試菌的MIC?？股匾埔汗?渾濁渾濁渾濁渾濁渾濁渾濁M I C細菌藥敏試驗- E-test法1.結(jié)合稀釋法和擴散法原理和特點而設(shè)計的一種操作簡便(

37、如同擴散法)、精確測定MIC(如同稀釋法)的一種方法。2.在涂布有待測試菌的平板上放置1條內(nèi)含干化、穩(wěn)定、濃度由高到低呈指數(shù)梯度分布的商品化抗菌藥物塑料試條。35孵育1618h。3.抑菌圈和試條橫向相交處的讀數(shù)刻度即是待測菌的MIC，參照CLSI標準判斷細菌藥敏試驗- E-test法青霉素的青霉素的MIC 解釋標準S 2R8結(jié)論：結(jié)論：1. MIC:1.02. 該肺炎鏈球菌對青霉素敏感該肺炎鏈球菌對青霉素敏感缺點Etest試條價格昂貴，目前尚未廣泛使用藥敏試驗結(jié)果的解釋（藥敏試驗結(jié)果的解釋（1）敏感（敏感（susceptible）：表示測試菌能被）：表示測試菌能被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達

38、到的血測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制或殺滅。藥濃度所抑制或殺滅。耐藥（耐藥（resistant）：表示測試菌不能被）：表示測試菌不能被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制或殺滅，治療無效。藥濃度所抑制或殺滅，治療無效。 藥敏試驗結(jié)果的解釋（藥敏試驗結(jié)果的解釋（2）中介中介 (intermediate) : 測試菌能被測定藥物大劑測試菌能被測定藥物大劑量給藥后在體內(nèi)達到的血量給藥后在體內(nèi)達到的血藥濃度所抑制，或在測定藥濃度所抑制，或在測定藥物濃集部位的體液藥物濃集部位的體液(如尿如尿)中被抑制中被抑制該范圍作為敏感與耐藥之該范圍作

39、為敏感與耐藥之間的緩沖區(qū)，避免由于微間的緩沖區(qū)，避免由于微小技術(shù)誤差影響實驗結(jié)果。小技術(shù)誤差影響實驗結(jié)果。（二）特殊的耐藥菌監(jiān)測的特殊試驗（二）特殊的耐藥菌監(jiān)測的特殊試驗 由于細菌存在一種或幾種耐藥機制，造由于細菌存在一種或幾種耐藥機制，造成了細菌的多重耐藥性。單一的藥敏試驗已成了細菌的多重耐藥性。單一的藥敏試驗已不能完全表示細菌的耐藥性，必須進行一些不能完全表示細菌的耐藥性，必須進行一些特殊的耐藥性監(jiān)測試驗。特殊的耐藥性監(jiān)測試驗。1.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定2.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測定氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測定3.耐青霉素肺炎鏈球菌的

40、篩選測定耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測定4.-內(nèi)酰胺酶的檢測內(nèi)酰胺酶的檢測5.超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶的檢測內(nèi)酰胺酶的檢測1.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定（耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定（methecillin resistance staphylococcus，MRS）包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌是目前導(dǎo)致醫(yī)院感染的重要病原菌。此類葡萄球菌具有多重耐藥性，即對全部一內(nèi)酰胺類抗菌藥物，包括青霉素族和頭孢菌素族以及臨床常用的其他多種抗菌藥物均耐藥。因此，此類葡萄球菌的早期檢出和確定具有重要臨床意義 1.耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定（耐甲氧西林葡萄球菌的篩選測定（methec

41、illin resistance staphylococcus，MRS）1g苯唑西林紙片的抑苯唑西林紙片的抑菌圈直徑菌圈直徑10mm，或或MIC4g/ml的金的金黃色葡萄球菌黃色葡萄球菌, 1g苯苯唑西林紙片的抑菌圈直唑西林紙片的抑菌圈直徑徑17mm，或，或MIC0.5g/ml的的凝固酶陰性葡萄球菌稱凝固酶陰性葡萄球菌稱耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌。臨床意義臨床意義對所有對所有-內(nèi)酰胺類藥物均無效，并對氨基內(nèi)酰胺類藥物均無效，并對氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)脂類、克林霉素和四環(huán)素糖甙類、大環(huán)內(nèi)脂類、克林霉素和四環(huán)素等抗生素多重耐藥。等抗生素多重耐藥。治療首選藥物為萬古霉素。治療首選藥物為萬古霉素

42、。2.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測定選測定對多種抗菌藥物包括氨基糖苷類呈固有耐藥是腸球菌的特點，故單用氨基糖苷類治療腸球菌感染無效。但如與一種作用于細胞壁的抗菌藥物如青霉素類合用，則可發(fā)生協(xié)同作用而增強殺菌效力。如果腸球菌對氨基糖苷類產(chǎn)生了高耐藥性，這種聯(lián)合應(yīng)用就會無效。所以及時篩選出腸球菌中氨基糖苷類高耐藥株，有助于臨床調(diào)整和重新確定治療方案。 2.氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩氨基糖苷類抗生素高耐藥腸球菌的篩選測定選測定定義定義: 對對30g萬古霉萬古霉素紙片抑菌圈直徑素紙片抑菌圈直徑19mm， 或或MIC32g/ml應(yīng)應(yīng)視為耐萬古霉素腸球視為耐萬

43、古霉素腸球菌（菌（vancomycin resistant enteroccoccus，VRE）。）。 臨床意義臨床意義耐萬古霉素腸球菌目前尚無有效的治療方耐萬古霉素腸球菌目前尚無有效的治療方法，但是對青霉素敏感的法，但是對青霉素敏感的VRE可用青霉素可用青霉素和慶大霉素聯(lián)合治療，若對青霉素耐藥而和慶大霉素聯(lián)合治療，若對青霉素耐藥而不是高水平耐氨基糖苷類可用壁霉素和慶不是高水平耐氨基糖苷類可用壁霉素和慶大霉素。另外氯霉素、紅霉素、四環(huán)素大霉素。另外氯霉素、紅霉素、四環(huán)素（或多西環(huán)素、或米諾環(huán)素）及利福平可（或多西環(huán)素、或米諾環(huán)素）及利福平可用于用于VRE株。株。3.耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測定

44、耐青霉素肺炎鏈球菌的篩選測定定義：定義：1g苯唑西林苯唑西林紙片的抑菌圈直徑紙片的抑菌圈直徑2g/ml應(yīng)視應(yīng)視為耐青霉素肺炎鏈球為耐青霉素肺炎鏈球菌。菌。 臨床意義臨床意義耐青霉素的肺炎鏈球菌對氨芐西林、耐青霉素的肺炎鏈球菌對氨芐西林、 氨氨芐西林芐西林/舒巴坦、舒巴坦、 頭孢克肟、頭孢克肟、 頭孢唑啉頭孢唑啉的臨床治療療效很差，治療時參考藥敏結(jié)的臨床治療療效很差，治療時參考藥敏結(jié)果選擇藥物，經(jīng)驗治療重癥感染時，可用果選擇藥物，經(jīng)驗治療重癥感染時，可用頭孢曲松或頭孢噻肟聯(lián)合萬古霉素用藥。頭孢曲松或頭孢噻肟聯(lián)合萬古霉素用藥。4.-內(nèi)酰胺酶的檢測內(nèi)酰胺酶的檢測青霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)青

45、霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)一內(nèi)酰胺環(huán)一內(nèi)酰胺環(huán)一內(nèi)酰胺酶能裂解青霉素族和頭孢菌素族抗生素的基本結(jié)構(gòu)一內(nèi)酰胺環(huán)，從而使其喪失抗菌活性。 快速檢測快速檢測-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶 陽性陽性-內(nèi)酰胺酶檢測的意義內(nèi)酰胺酶檢測的意義-內(nèi)酰胺酶：可水解內(nèi)酰胺酶：可水解-內(nèi)酰胺類抗生素。內(nèi)酰胺類抗生素。臨床意義：（臨床意義：（1）流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以）流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌以及卡拉莫拉漢菌等陽性，表示對青霉素、氨卞西及卡拉莫拉漢菌等陽性，表示對青霉素、氨卞西林以及阿莫西林耐藥。（林以及阿莫西林耐藥。（2）葡萄球菌屬以及腸）葡萄球菌屬以及腸球菌屬等，陽性表示對青霉素、氨基組青霉素、球菌屬等，陽性表示

46、對青霉素、氨基組青霉素、羧基組青霉素以及脲基組青霉素耐藥羧基組青霉素以及脲基組青霉素耐藥5.超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶(extend spectum -lactamase, ESBL)的檢測的檢測超廣譜超廣譜-內(nèi)酰胺酶是由質(zhì)粒介導(dǎo)的基因所編碼，可水內(nèi)酰胺酶是由質(zhì)粒介導(dǎo)的基因所編碼，可水解青霉素類、頭孢菌素和氨曲南，主要見于解青霉素類、頭孢菌素和氨曲南，主要見于大腸埃希大腸埃希菌、肺炎克雷伯克、產(chǎn)酸雷伯菌及奇異變形桿菌菌、肺炎克雷伯克、產(chǎn)酸雷伯菌及奇異變形桿菌。篩選方法：雙紙片擴散法、三相試驗和篩選方法：雙紙片擴散法、三相試驗和E試驗試驗雙紙片協(xié)同試驗操作簡便、結(jié)果可靠、成本不高，雙紙片協(xié)同

47、試驗操作簡便、結(jié)果可靠、成本不高，是臨床上較常開展的項目。是臨床上較常開展的項目。 雙紙片擴散法雙紙片擴散法藥物：頭孢他啶30 ug頭孢他啶/克拉維酸 30/10 ug以及頭孢噻肟30 ug頭孢噻肟/克拉維酸30/10 ug結(jié)果判讀：對兩組中任何一個藥物，在加克拉維酸后，抑菌圈與不加克拉維酸的相比，增加值 5mm 時，判定為產(chǎn)ESBL（如，頭孢他啶的抑菌圈直徑16；頭孢他啶/克拉維酸的抑菌圈22 ）。臨床意義臨床意義產(chǎn)產(chǎn)ESBL細菌細菌,不論體外藥物敏感試驗結(jié)果不論體外藥物敏感試驗結(jié)果如何如何, 對青霉素類、對青霉素類、1-3代頭孢菌素類和代頭孢菌素類和氨曲南治療均無效，藥敏也全部修改成耐氨曲

48、南治療均無效，藥敏也全部修改成耐藥。藥。提提 綱綱第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測臨床常見病原體為：細菌、病毒、真菌、臨床常見病原體為：細菌、病毒、真菌、寄生蟲、支原體、衣原體以及立克次體等。寄生蟲、支原體、衣原體以及立克次體等。（一）細菌感染檢查項目的選擇（一）細菌感染檢查

49、項目的選擇細菌感染性疾病一般均細菌感染性疾病一般均需進行細菌學(xué)診斷以明確病因。需進行細菌學(xué)診斷以明確病因。三個方面著手：三個方面著手：檢測細菌或其抗原檢測細菌或其抗原-主要包括直接涂片顯主要包括直接涂片顯微鏡檢查、培養(yǎng)、抗原檢測與分析。微鏡檢查、培養(yǎng)、抗原檢測與分析。檢測抗體。檢測抗體。檢測檢測細菌遺傳物質(zhì)細菌遺傳物質(zhì)-主要包括基因探針技術(shù)和主要包括基因探針技術(shù)和PCR技術(shù)。技術(shù)。 難培養(yǎng)或培養(yǎng)要求高的細菌：綜合運用免疫學(xué)或分子生物難培養(yǎng)或培養(yǎng)要求高的細菌：綜合運用免疫學(xué)或分子生物學(xué)檢測，如結(jié)核分枝桿菌感染以及幽門螺桿菌感染等。學(xué)檢測，如結(jié)核分枝桿菌感染以及幽門螺桿菌感染等。細菌培養(yǎng)是最重要的

50、確診方法。細菌培養(yǎng)是最重要的確診方法。 （二）病毒感染檢查項目的選擇（二）病毒感染檢查項目的選擇在易感細胞內(nèi)以復(fù)制方式進行增殖的非細在易感細胞內(nèi)以復(fù)制方式進行增殖的非細胞型微生物胞型微生物病毒感染的實驗室檢查包括病毒感染的實驗室檢查包括病毒分離與鑒病毒分離與鑒定定、病毒核酸與抗原的直接檢出病毒核酸與抗原的直接檢出，以及，以及特特異性抗體的檢測異性抗體的檢測。 病毒分離與鑒定：細胞培養(yǎng)。病毒分離與鑒定：細胞培養(yǎng)。早期診斷手段：多檢測病毒抗原、特異性早期診斷手段：多檢測病毒抗原、特異性抗體或核酸。抗體或核酸。（三）真菌感染檢查項目的選擇與應(yīng)用評價（三）真菌感染檢查項目的選擇與應(yīng)用評價真菌是以腐生或

51、寄生方式攝取養(yǎng)料的真核細胞型微生物。真菌的微生物學(xué)診斷手段主要包括直接檢查、培養(yǎng)檢查、免疫學(xué)試驗和動物試驗 直接顯微鏡檢查：初步明確真菌感染直接顯微鏡檢查：初步明確真菌感染分離培養(yǎng)：明確何種真菌感染分離培養(yǎng)：明確何種真菌感染大多數(shù)真菌營養(yǎng)要求不高，常用沙保氏培養(yǎng)基 （SDA）培養(yǎng)。淺部病原性真菌的最適溫度為2228，生長緩慢，大多于14周出現(xiàn)典型菌落。深部病原性真菌培養(yǎng)在37中生長最好，生長較快，經(jīng)3-4天即長出菌落。真菌感染檢查項目的選擇與應(yīng)用評價真菌感染檢查項目的選擇與應(yīng)用評價真菌抗原檢測：只適合于血清與腦脊液中真菌抗原檢測：只適合于血清與腦脊液中隱球菌、念珠菌以及莢膜組織胞漿菌等。隱球菌

52、、念珠菌以及莢膜組織胞漿菌等。真菌抗體檢測：深部真菌的檢測。真菌抗體檢測：深部真菌的檢測。（四）寄生蟲感染檢查項目的選擇（四）寄生蟲感染檢查項目的選擇與應(yīng)用評價與應(yīng)用評價直接顯微鏡檢查：觀直接顯微鏡檢查：觀察寄生蟲生活史的各察寄生蟲生活史的各階段，是寄生蟲感染階段，是寄生蟲感染的主要診斷依據(jù)。的主要診斷依據(jù)。寄生蟲抗體檢測：輔寄生蟲抗體檢測：輔助診斷。助診斷。支原體感染檢查項目的選擇與評價支原體感染檢查項目的選擇與評價支原體是一群介于細菌與病毒之間，可通過濾菌器、無細胞壁，能在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖的最小原核微生物。 與人類疾病有關(guān)的是肺炎支原體、唾液支原體、口腔支原體、人型支原體、發(fā)酵支原體

53、和微小株支原體。 支原體感染檢查項目的選擇與評價支原體感染檢查項目的選擇與評價直接顯微鏡檢查：無價值。直接顯微鏡檢查：無價值。分離培養(yǎng)：陽性可明確診斷。分離培養(yǎng)：陽性可明確診斷。目前臨床多檢測支原體抗原與核目前臨床多檢測支原體抗原與核酸，用于早期快速診斷。酸，用于早期快速診斷。螺旋體感染檢查項目的選擇與評價螺旋體感染檢查項目的選擇與評價暗視野顯微鏡檢查：是診斷早暗視野顯微鏡檢查：是診斷早期梅毒唯一快速、可靠的方法，期梅毒唯一快速、可靠的方法，尤其對已出現(xiàn)硬下疳而梅毒血尤其對已出現(xiàn)硬下疳而梅毒血清反應(yīng)仍呈陰性者意義更大清反應(yīng)仍呈陰性者意義更大梅毒血清學(xué)試驗梅毒血清學(xué)試驗（1）過篩試驗：）過篩試驗

54、：RPR、VDRL、TRUST（2）確診試驗：）確診試驗：FTA-ABS、MHA-TP、TPPA螺旋體感染檢查項目的選擇與評價螺旋體感染檢查項目的選擇與評價TPHA試驗試驗螺旋體感染檢查項目的選擇與評價螺旋體感染檢查項目的選擇與評價腦脊液檢查：腦脊液檢查：VDRL試驗陽性等有診斷價值。腦脊液試驗陽性等有診斷價值。腦脊液PCR檢測，可以快速準確的診斷神經(jīng)性梅毒。檢測，可以快速準確的診斷神經(jīng)性梅毒。TP-PCR：TPPCR檢測梅毒螺旋體檢測梅毒螺旋體DNA，特異性，特異性很強，敏感性很高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進方很強，敏感性很高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進方法。法。PCR檢測梅毒螺旋體的檢測梅

55、毒螺旋體的DNA，其敏感性、特異性，其敏感性、特異性均優(yōu)于血清學(xué)方法均優(yōu)于血清學(xué)方法 Howard Taylor Ricketts立克次體檢測立克次體檢測斑疹傷寒群立克次體目立克次體屬東方體屬埃立克體屬巴通體屬柯克斯體屬恙蟲病群斑點熱群犬埃立克體群腺熱埃立克體群嗜吞噬細胞埃立克體群立克次體目的類別立克次體目的類別柯克斯體柯克斯體培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性專性細胞內(nèi)生長的原核細胞性微生物對多種抗生素敏感引起自然疫源性疾病，且為人畜共患 病原體 所致疾病立克次體屬 斑疹傷寒（流行性斑疹傷寒、地方性斑疹傷寒、 加拿大斑疹傷寒） 斑點熱（洛磯山斑點熱、紐扣熱、昆士蘭熱、 立克次體痘、北亞蜱傳斑疹傷寒）柯克斯體屬

56、 Q熱東方體屬 恙蟲病群（恙蟲?。┌Ａ⒖梭w屬 犬埃立克體群（人單核細胞埃立克體?。?腺熱埃立克體群（腺熱埃立克體） 嗜吞噬細胞埃立克體群（人粒細胞埃立克體病）巴通體屬 戰(zhàn)壕熱、貓抓病、Oroya熱、秘魯疣、桿菌性血管瘤、 心內(nèi)膜炎外斐試驗為非特異性血清學(xué)診斷試驗，用于斑疹傷寒、斑點熱和恙蟲病的確診特異性血清學(xué)試驗有免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗和補體結(jié)合試驗等 衣原體是一類嚴格在細胞內(nèi)寄生，有獨特發(fā)育衣原體是一類嚴格在細胞內(nèi)寄生，有獨特發(fā)育周期，能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。周期，能通過細菌濾器的原核細胞型微生物。衣原體屬分為四個種衣原體屬分為四個種l沙眼衣原體沙眼衣原體l肺炎衣原體肺炎衣

57、原體l鸚鵡熱衣原體鸚鵡熱衣原體l獸類衣原體獸類衣原體衣原體感染檢查項目的選擇與評價衣原體感染檢查項目的選擇與評價直接顯微鏡檢查：檢直接顯微鏡檢查：檢查衣原體包涵體可提查衣原體包涵體可提供早期初步診斷。供早期初步診斷。分離培養(yǎng)：陽性可明分離培養(yǎng)：陽性可明確診斷。確診斷。目前臨床多檢測衣原目前臨床多檢測衣原體抗原與核酸，用于體抗原與核酸，用于早期快速診斷。早期快速診斷。第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第一節(jié)：標本的采集運送、實驗室評價和檢查方法第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第二節(jié)：病原體耐藥性檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第三節(jié)：臨床感染常見病原體檢測第四節(jié)：病毒性肝炎檢測第四節(jié)：病毒性

58、肝炎檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第五節(jié)：性傳播疾病病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測第六節(jié)：醫(yī)院感染常見病原體檢測甲型肝炎病毒標志物檢測甲型肝炎病毒標志物檢測乙型肝炎病毒標志物檢測乙型肝炎病毒標志物檢測丙型肝炎病毒標志物檢測丙型肝炎病毒標志物檢測病毒性肝炎主要有7型，即甲型(HA)、乙型(HB)、丙型(HC)、丁型(HD)、戊型(HE)、庚型(HG)、輸血傳播病毒肝炎它們分別由肝炎病毒甲型(HAV)、乙型(HBV)、丙型(HCV)、丁型(HDV)和戊型(HEV)、庚型(HGV)、輸血傳播病毒(TTV)所引起。 一、甲型肝炎病毒標志物檢測一、甲型肝炎病毒標志物檢測甲型肝炎病毒（Hepa

59、titis A virus、HAV）屬微小RNA病毒科，無包膜，核心為單股正鏈RNA。0 1 2 3 4 5 6 7 8 26 52糞中糞中HAV ALTAnti-HAV, IgGAnti-HAV, IgMWeeksHAV infectionHAV為甲型病毒性肝炎的病原體，主要通過糞口途為甲型病毒性肝炎的病原體，主要通過糞口途徑傳播。徑傳播。臨床表現(xiàn)為急性黃疸肝炎。臨床表現(xiàn)為急性黃疸肝炎。0 1 2 3 4 5 6 7 8 26 52糞中糞中HAV ALTAnti-HAV, IgGAnti-HAV, IgMWeeksHAV infectionGraph showing the course o

60、f Hepatitis-A virus infection標志物名稱標志物名稱 檢測方法檢測方法 參考值參考值抗抗HAV-IgM ELISA 陰性陰性抗抗HAV-IgG ELISA 陰性陰性抗抗HAV-IgA ELISA 陰性陰性HAVAg ELISA 陰性陰性HAV-RNA RT- PCR 陰性陰性 檢測方法與參考值檢測方法與參考值臨床意義臨床意義抗抗HAV IgM，說明機體正在感染，說明機體正在感染HAV，在，在HAV感染后感染后1-2周內(nèi)出現(xiàn)，是早期診斷甲肝的特異指標。周內(nèi)出現(xiàn)，是早期診斷甲肝的特異指標?？箍笻AV IgG，出現(xiàn)于恢復(fù)期并長期存在，是獲得，出現(xiàn)于恢復(fù)期并長期存在，是獲得免