臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)計及建設(shè)要點

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室設(shè)計及建設(shè)要點1.實驗室設(shè)計布局以四區(qū)設(shè)計為例，更高分區(qū)要求以此類推：mNGS實驗室設(shè)置應(yīng)該嚴(yán)格按照醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理辦法 （衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010194號）國家衛(wèi)健委高通量測序?qū)嶒炇业囊筮M(jìn)行，臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室應(yīng)獲得監(jiān)管屬地臨床檢驗中心的認(rèn)可，標(biāo)準(zhǔn)化分區(qū)及空氣流向，確保工作有序，互不干擾，防止污染。四區(qū)必須完全獨立、大量的新風(fēng)補(bǔ)充、不同區(qū)域的不同壓力梯度、較嚴(yán)格的濕度控制要求、較高的潔凈度要求。1）裝修材料 簡明潔凈的外觀 SL6040A標(biāo)準(zhǔn)PCR實驗室主要由彩鋼板、鋁合金型材和玻璃等材料構(gòu)成， 其四角采用鋁合金圓角立柱支撐，

2、實驗室內(nèi)角采用鋁合金內(nèi)圓角裝飾，結(jié)構(gòu)牢固， 線條簡明，美觀大方，密封性好。 2）隔斷布局試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)配備有28冰箱，計算冷負(fù)荷時，需要將它們計算在內(nèi)。房間的面積宜控制在1520。標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)配備有28冰箱和-20冰箱，計算冷負(fù)荷時，需要將它們計算在內(nèi)。在標(biāo)本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進(jìn)行提取核酸的操作。為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室，排風(fēng)經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實驗室中。如果實驗室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺，實驗室的面積增加

3、10；標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在3040之間。擴(kuò)增室擴(kuò)增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，在實驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，保證它的正常工作。該區(qū)面積控制在2530。產(chǎn)物分析區(qū)在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥，保證房間內(nèi)的相對負(fù)壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在3040，用于測序儀增加等。另外此分區(qū)為負(fù)壓最大區(qū)域，考慮冷量損耗，工作溫度:19-25（22±3），工作濕度:維持20-80%的不凝結(jié)的相對濕度。儀器必須放置在堅固穩(wěn)定桌面上；相關(guān)聯(lián)區(qū)域不得放置離心機(jī)、振蕩儀等可產(chǎn)生振動的儀器；儀器放置區(qū)域無大型機(jī)器或施工等導(dǎo)致儀器振動的儀器設(shè)備；儀器運行過程中避免劇烈開關(guān)實驗室

4、的門以免引起震動；未經(jīng)授權(quán)嚴(yán)謹(jǐn)相關(guān)人員觸碰儀器和相關(guān)操作。3）強(qiáng)電 試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱、冰柜等；總功率5kw樣本制備區(qū)：高速離心機(jī)、低速離心機(jī)、垂直混勻儀、安全柜等；總功率10kw文庫制備區(qū)：PCR儀、熒光定量PCR儀等；總功率5kw測序分析區(qū)：測序儀供電電壓波動不超過10%，必要時需要配備穩(wěn)壓器；在儀器待機(jī)或運行過程中嚴(yán)禁突然斷電，必要時需要為儀器配備UPS并且足夠持續(xù)到市電穩(wěn)定供應(yīng)或者工作日內(nèi)提前48小時通知協(xié)調(diào)儀器進(jìn)行關(guān)機(jī)。4）暖通 要求四個區(qū)域的空調(diào)系統(tǒng)完全獨立，前兩個區(qū)域相對正壓，后兩個區(qū)域相對負(fù)壓。標(biāo)本制備區(qū)配備有B2型生物安全柜，需要在安全柜進(jìn)行操作時，要有相應(yīng)數(shù)量的新風(fēng)補(bǔ)充。產(chǎn)物

5、分析區(qū)配備有排風(fēng)櫥，也需要有一定數(shù)量的新風(fēng)補(bǔ)充。實驗室內(nèi)的溫度、濕度都有一定的要求。尤其是濕度，PCR實驗室內(nèi)一般要求相對濕度在65%以下。獨立熱泵機(jī)組+全新風(fēng)空調(diào)機(jī)組+排風(fēng)系統(tǒng) 使用獨立的風(fēng)冷熱泵機(jī)組，冬季提供熱源，其它季節(jié)提供冷源?？諝馓幚韯t采用組合式新風(fēng)處理機(jī)組，通過表冷段和再熱段來控制新風(fēng)濕度，保證房間內(nèi)的溫度、濕度都達(dá)到要求。該方案的優(yōu)點在于可以滿足PCR實驗室對空調(diào)系統(tǒng)的全部要求（溫度、濕度、壓差、潔凈度等）。潔凈度要求 全新風(fēng)系統(tǒng)的新風(fēng)處理機(jī)組會有粗中效過濾送風(fēng)，其中測序室要做高效末端過濾系統(tǒng)，達(dá)到防塵，達(dá)到測序儀使用條件要求：儀器的操作應(yīng)該在PollutionDegreeII（

6、二級污染）或更好的環(huán)境中。PollutionDegreeII：通常只包含有非導(dǎo)電污染物。5）弱電 建議每個房間預(yù)留1網(wǎng)絡(luò)端口、1電話端口。測序分析區(qū)必須配備網(wǎng)絡(luò)端口。網(wǎng)線端口1|配可連外網(wǎng)IP地址1個，用于VPN通訊網(wǎng)線端口2|配可連內(nèi)網(wǎng)IP地址2個，用于內(nèi)網(wǎng)Lis系統(tǒng)及數(shù)據(jù)傳輸網(wǎng)絡(luò)要求千兆級及以上網(wǎng)絡(luò)（不小于1000Mbps數(shù)據(jù)傳輸速率）6）給排水 排水系統(tǒng)可采用下排和上排方式，安裝污水處理（沉淀箱，臭氧和紫外）設(shè)備，實驗室低濃度無毒水可以直接排放，有毒液體或高濃度腐蝕性液體建議分類收集，由專業(yè)資質(zhì)公司處理。2.防污染措施：1）高通量測序?qū)嶒炇抑辽俜譃樵噭?zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、文庫制備區(qū)、測序

7、分析區(qū)共四個區(qū)，每個房間壓差依次梯度5Pa，四區(qū)獨立設(shè)置PCR專用走廊和緩沖間，在緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)的氣壓設(shè)置要求 為了防止整個PCR實驗過程中試劑和標(biāo)本受到氣溶膠的污染以及擴(kuò)增對人員 和環(huán)境的污染，標(biāo)準(zhǔn)PCR實驗室內(nèi)各實驗區(qū)設(shè)置了一定的相對氣壓，從設(shè)施上保 證人員、環(huán)境和標(biāo)本的安全性。 2）實驗室整體流向（人流、物流和垃圾流）按照試劑準(zhǔn)備區(qū)標(biāo)本制備區(qū)擴(kuò)增區(qū)產(chǎn)物分析區(qū)順壓差從大到小的梯度而行，防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入上游區(qū)域；，嚴(yán)格遵守從一區(qū)到八區(qū)的單一方向制度，不得反向進(jìn)入前一個區(qū)，盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動，以減少交叉污染。試劑準(zhǔn)備區(qū)

8、和標(biāo)本制備區(qū)呈相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入，造成污染。核酸擴(kuò)增室及產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)呈相對負(fù)壓狀態(tài)，以防止含核酸的氣溶膠擴(kuò)散出去污染試劑與樣品。建議采用510Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。3）電子連鎖不銹鋼傳遞窗：試劑和標(biāo)本通過電子連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞，保證 試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不會受到污染。 4）紫外燈消毒：在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳遞窗內(nèi)部安裝有紫外燈， 供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動紫外線燈，對實驗桌進(jìn)行局部 消毒。3.區(qū)域管理：在各個實驗區(qū)使用帶有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服和物品（如不同顏色），每個工作區(qū)域均有專用的儀器設(shè)備，各區(qū)域儀器設(shè)備須有明確的標(biāo)記

9、，避免設(shè)備物品如加樣器等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出。當(dāng)工作人員離開時，不得將本區(qū)的工作服、手套、口罩和物品帶到其他區(qū)域，從而造成不同的工作區(qū)域間設(shè)備物品發(fā)生混淆污染。4. 環(huán)境衛(wèi)生：每個區(qū)域都應(yīng)該有獨立的清潔工具，每個區(qū)域的清潔工具不得混用，清潔時按照從一區(qū)到八區(qū)的單一方向制度。工作結(jié)束后用75%的乙醇擦拭工作臺面，用紫外線燈（建議安裝無臭紫外燈）進(jìn)行照射，同時注意實驗室的通風(fēng)換氣。5.人員要求：從事臨床基因 擴(kuò)增檢驗的技術(shù)人員必須經(jīng)過上崗培訓(xùn)，持證上崗【參考資料】 國家衛(wèi)生計生委關(guān)于印發(fā)醫(yī)學(xué)檢驗實驗室基本標(biāo)準(zhǔn)和管理規(guī)范（試行）的通知國衛(wèi)醫(yī)發(fā)201637號 醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗實驗室管理辦法 衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010194號 附