實(shí)驗(yàn)七 植物染色體標(biāo)本制作和組型分析資料

1、實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七 植物染色體標(biāo)本制作和組型分植物染色體標(biāo)本制作和組型分析析 綜合性實(shí)驗(yàn)綜合性實(shí)驗(yàn) 6h一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康?.學(xué)習(xí)植物染色體制片的基本原理和方法。學(xué)習(xí)植物染色體制片的基本原理和方法。2.了解細(xì)胞周期中染色體的動(dòng)態(tài)變化。了解細(xì)胞周期中染色體的動(dòng)態(tài)變化。3. 掌握植物染色體組型分析的方法；了解染色掌握植物染色體組型分析的方法；了解染色體組型分析的意義體組型分析的意義二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 常規(guī)壓片染色體常不能完全散開(kāi)常規(guī)壓片染色體常不能完全散開(kāi),容易重疊、容易重疊、變形、斷裂，影響顯帶結(jié)果，核型分析較變形、斷裂，影響顯帶結(jié)果，核型分析較困難。困難。 20世紀(jì)世紀(jì)70年代以來(lái)，參照

2、動(dòng)物染色體標(biāo)本年代以來(lái)，參照動(dòng)物染色體標(biāo)本制備技術(shù)，對(duì)植物細(xì)胞去壁、低滲、火焰制備技術(shù)，對(duì)植物細(xì)胞去壁、低滲、火焰干燥方法，取得了很好的結(jié)果。但操作繁干燥方法，取得了很好的結(jié)果。但操作繁瑣，費(fèi)用較貴?，?，費(fèi)用較貴。 分散良好的標(biāo)本片用于染色體計(jì)數(shù)、組型分散良好的標(biāo)本片用于染色體計(jì)數(shù)、組型分析、顯帶、顯微操作、原位雜交等分子分析、顯帶、顯微操作、原位雜交等分子細(xì)胞遺傳學(xué)研究領(lǐng)域。細(xì)胞遺傳學(xué)研究領(lǐng)域。 染色體組在細(xì)胞分裂中期的表型稱為染色染色體組在細(xì)胞分裂中期的表型稱為染色體組型或稱核型，包括染色體數(shù)目、形態(tài)、體組型或稱核型，包括染色體數(shù)目、形態(tài)、大小、著絲點(diǎn)位置及副縊痕及隨體的有無(wú)大小、著絲點(diǎn)位

3、置及副縊痕及隨體的有無(wú)等特征。等特征。 染色體組型分析就是通過(guò)對(duì)染色體標(biāo)本或染色體組型分析就是通過(guò)對(duì)染色體標(biāo)本或其照片進(jìn)行測(cè)量、對(duì)比分析、配對(duì)、分組、其照片進(jìn)行測(cè)量、對(duì)比分析、配對(duì)、分組、排列，對(duì)組內(nèi)各染色體的形態(tài)進(jìn)行測(cè)量、排列，對(duì)組內(nèi)各染色體的形態(tài)進(jìn)行測(cè)量、描述，從而闡明生物染色體組成的過(guò)程。描述，從而闡明生物染色體組成的過(guò)程。三、實(shí)驗(yàn)材料三、實(shí)驗(yàn)材料 器具：恒溫培養(yǎng)箱，顯微鏡器具：恒溫培養(yǎng)箱，顯微鏡 試劑：試劑：0.02-0.10.02-0.1秋水仙素溶液秋水仙素溶液，甲醇，冰，甲醇，冰醋酸，醋酸，70%70%酒精，纖維素酶，果膠酶，酒精，纖維素酶，果膠酶，GiemsaGiemsa染液染液

4、/ /改良苯酚品紅染色液改良苯酚品紅染色液，0.075mol/L KCl0.075mol/L KCl 材料：常用分生區(qū)組織，如根尖、莖尖和嫩材料：常用分生區(qū)組織，如根尖、莖尖和嫩葉做材料。葉做材料?？捎么篼溈捎么篼?2=14)、黑麥、黑麥(2=14)、玉米、玉米(2=20)、蠶豆、蠶豆(2=12) 、洋蔥、洋蔥(2=16)根尖根尖。四、實(shí)驗(yàn)方法四、實(shí)驗(yàn)方法一）一） 根尖培養(yǎng)和預(yù)處理根尖培養(yǎng)和預(yù)處理 取材：將玉米取材：將玉米/ /蠶豆種子蠶豆種子/ /洋蔥鱗莖放在洋蔥鱗莖放在2525溫箱溫箱中發(fā)芽，待根長(zhǎng)到中發(fā)芽，待根長(zhǎng)到1cm1cm左右。左右。 前處理：剪下根尖用前處理：剪下根尖用0.050.

5、05秋水仙素秋水仙素溶液處理溶液處理3 34h4h。也可。也可將剪下的根尖放在將剪下的根尖放在03蒸餾水中，置蒸餾水中，置冰箱中冰箱中24小時(shí)，使分裂的細(xì)胞盡可能集中于分裂小時(shí)，使分裂的細(xì)胞盡可能集中于分裂中期。中期。 固定：用水洗凈處理過(guò)的根尖，經(jīng)乙醇固定：用水洗凈處理過(guò)的根尖，經(jīng)乙醇 （甲（甲醇）醇）冰醋酸（冰醋酸（3:13:1）固定）固定224小時(shí)。使細(xì)胞的小時(shí)。使細(xì)胞的分裂活動(dòng)處于停滯狀態(tài)。分裂活動(dòng)處于停滯狀態(tài)。 制片：有多種方法制片：有多種方法切片、壓片、滴片切片、壓片、滴片等。等。二）二） 壓片法制片壓片法制片 解離：取出根尖，用蒸餾水洗凈，切取分生區(qū)組解離：取出根尖，用蒸餾水洗凈

6、，切取分生區(qū)組織織0.51mm長(zhǎng)，放入長(zhǎng)，放入1mol/L HCl室溫室溫 （60 解解離對(duì)比）離對(duì)比）解離解離10、12、14、16、18、20min，軟，軟化去除細(xì)胞壁及果膠物質(zhì)，使細(xì)胞易于分散。再化去除細(xì)胞壁及果膠物質(zhì)，使細(xì)胞易于分散。再用蒸餾水洗凈。用蒸餾水洗凈。 染色：清水漂洗去除殘留鹽酸后，用改良苯酚品染色：清水漂洗去除殘留鹽酸后，用改良苯酚品紅染色液染色紅染色液染色510min。 壓片：切取分生區(qū)部分組織，用鑷子搗碎，蓋上壓片：切取分生區(qū)部分組織，用鑷子搗碎，蓋上蓋玻片，覆以吸水紙，輕輕敲打蓋片，使細(xì)胞和蓋玻片，覆以吸水紙，輕輕敲打蓋片，使細(xì)胞和染色體分散。染色體分散。 鏡檢。鏡

7、檢。三）去壁低滲火焰干燥法制片三）去壁低滲火焰干燥法制片1.酶解：倒去固定液，用蒸餾水充分洗干凈，切酶解：倒去固定液，用蒸餾水充分洗干凈，切取分生區(qū)放到青霉素小瓶中，取分生區(qū)放到青霉素小瓶中，2.加入混合酶液（加入混合酶液（2.5%纖維素酶纖維素酶+2.5%果膠酶），果膠酶），25酶解酶解1-2 h（ 28 ，20min）。）。3.低滲：倒去酶液，用蒸餾水慢慢沖洗低滲：倒去酶液，用蒸餾水慢慢沖洗2 次，然次，然后在蒸餾水中浸泡后在蒸餾水中浸泡30 min。4.制備細(xì)胞懸液：倒去蒸餾水，用鑷子將材料夾制備細(xì)胞懸液：倒去蒸餾水，用鑷子將材料夾碎。向細(xì)胞液中加入碎。向細(xì)胞液中加入23ml新鮮固定液，

8、吹打新鮮固定液，吹打制成細(xì)胞懸液。制成細(xì)胞懸液。5.去組織塊：靜置片刻，使大塊組織沉淀，吸取去組織塊：靜置片刻，使大塊組織沉淀，吸取上層細(xì)胞懸液靜置上層細(xì)胞懸液靜置30min 左右，使細(xì)胞沉淀，左右，使細(xì)胞沉淀，輕輕吸去上清液，留約輕輕吸去上清液，留約1ml左右細(xì)胞懸液制備標(biāo)左右細(xì)胞懸液制備標(biāo)本。本。6.冷凍滴片冷凍滴片染色染色鏡檢。鏡檢。四）四） 染色體組型分析染色體組型分析1、在顯微鏡下找出染色體分散良好、姐妹染色單、在顯微鏡下找出染色體分散良好、姐妹染色單體清楚的中期分裂相進(jìn)行顯微拍攝。體清楚的中期分裂相進(jìn)行顯微拍攝。2、選取顯微照片上的一個(gè)細(xì)胞的全部染色體，目、選取顯微照片上的一個(gè)細(xì)胞

9、的全部染色體，目測(cè)配對(duì)測(cè)配對(duì)測(cè)量測(cè)量計(jì)算計(jì)算分析分析校驗(yàn)配對(duì)校驗(yàn)配對(duì)剪貼。剪貼。3、根據(jù)染色體的長(zhǎng)短和形態(tài)特征進(jìn)行同源染色體、根據(jù)染色體的長(zhǎng)短和形態(tài)特征進(jìn)行同源染色體的目測(cè)配對(duì)。的目測(cè)配對(duì)。4、測(cè)量出每條染色體短臂和長(zhǎng)臂長(zhǎng)度，計(jì)算出各、測(cè)量出每條染色體短臂和長(zhǎng)臂長(zhǎng)度，計(jì)算出各條染色體的相對(duì)長(zhǎng)度、著絲粒指數(shù)、臂指數(shù)，并條染色體的相對(duì)長(zhǎng)度、著絲粒指數(shù)、臂指數(shù)，并記錄原始數(shù)據(jù)。記錄原始數(shù)據(jù)。5、根據(jù)測(cè)量數(shù)據(jù)校正目測(cè)配對(duì)排列的結(jié)果，進(jìn)行、根據(jù)測(cè)量數(shù)據(jù)校正目測(cè)配對(duì)排列的結(jié)果，進(jìn)行調(diào)整排列。調(diào)整排列。6、把染色體按、把染色體按總長(zhǎng)度由大到小，臂比由小到大總長(zhǎng)度由大到小，臂比由小到大成成對(duì)地排列，排列時(shí)注意短臂向上，長(zhǎng)臂向下，最對(duì)地排列，排列時(shí)注意短臂向上，長(zhǎng)臂向下，最后把染色體貼成一完整的染色體組型圖。后把染色體貼成一完整的染色體組型圖。 染色體形態(tài)參數(shù)染色體形態(tài)參數(shù)絕對(duì)長(zhǎng)度：真實(shí)長(zhǎng)度絕對(duì)長(zhǎng)度：真實(shí)長(zhǎng)度相對(duì)長(zhǎng)度相對(duì)長(zhǎng)度=(某染色體的長(zhǎng)度某染色體的長(zhǎng)度/染色體組內(nèi)全部染色體組內(nèi)全部染色體總長(zhǎng)度染色體總長(zhǎng)度) 100臂比臂比=長(zhǎng)臂長(zhǎng)度長(zhǎng)臂長(zhǎng)度(q)/短臂長(zhǎng)度短臂長(zhǎng)度(p)著絲粒指數(shù)著絲粒指數(shù)=(短臂長(zhǎng)度短臂長(zhǎng)度/該染色體的長(zhǎng)度該染色體的長(zhǎng)度) 100五、結(jié)果與討論五、結(jié)果與討論結(jié)果結(jié)果1. 提交染色體標(biāo)本片提交染色體標(biāo)本片/圖片一份圖片一份2. 組型分析圖、表。組型分析圖、表。討論討論1