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文檔簡介

1、第一章 緒論(12345)微生物與人類的關(guān)系?微生物學(xué)的定義與發(fā)展歷史?3位微生物學(xué)家的貢獻(xiàn)?20世紀(jì)微生物學(xué)的特點(diǎn)?21世紀(jì)微生物學(xué)發(fā)展的趨勢?知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平微生物什么是微生物?肉眼看不到的微小生物,無處不在,無時(shí)不有。A與人類的關(guān)系1、有利:微生物是自然界物質(zhì)循環(huán)的關(guān)鍵環(huán)節(jié);體內(nèi)的正常菌群是人及動(dòng)物健康的基本保證;微生物可以為我們提供很多有用的物質(zhì);基因工程為代表的現(xiàn)代生物技術(shù)。2、有害:引起疾病。A微生物的特點(diǎn)起源早,發(fā)現(xiàn)晚,個(gè)體小,數(shù)量多,種類多,分布廣,生長快,周期短,易培養(yǎng),易變異,重復(fù)性強(qiáng),易操作。微生物學(xué)什么是微生物學(xué)?是研究微生物在一定條件下的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生

2、化、遺傳變異以及進(jìn)化、分類、生態(tài)等生命活動(dòng)規(guī)律及其應(yīng)用的一門科學(xué)。A微生物學(xué)是如何形成的?1、微生物的發(fā)現(xiàn):列文.虎克的貢獻(xiàn)。2、微生物學(xué)的建立巴斯德的貢獻(xiàn):發(fā)現(xiàn)并證實(shí)發(fā)酵是由微生物引起的;徹底否定了“自然發(fā)生”學(xué)說;免疫學(xué)預(yù)防接種;巴斯德消毒法??坪盏呢暙I(xiàn):微生物學(xué)基本操作技術(shù)方面的貢獻(xiàn);對病原細(xì)菌的研究做出了突出的貢獻(xiàn)。A20世紀(jì)微生物學(xué)的特點(diǎn)多學(xué)科交叉促進(jìn)微生物學(xué)全面發(fā)展;微生物學(xué)推動(dòng)生命科學(xué)的發(fā)展(促進(jìn)許多重大理論問題的突破;對生命科學(xué)研究技術(shù)的貢獻(xiàn);微生物與“人類基因組計(jì)劃”)。B中國微生物學(xué)發(fā)展概況起步晚,發(fā)展快B21世紀(jì)微生物學(xué)發(fā)展趨勢微生物基因組學(xué)研究將全面展開;與環(huán)境密切相關(guān)

3、的微生物學(xué)研究將獲得長足發(fā)展;微生物生命現(xiàn)象的特性和共性將更加受到重視;與其他學(xué)科實(shí)現(xiàn)更廣泛的交叉,獲得新的發(fā)展;微生物產(chǎn)業(yè)將呈現(xiàn)全新的局面B第二章 顯微鏡下的微生物(1234)形態(tài)結(jié)構(gòu);繁殖方式;與人類的關(guān)系知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平細(xì)菌什么是細(xì)菌?單細(xì)胞、原核微生物。A形態(tài)顯微:球形,桿狀,螺旋形。不規(guī)則形。裂殖。菌落:濕潤,粘稠,光滑,透明。A與人類的關(guān)系有利;有害。B放線菌什么是放線菌?單細(xì)胞、原核微生物,呈線狀。孢子繁殖。A形態(tài)顯微:線狀,基質(zhì)菌絲、氣生菌絲、孢子絲。孢子絲形狀是鑒定分類的重要依據(jù)。菌落:干粉狀,堅(jiān)硬,分泌色素。A與人類的關(guān)系有利:土壤肥沃的特征??股氐闹匾獊碓?/p>

4、。有害:疾病。B霉菌什么是霉菌?多細(xì)胞,真核微生物。A形態(tài)顯微:絲狀,有隔菌絲、無隔菌絲?;|(zhì)菌絲、氣生菌絲、繁殖菌絲。有性孢子、無性孢子。孢子繁殖。菌落:絨毛狀,各種顏色。A與人類關(guān)系有利:各種山珍,發(fā)酵食品。有害:疾病,腐爛。B酵母菌什么是酵母菌?單細(xì)胞,真核微生物。A形態(tài)顯微:橢圓形,單細(xì)胞。芽殖。菌落:粘稠,隆起,不透明。A與人類關(guān)系有利:食品,生物技術(shù)。有害:疾病。B第三章 微生物細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與功能(12)G+G-細(xì)菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn);肽聚糖和磷壁酸的結(jié)構(gòu)特點(diǎn);G-細(xì)菌細(xì)胞壁的脂多糖構(gòu)造;缺壁細(xì)菌;革蘭氏染色的步驟和機(jī)理;細(xì)菌芽孢的構(gòu)造和功能;芽孢的耐熱機(jī)制;研究芽孢的意義;莢膜的結(jié)構(gòu)與

5、功能;原核生物鞭毛的構(gòu)造和功能;真核與原核微生物的特點(diǎn)與區(qū)別;真核微生物鞭毛的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平微生物細(xì)胞的構(gòu)造一般構(gòu)造細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)膜、內(nèi)含物、核區(qū)、細(xì)胞質(zhì)A特殊構(gòu)造鞭毛、芽孢、糖被A細(xì)胞壁G+陽性菌細(xì)胞壁特點(diǎn):厚度大、化學(xué)組分簡單。A結(jié)構(gòu):肽聚糖多、磷壁酸A肽聚糖分子結(jié)構(gòu):40層,80納米,占90%。雙糖,四肽尾,五肽橋。溶菌酶,肽聚糖多樣性功能:細(xì)胞骨架,支撐。A磷壁酸:甘油磷酸、核糖醇磷酸。壁磷壁酸,膜磷壁酸功能:負(fù)電荷,貯藏磷,致病性,表面抗原,吸附受體,調(diào)節(jié)自溶素BG-陰性菌細(xì)胞壁特點(diǎn):層次多,厚度低,化學(xué)成分復(fù)雜結(jié)構(gòu):肽聚糖少,脂多糖,脂類,蛋白,周質(zhì)空間肽

6、聚糖分子結(jié)構(gòu):1-2層,2-3納米,占10%。內(nèi)消旋二氨基庚二酸(m-DAP),沒有肽橋。功能:稀疏,機(jī)械強(qiáng)度差。外膜結(jié)構(gòu):由脂多糖、磷脂和脂蛋白組成。功能:保護(hù)性屏障,阻止有害物質(zhì)進(jìn)入,阻止周質(zhì)酶和細(xì)胞物質(zhì)外流。脂多糖(LPS)結(jié)構(gòu):10納米,由類脂A、核心多糖和O-特異側(cè)鏈組成。功能:類脂A是致病物質(zhì)-內(nèi)毒素的物質(zhì)基礎(chǔ),負(fù)電荷較強(qiáng),吸附陽離子,LPS結(jié)構(gòu)多變,決定了表面抗原決定蔟的多樣性,是噬菌體吸附受體,選擇性屏障功能。外膜蛋白結(jié)構(gòu):嵌合在LPS和磷脂層外膜的蛋白。脂蛋白,孔蛋白(1納米),特異性,非特異性功能:不清楚周質(zhì)空間:外膜與細(xì)胞膜之間的狹窄空間(15納米)。內(nèi)含周質(zhì)蛋白。水解酶

7、,合成酶,結(jié)合蛋白,受體蛋白無壁細(xì)菌(L型細(xì)菌)由自發(fā)突變形成的遺傳性穩(wěn)定的細(xì)胞壁缺損細(xì)菌。細(xì)胞膨大,對滲透敏感,在培養(yǎng)基表面呈“油煎蛋”似的小菌落革蘭氏染色步驟:結(jié)晶紫初染,碘液媒染,乙醇脫色,番紅復(fù)染,紫色陽性,紅色陰性原理:細(xì)胞壁化學(xué)成分的差異,引起物理特性(脫色能力)的不同。芽孢功芽孢(特殊的休眠構(gòu)造)概念:某些細(xì)菌在其生長發(fā)育后期,在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè),圓形或橢圓形,厚壁,含水量極低,抗逆性極強(qiáng)的休眠體。無繁殖功能。是生物界抗逆性最強(qiáng)的生命體之一。(功能)產(chǎn)芽孢細(xì)菌的種類:芽孢桿菌屬、梭菌屬芽孢八疊球菌屬、孢螺菌屬。芽孢的有無、形態(tài)、大小和著生位置是細(xì)菌分類和鑒定的重要指標(biāo)。芽孢的構(gòu)造

8、:孢外壁、芽孢衣、皮層、核心(芽孢壁、芽孢質(zhì)膜、芽孢質(zhì)核區(qū))芽孢形成:DNA濃縮,束狀染色質(zhì)形成;細(xì)胞膜內(nèi)陷,細(xì)胞發(fā)生不對稱分裂;前芽孢雙層膜形成;填充芽孢肽聚糖,合成DPA,積累鈣離子,形成皮層;芽孢衣合成結(jié)束;皮層合成完成,芽孢成熟;芽孢囊裂解,芽孢游離外出。芽孢萌發(fā):由休眠狀態(tài)的芽孢變成營養(yǎng)狀態(tài)細(xì)菌?;罨?;出芽;生長。芽孢衣中富含半光氨酸的蛋白質(zhì)三維空間結(jié)構(gòu)發(fā)生可逆性變化,芽孢透性增加。芽孢的耐熱機(jī)制:滲透調(diào)節(jié)皮層膨脹學(xué)說。芽孢衣對多價(jià)陽離子和水分透性很差,皮層離子強(qiáng)度很高,皮層滲透壓很高,奪取芽孢核心的水分,皮層充分膨脹,核心部分高度失水(10%),因此具有極強(qiáng)的耐熱性。研究芽孢的意義

9、:分類鑒定意義;提高篩選效率;保存菌種意義;滅菌手段的指標(biāo)伴孢晶體(-內(nèi)毒素)概念:少數(shù)芽孢桿菌,在芽孢旁形成的一顆菱形或雙錐形的堿溶性蛋白晶體。功能:對200多種鱗翅目昆蟲的幼蟲有毒。生物殺蟲劑殺蟲原理:鱗翅目昆蟲幼蟲腸道呈堿性,伴孢晶體溶解,造成幼蟲腸道穿孔。對人無害。細(xì)胞壁以外的構(gòu)造糖被莢膜結(jié)構(gòu)概念:包被于某些細(xì)菌細(xì)胞壁以外的一層厚度不定的膠狀物質(zhì)。按其有無固定層次、層次厚薄分為莢膜、微莢膜、粘液層和菌膠團(tuán)。含水量很高,化學(xué)成分是多糖、多肽或蛋白質(zhì)。糖被的有無和性質(zhì)可用于菌種鑒定。黃原膠莢膜的功能:保護(hù)作用;貯藏養(yǎng)料;作為滲透屏障或離子交換系統(tǒng);表面吸附作用;細(xì)菌間的信息識(shí)別作用;堆積代

10、謝廢物。細(xì)胞壁以外的構(gòu)造鞭毛概念:生長在某些細(xì)菌體表的長絲狀、波曲形的蛋白質(zhì)附屬物。1-數(shù)十根,具有運(yùn)動(dòng)功能。電子顯微鏡、染色、半固體培養(yǎng)基渾濁的擴(kuò)散區(qū),菌落邊緣觀察結(jié)構(gòu):基體(4個(gè)盤狀物;L環(huán)、P環(huán)、S-M環(huán)、Mot蛋白、Fli蛋白)、鉤形鞘、鞭毛絲。鞭毛的生長方式是頂端延伸。功能:運(yùn)動(dòng),實(shí)現(xiàn)其趨性(趨光、趨化、趨磁)最有效方式。旋轉(zhuǎn)論,100µm/s著生方式:端生(一、兩)、周生、側(cè)生,鞭毛的有無和著生方式在細(xì)菌分類和鑒定中是重要的形態(tài)指標(biāo)。細(xì)胞壁(真核微生物)真菌細(xì)胞壁:主要成分是多糖,還有少量的蛋白質(zhì)和脂類。低等真菌以纖維素為主,酵母菌以葡聚糖為主,高等真菌以幾丁質(zhì)為主。功能

11、:固定外形,保護(hù)細(xì)胞免受各種外界因子損傷。鞭毛(真核微生物)概念:在某些真核微生物細(xì)胞的表面長有或長或短的毛發(fā)狀細(xì)胞器。具有運(yùn)動(dòng)功能。以揮鞭方式推動(dòng)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)。結(jié)構(gòu):鞭桿、基體和過渡區(qū)3部分組成。鞭桿的橫切面呈9+2型。中心有一對包在中央微管鞘中相互平行的中央微管,其外圍繞一圈(9個(gè))微管二聯(lián)體,每條微管二聯(lián)體由A、B兩條中空的亞纖維組成。相鄰的微管二聯(lián)體間有微管連絲蛋白相連,每條微管二聯(lián)體上還有伸向中央微管的放射輻條第四章 微生物的營養(yǎng)(123)營養(yǎng)物質(zhì)與營養(yǎng)的概念;微生物的營養(yǎng)要求;微生物的營養(yǎng)類型;配制培養(yǎng)基的原則;培養(yǎng)基的種類及特點(diǎn);微生物吸收營養(yǎng)的主要方式及特點(diǎn)。知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容

12、學(xué)習(xí)水平營養(yǎng)與營養(yǎng)物質(zhì)的概念營養(yǎng)物質(zhì)能夠滿足微生物肌體生長、繁殖和完成各種生理活動(dòng)所需的物質(zhì)。生存的物質(zhì)基礎(chǔ)A營養(yǎng)微生物獲得和利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。生理過程A微生物細(xì)胞的化學(xué)成分化學(xué)元素主要元素:C、H、O、N、P、S、K、Mg、Ca、FeA微量元素:Zn、Mn、Na、Cl、Mo、Se、Co、Cu、W、Ni、B。10-810-6mol/L。酶的組成部分或使酶活化。過量有害。A化學(xué)成分及其分析有機(jī)物:蛋白質(zhì)、糖、脂、核酸、維生素以及降解產(chǎn)物和代謝產(chǎn)物無機(jī)物:無機(jī)鹽水:7090%。微生物營養(yǎng)要求?營養(yǎng)物質(zhì)及其生理功能五大營養(yǎng)物質(zhì):碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子和水碳源:在微生物生長過程中為微生物提供碳

13、素來源的物質(zhì)。細(xì)胞物質(zhì)和能量來源。糖類是主要來源。速效碳源、遲效碳源。單糖多糖,六碳糖五碳糖。氮源:為微生物提供氮素來源。細(xì)胞物質(zhì)。速效氮源、遲效氮源;有機(jī)氮、無機(jī)氮;氨態(tài)氮、硝態(tài)氮。無機(jī)鹽:必不可少。酶活性中心的組成部分,維持生物大分子和細(xì)胞結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,調(diào)節(jié)和維持細(xì)胞的滲透壓平衡,控制氧化還原電位,某些微生物生長的能源物質(zhì)。生長因子:微生物生長所必需且需要量很少,微生物自身不能合成或合成量不足以滿足機(jī)體生長需要的有機(jī)化合物。維生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶。加入酵母浸膏、牛肉浸膏及動(dòng)植物組織液。水:必不可少。功能:溶劑與運(yùn)輸介質(zhì);參與化學(xué)反應(yīng);維持生物大分子穩(wěn)定的構(gòu)象;良好的熱導(dǎo)體;維持細(xì)胞正常

14、形態(tài);控制由多亞基組成的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。水活度w0.6。微生物的營養(yǎng)類型按碳源:無機(jī)自養(yǎng)型、有機(jī)異養(yǎng)型。按能量來源:光能型、化能型。經(jīng)組合:四種營養(yǎng)類型。腐生型、寄生型;營養(yǎng)缺陷型、野生型。主要用于微生物遺傳學(xué)方面的研究。在不同生長條件下營養(yǎng)類型也會(huì)發(fā)生變化。培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類與特點(diǎn)?概念:人工配制的,適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。是微生物學(xué)研究和微生物發(fā)酵工業(yè)的基礎(chǔ)。配制原則:選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì);牛肉浸膏蛋白胨培養(yǎng)基,高氏一號(hào)培養(yǎng)基,麥芽汁培養(yǎng)基,PDA培養(yǎng)基。查氏培養(yǎng)基。營養(yǎng)物質(zhì)濃度及配比(C/N);控制pH值,細(xì)菌放線菌pH77.5,酵母菌霉菌pH56,加入緩沖劑或加酸加堿;控制氧

15、化還原電位;值0.1V好氧,0.1V厭氧,通氣量(震蕩、攪拌),加入氧化劑或還原劑。原料的來源,用廉價(jià)低成本的原料;滅菌處理:高壓蒸汽滅菌,0.1MPa,121,30min。培養(yǎng)基的類型及應(yīng)用:按成分不同劃分:天然培養(yǎng)基:化學(xué)成分不清楚或化學(xué)成分不恒定。工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。合成培養(yǎng)基:化學(xué)成分完全了解。用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)微生物營養(yǎng)需求、代謝、分類鑒定、生物量鑒定、菌種選育及遺傳分析等。按物理狀態(tài)劃分:固體培養(yǎng)基(加入凝固劑),半固體培養(yǎng)基(凝固劑減半),液體培養(yǎng)基(震蕩或攪拌)。按用途:基礎(chǔ)培養(yǎng)基:基本營養(yǎng)物質(zhì)。 加富培養(yǎng)基:加入特殊營養(yǎng)物質(zhì),培養(yǎng)營養(yǎng)要求苛刻的異養(yǎng)微生物。 鑒別培養(yǎng)基:用于鑒別不同類

16、型微生物。產(chǎn)生明顯的特征性變化。 選擇培養(yǎng)基:加入特殊的 營養(yǎng)物質(zhì)或化學(xué)物質(zhì)。未培養(yǎng)微生物。營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞微生物吸收營養(yǎng)的主要方式及特點(diǎn)?營養(yǎng)物質(zhì)能否被微生物利用的決定性因素是能否進(jìn)入細(xì)胞。影響營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的因素:營養(yǎng)物質(zhì)本身的性質(zhì)(相對分子質(zhì)量、溶解性、電負(fù)性、極性),微生物所處的環(huán)境(溫度、pH和離子強(qiáng)度、存在誘導(dǎo)運(yùn)輸系統(tǒng)形成的物質(zhì)、代謝過程抑制劑、解偶聯(lián)劑等),細(xì)胞的透過屏障(原生質(zhì)膜、細(xì)胞壁、莢膜及粘液層)。運(yùn)輸方式:簡單擴(kuò)散,促進(jìn)擴(kuò)散,主動(dòng)運(yùn)輸。簡單擴(kuò)散:由高濃度向低濃度進(jìn)行擴(kuò)散。非特異性,分子結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化,物理學(xué)過程,不消耗能量,擴(kuò)散動(dòng)力來自于膜內(nèi)外的濃度差。不能逆濃度運(yùn)輸

17、,擴(kuò)散的速率隨著濃度差的降低而減少,直至動(dòng)態(tài)平衡。促進(jìn)擴(kuò)散:被動(dòng)的物質(zhì)跨膜運(yùn)輸方式。不消耗細(xì)胞能量,分子結(jié)構(gòu)不發(fā)生變化,不能逆濃度運(yùn)輸,運(yùn)輸速率與膜內(nèi)外濃度差成正比。需要載體(透過酶)。載體具有高度的專一性。透過酶是誘導(dǎo)酶。主動(dòng)運(yùn)輸:主要的物質(zhì)運(yùn)輸方式,需要消耗能量,可以逆濃度差運(yùn)輸,運(yùn)輸過程中需要載體蛋白。載體蛋白通過構(gòu)象變化而改變與被運(yùn)輸物質(zhì)之間的親和力大小,使兩者之間發(fā)生可逆性結(jié)合與分離,從而完成物質(zhì)的跨膜運(yùn)輸。初級(jí)主動(dòng)運(yùn)輸:由電子傳遞系統(tǒng)、ATP酶或細(xì)菌視紫紅質(zhì)引起的質(zhì)子運(yùn)輸方式。呼吸能、化學(xué)能和光能的消耗,引起胞內(nèi)質(zhì)子外排,導(dǎo)致原生質(zhì)膜內(nèi)外建立質(zhì)子濃度差,使膜處于充能狀態(tài)(能化膜)。

18、次級(jí)主動(dòng)運(yùn)輸:初級(jí)主動(dòng)運(yùn)輸建立的能化膜在質(zhì)子濃度差消失的過程中,偶聯(lián)其他物質(zhì)的運(yùn)輸。同向運(yùn)輸(物質(zhì)與質(zhì)子通過同一載體按同一方向)、逆向運(yùn)輸(物質(zhì)與質(zhì)子通過同一載體按相反方向)、單向運(yùn)輸(物質(zhì)通過載體進(jìn)入細(xì)胞)。ATP結(jié)合性盒式轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白系統(tǒng)(ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白):由兩個(gè)疏水性跨膜域與位于質(zhì)膜內(nèi)表面的兩個(gè)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域形成復(fù)合物,兩個(gè)疏水性跨膜域在質(zhì)膜上形成一個(gè)孔,兩個(gè)核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域可與ATP結(jié)合,ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以與專一性的溶質(zhì)結(jié)合蛋白結(jié)合,溶質(zhì)結(jié)合蛋白攜帶被轉(zhuǎn)運(yùn)的溶質(zhì)分子在質(zhì)膜外表面與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白跨膜域結(jié)合,ATP則結(jié)合在ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的核苷酸結(jié)合結(jié)構(gòu)域上,ATP水解產(chǎn)生的能量使跨膜域構(gòu)象發(fā)

19、生改變,被轉(zhuǎn)運(yùn)的溶質(zhì)分子進(jìn)入胞內(nèi)。Na+,K+-ATP酶系統(tǒng):功能是利用ATP的能量將Na+由細(xì)胞內(nèi)泵出胞外,并將K+泵入胞內(nèi)。該酶由大小兩個(gè)亞基組成,大亞基可被磷酸化?;鶊F(tuán)轉(zhuǎn)位:具有一個(gè)復(fù)雜的運(yùn)輸系統(tǒng),物質(zhì)在運(yùn)輸過程中發(fā)生化學(xué)變化。糖在運(yùn)輸過程中發(fā)生了磷酸化,磷酸基團(tuán)來源于胞內(nèi)的烯醇丙酮酸磷酸(PEP),PTS由5中蛋白質(zhì)組成,酶、酶(a、b和c3個(gè)亞基)和熱穩(wěn)定蛋白質(zhì)(HPr)。在糖的運(yùn)輸過程中,PEP上的磷酸基團(tuán)逐步通過酶、HPr的磷酸化與去磷酸化作用,最終在酶的作用下轉(zhuǎn)移到糖,生成磷酸糖釋放于細(xì)胞質(zhì)中。鐵載體運(yùn)輸:能與Fe3+形成復(fù)合物并將其運(yùn)輸進(jìn)入胞內(nèi)的小分子化合物。3個(gè)鐵載體可圍繞

20、一個(gè)Fe3+形成鐵-鐵載體復(fù)合物,與鐵載體受體蛋白結(jié)合后,將鐵轉(zhuǎn)運(yùn)至胞內(nèi)。第五章 微生物的代謝(1234)代謝的概念;生物氧化的概念和類型;發(fā)酵的概念、代謝途徑及產(chǎn)能特點(diǎn);呼吸的類型及產(chǎn)能特點(diǎn);自養(yǎng)微生物的生物氧化(氨、硫、鐵、氫),能量轉(zhuǎn)換的方式;固氮微生物的種類;生物固氮的機(jī)制;其他耗能反應(yīng)(運(yùn)輸、運(yùn)動(dòng)、生物發(fā)光);能量代謝的調(diào)節(jié)方式;初級(jí)代謝與次級(jí)代謝的關(guān)系;次級(jí)代謝的調(diào)節(jié)方式知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平代謝代謝的概念生物體內(nèi)所進(jìn)行的全部化學(xué)反應(yīng)的總稱,是生命存在的基本特征。A代謝的類型分解代謝和合成代謝。A能量的產(chǎn)生和用途能量除用于合成代謝外,還用于運(yùn)動(dòng)、營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸和釋放。微生物代

21、謝的特點(diǎn)微生物除了有初級(jí)代謝外,還會(huì)產(chǎn)生次級(jí)代謝和次級(jí)代謝產(chǎn)物。次級(jí)代謝與人類的生產(chǎn)和生活有關(guān)。微生物的產(chǎn)能代謝生物氧化概念與類型?概念:物質(zhì)在生物體內(nèi)經(jīng)過一系列連續(xù)的氧化還原反應(yīng),逐步分解并釋放能量。產(chǎn)生的能量可被微生物直接利用,也可轉(zhuǎn)換儲(chǔ)存在高能化合物(ATP)中。A發(fā)酵的概念、代謝途徑及產(chǎn)能特點(diǎn)?異養(yǎng)微生物的生物氧化根據(jù)氧化還原反應(yīng)中電子受體的不同,分為:發(fā)酵和呼吸(有氧、無氧)。發(fā)酵:微生物細(xì)胞將有機(jī)物氧化釋放的電子交給底物本身未完全氧化的某種代謝產(chǎn)物,同時(shí)釋放能量并產(chǎn)生各種不同的代謝產(chǎn)物。只釋放出一小部分的能量。糖酵解:四種途徑(EMP、HM、ED及磷酸解酮酶途徑)呼吸作用:微生物在

22、降解底物的過程中,將釋放出的電子交給NAD(P)、FAD或FMN等電子載體,再經(jīng)電子傳遞系統(tǒng),傳給外源電子受體,從而生成水或其他還原型產(chǎn)物并釋放出能量的過程。以分子氧作為最終電子受體的呼吸稱為有氧呼吸,以氧化型化合物作為最終電子受體的呼吸稱為無氧呼吸。呼吸作用與發(fā)酵作用的根本區(qū)別在于:電子載體不是將電子直接傳遞給底物降解的中間產(chǎn)物,而是交給電子傳遞系統(tǒng),逐步釋放出能量再交給最終電子受體。碳?xì)浠衔?、脂肪酸、醇類都可通過呼吸作用而分解。有氧呼吸:TCA循環(huán)。1分子葡萄糖完全氧化,產(chǎn)生2分子的丙酮酸,釋放3分子的CO2,4分子的NADH,1分子FADH2,1分子的GTP,38個(gè)ATP。無氧呼吸:厭

23、氧微生物和兼性厭氧微生物。最終電子受體是NO3-、NO2-、SO42-、S2O32-及CO2等外源受體。也需要細(xì)胞色素等電子傳遞體,也能產(chǎn)生較多的能量。產(chǎn)生能量:有氧呼吸無氧呼吸發(fā)酵自養(yǎng)微生物的生物氧化可以氧化無機(jī)物獲得能量,同化合成細(xì)胞物質(zhì)。通過氧化磷酸化產(chǎn)生ATP。1、氨的氧化:硝化細(xì)菌分為兩個(gè)亞群:亞硝化細(xì)菌和硝化細(xì)菌。將NH3和NO2-用作能源。2、硫的氧化:硫桿菌能夠利用一種或多種還原態(tài)或部分還原態(tài)的硫化合物作能源。3、鐵的氧化:從亞鐵到高價(jià)鐵的氧化,產(chǎn)能反應(yīng)。嗜酸性的氧化亞鐵硫桿菌。4、氫的氧化:氫細(xì)菌能利用分子氫氧化產(chǎn)生能量,能量轉(zhuǎn)換方式1、底物水平磷酸化:物質(zhì)在生物氧化過程中,

24、常生成一些含有高能鍵的化合物,這些化合物可直接偶聯(lián)ATP或GTP的合成。既存在于發(fā)酵過程中,也存在于呼吸作用過程中。2、氧化磷酸化:物質(zhì)在生物氧化過程中形成的NADH和FADH2可通過位于線粒體內(nèi)膜或細(xì)菌質(zhì)膜上的電子傳遞系統(tǒng),將電子傳遞給氧或其他氧化型物質(zhì),在這個(gè)過程中偶聯(lián)著ATP的合成。1分子NADH和FADH2可分別產(chǎn)生3分子和2分子ATP。3、光合磷酸化:光合細(xì)菌將光能轉(zhuǎn)變成化學(xué)能。以用于從CO2合成細(xì)胞物質(zhì)。(1)光合色素:將光能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能的關(guān)鍵物質(zhì)。細(xì)菌葉綠素與植物葉綠素的區(qū)別在于側(cè)鏈基團(tuán)的不同,由此導(dǎo)致光吸收特性不同。(2)光合單位:在光合作用過程中還原1分子CO2所需的葉綠素分

25、子數(shù)。(3)光合磷酸化:光能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能的過程。細(xì)菌葉綠素分子吸收光量子時(shí),細(xì)菌葉綠素被激活,釋放電子而被氧化,釋放出的電子在電子傳遞系統(tǒng)中逐步釋放能量。1)環(huán)式光合磷酸化:存在于光合細(xì)菌的原始產(chǎn)能機(jī)制,只存在于原核生物的光合細(xì)菌中,都是厭氧菌,不能利用H2O作為還原CO2的氫供體,而是利用還原態(tài)的無機(jī)物(H2S、H2),不產(chǎn)氧。這類光合細(xì)菌廣泛分布在深層淡水或海水中,能夠分解污水中的H2S和有機(jī)物,用于水質(zhì)凈化。2)非環(huán)式光合磷酸化:藍(lán)細(xì)菌與其他光合細(xì)菌??梢粤呀馑尫叛鯕狻?)嗜鹽菌紫膜的光合作用:位于嗜鹽菌細(xì)胞膜上的紫膜,約占細(xì)胞膜的50%,由細(xì)菌視紫紅質(zhì)組成,在光量子驅(qū)動(dòng)下,形成質(zhì)子

26、梯度,合成ATP。耗能代謝細(xì)胞物質(zhì)的合成1、CO2的固定:卡爾文循環(huán)、還原性TCA;2、生物固氮;3、二碳化合物的同化;4、糖類的合成;5、氨基酸的合成;6、核苷酸的合成。生物固氮:一些特殊類群的原核微生物能夠利用分子態(tài)氮還原為氨。固氮微生物:自生固氮體系,共生固氮體系和聯(lián)合固氮體系。固氮菌屬,巴氏固氮梭菌,根瘤菌屬。固氮酶:由鐵蛋白和鉬鐵蛋白兩個(gè)組分組成,固氮作用是一個(gè)耗能反應(yīng)。其他耗能反應(yīng)1、運(yùn)動(dòng);2、營養(yǎng)物質(zhì)運(yùn)輸;3、生物發(fā)光。代謝的調(diào)節(jié)方式?微生物代謝的調(diào)節(jié)通過控制酶的作用實(shí)現(xiàn)。酶活性調(diào)節(jié)(已有的酶、酶化學(xué)水平)一、酶活性調(diào)節(jié):通過酶分子構(gòu)象或分子結(jié)構(gòu)的改變來調(diào)節(jié)其催化反應(yīng)的速率。受多

27、種因素影響(底物的性質(zhì)和濃度、環(huán)境因子、其它酶)。1、變構(gòu)調(diào)節(jié):反應(yīng)產(chǎn)物的積累會(huì)抑制催化這個(gè)反應(yīng)的酶的活性。由于反應(yīng)產(chǎn)物與酶的結(jié)合抑制了底物與酶活性中心的結(jié)合。在一個(gè)由多步反應(yīng)組成的代謝途徑中,末端產(chǎn)物通常會(huì)反饋抑制該途徑的第一個(gè)酶,這種酶被稱為變構(gòu)酶。2、修飾調(diào)節(jié):是通過共價(jià)調(diào)節(jié)酶來實(shí)現(xiàn)的。共價(jià)調(diào)節(jié)酶通過修飾酶催化其多肽鏈上某些基團(tuán)進(jìn)行可逆的共價(jià)修飾,使之處于活性與非活性的互變狀態(tài),從而導(dǎo)致調(diào)節(jié)酶的活化與抑制,以抑制代謝的速度和方向。酶促共價(jià)修飾是酶分子共價(jià)鍵發(fā)生了改變。是一種體內(nèi)較經(jīng)濟(jì)的代謝調(diào)節(jié)方式。酶促共價(jià)修飾對調(diào)節(jié)信號(hào)具放大效應(yīng),其催化效率比別構(gòu)酶調(diào)節(jié)要高。酶合成調(diào)節(jié)(合成量、遺傳水平

28、)二、分支合成途徑調(diào)節(jié):每個(gè)分支途徑的末端產(chǎn)物控制分支點(diǎn)后的第一個(gè)酶,同時(shí)每個(gè)末端產(chǎn)物又對整個(gè)途徑的第一個(gè)酶有部分的抑制作用。1、同工酶:指能催化同一種化學(xué)反應(yīng),但其酶蛋白本身的分子結(jié)構(gòu)組成卻有所不同的一組酶。在分支途徑中的第一個(gè)酶有幾種結(jié)構(gòu)不同的一組同功酶,每一種代謝終產(chǎn)物只對一種同功酶具有反饋抑制作用,只有當(dāng)幾種終產(chǎn)物同時(shí)過量時(shí),才能完全阻止反應(yīng)的進(jìn)行。2、協(xié)同反饋抑制:在分支代謝途徑中,幾種末端產(chǎn)物同時(shí)都過量,才對途徑中的第一個(gè)酶具有抑制作用。若某一末端產(chǎn)物單獨(dú)過量則對途徑中的第一個(gè)酶無抑制作用。3、累積反饋抑制:在分支代謝途徑中,任何一種末端產(chǎn)物過量時(shí)都能對共同途徑中的第一個(gè)酶起抑制作

29、用,而且各種末端產(chǎn)物的抑制作用互不干擾。當(dāng)各種末端產(chǎn)物同時(shí)過量時(shí),它們的抑制作用是累加的。4、順序反饋抑制:分支代謝途徑中的兩個(gè)末端產(chǎn)物,不能直接抑制代謝途徑中的第一個(gè)酶,而是分別抑制分支點(diǎn)后的反應(yīng)步驟,造成分支點(diǎn)上中間產(chǎn)物的積累,這種高濃度的中間產(chǎn)物再反饋抑制第一個(gè)酶的活性。因此,只有當(dāng)兩個(gè)末端產(chǎn)物都過量時(shí),才能對途徑中的第一個(gè)酶起到抑制作用。微生物次級(jí)代謝與次級(jí)代謝產(chǎn)物初級(jí)代謝概念:將微生物從外界吸收的各種營養(yǎng)物質(zhì),通過分解代謝和合成代謝,生成維持生命活動(dòng)的物質(zhì)和能量的過程。次級(jí)代謝概念:微生物在一定的生長時(shí)期,以初級(jí)代謝產(chǎn)物為前體,合成一些對微生物的生命活動(dòng)無明確功能的物質(zhì)。有人把超出生

30、理需求的過量初級(jí)代謝產(chǎn)物也看作是次級(jí)代謝產(chǎn)物。大多是分子結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的化合物,抗生素、激素、生物素、毒素及維生素。初級(jí)代謝與次級(jí)代謝的關(guān)系:初級(jí)代謝的關(guān)鍵性中間產(chǎn)物是次級(jí)代謝的前提;次級(jí)代謝在菌體指數(shù)生長后期或穩(wěn)定期進(jìn)行;次級(jí)代謝易受環(huán)境條件的影響;催化次級(jí)代謝的酶專一性不高;次級(jí)代謝產(chǎn)物的合成,因菌株不同而異;質(zhì)粒與次級(jí)代謝關(guān)系密切,控制著多種抗生素的合成。次級(jí)代謝產(chǎn)物沒有明確的生理功能,也不是菌體生長繁殖所必需的物質(zhì)。次級(jí)代謝的調(diào)節(jié)1、初級(jí)代謝對次級(jí)代謝的調(diào)節(jié):次級(jí)代謝的調(diào)解過程有酶活性的激活和抑制及酶合成的誘導(dǎo)和阻遏。同時(shí),次級(jí)代謝會(huì)受到初級(jí)代謝的調(diào)節(jié)。2、碳、氮代謝物的調(diào)節(jié)作用:高濃度

31、的NH4+可以降低谷氨酰胺合成酶的活性,繼而對抗生素的生產(chǎn)有不利影響。硝酸鹽可以大幅度地促進(jìn)利福霉素的合成。同時(shí)可以抑制脂肪合成。硝酸鹽還可提高菌體中谷氨酰胺合成酶的比活力。3、誘導(dǎo)作用及產(chǎn)物的反饋抑制:在次級(jí)代謝中也存在著誘導(dǎo)作用。巴比妥能促進(jìn)將利福霉素SV轉(zhuǎn)化為利福霉素B的能力。次級(jí)代謝產(chǎn)物的過量積累也能反饋抑制其合成酶系。培養(yǎng)基中的磷酸鹽、溶解氧、金屬離子及細(xì)胞膜透性也會(huì)對次級(jí)代謝產(chǎn)生或多或少的影響。第六章 微生物的生長繁殖及其控制(1245)生長和繁殖的概念;生長曲線的概念及分期特點(diǎn);二次生長;同步培養(yǎng)及方法;連續(xù)培養(yǎng)及方法;影響微生物生長的環(huán)境因素;控制微生物生長的化學(xué)物質(zhì)及特點(diǎn);控

32、制微生物生長的物理因素及特點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平生長繁殖生長的概念細(xì)胞物質(zhì)有規(guī)律地、不可逆地增加,導(dǎo)致細(xì)胞體積擴(kuò)大的生物學(xué)過程。量變過程。A繁殖的概念微生物生長到一定階段,由于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的復(fù)制與重建并通過特定方式,產(chǎn)生新的生命個(gè)體,即引起生命個(gè)體數(shù)量增加的生物學(xué)過程。質(zhì)變過程。A細(xì)菌的個(gè)體生長染色體DNA的復(fù)制與分離細(xì)菌的染色體為環(huán)形的雙鏈DNA分子。雙向復(fù)制,復(fù)制起點(diǎn)附著在細(xì)胞膜上。A細(xì)胞壁擴(kuò)增在桿菌中新合成的肽聚糖在細(xì)胞壁中是新老細(xì)胞壁呈間隔分布,在多個(gè)位點(diǎn)插入;在球菌中新合成的肽聚糖是固定在赤道板附近插入,導(dǎo)致辛勞細(xì)胞壁能明顯地分開,原來的細(xì)胞壁被推向兩端。細(xì)菌的分裂與調(diào)節(jié)細(xì)菌進(jìn)

33、入分裂期,在細(xì)菌長度的中間位置,細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷,新合成的肽聚糖插入,導(dǎo)致橫隔壁向心生長,最后在中心會(huì)合,完成分裂。細(xì)菌的群體生長繁殖生長的規(guī)律生長曲線:在分批培養(yǎng)過程中,以時(shí)間為橫坐標(biāo),以菌數(shù)為縱坐標(biāo),反映細(xì)菌在整個(gè)培養(yǎng)期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。生長曲線分為遲緩期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定生長期和衰亡期等4個(gè)生長時(shí)期。1、遲緩期:細(xì)菌接種到新鮮培養(yǎng)基而處于一個(gè)新的生長環(huán)境,細(xì)菌并不馬上分裂,細(xì)菌的數(shù)量恒定,或增加很少。此時(shí)的細(xì)胞體積最大。產(chǎn)生遲緩期的原因:暫時(shí)缺少足夠的能量和必需的生長因子,種子老化或未充分活化,接種時(shí)造成的損傷。遲緩期是必需的??s短遲緩期的措施:通過遺傳學(xué)方法改變菌種的遺傳特性;利用對數(shù)

34、生長期的細(xì)胞作種子;盡量使接種前后所使用的培養(yǎng)基組成不要相差太大;適當(dāng)擴(kuò)大接種量。2、對數(shù)生長期:以最大的速率生長和分裂,導(dǎo)致細(xì)菌數(shù)量呈對數(shù)增加。細(xì)菌呈平衡生長,代謝活性及酶活性高而穩(wěn)定,細(xì)胞大小比較一致,生活力強(qiáng),生產(chǎn)上常被用作種子,在科研上是理想的實(shí)驗(yàn)材料。3、穩(wěn)定生長期:由于營養(yǎng)物質(zhì)消耗,代謝產(chǎn)物積累和pH等環(huán)境變化,環(huán)境條件逐步不適宜細(xì)菌生長,導(dǎo)致生長速率降低至零(分裂增加的數(shù)量等于死亡數(shù)量)?;罴?xì)菌數(shù)最高并維持穩(wěn)定。工業(yè)生產(chǎn)上產(chǎn)生產(chǎn)品的時(shí)期。延長穩(wěn)定期的措施:補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì),取走代謝產(chǎn)物,改善培養(yǎng)條件(對好氧菌進(jìn)行通氣、攪拌或震蕩)。4、衰亡期:營養(yǎng)物質(zhì)耗盡,有毒代謝產(chǎn)物大量積累,細(xì)菌

35、死亡速率逐步增加,活細(xì)菌數(shù)逐步減少。細(xì)菌代謝活性降低,衰老并自溶,后期細(xì)菌死亡速率降低。二次生長:不同的微生物,同一種微生物對不同物質(zhì)的利用能力不同。微生物在同時(shí)含有速效碳源(氮源)和遲效碳源(氮源)的培養(yǎng)基中生長時(shí),微生物首先會(huì)利用速效碳源(氮源)生長,直到該營養(yǎng)耗盡,然后進(jìn)過短暫的停滯后,再利用遲效碳源(氮源)重新開始生長。生長的數(shù)學(xué)模型代時(shí)(G):每個(gè)細(xì)菌分裂繁殖一代所需要的時(shí)間。倍增時(shí)間:細(xì)菌數(shù)量增加一倍所需要的時(shí)間。主要生長參數(shù)1、遲緩時(shí)間(T):微生物在生長過程中,達(dá)到對數(shù)生長期所需時(shí)間與理想條件下達(dá)到對數(shù)生長期所需時(shí)間之差。2、比生長速率:單位數(shù)量的細(xì)菌在單位時(shí)間(h)內(nèi)增加的量

36、。3、總生長量:在某一時(shí)間里,通過培養(yǎng)所獲得的微生物總量與原來接種的量之差值。同步培養(yǎng)概念:能使群體中不同步的細(xì)胞轉(zhuǎn)變成能同時(shí)生長或分裂的群體細(xì)胞。以同步培養(yǎng)方法使群體細(xì)胞能處于同一生長階段,并同時(shí)進(jìn)行分裂的生長方式稱為同步生長。同步培養(yǎng)物常被用來研究在單個(gè)細(xì)胞上難以研究的生理與遺傳特性,作為工業(yè)發(fā)酵的種子。同步培養(yǎng)方法:機(jī)械法和環(huán)境條件控制技術(shù)。1、機(jī)械法:根據(jù)細(xì)胞體積與質(zhì)量不同或根據(jù)它們同某種材料結(jié)合能力不同的原理而設(shè)計(jì)的方法。離心法、過濾分離法、硝酸纖維素濾膜法。2、環(huán)境條件控制技術(shù):溫度,培養(yǎng)基成分控制,其他(光暗交替、高溫)。連續(xù)培養(yǎng)概念:在微生物的整個(gè)培養(yǎng)期間,通過一定的方式使微生

37、物能以恒定的比生長速率生長并能持續(xù)生長下去的一種培養(yǎng)方法。采用開放系統(tǒng),不斷地補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)和以同樣的速率移出培養(yǎng)物是實(shí)現(xiàn)連續(xù)培養(yǎng)的基本原則。1、恒化器連續(xù)培養(yǎng):保持培養(yǎng)基中某種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度基本恒定,使細(xì)菌的比生長速率恒定。某種營養(yǎng)物質(zhì)被作為比生長速率的控制因子。用于微生物學(xué)的研究,篩選不同的變種。2、恒濁器連續(xù)培養(yǎng):保持培養(yǎng)基中菌體濃度恒定。使細(xì)菌生長連續(xù)進(jìn)行。用于發(fā)酵工業(yè)。環(huán)境對生長的影響營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)不足,降低或停止細(xì)胞物質(zhì)合成,或誘導(dǎo)合成特定的運(yùn)輸系統(tǒng),充分吸收環(huán)境中微量的營養(yǎng)物質(zhì),另一方面對胞內(nèi)某些非必需成分或失效的成分進(jìn)行降解以重新利用。水的活性微生物生長都有最適的w,通過培養(yǎng)基

38、的滲透壓力變化影響微生物的生長速率。溫度嗜冷、兼性嗜冷、嗜溫、嗜熱和超嗜熱。溫度影響微生物生長的機(jī)理:影響酶活性;影響細(xì)胞質(zhì)膜的流動(dòng)性;影響物質(zhì)的溶解度。pH微生物生長都有一個(gè)最適pH范圍。還有一個(gè)最低與最高的pH范圍。pH影響微生物生長的機(jī)理:影響細(xì)胞質(zhì)膜的透性;影響細(xì)胞質(zhì)膜結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性;影響物質(zhì)的溶解性或電離性,進(jìn)而影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收。氧分為:好氧、微好氧、耐氧厭氧、兼性厭氧和專性厭氧。采取措施:震蕩或通氣(好氧);排除氧或添加還原劑(厭氧);深層培養(yǎng)(兼性厭氧或耐氧厭氧)。微生物生長繁殖的控制控制微生物的化學(xué)物質(zhì)1、抗微生物劑:是一類能夠殺死微生物或抑制微生物生長的化學(xué)物質(zhì)??梢允侨斯ず?/p>

39、成的,也可以是生物合成的天然物質(zhì)。根據(jù)抗微生物的特性可分為:抑菌劑:能抑制微生物生長,但不能殺死。殺菌劑:能殺死微生物細(xì)胞,但不能使細(xì)胞裂解。溶菌劑:能通過誘導(dǎo)細(xì)胞裂解而殺死細(xì)胞。根據(jù)作用效果和作用范圍,可分為:消毒劑:殺死非生物材料上的微生物。防腐劑:具有殺死微生物或抑制微生物生長的能力,但對于動(dòng)物或人體的組織無毒害作用。可作為外用抗微生物藥物。2、抗代謝物:生長因子的結(jié)構(gòu)類似物,干擾機(jī)體的正常代謝,達(dá)到抑制微生物生長的目的?;前奉愃幬?。3、抗生素:某些生物合成或半合成的一類次級(jí)代謝產(chǎn)物或衍生物,能夠抑制微生物生長或殺死微生物的化合物??股貧⒕恚阂种萍?xì)菌細(xì)胞壁合成;破壞細(xì)胞質(zhì)膜;作用于

40、呼吸鏈以干擾氧化磷酸化;抑制蛋白質(zhì)和核酸合成??顾幮援a(chǎn)生的機(jī)理:細(xì)胞質(zhì)膜透性改變;藥物作用靶標(biāo)改變;合成修飾抗生素的酶;抗性菌株發(fā)生遺傳變異。避免耐藥性的措施:第一次使用的藥物劑量要足;避免在一個(gè)時(shí)期或長期多次使用同種抗生素;不同的抗生素混合使用;對現(xiàn)有抗生素進(jìn)行改造;篩選新的更有效的抗生素。控制微生物的物理因素1、高溫滅菌:超過最高溫度或低于最低溫度都會(huì)對微生物產(chǎn)生殺滅或抑制作用。十倍減少時(shí)間(D):殺死樣品中90%菌體或孢子及芽孢所需要的時(shí)間。與溫度、微生物的種類、生長時(shí)期、檢測培養(yǎng)基的性質(zhì)等因素有關(guān)。熱致死時(shí)間:殺死液體中所有微生物所需要的時(shí)間。可以衡量不同微生物的熱敏感性。孢子比營養(yǎng)體

41、抗熱,中性培養(yǎng)基比酸性培養(yǎng)基抗熱,高濃度的糖、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)能增加微生物對熱的抗性,干細(xì)胞比濕細(xì)胞有更大的抗熱性。高壓蒸汽滅菌:121,30分鐘。煮沸消毒:100,15分鐘。金屬工具等。間歇滅菌:流通蒸汽(或蒸煮)反復(fù)滅菌幾次。干熱滅菌:160170,12小時(shí)。干熱滅菌箱,用于玻璃器皿、金屬用具等。超高溫滅菌:135150,26秒。牛奶、液體食品等。巴氏滅菌法:65,30分鐘。富含營養(yǎng)的食品。2、輻射作用:利用電磁輻射產(chǎn)生的電磁波殺死微生物。微波、紫外線(UV)、X射線和射線等。微波產(chǎn)生熱;紫外線使DNA分子中相鄰的嘧啶形成嘧啶二聚體,抑制DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄;X射線和射線能使其他物質(zhì)氧化或產(chǎn)生自由

42、基(OH-、H-)再作用于生物分子(打斷氫鍵、使雙鍵氧化、破壞環(huán)狀結(jié)構(gòu)或使分子聚合等),破壞和改變生物大分子結(jié)構(gòu)。3、過濾滅菌:濾板中間填充棉花、玻璃纖維或石棉,后改用濾紙。用于發(fā)酵工業(yè);醋酸纖維素濾膜(0.45m),用于科研;核孔濾器(聚碳酸膠片,厚10m),用于科研。用于空氣和不耐熱的液體培養(yǎng)基。4、高滲作用:提高環(huán)境的滲透壓力即降低w值,可以達(dá)到控制微生物生長的目的。某些微生物含有滲透保護(hù)劑(滲透調(diào)節(jié)劑、滲透穩(wěn)定劑),適應(yīng)培養(yǎng)基的滲透壓變化。5、干燥:干燥是保存微生物菌種的重要手段之一。6、超聲波:利用空穴作用和熱能抑制或殺死微生物。第七章 病毒(134567)病毒的性質(zhì)和定義;病毒的種

43、類;病毒的本質(zhì)?;病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)?;病毒的殼體結(jié)構(gòu)?;病毒的包膜結(jié)構(gòu)?;毒粒的結(jié)構(gòu)類型;毒粒的化學(xué)組成;病毒的蛋白質(zhì)類型;病毒的復(fù)制方式?;一步生長曲線及分期?;病毒的復(fù)制周期;病毒吸附的方式;病毒的侵入方式;病毒大分子合成的階段;病毒的裝配過程;病毒非增殖性感染的類型;缺損病毒的類型;吻合噬菌體的溶源性反應(yīng);噬菌體感染對原核細(xì)胞的影響;病毒感染對真核細(xì)胞的影響;病毒感染對機(jī)體的影響;亞病毒因子及特點(diǎn)知識(shí)點(diǎn)核心概念知識(shí)內(nèi)容學(xué)習(xí)水平概述病毒的特點(diǎn)和定義病毒是一類既具有化學(xué)大分子屬性,又具有生物體基本特征;既具有細(xì)胞外的感染性顆粒形式,又具有細(xì)胞內(nèi)的繁殖性基因形式的獨(dú)特生物類群。病毒的特點(diǎn):結(jié)構(gòu)簡

44、單(不具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)、核蛋白)、特殊的繁殖形式(復(fù)制)、絕對的細(xì)胞內(nèi)寄生(基因水平)。A病毒的宿主范圍(病毒能夠感染并在其中復(fù)制的宿主種類和組織細(xì)胞種類)噬菌體:原核生物病毒。植物病毒:1000多種。動(dòng)物病毒:昆蟲病毒、醫(yī)學(xué)病毒、獸醫(yī)病毒。A毒粒的性質(zhì)毒粒的形態(tài)結(jié)構(gòu)1、毒粒的大小和形狀:大小在十幾納米幾百納米;形狀:球形顆粒、桿狀顆粒和復(fù)雜形狀顆粒。2、毒粒的殼體結(jié)構(gòu):包圍著核酸的蛋白質(zhì)外殼。殼體由蛋白質(zhì)亞基以次級(jí)鍵結(jié)合形成。取螺旋對稱和二十面體對稱。(1)螺旋對稱殼體:蛋白質(zhì)亞基有規(guī)律地沿著中心軸呈螺旋排列,病毒核酸以多個(gè)弱鍵與蛋白質(zhì)亞基結(jié)合。(2)二十面體對稱:蛋白質(zhì)亞基圍繞著具立方對稱的正

45、多面體的角或邊排列,進(jìn)而形成一個(gè)封閉的蛋白質(zhì)鞘。若以一定數(shù)目的亞基排列成具有一定表面積的立方對稱實(shí)體,二十面體容積最大,能包裹更多的病毒核酸。病毒核酸盤繞折疊在殼體中的有限空間內(nèi)。核酸的結(jié)合有助于增加二十面體殼體的穩(wěn)定性。(3)雙對稱結(jié)構(gòu):噬菌體。頭部二十面體對稱,尾部呈螺旋對稱。3、毒粒的包膜結(jié)構(gòu):一些復(fù)雜的病毒的核殼外還覆蓋一層脂蛋白膜,包膜是病毒以芽出方式成熟時(shí),由細(xì)胞膜衍生而來。薄膜上有病毒編碼的包膜糖蛋白,包膜糖蛋白靠跨膜固著肽附著于脂雙層,形成包膜突起(刺突)。病毒包膜有維系毒粒結(jié)構(gòu)、保護(hù)病毒核殼的作用。4、毒粒的結(jié)構(gòu)類型:根據(jù)病毒毒粒有無包膜以及殼體的對稱形式,分為4種類型:裸露

46、的二十面體毒粒、裸露的螺旋毒粒、有包膜的二十面體毒粒和有包膜的螺旋毒粒。毒粒的化學(xué)組成1、病毒的核酸:一種病毒的毒粒只含有一種核酸,病毒的基因組都是單倍體。(1)病毒核酸的類型:ssDNA、dsDNA、ssRNA和dsRNA4種類型,又有線狀和環(huán)狀之分,又有正極性(+意義、+鏈)和負(fù)極性(意義,鏈)之分。(2)核酸的結(jié)構(gòu)特征:黏性末端、循環(huán)排列和末端重復(fù)序列。有的病毒5·端有帽子結(jié)構(gòu),3·端有poly(A)結(jié)構(gòu)。2、病毒的蛋白質(zhì):分為結(jié)構(gòu)蛋白(構(gòu)成一個(gè)形態(tài)成熟的有感染性病毒顆粒所必需)和非結(jié)構(gòu)蛋白(具有一定功能,但不結(jié)合于毒粒中)。(1)殼體蛋白:蛋白質(zhì)亞基,蛋白質(zhì)亞基的組

47、成和數(shù)目不同。功能是保護(hù)病毒的核酸。無包膜病毒的殼體蛋白參與病毒的吸附、進(jìn)入,決定病毒的宿主嗜性,同時(shí)還是病毒的表面抗原。(2)包膜蛋白:包括包膜糖蛋白和基質(zhì)蛋白。包膜糖蛋白是病毒的主要表面抗原,是病毒的吸附蛋白,他們與細(xì)胞受體相互作用啟動(dòng)病毒感染發(fā)生,有些病毒的包膜糖蛋白還介導(dǎo)病毒的進(jìn)入?;|(zhì)蛋白構(gòu)成膜脂雙層與核殼之間的亞膜結(jié)構(gòu),具有支撐包膜、維持病毒結(jié)構(gòu)的作用。(3)毒粒酶:3個(gè)來源,宿主細(xì)胞酶或經(jīng)病毒修飾改變了的宿主細(xì)胞酶;病毒的一些非結(jié)構(gòu)蛋白;毒粒酶。3、病毒的脂類:來源于細(xì)胞的脂類化合物。種類與含量具有宿主細(xì)胞特異性。4、病毒的糖類:以寡糖側(cè)鏈存在于糖蛋白中,組成與宿主細(xì)胞有關(guān)。5、

48、其它組成:陽離子化合物、金屬陽離子。對核酸的構(gòu)型產(chǎn)生一定的影響。病毒的復(fù)制潛伏期裂解期平穩(wěn)期病毒的復(fù)制周期1、一步生長曲線:以適量的病毒接種處于標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)的高濃度的敏感細(xì)胞,待病毒吸附后,用高倍稀釋或用抗血清處理病毒-細(xì)胞培養(yǎng)物,以建立同步感染,繼續(xù)培養(yǎng),定時(shí)取樣測定培養(yǎng)物中的病毒效價(jià),以感染時(shí)間為橫坐標(biāo),病毒的感染效價(jià)為縱坐標(biāo),描繪出病毒特征性的繁殖曲線。兩個(gè)特征性數(shù)據(jù)。潛伏期:毒粒吸附于細(xì)胞到受感染細(xì)胞釋放出子代毒粒所需的最短時(shí)間。裂解量:每個(gè)受感染細(xì)胞所產(chǎn)生的子代病毒顆粒的平均數(shù)目。等于潛伏期受染細(xì)胞的數(shù)目除以穩(wěn)定期受染細(xì)胞所釋放的全部子代病毒數(shù)目。2、隱蔽期:自病毒在受染細(xì)胞內(nèi)消失到細(xì)胞

49、內(nèi)出現(xiàn)新的感染性病毒的時(shí)間。隱蔽期病毒在細(xì)胞內(nèi)存在的動(dòng)力學(xué)曲線呈線性函數(shù),從而證明子代病毒顆粒是由新合成的病毒基因組與蛋白質(zhì)經(jīng)裝配成熟。3、病毒的復(fù)制周期:病毒感染敏感的宿主細(xì)胞,毒粒表面的吸附蛋白與細(xì)胞表面的病毒受體結(jié)合,以一定的方式進(jìn)入細(xì)胞,經(jīng)過脫殼、釋放出病毒基因組。病毒基因組在細(xì)胞核和(或)細(xì)胞質(zhì)中,進(jìn)行病毒大分子的生物合成,新合成的病毒基因組與病毒殼體蛋白裝配成病毒核殼,并以一定方式釋放到細(xì)胞外;若是有包膜病毒,核殼通過與細(xì)胞膜的相互作用芽出釋放,并在此過程中自細(xì)胞膜衍生獲得包膜。從病毒吸附于細(xì)胞開始,到子代病毒從受染細(xì)胞釋放到細(xì)胞外的病毒復(fù)制過程稱為病毒的復(fù)制周期。病毒的復(fù)制周期:

50、五個(gè)階段吸附;侵入;脫殼;病毒大分子的合成;裝配與釋放。病毒感染的起始1、吸附:病毒表面蛋白與細(xì)胞受體特異性結(jié)合,導(dǎo)致病毒附著于細(xì)胞表面,這是啟動(dòng)病毒感染的第一階段。(1)病毒吸附蛋白:能夠特異性地識(shí)別細(xì)胞受體并與之結(jié)合的毒粒表面的結(jié)構(gòu)蛋白分子,殼體蛋白、尾絲蛋白或包膜糖蛋白。編碼反受體的基因的突變、能夠滅活或破壞反受體的蛋白水解酶及中和抗體均可導(dǎo)致反受體與受體相互作用能力的喪失,進(jìn)而影響病毒的感染性。(2)細(xì)胞受體:能被病毒吸附蛋白特異性地識(shí)別并與之結(jié)合,介導(dǎo)病毒進(jìn)入細(xì)胞,啟動(dòng)感染發(fā)生的一組細(xì)胞膜表面分子,蛋白質(zhì)、糖蛋白或磷脂。病毒受體的細(xì)胞種系特異性決定了病毒的宿主范圍,病毒受體還具有組織

51、特異性,從而決定了病毒的組織嗜性。(3)病毒的吸附過程:病毒吸附蛋白與細(xì)胞受體間的結(jié)合力來源于空間結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)性、相互間的電荷、氫鍵、疏水性相互作用及范德華力。影響吸附活性的因素有:細(xì)胞代謝抑制物、蛋白酶、糖苷酶、脂溶劑和抗體等,溫度、離子濃度和pH等環(huán)境因素亦可影響病毒的吸附反應(yīng)。2、侵入:病毒吸附后立即發(fā)生、依賴于能量的感染步驟。噬菌體采用注射形式。動(dòng)物病毒采用移位、內(nèi)吞方式、融合和病毒-抗體復(fù)合物與細(xì)胞表面的免疫球蛋白受體的結(jié)合進(jìn)入細(xì)胞。植物病毒通過人為或自然的機(jī)械損傷形成的微傷口進(jìn)入細(xì)胞,或靠攜帶有病毒的媒介昆蟲帶入細(xì)胞。3、脫殼:病毒的包膜和(或)殼體除去而釋放出病毒基因組的過程。是病

52、毒基因組進(jìn)行復(fù)制和功能表達(dá)所必需的感染事件。病毒殼體蛋白的重排對病毒脫殼至關(guān)重要,脫殼過程與蛋白酶、熱裂解等因素有關(guān)。噬菌體脫殼與侵入同時(shí)完成,動(dòng)物病毒脫殼過程復(fù)雜。病毒大分子的合成通過病毒基因組的表達(dá)與復(fù)制完成的,存在著強(qiáng)烈的時(shí)序性。病毒基因組的轉(zhuǎn)錄是分期進(jìn)行的。發(fā)生在病毒核酸復(fù)制以前的轉(zhuǎn)錄為早期轉(zhuǎn)錄,所轉(zhuǎn)錄的基因稱作早期基因,早期基因編碼的早期蛋白主要是參與病毒核酸復(fù)制、調(diào)節(jié)病毒基因組表達(dá),以及改變或抑制宿主細(xì)胞大分子合成的蛋白質(zhì)。病毒核酸復(fù)制后所進(jìn)行的轉(zhuǎn)錄為晚期轉(zhuǎn)錄,所轉(zhuǎn)錄的基因稱為晚期基因,晚期基因編碼的晚期蛋白主要是構(gòu)成子代毒粒所需的結(jié)構(gòu)蛋白。分為3個(gè)連續(xù)的階段:病毒早期基因的表達(dá);

53、病毒基因組的復(fù)制;病毒晚期基因的表達(dá)。病毒的裝配與釋放病毒的裝配:新合成的毒粒結(jié)構(gòu)組分以一定的方式結(jié)合,裝配成完整的病毒顆粒。成熟的子代病毒顆粒依一定途徑釋放到細(xì)胞外,病毒的釋放標(biāo)志病毒復(fù)制周期結(jié)束。1、噬菌體的裝配與釋放:極為復(fù)雜的裝配過程,包括4個(gè)完全獨(dú)立的亞裝配途徑,無尾絲的尾部裝配,頭部的裝配,尾部與頭部自發(fā)結(jié)合,單獨(dú)裝配的尾絲與前已裝配好的顆粒相連。每一種結(jié)構(gòu)蛋白在裝配時(shí)都發(fā)生了構(gòu)型的改變,為后一種蛋白質(zhì)的結(jié)合提供了可識(shí)別位點(diǎn)。大多數(shù)噬菌體都是以裂解細(xì)胞方式釋放。2、動(dòng)物病毒晚期基因編碼的殼體蛋白通過自我裝配形成殼體,首先裝配成空的前殼體,然后與核酸結(jié)合成熟為完整的病毒顆粒,芽出形成

54、包膜。3、植物病毒(TMV)殼體蛋白質(zhì)亞基首先形成20S的雙層圓盤,然后圓盤與RNA的基因組3·端的特異性裝配起始序列結(jié)合而轉(zhuǎn)變成螺旋,RNA穿過螺旋的中心孔并在生長端形成一個(gè)可移動(dòng)的環(huán),隨著蛋白質(zhì)亞基不斷加入,螺旋殼體首先向5·端生長,5·端包裝完成后,再向3·端延伸至核殼成熟。病毒的非增殖性感染(不完全循環(huán))非增殖性感染的類型1、流產(chǎn)感染:普遍發(fā)生的一類非增殖性感染。(1)依賴于細(xì)胞的流產(chǎn)感染:非允許細(xì)胞,病毒在其內(nèi)不能復(fù)制。原因于這些細(xì)胞缺少某些參與病毒復(fù)制的酶、tRNA或病毒大分子合成所需的其他細(xì)胞蛋白。(2)依賴于病毒的流產(chǎn)感染:基因組不完整的

55、缺損病毒引起。一個(gè)或多個(gè)病毒復(fù)制必需基因有缺損,喪失了其功能。2、限制性感染:細(xì)胞的瞬時(shí)允許性產(chǎn)生。病毒持續(xù)存在于受染細(xì)胞內(nèi)不能復(fù)制,直到細(xì)胞成為允許性細(xì)胞。3、潛伏感染:在受染細(xì)胞內(nèi)有病毒基因組持續(xù)存在,但并無感染性病毒顆粒產(chǎn)生,而且受染細(xì)胞也不會(huì)被破壞。病毒基因的功能表達(dá)導(dǎo)致宿主基因表達(dá)的改變,以致正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化為惡性細(xì)胞。缺損病毒?缺損病毒的復(fù)制還需要其他病毒基因組或病毒基因的輔助活性,才能復(fù)制。1、干擾缺損顆粒(DI):病毒復(fù)制時(shí)產(chǎn)生的一類亞基因組的缺失突變體。必須依賴于其同源的完全病毒提供其復(fù)制必需的基因產(chǎn)物才能復(fù)制。DI基因組較其完全病毒小,復(fù)制更為迅速,在與其完全病毒共感染時(shí)更易占

56、據(jù)優(yōu)勢,從而干擾其復(fù)制。2、衛(wèi)星病毒:寄生于輔助病毒的基因產(chǎn)物的病毒,依賴于輔助病毒才能復(fù)制。絕對缺損病毒。形態(tài)結(jié)構(gòu)和抗原性與輔助病毒不同,基因組與輔助病毒的基因組也很少有同源性。3、條件缺損病毒:基因組發(fā)生了突變的條件致死突變體。在非允許條件或限制條件下導(dǎo)致流產(chǎn)感染。也能干擾野生型病毒復(fù)制。4、整合的病毒基因組:溫和噬菌體和腫瘤病毒感染宿主細(xì)胞后,病毒基因組整合于宿主染色體,并隨細(xì)胞分裂傳遞給子代細(xì)胞,稱之為整合感染。(1)溫和噬菌體的溶源性反應(yīng):以溶源狀態(tài)存在的噬菌體不能完成復(fù)制循環(huán),噬菌體基因組長期存在于宿主細(xì)胞內(nèi),沒有成熟噬菌體產(chǎn)生,這一現(xiàn)象稱作溶源性現(xiàn)象。能夠?qū)е氯茉葱园l(fā)生的噬菌體稱作溫和噬菌體(溶源性噬菌體)。處于溶源性細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的噬菌體DNA在一定條件下可啟動(dòng)裂解循環(huán)。自然情況下的溶源性細(xì)菌的裂解稱為

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