實(shí)驗(yàn)三傳代細(xì)胞培養(yǎng)和病毒感染力(TCID50)的滴定

1、、半數(shù)致死量半數(shù)致死量(50% lethal dose, LD50 ): 指能使接種的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于感染后一定時(shí)間內(nèi)死指能使接種的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于感染后一定時(shí)間內(nèi)死亡一半所需的活微生物量或毒素量。亡一半所需的活微生物量或毒素量。 、半數(shù)雞胚感染量半數(shù)雞胚感染量(egg 50% infective dose, EID50): 指能使半數(shù)試驗(yàn)對(duì)象指能使半數(shù)試驗(yàn)對(duì)象( (動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞動(dòng)物、雞胚或細(xì)胞) )發(fā)生發(fā)生感染的病原微生物的量。感染的病原微生物的量。 、組織培養(yǎng)半數(shù)感染量、組織培養(yǎng)半數(shù)感染量(50% tissue culture infective dose, TCID50) 4 4、蝕斑形成單位、

2、蝕斑形成單位(plaque forming unit ,PFU)1.1.在在1.5ml離心管中將偽狂犬病毒離心管中將偽狂犬病毒(PRV)作連續(xù)作連續(xù)10倍的稀釋倍的稀釋，從，從10-1-10-10。2.2.將稀釋好的病毒接種到將稀釋好的病毒接種到96孔微量培養(yǎng)板中，每一稀釋度孔微量培養(yǎng)板中，每一稀釋度接種一縱排共接種一縱排共8 8孔，每孔接種孔，每孔接種100l。3.3.在每孔加入細(xì)胞懸液在每孔加入細(xì)胞懸液100l，使細(xì)胞量達(dá)到使細(xì)胞量達(dá)到23105/ml4.4.設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，正常細(xì)胞對(duì)照作兩縱排設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照，正常細(xì)胞對(duì)照作兩縱排( (100l生長(zhǎng)液生長(zhǎng)液+ +100l細(xì)胞懸液）細(xì)胞懸液）

3、5.5.逐日觀察并記錄結(jié)果，一般需要觀察逐日觀察并記錄結(jié)果，一般需要觀察5-7天。天。6.6.結(jié)果的計(jì)算，結(jié)果的計(jì)算，Reed-Muench兩氏法或兩氏法或 Karber法法CPE：Cytopathic effect距離比例（距離比例（91.6-5091.6-50）/ /（91.6-4091.6-40）0.80.8lgTCIDlgTCID5050=距離比例距離比例稀釋度對(duì)數(shù)之間的差稀釋度對(duì)數(shù)之間的差+ +高于高于 50%50%病變率的稀釋度的對(duì)數(shù)病變率的稀釋度的對(duì)數(shù) =0.8=0.8(-1)+(-3)(-1)+(-3) =-3.8 =-3.8 TCID TCID5050=10=10-3.8-3.80.1ml0.1ml含義含義: :將該病毒稀釋將該病毒稀釋10103.83.8倍接種倍接種9696孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔，每孔100100 l l，可，可使使50%50%接種孔的細(xì)胞發(fā)生病接種孔的細(xì)胞發(fā)生病變變lgTCIDlgTCID5050=L-d(s-0.5)=L-d(s-0.5) L L：最高濃度的稀釋度的對(duì)數(shù)最高濃度的稀釋度的對(duì)數(shù) d d：稀釋度對(duì)數(shù)之間的差：稀釋度對(duì)數(shù)之間的差 s s：陽(yáng)性孔比率總和：陽(yáng)性孔比率總和lgTCIDlgTCID5050=-1-1=-1-1(3.375-0.5)=-3.875(3