第十三章肝功能檢驗(yàn)ppt課件

1、第十三章第十三章 肝功能檢驗(yàn)肝功能檢驗(yàn)n本章內(nèi)容概要：本章內(nèi)容概要：n本章教學(xué)要求：本章教學(xué)要求：第二節(jié)第二節(jié) 肝功能實(shí)驗(yàn)肝功能實(shí)驗(yàn)第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 掌握掌握: :黃疸的發(fā)活力理和各型黃疸的代謝特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室鑒別診黃疸的發(fā)活力理和各型黃疸的代謝特點(diǎn)及實(shí)驗(yàn)室鑒別診斷要點(diǎn)；肝功能實(shí)驗(yàn)生化檢查目的的種類和重點(diǎn)工程的測(cè)定方法斷要點(diǎn)；肝功能實(shí)驗(yàn)生化檢查目的的種類和重點(diǎn)工程的測(cè)定方法及評(píng)價(jià)。及評(píng)價(jià)。 熟習(xí)熟習(xí): :肝臟的生物化學(xué)功能，膽紅素代謝；各測(cè)定工程的臨床肝臟的生物化學(xué)功能，膽紅素代謝；各測(cè)定工程的臨床意義意義 了解：肝臟的根本機(jī)構(gòu)；肝功能實(shí)驗(yàn)工程選擇的原那么。了解：肝臟的根本機(jī)構(gòu)；肝功能實(shí)驗(yàn)工

2、程選擇的原那么。 第三節(jié)第三節(jié) 肝功能實(shí)驗(yàn)選擇原那么肝功能實(shí)驗(yàn)選擇原那么第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述n肝臟構(gòu)造n肝臟的生化功能n肝臟疾病的生化改動(dòng)一、肝臟構(gòu)造一、肝臟構(gòu)造一一 解剖學(xué)特點(diǎn)解剖學(xué)特點(diǎn)雙重血液供應(yīng)雙重血液供應(yīng) 腹自動(dòng)脈的分技肝動(dòng)脈腹自動(dòng)脈的分技肝動(dòng)脈 氧氧 門靜脈門靜脈 營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng) 雙重輸出管道雙重輸出管道 肝靜脈肝靜脈 代謝降解物代謝降解物 下腔靜脈下腔靜脈 膽道系統(tǒng)膽道系統(tǒng) 脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物脂溶性物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物 體外體外 二二 肝臟的顯微構(gòu)造特點(diǎn)肝臟的顯微構(gòu)造特點(diǎn)1 1、組織構(gòu)造、組織構(gòu)造2 2、亞細(xì)胞構(gòu)造、亞細(xì)胞構(gòu)造三三 細(xì)胞的再生細(xì)胞的再生二、肝臟的生物化學(xué)功能二、肝臟的

3、生物化學(xué)功能排泄功能排泄功能物質(zhì)代謝功能物質(zhì)代謝功能生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化重要生化功能重要生化功能一排泄功能一排泄功能主要排泄對(duì)象：膽汁酸、膽紅素、氨主要排泄對(duì)象：膽汁酸、膽紅素、氨1 1、膽汁酸代謝、膽汁酸代謝1 1膽汁的分泌：膽汁的分泌：膽汁功能：促進(jìn)脂類的消化吸收，同時(shí)能將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化膽汁功能：促進(jìn)脂類的消化吸收，同時(shí)能將體內(nèi)某些代謝產(chǎn)物及生物轉(zhuǎn)化產(chǎn)物不斷地排入腸道隨糞便排出體外。產(chǎn)物不斷地排入腸道隨糞便排出體外。膽汁的來(lái)源：膽汁的來(lái)源：肝膽汁肝膽汁 膽囊膽汁膽囊膽汁 十二指腸十二指腸膽汁的成分：膽汁的成分：水水/ /膽汁酸鹽、卵磷脂、蛋白質(zhì)、脂肪酸和膽固醇膽汁酸鹽、卵磷脂、蛋白

4、質(zhì)、脂肪酸和膽固醇2 2膽汁酸生成及種類：膽汁酸生成及種類：初級(jí)膽汁酸肝細(xì)胞初級(jí)膽汁酸肝細(xì)胞次級(jí)膽汁酸腸道次級(jí)膽汁酸腸道3 3膽汁酸肝腸循環(huán)：膽汁酸肝腸循環(huán)：4 4膽汁酸的功能：膽汁酸的功能：促進(jìn)脂類消化促進(jìn)脂類消化促進(jìn)脂類吸收促進(jìn)脂類吸收抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀抑制膽固醇從膽汁中析出沉淀2 2、膽紅素代謝、膽紅素代謝膽色素膽色素 尿膽素原尿膽素原 糞膽素原糞膽素原尿膽素尿膽素糞膽素糞膽素膽綠素膽綠素膽紅素膽紅素未結(jié)合膽紅素未結(jié)合膽紅素( (單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)如骨髓、脾臟單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)如骨髓、脾臟) )結(jié)合膽紅素肝臟結(jié)合膽紅素肝臟膽素原膽素原未結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)：未結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)

5、：結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝：結(jié)合膽紅素的來(lái)源與轉(zhuǎn)運(yùn)與代謝：衰老紅細(xì)胞衰老紅細(xì)胞血紅蛋白血紅蛋白 3 3、血氨代謝、血氨代謝藥物及體內(nèi)含氮物質(zhì)藥物及體內(nèi)含氮物質(zhì)如嘌呤、嘧啶等如嘌呤、嘧啶等來(lái)源來(lái)源去路相對(duì)平衡相對(duì)平衡部位肝臟細(xì)胞鳥氨酸鳥氨酸瓜瓜氨氨酸酸瓜氨酸瓜氨酸精氨酸代琥珀酸精氨酸代琥珀酸ATPAMP+PPi延延胡胡索索酸酸鳥氨酸鳥氨酸精氨酸精氨酸H2OCONH2NH2天門冬氨酸天門冬氨酸NH3CO2氨氨甲甲酰酰磷磷酸酸+H2O二物質(zhì)代謝功能二物質(zhì)代謝功能1 1、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝2 2、激素及維生素代謝、激素及維生素代謝 (1) (1) 在蛋白質(zhì)代謝中的作用在蛋白質(zhì)代謝中的作用

6、(2) (2) 在氨基酸代謝中的作用在氨基酸代謝中的作用 (3) (3) 在糖代謝中的作用在糖代謝中的作用 (4) (4) 在脂代謝中的作用在脂代謝中的作用激素的滅活主要在肝臟進(jìn)展激素的滅活主要在肝臟進(jìn)展 多種維生素能在肝細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存并進(jìn)展轉(zhuǎn)化多種維生素能在肝細(xì)胞內(nèi)儲(chǔ)存并進(jìn)展轉(zhuǎn)化 三肝臟的生物轉(zhuǎn)化三肝臟的生物轉(zhuǎn)化n定義：定義： 生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化: : 機(jī)體對(duì)許多外源性或內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)展化學(xué)轉(zhuǎn)變，機(jī)體對(duì)許多外源性或內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)展化學(xué)轉(zhuǎn)變，添加其水溶性添加其水溶性( (或極性或極性) )，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過(guò)程稱，使其易隨膽汁、尿排出，這種體內(nèi)變化過(guò)程稱生物轉(zhuǎn)化生物轉(zhuǎn)化(b

7、iotransformation)(biotransformation)。 n轉(zhuǎn)化對(duì)象：轉(zhuǎn)化對(duì)象：n轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：轉(zhuǎn)化特點(diǎn)：n生理意義：維護(hù)機(jī)體生理意義：維護(hù)機(jī)體,致癌、致畸致癌、致畸內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物內(nèi)源性非營(yíng)養(yǎng)物: :氨、胺、膽色素、激素氨、胺、膽色素、激素 外源性非營(yíng)養(yǎng)物外源性非營(yíng)養(yǎng)物: :藥物、毒物、食品防腐劑、色素藥物、毒物、食品防腐劑、色素 延續(xù)性，延續(xù)性，多樣性，多樣性， 失活與活化雙重性失活與活化雙重性三、肝臟疾病的生化改動(dòng)三、肝臟疾病的生化改動(dòng)一膽紅素代謝妨礙黃疸一膽紅素代謝妨礙黃疸n定義定義: :n黃疸分類黃疸分類: : 黃疸黃疸和阻塞性黃疸和阻塞性黃疸 溶血性黃疸溶血性黃疸肝細(xì)胞

8、性黃疸肝細(xì)胞性黃疸高膽紅素血癥高膽紅素血癥二膽汁酸代謝妨礙二膽汁酸代謝妨礙1 1、膽汁酸合成妨礙、膽汁酸合成妨礙2 2、膽汁酸向腸道排出妨礙、膽汁酸向腸道排出妨礙3 3膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂膽汁酸腸肝循環(huán)紊亂4 4膽汁瘀積病變時(shí)膽汁酸代謝紊亂膽汁瘀積病變時(shí)膽汁酸代謝紊亂 三血漿酶異常三血漿酶異常1 1肝臟合成酶類肝臟合成酶類: :膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；膽堿脂酶、凝血因子、銅藍(lán)蛋白；2. 2. 肝細(xì)胞內(nèi)酶肝細(xì)胞內(nèi)酶: ALT: ALT、AST AST 3 3肝臟阻塞性疾病酶活性改動(dòng)：肝臟阻塞性疾病酶活性改動(dòng)：ALPALP、GGTGGT4 4肝硬化疾病酶活性改動(dòng)：?jiǎn)伟费趸父斡不膊∶富钚愿膭?dòng)

9、：?jiǎn)伟费趸窶AOMAO 四血漿蛋白異常四血漿蛋白異常 第二節(jié)第二節(jié) 肝功能實(shí)驗(yàn)肝功能實(shí)驗(yàn)n血清漿蛋白血清漿蛋白n測(cè)定血清酶測(cè)定測(cè)定血清酶測(cè)定n血清膽紅素測(cè)定血清膽紅素測(cè)定n血清膽汁酸測(cè)定血清膽汁酸測(cè)定n血氨測(cè)定血氨測(cè)定一、血清漿蛋白測(cè)定一、血清漿蛋白測(cè)定一總蛋白、白蛋白、及白蛋白一總蛋白、白蛋白、及白蛋白/ /球蛋白球蛋白A/GA/G比值測(cè)定比值測(cè)定 1 1總蛋白測(cè)定總蛋白測(cè)定 化學(xué)法化學(xué)法( (雙縮脲法雙縮脲法 ) )、物理法、染料結(jié)合法、電泳法、物理法、染料結(jié)合法、電泳法 染料結(jié)合法染料結(jié)合法(BCG(BCG、BCPBCP、沉淀法、沉淀法 2.2.白蛋白測(cè)定白蛋白測(cè)定 3 3A/GA/G

10、比值比值 【參考范圍】總蛋白總蛋白 60 6080g/L 80g/L 白蛋白白蛋白 35 3555g/L 55g/L 球蛋白：球蛋白：151532g/L A/G32g/L A/G比值：比值： 1.5 1.52.0/12.0/1【臨床意義】 嚴(yán)重肝病時(shí)，肝臟合成分子量小的蛋白質(zhì)才干降低，血中嚴(yán)重肝病時(shí)，肝臟合成分子量小的蛋白質(zhì)才干降低，血中白蛋白濃度減少；而免疫系統(tǒng)、單核巨噬細(xì)胞合成球蛋白添加，白蛋白濃度減少；而免疫系統(tǒng)、單核巨噬細(xì)胞合成球蛋白添加，導(dǎo)致導(dǎo)致A/GA/G比值減少。嚴(yán)重那么會(huì)出現(xiàn)比值減少。嚴(yán)重那么會(huì)出現(xiàn)A/GA/G比值小于比值小于1 1，稱為，稱為A/GA/G比值比值倒置，表示肝功

11、能損害嚴(yán)重。倒置，表示肝功能損害嚴(yán)重。二纖維蛋白原測(cè)定二纖維蛋白原測(cè)定 凝血因子凝血因子 測(cè)定方法：分為三大類測(cè)定方法：分為三大類 根據(jù)纖維蛋白原的生物學(xué)特性測(cè)定方法根據(jù)纖維蛋白原的生物學(xué)特性測(cè)定方法 根據(jù)纖維蛋白原理化性質(zhì)而建立的測(cè)定方法。根據(jù)纖維蛋白原理化性質(zhì)而建立的測(cè)定方法。 根據(jù)纖維蛋白原免疫學(xué)特點(diǎn)而建立的測(cè)定方法。根據(jù)纖維蛋白原免疫學(xué)特點(diǎn)而建立的測(cè)定方法。 【參考范圍】2.224.22g/L(熱沉淀比濁法)【臨床意義】 (1) (1) 纖維蛋白原添加：感染；無(wú)菌炎癥；其它。纖維蛋白原添加：感染；無(wú)菌炎癥；其它。(2) (2) 纖維蛋白原減少纖維蛋白原減少: : 嚴(yán)重的肝臟疾?。粐?yán)重的

12、肝臟疾??； 其它疾病引起纖維蛋白原減少的疾病。其它疾病引起纖維蛋白原減少的疾病。三甲胎蛋白三甲胎蛋白1-fetoprotein1-fetoprotein，AFPAFP測(cè)定測(cè)定 測(cè)定方法：測(cè)定方法：【參考范圍】成人 1030g/L 400g/L作為肝癌診斷規(guī)范 【臨床意義】 酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、火箭電泳放酶聯(lián)免疫吸附法、放射免疫分析法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合法、火箭電泳放射自顯影法、酶聯(lián)火箭電泳法等射自顯影法、酶聯(lián)火箭電泳法等 (1) (1) 原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷規(guī)范：血清原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌的診斷規(guī)范：血清AFPAFP測(cè)定值超越測(cè)定值超越400400g/L(400ng/ml)

13、g/L(400ng/ml) ； (2)(2)活動(dòng)性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷活動(dòng)性急、慢性肝炎、肝硬化或其它肝病病人的診斷四其它四其它【臨床意義】肝豆?fàn)詈俗冃浴九R床意義】肝豆?fàn)詈俗冃訵ilsonWilson病和遺傳性色素堆積癥病和遺傳性色素堆積癥1.1.銅藍(lán)蛋白測(cè)定銅藍(lán)蛋白測(cè)定 【參考范圍】【參考范圍】 52.9 52.9167.7 IU/L167.7 IU/L【臨床意義】【臨床意義】 遺傳性血色素堆積癥鐵堆積遺傳性血色素堆積癥鐵堆積2 2轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)鐵蛋白【原理】雙聯(lián)吡啶法【原理】雙聯(lián)吡啶法 【原理】銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性【原理】銅藍(lán)蛋白具有氧化酶活性 【參考范圍】【參考范圍】

14、TIBC 男男 5077mol/L 女女5477mol/L轉(zhuǎn)鐵蛋轉(zhuǎn)鐵蛋白飽和度為白飽和度為33.0%35.0% 二、血清酶測(cè)定二、血清酶測(cè)定一氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定一氨基轉(zhuǎn)移酶測(cè)定1 1賴氏法測(cè)定賴氏法測(cè)定ALTALT原理：原理：ALTALT催化丙氨酸催化丙氨酸(alamine)(alamine)與與-酮戊二酸酮戊二酸(-oxoglutarate)(-oxoglutarate)之間的氨基轉(zhuǎn)移之間的氨基轉(zhuǎn)移反響，生成丙酮酸反響，生成丙酮酸(pyruvate)(pyruvate)和谷氨酸和谷氨酸(glutamate)(glutamate)。 在在3737及及pH7.4pH7.4條件下反響條件下反響30mi

15、n30min，以，以2 2，4-4-二硝基苯肼終止反響，并與底物二硝基苯肼終止反響，并與底物-酮戊二酸和產(chǎn)物酮戊二酸和產(chǎn)物-丙酮酸的丙酮酸的羰基生成羰基生成2 2，4-4-二硝基苯腙，苯腙在堿性條件下生成紅棕色，與二硝基苯腙，苯腙在堿性條件下生成紅棕色，與505nm505nm波優(yōu)點(diǎn)讀取波優(yōu)點(diǎn)讀取吸光度后計(jì)算活性。吸光度后計(jì)算活性。 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；NaOHNaOH的濃度對(duì)顯色有影響；的濃度對(duì)顯色有影響；該法的反復(fù)性差。該法的反復(fù)性差。 卡門氏單位：卡門氏單位：1.0ml1.0ml血清在血清在25

16、25，340nm340nm，反響體積，反響體積3.0ml,3.0ml,光徑光徑1.0cm1.0cm時(shí)每分鐘測(cè)時(shí)每分鐘測(cè)定吸光度下降定吸光度下降0.0010.001，即耗費(fèi)，即耗費(fèi)4.82 4.82 10-4mol NADH 10-4mol NADH為一個(gè)卡門氏單位為一個(gè)卡門氏單位【參考范圍】【參考范圍】 5 52525卡門氏單位卡門氏單位 【臨床意義】【臨床意義】(2) (2) 慢性活動(dòng)性肝炎或脂肪肝：慢性活動(dòng)性肝炎或脂肪肝：(1) (1) 肝細(xì)胞損傷的靈敏目的肝細(xì)胞損傷的靈敏目的: :ALT輕度增高輕度增高(100200IU),或?qū)僬７秶驅(qū)僬７秶?2. 2. 延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)

17、定ALT ALT 原理：原理： 采用酶偶聯(lián)反響采用酶偶聯(lián)反響, ,即即L-L-丙氨酸和丙氨酸和-酮戊二酸在酮戊二酸在ALTALT作用下，作用下，生成丙酮酸和生成丙酮酸和L-L-谷氨酸。丙酮酸再在谷氨酸。丙酮酸再在LDLD作用下生成作用下生成L-L-乳酸，同乳酸，同時(shí)時(shí)NADHNADH被氧化為被氧化為NAD+,NAD+,可在可在340nm340nm處延續(xù)監(jiān)測(cè)到處延續(xù)監(jiān)測(cè)到NADHNADH的耗費(fèi)量的耗費(fèi)量, ,從從而計(jì)算出而計(jì)算出ALTALT活性濃度。活性濃度。 雙試劑法雙試劑法 : :首先使血清與短少首先使血清與短少-酮戊二酸的底物溶液混合，酮戊二酸的底物溶液混合，3737保溫保溫5 5分鐘，將

18、標(biāo)本中所含的分鐘，將標(biāo)本中所含的-酮酸酮酸( (如丙酮酸如丙酮酸) )耗費(fèi)完，耗費(fèi)完，然后，參與然后，參與-酮戊二酸啟動(dòng)酮戊二酸啟動(dòng)ALTALT催化的反響，在波長(zhǎng)催化的反響，在波長(zhǎng)340nm340nm處延處延續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反響期吸光度下降速率續(xù)監(jiān)測(cè)吸光度下降速率。根據(jù)線性反響期吸光度下降速率(-(-A/min)A/min)，來(lái)計(jì)算，來(lái)計(jì)算ALTALT的活性。的活性。 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：存在著兩個(gè)副反響，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏高；存在著兩個(gè)副反響，會(huì)使測(cè)定結(jié)果偏高；A A、血清中存在的、血清中存在的-酮酸酮酸( (如丙酮酸如丙酮酸) )能耗費(fèi)能耗費(fèi)NADHNADH。B B、血清中谷氨酸

19、脫氫酶、血清中谷氨酸脫氫酶(GLDH)(GLDH)增高時(shí)，在有氨存在條件下，亦能耗費(fèi)增高時(shí)，在有氨存在條件下，亦能耗費(fèi)NADHNADH。 雙試劑法，因溫育期長(zhǎng)，能有效地消除干擾反響，測(cè)定準(zhǔn)確性雙試劑法，因溫育期長(zhǎng)，能有效地消除干擾反響，測(cè)定準(zhǔn)確性高，是高，是ALTALT測(cè)定的首選方法；測(cè)定的首選方法；血清不宜反復(fù)冰凍保管，以免影響酶活性；防止運(yùn)用溶血標(biāo)本。血清不宜反復(fù)冰凍保管，以免影響酶活性；防止運(yùn)用溶血標(biāo)本。 3.3.賴氏法測(cè)定賴氏法測(cè)定ASTAST原理：原理：血清中的血清中的ASTAST可催化門冬氨酸可催化門冬氨酸(aspartate)(aspartate)與與-酮戊二酸間的氨基移換，生成

20、酮戊二酸間的氨基移換，生成草酸乙酸草酸乙酸(oxaloacetate)(oxaloacetate)和和L-L-谷氨酸。草酸乙酸自行脫羧轉(zhuǎn)變成為丙酮酸。反響谷氨酸。草酸乙酸自行脫羧轉(zhuǎn)變成為丙酮酸。反響6060分鐘后，參與分鐘后，參與2 2，4-4-二硝基苯肼終止反響，并與酮酸生反響生成兩種二硝基苯肼終止反響，并與酮酸生反響生成兩種2 2，4-4-二硝基苯二硝基苯腙。在堿性條件下腙。在堿性條件下, ,兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在兩種苯腙的吸收光譜曲線有差別，在505nm505nm處差別最大，由草處差別最大，由草酸乙酸轉(zhuǎn)變成的丙酮酸所生成的苯腙呈色強(qiáng)度顯著大于酸乙酸轉(zhuǎn)變成的丙酮酸所生成的苯腙呈色

21、強(qiáng)度顯著大于-酮戊二酸苯腙。據(jù)此可酮戊二酸苯腙。據(jù)此可用比色法測(cè)定用比色法測(cè)定ASTAST活性?；钚?。 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；賴氏法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果需與卡門分光法的結(jié)果對(duì)比后求出；該法的反復(fù)性差：負(fù)干擾景象該法的反復(fù)性差：負(fù)干擾景象 【參考范圍】【參考范圍】 8 82828卡門氏單位卡門氏單位 【臨床意義】【臨床意義】肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清肌炎、胸膜炎、腎炎及肺炎：血清ASTAST也可輕度增高。也可輕度增高。 心肌梗死：血清中心肌梗死：血清中ASTAST活性增高活性增高 各種肝病病人：血清各種肝病病人：血清ASTAST的升高的升高 4 4延續(xù)監(jiān)測(cè)

22、法測(cè)定延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定AST AST 原理：原理：采用酶偶聯(lián)反響采用酶偶聯(lián)反響, ,即即L-L-門冬氨酸和門冬氨酸和-酮戊二酸在酮戊二酸在ASTAST作用作用下，生成草酰乙酸和下，生成草酰乙酸和L-L-谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶作用谷氨酸。草酰乙酸在蘋果酸脫氫酶作用下生成下生成L-L-蘋果酸，同時(shí)伴有蘋果酸，同時(shí)伴有NADHNADH轉(zhuǎn)化為轉(zhuǎn)化為NAD+NAD+，在，在340nm340nm監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)NADHNADH的轉(zhuǎn)化速率，從而計(jì)算出的轉(zhuǎn)化速率，從而計(jì)算出ASTAST的活性。的活性。 雙試劑法雙試劑法 : :同測(cè)定。同測(cè)定。方法評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià) 誤差可來(lái)自內(nèi)源性和誤差可來(lái)自內(nèi)源性和( (或或) )

23、外源性外源性內(nèi)源性干擾主要來(lái)自血清中高濃度丙酮酸和內(nèi)源性干擾主要來(lái)自血清中高濃度丙酮酸和L-L-谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶(GLDH)(GLDH)。外源性干擾來(lái)自試劑中污染的外源性干擾來(lái)自試劑中污染的GLDHGLDH和和ASTAST。 【參考范圍】【參考范圍】 5 540 IU/L(40 IU/L(延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定) )【臨床意義】【臨床意義】 見(jiàn)賴氏法見(jiàn)賴氏法( (二二)ALP)ALP測(cè)定測(cè)定 n化學(xué)法化學(xué)法n延續(xù)監(jiān)測(cè)法：延續(xù)監(jiān)測(cè)法：鮑氏法鮑氏法金氏法金氏法皮氏法皮氏法、金氏法測(cè)定、金氏法測(cè)定ALPALP 原理：原理：ALPALP在堿性環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解釋放出酚在堿性

24、環(huán)境中作用于磷酸苯二鈉，使之水解釋放出酚和磷酸。酚在堿性溶液中與和磷酸。酚在堿性溶液中與4 4氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化氨基安替比林作用，經(jīng)鐵氰化鉀氧化構(gòu)成紅色醌類化合物，根據(jù)紅色深淺確定鉀氧化構(gòu)成紅色醌類化合物，根據(jù)紅色深淺確定ALPALP的活力。的活力。 (2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： 磷酸苯二鈉比色法與更早的磷酸苯二鈉比色法與更早的-甘油磷酸鈉法相比具有較大的甘油磷酸鈉法相比具有較大的優(yōu)點(diǎn)，如水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、優(yōu)點(diǎn)，如水解速度快，保溫時(shí)間較短、靈敏度較高、顯色穩(wěn)定、不需去蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷酸對(duì)硝基酚延續(xù)監(jiān)測(cè)法不需去蛋白、操作簡(jiǎn)單、快速。但與磷

25、酸對(duì)硝基酚延續(xù)監(jiān)測(cè)法相比，準(zhǔn)確度、精細(xì)度較低；操作比較繁瑣相比，準(zhǔn)確度、精細(xì)度較低；操作比較繁瑣, ,，靈敏度低。，靈敏度低?！緟⒖挤秶俊緟⒖挤秶?成人：成人：3 313 13 單位單位 ，兒童：，兒童：5 52828單位單位 ALPALP金氏單位定義是金氏單位定義是100ml100ml血清，血清，3737與底物保溫與底物保溫1515分鐘，產(chǎn)生分鐘，產(chǎn)生1mg1mg酚為酚為1 1個(gè)金氏單位。個(gè)金氏單位。ALPALP主要用于診斷肝膽和骨骼疾病主要用于診斷肝膽和骨骼疾病 【臨床意義】【臨床意義】 2.2.延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定ALPALP原理：原理：以磷酸對(duì)硝基酚以磷酸對(duì)硝基酚(p-ni

26、trophenyl phosphate,4-NPP)(p-nitrophenyl phosphate,4-NPP)為底物，為底物，2-2-氨氨基基-2-2-甲基甲基-1,3-1,3-丙醇丙醇2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP2-amino-2-methyl-1-propanol,AMP或二或二乙醇胺為磷酸基的受體。在堿性環(huán)境下，乙醇胺為磷酸基的受體。在堿性環(huán)境下，ALPALP催化催化4-NPP4-NPP水解產(chǎn)生游水解產(chǎn)生游離的對(duì)硝基酚，對(duì)硝基酚離的對(duì)硝基酚，對(duì)硝基酚(p-nitrophenol(p-nitrophenol，4-NP)4-NP)在堿性溶液中轉(zhuǎn)在堿性溶液

27、中轉(zhuǎn)變成黃色。根據(jù)變成黃色。根據(jù)405nm405nm處吸光度增高速率來(lái)計(jì)算處吸光度增高速率來(lái)計(jì)算ALPALP活性單位?；钚詥挝弧７椒ㄔu(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： 線性范圍可達(dá)線性范圍可達(dá)500U/L500U/L，批內(nèi)，批內(nèi)CVCV為為2.06%2.06%2.36%2.36%，批間，批間CVCV為為2.74%2.74%。 【參考范圍】【參考范圍】男性：男性：1 11212歲歲 500U/L, 500U/L, 女性：女性：1 11212歲歲 500U/L 500U/L 12121515歲歲 750U/L 15 15歲歲 40 40 150U/L150U/L，2525歲歲 40 40150U/L150U/L?！?/p>

28、臨床意義】【臨床意義】 見(jiàn)金氏法見(jiàn)金氏法( (三三)GGT)GGT測(cè)定法測(cè)定法 化學(xué)法重氮反響比色法和延續(xù)監(jiān)測(cè)法。化學(xué)法重氮反響比色法和延續(xù)監(jiān)測(cè)法。 1. 1. 重氮反響比色法測(cè)定重氮反響比色法測(cè)定GGTGGT原理：原理： 【參考范圍】【參考范圍】 男性男性 3 3 17 U/L17 U/L； 女性女性 2 2 13 U/L13 U/L2.2.延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定延續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定GGTGGT(1) (1) 原理：原理： (2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： (2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)：重氮比色法活性單位：100ml血清在37下反響1hr,生成0.5mol的-苯胺為1個(gè)GGT活性單位。男性：男性

29、：111150 U/L50 U/L；( (以以-谷氨酰谷氨酰-3-3-羧基羧基-4-4-硝基苯胺為底物硝基苯胺為底物) )女性：女性：7 732 U/L 32 U/L 男性：男性： 40U/L 40U/L；女性：；女性：30U/L(30U/L(以以-谷氨酰谷氨酰-4-4-硝基苯胺為底物硝基苯胺為底物) )【參考范圍】【參考范圍】( (四四)MAO)MAO測(cè)定測(cè)定 原理原理: : MAOMAO主要作用于主要作用于CH2-NH2CH2-NH2基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成基團(tuán)，在氧參與下，氧化脫氨生成相應(yīng)的卞醛、氨及過(guò)氧化氫。以芐氨偶氮相應(yīng)的卞醛、氨及過(guò)氧化氫。以芐氨偶氮-萘酚為底物萘酚為底物,

30、,在在O2O2和和H20H20參與下，參與下，MAOMAO催化生成芐醛偶氮催化生成芐醛偶氮-萘酚、氨及過(guò)氧化萘酚、氨及過(guò)氧化氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)展比色測(cè)定。氫，用環(huán)己烷抽提后進(jìn)展比色測(cè)定。(2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： 【單位定義】：【單位定義】：1ml1ml血清與底物在血清與底物在3737孵育孵育6060分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生分鐘，催化單胺氧化產(chǎn)生1nmol1nmol芐醛偶氮芐醛偶氮-萘萘酚為酚為1 1 個(gè)個(gè)MAOMAO單位。單位。【參考范圍】【參考范圍】 12 1240 U/ml (1240 U/ml (121031034040103 U/L)103 U/L)。【臨床意義】：肝硬化時(shí)

31、，肝纖維化景象非?；顫姡九R床意義】：肝硬化時(shí)，肝纖維化景象非?；顫?，MAOMAO活性明顯升高?；钚悦黠@升高。 三、血清膽紅素測(cè)定三、血清膽紅素測(cè)定重氮鹽法重氮鹽法膽紅素氧化酶膽紅素氧化酶(bilirubin oxidase,BOD)(bilirubin oxidase,BOD)法法高效液相色譜法高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)(high performance liquid chromatography,HPLC)、導(dǎo)數(shù)分光光度法導(dǎo)數(shù)分光光度法直接分光光度計(jì)法直接分光光度計(jì)法 測(cè)測(cè)定定方方法法1 1重氮鹽改良重氮鹽改良J

32、-G(Jendrassik and Grof method,J-G)J-G(Jendrassik and Grof method,J-G)法法(1) (1) 原理原理: : 血清中結(jié)合膽紅素與重氮鹽反響生成偶氮膽紅素；同樣條件下，游離膽紅素血清中結(jié)合膽紅素與重氮鹽反響生成偶氮膽紅素；同樣條件下，游離膽紅素需求在加速劑作用下，使游離膽紅素分子內(nèi)的次級(jí)鍵斷裂，極性上升并與重氮試需求在加速劑作用下，使游離膽紅素分子內(nèi)的次級(jí)鍵斷裂，極性上升并與重氮試劑反響。反響完成后參與終止試劑，繼而參與堿性酒石酸鉀鈉使紫色偶氮試劑轉(zhuǎn)劑反響。反響完成后參與終止試劑，繼而參與堿性酒石酸鉀鈉使紫色偶氮試劑轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，波長(zhǎng)

33、變?yōu)樗{(lán)色，波長(zhǎng)600nm600nm下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。下比色分析，求出血樣中總膽紅素的含量。 (2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： 引薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在引薦的常規(guī)方法，其方法的線性范圍較寬，在 342 342mol/L(200mg/L)mol/L(200mg/L)濃濃度下有較好的準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性降低。因此，建議濃度度下有較好的準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性，高濃度時(shí)準(zhǔn)確性和準(zhǔn)確性降低。因此，建議濃度過(guò)高時(shí)減少血樣用量測(cè)定。過(guò)高時(shí)減少血樣用量測(cè)定。 【臨床意義】【臨床意義】 【參考范圍】【參考范圍】 黃疸的鑒別診斷黃疸的鑒別診斷 總膽紅素總膽紅素: 5

34、.1: 5.119.0mol/L(0.319.0mol/L(0.31.1mg/dL)1.1mg/dL) 直接膽紅素直接膽紅素: 1.71: 1.716.8mol/L (0.16.8mol/L (0.10.4mg/dL)0.4mg/dL)2 2膽紅素膽紅素BODBOD測(cè)定法測(cè)定法(1) (1) 原理原理: : BOD BOD在不同在不同pHpH條件下催化不同組份的膽紅素氧化生成膽綠素，膽綠素與氧進(jìn)條件下催化不同組份的膽紅素氧化生成膽綠素，膽綠素與氧進(jìn)行非酶促反響轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙衔铮懠t素的最大吸收峰在行非酶促反響轉(zhuǎn)變?yōu)榈仙衔?，膽紅素的最大吸收峰在450nm 450nm 附近。隨著附近。隨著

35、膽紅素被氧化膽紅素被氧化,450nm,450nm下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。；在下降，下降程度與膽紅素濃度成正比。；在pH8.0pH8.0條件下條件下, ,未未結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測(cè)定總膽紅素結(jié)合膽紅素及結(jié)合膽紅素均被氧化，用于測(cè)定總膽紅素, ,在在pH=4.5pH=4.5的酸性條件的酸性條件下，下，BODBOD僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分僅能催化結(jié)合膽紅素和大部分膽紅素，而游離膽紅素不被氧化，測(cè)定膽紅素，而游離膽紅素不被氧化，測(cè)定其含量代表結(jié)合膽紅素。其含量代表結(jié)合膽紅素。(2) (2) 方法評(píng)價(jià)：方法評(píng)價(jià)： BODBOD法測(cè)定總膽紅素的準(zhǔn)確性、精細(xì)度比改良法測(cè)定總膽紅素

36、的準(zhǔn)確性、精細(xì)度比改良J-GJ-G法好法好 【參考范圍】【參考范圍】血清總膽紅素：血清總膽紅素： 10.26 10.264.104.10mol/L mol/L 血清結(jié)合膽紅素：血清結(jié)合膽紅素： 2.57 2.572.56 2.56 mol/L mol/L 膽紅素膽紅素mol/L =mol/L =膽紅素膽紅素mg/L X 17.1mg/L X 17.1【臨床意義】【臨床意義】見(jiàn)重氮比色法見(jiàn)重氮比色法四、血清膽汁酸測(cè)定四、血清膽汁酸測(cè)定高效液相色譜法高效液相色譜法放射免疫分析法放射免疫分析法酶免疫分析法酶免疫分析法比色分析測(cè)定法比色分析測(cè)定法 測(cè)測(cè)定定方方法法(1) (1) 酶比色法測(cè)定原理酶比色

37、法測(cè)定原理 3-HSD3-HSD膽汁酸膽汁酸 + NAD+ 3- + NAD+ 3-氧氧-5-5類固醇類固醇+ NADH + NADH 1 1 NADH + NBT NADH + NBT 甲甲jiejie藍(lán)色化合物藍(lán)色化合物 =540nm =540nm 2 2 3-3-氧氧-5-5類固醇類固醇 + NAD+ 3- + NAD+ 3-氧氧-5-5類固醇類固醇 + NADH + NADH 3 3黃遞酶黃遞酶4-DH4-DHu酶比色法酶比色法 由于膽汁酸在血中含量低，方法檢測(cè)的靈敏度達(dá)不到要求，經(jīng)過(guò)添加由于膽汁酸在血中含量低，方法檢測(cè)的靈敏度達(dá)不到要求，經(jīng)過(guò)添加3-3-氧氧-5-5-類固醇脫氫酶類固

38、醇脫氫酶( (4-DH)4-DH)，膽汁酸經(jīng)，膽汁酸經(jīng)3-HSD3-HSD催化的產(chǎn)物催化的產(chǎn)物3-3-氧代膽酸在氧代膽酸在4-DH4-DH作用下再作用下再次脫氫，加大了次脫氫，加大了NADHNADH的生成量，提高了反響的檢測(cè)才干見(jiàn)反響式的生成量，提高了反響的檢測(cè)才干見(jiàn)反響式1 1、2 2、3 3。但。但以上兩種方法都存在一個(gè)缺陷：生成的藍(lán)色產(chǎn)物是一種染料，易于附著管壁，難于清以上兩種方法都存在一個(gè)缺陷：生成的藍(lán)色產(chǎn)物是一種染料，易于附著管壁，難于清洗或堵塞管道。洗或堵塞管道。酶循環(huán)法測(cè)定原理為：酶循環(huán)法測(cè)定原理為：NAD+NAD+ Thio-NAD Thio-NAD Thio-NADH Thio-NADH 膽汁酸膽汁酸3-3-氧代膽汁酸氧代膽汁酸NADHNADH3-HSD(2) (2) 酶比色測(cè)定法評(píng)價(jià)：酶比色測(cè)定法評(píng)價(jià)： 快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠和適用的優(yōu)點(diǎn)。它即可以