多聚酶鏈式反應(yīng)擴增DNA片段(人教版選修)

1、1 1、DNADNA分子的組成成分和結(jié)構(gòu)分子的組成成分和結(jié)構(gòu)DNA DNA 分子的基本組成單位是分子的基本組成單位是 . .共有共有 種種, ,每個基本單位是由一分子每個基本單位是由一分子的的 、一分子的、一分子的 、和一分子的和一分子的 構(gòu)成。構(gòu)成。脫氧核甘酸脫氧核甘酸4 4磷酸磷酸堿基堿基脫氧核糖脫氧核糖 那么那么DNADNA分子的平面結(jié)構(gòu)怎分子的平面結(jié)構(gòu)怎樣呢？樣呢？一一 、基礎(chǔ)知識、基礎(chǔ)知識ATGCAGCT5端端3端端5端端3端端 識別識別 ： DNA分子的分子的3 端與端與5 端端-OH端為端為3 ; 磷酸基團的末磷酸基團的末端為端為5。DNA雙鏈雙鏈單鏈單鏈變性（加熱變性（加熱80

2、-100 ）復(fù)性（緩慢冷卻）復(fù)性（緩慢冷卻）3 3、DNA DNA 分子的熱變性原理：分子的熱變性原理：變性的目的：變性的目的：復(fù)性的目的：復(fù)性的目的：解開雙鏈解開雙鏈有利于引物有利于引物和引物和引物與兩條單與兩條單鏈的結(jié)合鏈的結(jié)合每個循環(huán)包括：每個循環(huán)包括：變性變性 復(fù)性復(fù)性延伸延伸 從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也從第二輪循環(huán)開始，上一次循環(huán)的產(chǎn)物也可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物可以作為模板參與反應(yīng)，并且由引物延伸延伸而成的而成的DNADNA單鏈會與引物單鏈會與引物結(jié)合，進行結(jié)合，進行DNADNA的的延伸，這樣，延伸，這樣，DNADNA聚合酶只能特異性地復(fù)制聚合酶只能特異性地復(fù)制處處

3、于兩個引物之間的于兩個引物之間的DNADNA序列序列，使這段固定長度使這段固定長度的序列的序列呈指數(shù)擴增。呈指數(shù)擴增。PCRPCR的反應(yīng)過程的反應(yīng)過程二、二、PCR的反應(yīng)過程的反應(yīng)過程 5/3/3/5/5/3/引物引物5/3/引物引物變性變性95oC復(fù)性復(fù)性55oC延伸延伸72oC5/3/3/5/5 引物引物15 引物引物2第二次復(fù)制第二次復(fù)制第一次復(fù)制第一次復(fù)制5 5 5 5 5 5 模板模板DNA5 5 5 5 5 5 5 5 三、三、 PCR反應(yīng)的實驗操作反應(yīng)的實驗操作四、結(jié)果分析與評價四、結(jié)果分析與評價DNA 含量的測定：含量的測定：稀釋稀釋對照調(diào)零對照調(diào)零測定測定計算（公式見計算（公

4、式見P63）波長波長260nm處讀數(shù)處讀數(shù)蒸餾水蒸餾水做對照做對照50倍倍 測定測定并并 的含量為的含量為體內(nèi)體內(nèi)DNA復(fù)制與復(fù)制與PCR的技術(shù)區(qū)別：的技術(shù)區(qū)別：體內(nèi)復(fù)制體內(nèi)復(fù)制PCRPCR技術(shù)技術(shù)解旋解旋在解旋酶作用下，細在解旋酶作用下，細胞提供胞提供ATPATP，部分解開，部分解開加熱到加熱到9494o oC,C,雙鏈全雙鏈全部解開，不需解旋酶部解開，不需解旋酶引物引物一小段一小段RNARNA一般用一般用DNADNA片段片段DNADNA聚合酶聚合酶細胞自身的細胞自身的DNADNA聚合酶聚合酶（不耐高溫）（不耐高溫）TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶復(fù)制特點復(fù)制特點半保留復(fù)制，邊解旋半保留

5、復(fù)制，邊解旋邊復(fù)制，多起點復(fù)制。邊復(fù)制，多起點復(fù)制。半保留復(fù)制，完全解半保留復(fù)制，完全解旋后復(fù)制，從模板鏈旋后復(fù)制，從模板鏈的一端開始復(fù)制。的一端開始復(fù)制。復(fù)制的方向復(fù)制的方向 子鏈的子鏈的55端向端向 33端端延伸延伸子鏈的子鏈的55端向端向 33端延伸端延伸練習鞏固練習鞏固1、關(guān)于、關(guān)于PCR技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是技術(shù)的應(yīng)用，錯誤的一項是A 古生物學、刑偵破案、古生物學、刑偵破案、DNA序列測定序列測定B 診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學診斷遺傳疾病、基因克隆、古生物學C DNA序列測定、基因克隆、刑偵破案序列測定、基因克隆、刑偵破案D 診斷遺傳疾病、合成核苷酸、診斷遺傳疾病、合成核苷酸、DNA序列序列測定測定2、做、做PCR使用的微量離心管、槍頭、緩沖使用的微量離心管、槍頭、緩沖液及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是液及蒸餾水使用前必須進行的關(guān)鍵步驟是A 反復(fù)洗滌反復(fù)洗滌 B 不怕外源不怕外源DNA污染污染C 高壓滅菌高壓滅菌 D 在在20 儲存儲存3、DNA的合成方向總是從子鏈的哪一的合成方向總是從子鏈的哪一端向哪一端延伸？端向哪一端延伸？4、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點是技術(shù)最突出的優(yōu)點是A