動物細胞融合

1、專題二細胞工程專題二細胞工程烏蘇高二生物烏蘇高二生物動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合核移植技術核移植技術動物動物細胞細胞工程工程常用常用技術技術胚胎移植技術胚胎移植技術單克隆抗體技術單克隆抗體技術細胞貼壁過程動物細胞能否融合呢？動物細胞能否融合呢？細胞細胞A A細胞細胞B B雜種雜種細胞細胞細胞細胞A A細胞細胞B B細胞細胞B B細胞細胞A A細胞細胞B B細胞細胞A A細胞細胞B B雜種雜種細胞細胞細胞細胞A A細胞細胞B B細胞細胞A A細胞細胞B B雜種雜種細胞細胞細胞細胞A A細胞細胞B B資料 太空中的太空中的“婚禮婚禮” 2003年1月5日，“神舟”四號準備著陸。

2、這次歷時6天零18個小時的太空飛行，開展了多項在軌研究，其中有一項被媒體描述成“太空婚禮”的生物實驗。不過，“婚禮”中的“新郎”和“新娘”是一些體細胞：動物細胞“新人”是小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞，植物細胞“新人”是有液泡的黃花煙草原生質體和脫液泡的革新一號煙草原生質體。作為“新房”的是一個黑色的小盒子-電融合儀。這是科技工作者在空間微重力條件下進行的細胞融合實驗。160min后，中國首批“太空娃娃”終于順利誕生。一、動物細胞融合一、動物細胞融合1.1.概念：概念：2.2.結果：結果：3.3.原理：原理：4.4.誘導方式誘導方式指兩個或多個動物細胞結合形成一個指兩個或多個動物細胞結合形成一個細

3、胞的過程。細胞的過程。形成單核的雜交細胞形成單核的雜交細胞細胞膜的流動性細胞膜的流動性物理法：離心、振動、電激物理法：離心、振動、電激化學法：聚乙二醇（化學法：聚乙二醇（PEG)PEG)生物法：滅活的病毒生物法：滅活的病毒5.5.過程：過程：注意：注意：動物細胞的融合也需要把多個兩種動物細胞的融合也需要把多個兩種細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩細胞放在一起，讓它們隨機融合后，再從中篩選雜交細胞選雜交細胞細胞細胞A細胞細胞B雜種細胞雜種細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法、化學法物理法、化學法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核用滅活

4、的病毒誘導動物細胞融合過程用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程病毒顆粒病毒顆粒黏附在細黏附在細胞表面胞表面病毒顆病毒顆粒穿通粒穿通細胞膜細胞膜細胞膜連接細胞膜連接結束的標志結束的標志6.6.意義：意義： 突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。7. 7. 應用：應用： 成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段物新品種培育等的重要手段 特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體體植物體細胞雜交和動物細胞融合

5、的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞融合的方法細胞融合的方法誘導方法誘導方法用途用途植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、 細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法誘導方法誘導方法用途用途植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融

6、合原理細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、 細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法 去去除細胞壁后誘導除細胞壁后誘導原生質體融合原生質體融合使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合誘導方法誘導方法用途用途植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、 細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法 去去除細胞壁后誘導除細胞壁后誘導原生質體融合原生質體融合使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合誘導方

7、法誘導方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、 細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法 去去除細胞壁后誘導除細胞壁后誘導原生質體融合原生質體融合使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合誘導方法誘導方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學（聚乙

8、二醇）化學（聚乙二醇）物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體1.1.什么是抗體？什么是抗體？2.2.抗體是由何種細胞產生的？抗體是由何種細胞產生的？抗體是具有免疫作用的蛋白質?？贵w是具有免疫作用的蛋白質。 B B淋巴細胞受抗原刺激后，增殖分化為淋巴細胞受抗原刺激后，增殖分化為漿細胞，漿細胞可以產生抗體。漿細胞，漿細胞可以產生抗體。問問 題題1 1）. . 每一個每一個B B淋巴細胞只分泌一種淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。特異性抗體。 2 2）. .每種抗體只能與特定的抗原發(fā)每種抗體只能與特定的抗原發(fā)生結合反應

9、。生結合反應。3、抗體有哪些特點？、抗體有哪些特點？ 4 4、傳統(tǒng)的抗體生產方法及缺陷是什、傳統(tǒng)的抗體生產方法及缺陷是什 么？么？問問 題題常規(guī)抗體的缺陷常規(guī)抗體的缺陷抗原不純抗原不純抗體不純抗體不純篩選單一漿細胞篩選單一漿細胞特異性差、純度低；特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏產量低、反應不夠靈敏漿細胞漿細胞 抗體抗體動物體動物體刺激刺激抗原抗原不能增殖產生大量抗體不能增殖產生大量抗體5、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？提示提示2 2：我們所學的哪種細胞是可以無我們所學的哪種細胞是可以無 限增殖的？限增殖的

10、？提示提示3 3：有什么方法能使有什么方法能使B B細胞產生抗體細胞產生抗體 的能力和腫瘤細胞無限增殖能的能力和腫瘤細胞無限增殖能 力同時具備呢？力同時具備呢？5、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？設計方案：設計方案： 一個一個B B淋巴細胞淋巴細胞 只分泌一種特異性抗體只分泌一種特異性抗體 小鼠骨髓瘤細胞小鼠骨髓瘤細胞 能無限增殖能無限增殖 雜交細胞雜交細胞既能產生一種特異性既能產生一種特異性抗體，又能無限增殖抗體，又能無限增殖二、單克隆抗體二、單克隆抗體由單個由單個B B淋巴細胞經過無性繁殖（克淋巴細胞經過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞隆），形成基因型相

11、同的細胞群，這一細胞群所產生的群所產生的化學性質單一、特異性強化學性質單一、特異性強的抗體的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 1 1、單克隆抗體的概念、單克隆抗體的概念雜交瘤細胞雜交瘤細胞單克隆抗體單克隆抗體 2 2、單克隆抗體制備過程、單克隆抗體制備過程篩選篩選, ,繼續(xù)培養(yǎng)繼續(xù)培養(yǎng)足夠數量的、能產生足夠數量的、能產生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)細胞融合、篩選細胞融合、篩選骨髓瘤骨髓瘤細胞細胞體體外外培培養(yǎng)養(yǎng)注注射射到到小小鼠鼠腹腹腔腔B B淋巴淋巴細胞細胞注射抗原注射抗原具有兩個親本的特性，具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，即能迅速大量增殖，又能產生足夠數量的又

12、能產生足夠數量的單一抗體。單一抗體。免疫原理，細胞融合原理和動物細免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理胞培養(yǎng)原理1.1.本過程利用了哪些原理？本過程利用了哪些原理？2.2.為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B B細胞融合？細胞融合？這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質，不僅具有親細胞的遺傳物質，不僅具有B淋巴細胞淋巴細胞分泌特異性抗體的能力，而且還有無限增分泌特異性抗體的能力，而且還有無限增殖的本領，因而可獲得大量單克隆抗體殖的本領，因而可獲得大量單克隆抗體思考：思考：三、單克隆抗體的應用三、單克隆抗體的應用單克隆抗體的單克隆抗

13、體的優(yōu)點：優(yōu)點：特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高2、用于、用于運載藥物：運載藥物：制成制成“生物導彈生物導彈” 治療疾病：治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療主要用于癌癥治療優(yōu)點：優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速優(yōu)點：優(yōu)點：療效高、毒副作用小療效高、毒副作用小1、作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與、作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質，并與 抗原特異性結合抗原特異性結合小結小結兩個過程兩個過程動物細胞融合過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導細胞融合的新方法一個誘導細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢1、動物細胞工程技術的基礎是：（）、動物細胞工程技術的基礎是：（）A動物細胞融合動物細胞融合B胚胎移植胚胎移植C動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)D核移植核移植在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正在動物細胞融合和植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）確的是（）A結果是相同的結果是相同的B雜種細胞的形成過程基本相同雜種細胞的形成過程基本相同C操作過程中酶的作用相同操作過程中酶的作用相同D誘導融合的手段相同誘導融合的手段相