實驗四_水中細菌總數(shù)的測定和土壤微生物的分離[1]ppt課件

1、實驗三 水中細菌總數(shù)的測定和土壤微生物的分別.一 實驗目的1.學習水樣的采取方法和水樣細菌總數(shù)測定的方法；2.了解水源水的平板菌落計數(shù)的原那么。一水中細菌總數(shù)的測定.二.實驗原理：本實驗運用平板菌落計數(shù)技術(shù)測定水中細菌總數(shù)。由于水中細菌種類繁多，它們對營養(yǎng)和其他生長條件的要求差別很大，不能夠找到一種培育基在一種條件下，使水中一切的細菌均能生長繁衍，因此，以一定的培育基平板上生長出來的菌落，計算出水中細菌總數(shù)僅是一種近似值。目前普通是采用肉膏蛋白胨瓊脂培育基。.本實驗以普通牛肉膏蛋白胨瓊脂培育基，采用平板菌落計數(shù)技術(shù)來分別測定自來水和河水中的細菌總數(shù)。1-7組河水，8-10組自來水.三、實驗操作

2、1.水體取樣： 應取距水面1015cm的深層水樣。先將滅菌的帶玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻轉(zhuǎn)過來，除去玻璃塞，水立刻流入瓶中，盛滿后，將瓶塞蓋好，再從水中取出。2. 自來水取樣： 翻開自來水龍頭，讓水流流出1min左右，用燒杯接取自來水。.3. 將河水水樣分別稀釋成10-1、10-2、10-3三個延續(xù)稀釋濃度留意：在稀釋前后一定要充分混勻、自來水樣不稀釋。 留意：河水樣的稀釋，取1個滅菌空試管，參與9mL滅菌水。用取過滅菌水的移液管取1mL河水樣，放入試管中，振蕩試管混合均勻。 .4.涂布平板法：1加熱曾經(jīng)配制好的固體培育基肉膏蛋白胨瓊脂培育基，使固體培育基溶化。2倒制平板：每個空平皿中

3、倒約20mL的培育基，放置桌面待其凝固。3用移液管汲取0.1mL水樣，滴于平板中；將玻璃涂布棒于酒精燈的外焰上加熱，殺死外表微生物，然后耐心待其冷卻，然后用涂布棒將水滴均勻的涂滿整個平板外表，盡量將水涂干。5. 倒置于37培育箱中培育24h。.6.菌落計數(shù)：1挑取無片狀菌苔生長的平板作為計數(shù)平板，假設片狀菌苔的大小不到平板的一半，而其他的一半菌落分布很均勻時，可將此一半的菌落數(shù)乘2以代表全平板的菌落數(shù)。2選擇平均菌落數(shù)在30300之間的平板來計算該水樣的菌落總數(shù)。假設一切的平板的菌落總數(shù)都不在30300范圍之內(nèi)，那么取最接近30300的平板進展計數(shù)3 假設有兩個稀釋濃度的總菌落數(shù)落在了3030

4、0范圍之內(nèi)，那么先計算兩個濃度下每ml水體中細菌總數(shù)，假設兩個數(shù)值的比值大于2那么取小的濃度，如假設小于2那么取兩值的平均值。.二土壤微生物的分別、培育一、實驗目的 掌握微生物分別純化的根本操作技術(shù)二、實驗原理 從混雜的微生物群體中獲得只含某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分別與純化。常用平板分別法：包括兩個方面： 1、選取適當?shù)呐嘤?2、挑取單菌落 .三、實驗操作1、倒平板 將營養(yǎng)瓊脂培育基、高氏1號瓊脂培育基、馬丁氏瓊脂培育基，加熱溶化，待冷至55-60時，馬丁培育基中加鏈霉素終濃度為30g/ml，混勻后倒平板。.2、 制備土壤稀釋液 稱取土壤10g，放入盛有90ml無菌水中，猛烈震

5、蕩20min，充分混合。用無菌吸管汲取1ml土壤懸液參與9ml無菌水中，混勻，以此類推，制備成10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6不同稀釋度的土壤溶液。 .3、涂平板 將上述每種培育基的三個平板底面分別用記號筆寫上10-4，10-5，10-6種稀釋度，再用無菌吸管分別汲取10-4，10-5，10-6種稀釋度的土壤稀釋液0.1ml，用無菌涂布棒涂布均勻后，靜置5-10min。假設平板數(shù)量缺乏， 減少10-6稀釋度的平板.4、培育 將高氏1號培育基平板和馬丁氏培育基平板倒置于28 恒溫培育箱中培育3-5d，營養(yǎng)瓊脂培育基平板倒置于37 恒溫培育箱中培育2-3d。.5、菌落形狀察看 、計數(shù)6、染色