預(yù)防醫(yī)學(xué)分子生物11習(xí)題

1、RNAi發(fā)卡式載體構(gòu)建及轉(zhuǎn)化1利用反向遺傳學(xué)研究基因功能的策略有哪些？2RNAi的分子機(jī)制。3RNAi 的生物學(xué)意義如何？PCR法克隆目的基因全長(zhǎng)若克隆某基因全長(zhǎng)，在進(jìn)行引物設(shè)計(jì)時(shí)，有哪些需要特別注意的事項(xiàng)？一個(gè)PCR循環(huán)的步驟？PCR反應(yīng)體系的重要組成？序列測(cè)定6.簡(jiǎn)述Sanger雙脫氧鏈終止法進(jìn)行DNA序列分析的基本原理，并將下列DNA測(cè)序膠片的結(jié)果（正向引物測(cè)序），從53寫出合成鏈的DNA序列。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)1SDS - PAGE測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量的原理是什么？2SDSPAGE是變性條件下的蛋白質(zhì)電泳，如果進(jìn)行保持蛋白質(zhì)天然特性的非變性電泳其與SDS有什么主要區(qū)別？

2、雙向電泳分離蛋白質(zhì)6.常用的雙向電泳，第一向采用技術(shù)，根據(jù)來(lái)分離蛋白質(zhì)；第二向采用技術(shù)，根據(jù)來(lái)分離蛋白質(zhì)。免疫印跡檢測(cè)目的蛋白質(zhì)的表達(dá)Western Blotting 檢測(cè)目的蛋白質(zhì)表達(dá)的原理？Southern雜交2. 探針為什么要進(jìn)行100 變性處理？4.探針：能夠與靶分子特異結(jié)合的核酸分子，帶有供雜交后檢測(cè)的合適標(biāo)記物。5.核酸分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶電荷，在電場(chǎng)中向極移動(dòng)。6.核酸電泳時(shí)用TAE緩沖液，用MOPS緩沖液（選填：DNA、RNA）。RNA的提取與Northern雜交1RT-PCR反應(yīng)過(guò)程中經(jīng)常使用哪幾種引物？2闡述Northern雜交過(guò)程中的主要實(shí)驗(yàn)步驟和相關(guān)注意事項(xiàng)。

3、3.Northern雜交可以測(cè)定總RNA或poly(A)+RNA中特定mRNA分子的（選填：表達(dá)豐度、基因拷貝數(shù)）。4.名詞解釋：Northern雜交，探針原位雜交分析1原位雜交、Northern Blot 雜交和RT-PCR均可以檢測(cè)組織中特定基因的表達(dá)，三者有何異同？第十九章 分子生物學(xué)常用技術(shù)一、 單選題 1. “Sourthern Blotting”指的是 (A) 將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用DNA做探針雜交 (B) 將RNA轉(zhuǎn)移到膜上，用DNA做探針雜交 (C) 將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用蛋白質(zhì)做探針雜交 (D) 將RNA轉(zhuǎn)移到膜上，用RNA做探針雜交 (E) 將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用RNA做探

4、針雜交 2. 分子雜交試驗(yàn)不能用于 (A) 單鏈DNA分子之間的雜交 (B) 單鏈DNA與RNA分子之間的雜交 (C) 抗原與抗體分子之間的結(jié)合 (D) 雙鏈DNA與RNA分子之間的雜交 (E) RNA與RNA之間的雜交 3. 探針是經(jīng)過(guò)什么標(biāo)記的核酸分子 (A) 用放射性同位素標(biāo)記 (B) 用生物素標(biāo)記 (C) 用地高辛標(biāo)記 (D) A、B、C都對(duì) (E) 用抗體標(biāo)記 4. 下列哪一條在分子印漬技術(shù)中不適用 (A) DNA向NC膜轉(zhuǎn)移 (B) 蛋白質(zhì)向PVDF膜轉(zhuǎn)移 (C) DNA向尼龍膜轉(zhuǎn)移 (D) RNA向NC膜轉(zhuǎn)移 (E) 蛋白質(zhì)向一號(hào)濾紙轉(zhuǎn)移 5. 用于核酸雜交的探針至少應(yīng)符合下列哪

5、條 (A) 必須是雙鏈DNA (B) 必須是雙鏈RNA (C) 必須是單鏈DNA (D) 必須是 100bp以上的大分子DNA (E) 必須是蛋白質(zhì) 6. 核酸斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)中可省略的步驟是 (A) 電泳 (B) 核酸樣品固定于NC膜 (C) 雜交信號(hào)檢測(cè) (D) 標(biāo)記探針 E) 制備樣本核酸 7. 免疫印漬技術(shù)中不適合應(yīng)用的步驟是 (A) 聚丙烯酸胺凝膠電泳 (B) 用NC膜或PVDF膜 (C) 靠毛細(xì)管作用進(jìn)行轉(zhuǎn)移 (D) 用同位素標(biāo)記抗體(E) 用非同位素標(biāo)記抗體 8. 原位雜交是指 (A) 在NC膜上進(jìn)行雜交操作 (B) 在組織切片或細(xì)胞涂片上進(jìn)行雜交操作 (C) 直接將核酸點(diǎn)在NC膜上

6、的雜交 (D) 在PVDF膜上進(jìn)行雜交操作 (E) 在凝膠電泳中進(jìn)行的雜交 9. 有關(guān)DNA鏈末端終止法的不正確說(shuō)法是 A) 需要ddNMP (B) 需要ddNTP (C) dNTP：ddNTP的比例要合適 (D) 需要放射性同位素或熒光染料 (E) 需要dNTP 10. 有關(guān)DNA序列自動(dòng)化測(cè)定的不正確敘述是 (A) 用熒光代替了同位素標(biāo)記 (B) 激光掃描分析代替人工讀序 (C) 基本原理與手工測(cè)序相同 (D) 不再需要引物 (E) 需要與手工序列分析相同的模板 11. 某種遺傳性疾病是由一個(gè)點(diǎn)突變（無(wú)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)變化）引起，可以 (A) 用DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析突變 (B) 用限制

7、性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析突變 C) 用 Western Blotting分析突變 (D) 用電泳分析基因組DNA (E) 用電泳分析細(xì)胞中的所有蛋白質(zhì) 12. 免疫印漬技術(shù)指的是 (A) 結(jié)合在膜上的蛋白質(zhì)分子與抗體分子結(jié)合 B) 結(jié)合在膜上的DNA分子與抗體結(jié)合 (C) 結(jié)合在膜上的RNA分子與抗體結(jié)合 (D) 結(jié)合在膜上的DNA分子與RNA分子結(jié)合 (E) 結(jié)合在膜上的免疫分子與DNA的結(jié)合 13. 同位素標(biāo)記探針檢測(cè)NC膜上的RNA分子(A) 叫做Northern Blotting (B) 叫做Southern Blotting (C) 叫做Western Blotting (D) 蛋白分子

8、雜交 (E) 免疫印漬雜交 14. 用做探針的DNA分子必須 (A) 在雜交前變性 (B) 在雜交前復(fù)性 (C) 長(zhǎng)于30個(gè)核著酸 (D) 短于30個(gè)核著酸 (E) 是雙鏈分子 二、填空題 1 只要 DNA 或 RNA 的單鏈分子之間存在著一定程度的_同源性_ ，就可以在不同的分子間形成_雜合分子_ 。 2 利用_印跡_ 使膠中的生物大分子或大分子的片段_轉(zhuǎn)到膜上_ ，可使之成為固相化分子。 3 存在于 NC 膜上的生物分子可以放到雜交液中，與_探針_ 進(jìn)行_雜交_ 。 5 Northern blotting 主要用于檢測(cè)_基因_ 的表達(dá)水平以及分析 基因選擇性剪接 6 蛋白質(zhì)的印漬分析，也稱

9、為_(kāi)免疫印跡_ 。7 目前 DNA 序列的手工測(cè)定或自動(dòng)化測(cè)定所基于的技術(shù)原理為 _ 8 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（ RFLP ）是利用_限制性內(nèi)切酶酶解_ DNA 分子再經(jīng)_電泳_ 即可檢測(cè)出突變 DNA 。 9 基因轉(zhuǎn)移技術(shù)包括_細(xì)胞_ 水平的基因轉(zhuǎn)移，而且可以進(jìn)行_動(dòng)物整體_ 水平的轉(zhuǎn)移。 10 在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，被導(dǎo)人的目的基因稱為_(kāi)轉(zhuǎn)基因_ ，目的基因的受體動(dòng)物稱為_(kāi)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物_ 。 11 單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析（ SSCP ）的原理基于 DNA 單鏈具有_特定構(gòu)象_ 特點(diǎn)，這種特點(diǎn)的形成取決于_DNA序列_ 。17.RNA干擾過(guò)程中三個(gè)重要組成元件是 ， ， 和 。18.PCR擴(kuò)增反應(yīng)中

10、一個(gè)循環(huán)的三個(gè)步驟依次是 ， ， 和 。19.用于熒光定量PCR標(biāo)記的Taqman水解探針是在PCR循環(huán)中的 延伸 階段中發(fā)光。20 DNA芯片的原理為 ，蛋白質(zhì)芯片的原理為 。21.常規(guī)PCR技術(shù)是 對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)的 終產(chǎn)物 進(jìn)行定性及定量分析；熒光定量PCR技術(shù)對(duì)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中 每一循環(huán) 的產(chǎn)物進(jìn)行定量分析。22.PCR反應(yīng)體系中除了含有Mg2+的緩沖體系外，還要具備 、 和 等四大要素。26.蛋白質(zhì)雙向電泳中的第一向和第二向分別是 和 27. 鑒定生物大分子間的相互作用方法，常用針對(duì)蛋白間相互作用的方法 和 ；蛋白，DNA間相互作用的方法為 和 。28常用融合蛋白標(biāo)簽有 和 。三、名

11、詞解釋題 1 DNA 印跡技術(shù) 2 RNA印跡技術(shù) 3 蛋白質(zhì)印跡技術(shù) 4 探針（ probe ） 5 基因敲除6 限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析（ RFLP ） 7. DNA 芯片 8.RT-PCR 9.CT值 11.雙向電泳12單鏈多態(tài)構(gòu)象分析（ SSCP ）13.定點(diǎn)誘變技術(shù)14.實(shí)時(shí)定量PCR 15.SiRNA 16.TaqMan探針17.DNA指紋圖譜五、問(wèn)答題 1 核酸分子雜交的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些？主要用途是什么？ 2 基因轉(zhuǎn)移和基因剔除技術(shù)在醫(yī)學(xué)上可能有哪些用途？ 3 簡(jiǎn)述 RFLP 和 SSCP 檢測(cè)基因突變的原理。 4 簡(jiǎn)述 DNA 末端合成終止法測(cè)定 DNA 序列的原理？ 5.

12、PCR的基本原理是什么?用PCR擴(kuò)增某一基因，必須預(yù)先得到什么樣的信息?7.簡(jiǎn)述用RNAi技術(shù)減低目的基因表達(dá)水平的機(jī)理？8.酵母雙雜交的原理是什么？9.引物是 PCR 反應(yīng)體系的四大要素之一， PCR 的許多應(yīng)用都是通過(guò)引物設(shè)計(jì)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，請(qǐng)問(wèn)引物設(shè)計(jì)的一般原則是什么？10.標(biāo)簽融合蛋白沉淀法鑒定蛋白相互作用的方法體系？11.EMSA或gel shift原理是什么？方法體系？12.ChIP的原理及方法體系？基因的表達(dá)與調(diào)控一 選擇題1.在真核基因表達(dá)的調(diào)控中, _調(diào)控元件能促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的速率。A 衰減子B 增強(qiáng)子 C 阻遏蛋白D TATA 盒2. I在一個(gè)可誘導(dǎo)的操縱元中，基因 A 一直表達(dá) B

13、一般不表達(dá)，直到一個(gè)信號(hào)分子誘導(dǎo)其表達(dá)C一直表達(dá)，直到一個(gè)信號(hào)分子關(guān)閉其表達(dá)D 從不表達(dá).3.在一個(gè)可誘導(dǎo)的操縱元中，能夠引起基因表達(dá)的調(diào)節(jié)物質(zhì)稱為A 阻遏蛋白B 輔阻遏蛋白 C 誘導(dǎo)分子D 輔誘導(dǎo)分子4.在大腸桿菌中，能夠誘導(dǎo)乳糖操縱元表達(dá)的效應(yīng)分子是 A 異構(gòu)乳糖B 代謝激活蛋白C cyclic AMPD -半乳糖苷酶.5.在乳糖操縱元中，編碼-半乳糖苷酶的基因是A lacA B lacZC lacYD lacO6.當(dāng)lacY基因發(fā)生無(wú)義突變時(shí)，在大腸桿菌細(xì)胞中仍能產(chǎn)生的酶是 A-半乳糖苷酶B透酶C轉(zhuǎn)乙酰酶D上面三個(gè)全產(chǎn)生7. 當(dāng)生長(zhǎng)在含有乳糖培養(yǎng)基上的大腸桿菌細(xì)胞中出現(xiàn)lacI 的產(chǎn)物時(shí)

14、，A 阻遏蛋白將結(jié)合lac 操縱基因區(qū)B-半乳糖苷酶不會(huì)產(chǎn)生 C lac 操縱子基因?qū)㈤_(kāi)始轉(zhuǎn)錄D細(xì)胞將不能消化乳糖. 8. 在一個(gè)大腸桿菌細(xì)胞中，當(dāng) lacO 基因發(fā)生組成型突變時(shí)，操縱元基因A 只在乳糖存在時(shí)表達(dá)B 在乳糖存在時(shí)不表達(dá)C 在乳糖不存在時(shí)不表達(dá) D無(wú)論乳糖存在與否均表達(dá). 9. 在lacI大腸桿菌菌株中，在什么條件下乳糖操縱元是表達(dá)的A 只在乳糖存在時(shí)B 只在乳糖不存在時(shí) C無(wú)論乳糖存在與否均表達(dá).D都不是 10. 乳糖操縱元是A 負(fù)調(diào)控下的可誘導(dǎo)操縱元B 負(fù)調(diào)控和正調(diào)控共同控制的可阻遏操縱元 C負(fù)調(diào)控和正調(diào)控共同控制的可誘導(dǎo)操縱元D負(fù)調(diào)控下的可阻遏操縱元11.代謝激活蛋白(C

15、AP)與_結(jié)合可調(diào)節(jié)乳糖操縱元的表達(dá)A啟動(dòng)子B 阻遏蛋白 C cyclic AMPD 誘導(dǎo)物 12.當(dāng)大腸桿菌生長(zhǎng)在既有葡萄糖又有乳糖的培養(yǎng)基上時(shí)，乳糖操縱元處于_控制A 正B 負(fù) C 正和負(fù)D 既不正也不負(fù) 13.哪一項(xiàng)是細(xì)菌操縱元的組成部分？A 啟動(dòng)子B 操縱基因C 結(jié)構(gòu)基因 D上三項(xiàng)均是 14.色氨酸操縱子是 調(diào)控A 正 B 負(fù)C正和負(fù)D既不正也不負(fù)15. 色氨酸操縱子的效應(yīng)物是A異構(gòu)乳糖B環(huán)腺苷酸 cyclic AMP C色氨酸 tryptophanD 輔阻遏物corepressor16. 5-甲基胞嘧啶通常被發(fā)現(xiàn)和下面哪種DNA序列相結(jié)合?A ATTA B CG C ACTD AC1

16、7. 當(dāng)異構(gòu)乳糖和阻遏蛋白結(jié)合, 一個(gè) _ 發(fā)生從而使阻遏蛋白失活.A 突變 B異構(gòu)效應(yīng)C阻遏效應(yīng)D 去阻遏效應(yīng)18. 當(dāng)大腸桿菌 Plac 細(xì)胞株在含有乳糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí),細(xì)菌A 具有代謝乳糖的能力B 合成等量但沒(méi)活性的酶 C 不能合成代謝乳糖的酶D 不能存活.19.大腸桿菌特殊細(xì)胞株 lacOC, lacZ+ and lacY-. 在不含乳糖培養(yǎng)基中，在細(xì)菌細(xì)胞中會(huì)產(chǎn)生哪種酶？? A 僅-半乳糖苷酶B-半乳糖苷酶和 乳糖透過(guò)酶C-半乳糖苷酶，乳糖透過(guò)酶和轉(zhuǎn)乙?；窪 三種酶均不能產(chǎn)生20. 原核細(xì)胞中, 基因調(diào)控通常發(fā)生在 _ 水平. A轉(zhuǎn)錄B 轉(zhuǎn)錄后C 翻譯D 翻譯后 21. 真核細(xì)胞

17、中, 當(dāng)激活調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合到啟動(dòng)子區(qū)域時(shí) A轉(zhuǎn)錄被激活B轉(zhuǎn)錄被抑制C翻譯被抑制D復(fù)制被激活 22. 增強(qiáng)子原件是A 一段特異的DNA調(diào)控序列B 一個(gè)調(diào)節(jié)蛋白C 一種mRNA降解酶D 一個(gè)mRNA轉(zhuǎn)錄本.23. 在真核生物中, 基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控需要下面A 啟動(dòng)子B增強(qiáng)子C轉(zhuǎn)錄因子 D以上全部 24. 轉(zhuǎn)錄因子是A 酶B DNA 原件 C DNA 結(jié)合蛋白D 誘導(dǎo)物.25. 當(dāng)和非轉(zhuǎn)錄活性基因比較時(shí)，轉(zhuǎn)錄激活基因具有 _ 水平的DNA甲基化， A 高 B低C 相同D 沒(méi)有26. IPTG能夠誘導(dǎo)-半乳糖苷酶的表達(dá)是因?yàn)锳 刺激乳糖操縱子阻遏蛋白的活性B IPTG與乳糖操縱子結(jié)合誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄C IPTG與

18、lacI 基因的產(chǎn)物結(jié)合，抑制它的活性D 抑制-半乳糖苷酶的降解 E IPTG作為-半乳糖苷酶的別構(gòu)效應(yīng)物，直接刺激它的活性27. 真核細(xì)胞參與基因表達(dá)調(diào)節(jié)的調(diào)控區(qū)比原核細(xì)胞復(fù)雜是因?yàn)锳 真核細(xì)胞的細(xì)胞核具有雙層膜B 原核細(xì)胞的基因總是以操縱子的形式存在C 原核細(xì)胞調(diào)節(jié)基因表達(dá)主要是在翻譯水平D 真核細(xì)胞需要控制細(xì)胞特異性的基因表達(dá)E 真核細(xì)胞基因組含有太多的重復(fù)序列28. 同一個(gè)基因在肝細(xì)胞中表達(dá)的終產(chǎn)物是ApoB-100，而在小腸上皮細(xì)胞中表達(dá)的終產(chǎn)物是相對(duì)分子質(zhì)量較小的ApoB-48，這是因?yàn)橥粋€(gè)基因在不同的細(xì)胞中A 使用不同的啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄B 使用相同的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄，但初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)歷了

19、選擇性剪接C 使用相同的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄，但初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)歷了選擇性加尾D 使用相同的啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄，但其中一種初級(jí)轉(zhuǎn)錄物經(jīng)歷了編輯E 表達(dá)的終產(chǎn)物（多肽鏈）經(jīng)歷了不同形式的后加工29. 一種大腸桿菌的突變株在含有乳糖沒(méi)有葡萄糖的培養(yǎng)基中不能合成-半乳糖糖苷酶，最可能是因?yàn)榫幋a哪一種蛋白質(zhì)的基因無(wú)義（Nonsense）造成的？A RNA聚合酶的亞基B RNA聚合酶的因子C 降解物激活蛋白（CAP）D lac 阻遏蛋白E lac轉(zhuǎn)乙酰酶二 填空題1正調(diào)控和負(fù)調(diào)控是基因表達(dá)的兩種最基本的調(diào)節(jié)形式，其中原核細(xì)胞常用（負(fù)）調(diào)控，而真核細(xì)胞常用（正）調(diào)控模式。2操縱子由（調(diào)節(jié)基因 ）、（結(jié)構(gòu)基因）和（控制元件包括啟

20、動(dòng)子和操作子）三種成分組成。3與阻遏蛋白結(jié)合的DNA序列通常被稱為（操作子）。4-半乳糖甘酶基因的表達(dá)受到（正調(diào)控）和（負(fù)調(diào)控）兩種機(jī)制的調(diào)節(jié)。5葡萄糖效應(yīng)是指（葡萄糖的存在對(duì)其他糖類利用的限制）。6操縱子的天然誘導(dǎo)物是（異乳糖），實(shí)驗(yàn)室里常用（IPTG）作為乳糖操縱子的安慰誘導(dǎo)物誘導(dǎo)-半乳糖苷酶的產(chǎn)生。7原核細(xì)胞DNA的甲基化位點(diǎn)主要是在（GATC）序列上。8、基因敲除即是（ ），它是研究（ ）的一種反向遺傳學(xué)方法。9 請(qǐng)把左側(cè)的術(shù)語(yǔ)與右側(cè)的描述匹配起來(lái)，每個(gè)術(shù)語(yǔ)的描述只有一個(gè)是正確的。A鋅指結(jié)構(gòu)域（1）由螺旋轉(zhuǎn)交螺旋和一個(gè)識(shí)別螺旋組成BLeu 拉鏈結(jié)構(gòu)域C HTH結(jié)構(gòu)域（3）兩個(gè)螺旋結(jié)構(gòu)域

21、通過(guò)亮氨酸連接D堿性結(jié)構(gòu)域（4）形成需要兩個(gè)半胱氨酸和兩個(gè)組氨酸EHLH 結(jié)構(gòu)域（5）由許多堿性氨基酸組成F激活結(jié)構(gòu)域（6）在兩個(gè)螺旋間形成二聚體，中間由一個(gè)環(huán)隔開(kāi)（7）由許多酸性氨基酸組成答案：A （4）；B （3）；C（1）；D（5）；E（6）；F（7）； 三 簡(jiǎn)答題1 乳糖如何誘導(dǎo)-半乳糖苷酶、透過(guò)酶、轉(zhuǎn)乙?；负铣傻?？為什么在葡萄糖存在的情況下，這一生物學(xué)事件不能發(fā)生？答案：當(dāng)向大腸桿菌細(xì)胞添加乳糖時(shí)，通過(guò)對(duì)這三種酶的結(jié)構(gòu)基因上游的單一啟動(dòng)子的誘導(dǎo)而致使這三種酶能夠快速合成。這三個(gè)基因都是乳糖操縱元的組成部分，作為一個(gè)轉(zhuǎn)錄單元而被轉(zhuǎn)錄。當(dāng)加入乳糖后，乳糖被代謝（異構(gòu)化）形成異乳糖，結(jié)合

22、在阻遏蛋白上。未結(jié)合異乳糖的阻遏蛋白能夠結(jié)合在操縱子上而阻止轉(zhuǎn)錄。因此，因此，乳糖操縱元通常處于負(fù)調(diào)控機(jī)制。當(dāng)異乳糖與阻遏蛋白結(jié)合后，阻遏蛋白失活而不能再與操縱子結(jié)合，也就不能阻止轉(zhuǎn)錄，結(jié)果，RNA聚合酶與啟動(dòng)子結(jié)合，起始能夠編碼這三種酶的一條mRNA的轉(zhuǎn)錄。-半乳糖苷酶將乳糖分解為葡萄糖和半乳糖（半乳糖在隨后的酶促反應(yīng)步驟中被轉(zhuǎn)化為葡萄糖）。因此，如果培養(yǎng)基中存在葡萄糖，誘導(dǎo)乳糖操縱元的打開(kāi)就是多余的。葡萄糖通過(guò)正調(diào)控機(jī)制阻止乳糖操縱元的誘導(dǎo)。在這種代謝產(chǎn)物阻遏的過(guò)程中，葡萄糖會(huì)使細(xì)胞中cAMP的含量大幅度降低，對(duì)于處于誘導(dǎo)狀態(tài)的乳糖操縱元而言，還必須要求cAMP與CAP（代謝基因激活子蛋白

23、）形成復(fù)合體，結(jié)合在乳糖啟動(dòng)子上游的CAP結(jié)合位點(diǎn)，激活轉(zhuǎn)錄。在缺少cAMP的情況下，就不可能存在cAMP-CAP復(fù)合體，轉(zhuǎn)錄也就不能被激活。2當(dāng)操作元被激活后，會(huì)表達(dá)產(chǎn)生多順?lè)醋觤RNA，什么是多順?lè)醋觤RNA？從細(xì)胞功能方面考慮，多順?lè)醋觤RNA具有什么優(yōu)點(diǎn)？答案：多順?lè)醋觤RNA含有編碼多個(gè)蛋白質(zhì)的信息。多順?lè)醋觤RNA是由包含多個(gè)可編碼的結(jié)構(gòu)基因的操縱元轉(zhuǎn)錄形成的，編碼的產(chǎn)物在同一生化途徑中起作用。通過(guò)利用這樣的多順?lè)醋觤RNA，細(xì)胞可以對(duì)同一代謝途徑進(jìn)行協(xié)同調(diào)節(jié)。但由于使用多順?lè)醋觤RNA，單個(gè)調(diào)節(jié)信號(hào)就可誘導(dǎo)同一代謝途徑中一組酶的同時(shí)合成。3有一大腸桿菌突變株，不管誘導(dǎo)物是否存在均

24、能合成-半乳糖苷酶，怎樣的遺傳缺陷會(huì)導(dǎo)致這種表性效應(yīng)的出現(xiàn)？答案：一種可能是阻遏蛋白與誘導(dǎo)物結(jié)合，使阻遏蛋白不能再與操作子結(jié)合（例如，調(diào)節(jié)基因發(fā)生突變，產(chǎn)生無(wú)功能的阻遏蛋白）；另一種可能是在操縱子區(qū)域發(fā)生堿基對(duì)的改變，致使阻遏蛋白不能識(shí)別操縱子（例如操縱子發(fā)生組成型突變Oc）。6 大腸桿菌的代謝激活蛋白（CAP）基因突變會(huì)對(duì)野生型的乳糖操縱元的表達(dá)產(chǎn)生怎樣的影響結(jié)果？答案： CAP與cAMP形成的復(fù)合物可以促進(jìn)RNA聚合酶與啟動(dòng)子的結(jié)合。只有在沒(méi)有葡萄糖、且操縱子沒(méi)有被阻遏蛋白占據(jù)的情況下，RNA聚合酶才能與啟動(dòng)子的結(jié)合（例如也缺少乳糖）。假如CAP基因突變，則無(wú)CAP-cAMP復(fù)合體結(jié)合在C

25、AP位點(diǎn)，在這種情況下，NA聚合酶就不能識(shí)別啟動(dòng)子并與之結(jié)合，操縱元就不能被表達(dá)。7 乳糖操縱元是可誘導(dǎo)的操縱元；色氨酸操縱元是可阻遏的操縱元。請(qǐng)討論這兩種類型操縱元的區(qū)別。 8I 當(dāng)細(xì)胞內(nèi)具有較高濃度的色氨酸時(shí)，色氨酸操縱元只能轉(zhuǎn)錄合成一段較短的前導(dǎo)轉(zhuǎn)錄本，而結(jié)構(gòu)基因不被轉(zhuǎn)錄，這是轉(zhuǎn)錄的弱化作用，是由前導(dǎo)序列中兩個(gè)連續(xù)的色氨酸密碼子介導(dǎo)的。如果色氨酸密碼子UGG突變?yōu)榻K止密碼子UAG，在色氨酸操存在或不存在兩種情況下，將對(duì)色氨酸操縱元的調(diào)控機(jī)制產(chǎn)生怎樣的影響，并加以解釋。答案：9試寫出一個(gè)基因可產(chǎn)生不同的表達(dá)產(chǎn)物的所有可能機(jī)制。答案：使用不同的啟動(dòng)子進(jìn)行轉(zhuǎn)錄；前體mRNA的選擇性加工；前體m

26、RNA的選擇性加尾；mRNA編輯；翻譯后水平的選擇性加工。10假定有一種大腸桿菌，其甲硫氨酸操縱元只由衰減子機(jī)制調(diào)控而沒(méi)有阻遏蛋白。在這種操縱元模型中，甲硫氨酸衰減子同大腸桿菌的色氨酸衰減子機(jī)制十分類似，在mRNA鏈上衰減子的部分序列如下：5 AAAAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGAUGGACUAA 3翻譯的起點(diǎn)位于這一序列的上游，且給出的序列是一正確的閱讀框。當(dāng)mRNA發(fā)生下列情況的突變時(shí)，大腸桿菌的甲硫氨酸操縱元的表達(dá)情況如何（組成型、野生型、或Met）？并請(qǐng)說(shuō)明原因。（1）斜體的A缺失；（2）斜體A及帶下劃線的A都缺失；（3）序列中的前三個(gè)A都缺失。答案：（1）組成型表達(dá)UGA

27、：因?yàn)樾斌wA缺失后會(huì)引起移框突變，由原來(lái)的AUG、AUG等等變?yōu)閁GA、UGA等等。UGA是終止密碼子，所以衰減子不能繼續(xù)翻譯，結(jié)構(gòu)基因可繼續(xù)轉(zhuǎn)錄。 （2）Met：當(dāng)斜體A及帶下劃線的A都缺失后，同樣會(huì)引起移框突變，由原來(lái)的AUG、AUG等等變?yōu)镚AU、GAU等等，GAU是天冬氨酸密碼子，這樣，即使在培養(yǎng)基中甲硫氨酸的含量很低，衰減子序列的翻譯也會(huì)繼續(xù)下去，操縱元的結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄就會(huì)終止。（3）野生型：當(dāng)前三個(gè)A都缺失時(shí)，閱讀框不會(huì)發(fā)生改變。11原核生物的基因與真核生物的基因在組織形式和表達(dá)方式方面有哪些主要的區(qū)別？答案： 原核生物的基因與真核生物的基因在結(jié)構(gòu)、RNA加工過(guò)程、以及轉(zhuǎn)錄與翻譯是否偶聯(lián)等方面存在著差異。結(jié)構(gòu)：原核生物的基因包括上游的啟動(dòng)子、下游的終止子以及中間的RNA編碼序列。真核生物的基因也具有這些特征，但其啟動(dòng)子要復(fù)雜的多，與啟動(dòng)子相鄰或相距較遠(yuǎn)的增強(qiáng)子和沉默子元件會(huì)對(duì)真核基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生較大的影響。真核生物的基因是具有內(nèi)含子的割裂基因。原核生物的mRNA多為