DB21_T 3596—2022蛹蟲草試管菌種檢驗(yàn)規(guī)范

1、DB21ICS 65.020.20CCS B 05遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)DB21/T 35962022 蛹蟲草試管菌種檢驗(yàn)規(guī)范 2022 - 06 - 30 發(fā)布2022 - 07 - 30 實(shí)施遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布Testing Specification for Tube strain of Cordyceps militaris DB21/T 35962022前言本文件按照GB/T 1.1-2020標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。 本文件起草單位：遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院,遼寧省農(nóng)產(chǎn)品加工流通中心。 本文件主要起草人：孟楠，

2、李亞潔，溫志新，都興范，李學(xué)軍，米銳，孫永欣，馬淑慧，李樹英， 王弘，楊遠(yuǎn)，李世軒。 本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋， 我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評估及復(fù)審。 歸口管理部門通訊地址：遼寧省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳（遼寧省沈陽市和平區(qū)太原北街2號），郵編：110001， 聯(lián)系電話：02423447862。 文件起草單位通信地址：遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院（大連市沙河口區(qū)黑石礁街50號），聯(lián)系電話： 041184671027。I DB21/T 35962022DB21/T 35962022蛹蟲草試管菌種檢驗(yàn)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了蛹蟲草試管菌

3、種的質(zhì)量要求、描述了試驗(yàn)方法、檢驗(yàn)規(guī)則等要求。本文件適用于蛹蟲草試管菌種質(zhì)量的檢驗(yàn)。 規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 GB/T 2828.1 計(jì)數(shù)抽樣檢驗(yàn)程序 第1部分：按接收質(zhì)量限（AQL）檢索的逐批檢驗(yàn)抽樣計(jì)劃GB/T 4789.28 食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)染色法、培養(yǎng)基和試劑 GB/T 12728 食用菌術(shù)語 NY/T 1846 食用菌菌種檢驗(yàn)規(guī)程 DB21/T 3187 蛹蟲草貯藏技術(shù)規(guī)程 3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用

4、于本文件。 3.1試管菌種 tube strain以玻璃試管為培養(yǎng)容器和使用單位的菌種。 3.2母種 stock culture 經(jīng)各種方法選育得到的具有結(jié)實(shí)性的菌絲體純培養(yǎng)物及其繼代培養(yǎng)物,也稱一級種。 3.3原種 mother spawn由母種移植、擴(kuò)大培養(yǎng)而成的菌絲體純培養(yǎng)物，移植、擴(kuò)大次數(shù)不超過4代，也稱二級種。 3.4角變 sectoring1 NY/T 528 食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T 1742 食用菌菌種通用技術(shù)要求 因菌絲體局部變異或感染病毒而導(dǎo)致菌絲變細(xì)、生長緩慢、菌絲體表面特征成角狀異常的現(xiàn)象。 3.5生物學(xué)效率 biological efficiency單位質(zhì)量培養(yǎng)

5、料的風(fēng)干物質(zhì)所培養(yǎng)產(chǎn)生出的子實(shí)體或菌絲體質(zhì)量（鮮重），常用百分?jǐn)?shù)表示，如風(fēng)干料100kg產(chǎn)生了新鮮子實(shí)體50kg，即為生物學(xué)效率50%。 3.6種性 characters of variety蛹蟲草的品種特性是辨別蛹蟲草菌種或品種優(yōu)劣的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。一般包括對溫度、濕度、酸堿度、光線和氧氣的要求，抗逆性、豐產(chǎn)性、出菇遲早、出菇潮數(shù)、栽培周期、商品質(zhì)量及栽培習(xí)性等農(nóng)藝性狀。 儀器設(shè)備 應(yīng)符合NY/T 1846-2010中規(guī)定。 抽樣應(yīng)符合GB/T 2828.1-2003中規(guī)定。試管菌種抽樣方案見附錄A。 檢驗(yàn)內(nèi)容和方法感官檢測容器肉眼觀察試管有無破損。 棉塞或膠塞手觸是否干燥；肉眼觀察是否潔凈，

6、對光源仔細(xì)觀察是否有粉狀物；松緊度以手提起棉塞（或膠塞） 或拔出棉塞（或膠塞）的狀況檢查；棉塞（或膠塞）透氣性和濾菌性以及觀察塞入試管口內(nèi)或漏出試管口外棉塞（或膠塞）的長度檢查。 培養(yǎng)基灌入量 肉眼觀察培養(yǎng)基灌入量多少。 斜面長度用卡尺測量斜面頂端到試管口的距離。 接種量 用卡尺測量接種塊大小。 菌種外觀及菌絲生長狀態(tài)肉眼觀察菌絲生長量、菌絲體特征、菌絲表面狀態(tài)、菌絲表面有無分泌物，菌落表面是否整齊，有無其他色澤及異常，必要時(shí)用5倍放大鏡觀察。 6.1.7 氣 味 在無菌條件下拔出棉塞（或膠塞），將試管口置于距鼻5cm10cm處，屏住呼吸，用清洗干凈、酒精棉球擦拭過得手在試管口上方輕輕煽動，順

7、風(fēng)鼻聞。 菌種生物學(xué)檢驗(yàn)雜菌和害蟲用放大倍數(shù)不低于1040的光學(xué)顯微鏡對培養(yǎng)物的水封片進(jìn)行觀察，每一檢樣應(yīng)觀察不少于50個(gè)視野。 細(xì)菌應(yīng)將檢驗(yàn)樣本按無菌操作接種于GB/T 4789.28中規(guī)定的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或PDA培養(yǎng)基中，（371） 培養(yǎng)24h，培養(yǎng)基渾濁或表面出現(xiàn)細(xì)菌菌落者為有細(xì)菌污染。 霉菌應(yīng)將檢驗(yàn)樣本按無菌操作接種于PDA培養(yǎng)基中，（281）培養(yǎng)2d3d，培養(yǎng)基上出現(xiàn)霉菌菌落者為受霉菌污染，必要時(shí)進(jìn)行水封片鏡檢。用顯微鏡檢測培養(yǎng)基中有霉菌分生孢子者為受霉菌污染。 菌絲生長速度一半處3mm5mm3mm5mm菌種一塊，菌絲朝上接種于平板中央，接種平板5個(gè)，至于（201） 下培養(yǎng)，記錄菌絲

8、長滿平皿天數(shù)。 6.4 菌種栽培性狀將試管菌種用PDA培養(yǎng)基制成液體菌種。用附錄B中配方，制作蛹蟲草45瓶。接種后平均分三組進(jìn)行常規(guī)管理，根據(jù)表1所列項(xiàng)目，做好栽培記錄，統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果。同時(shí)將該菌種的出發(fā)菌株設(shè)為對照，亦做同樣處理。對比二者的檢驗(yàn)結(jié)果。 表1 菌種栽培性狀檢驗(yàn)記錄7 質(zhì)量要求7.1 試管菌種感官要求應(yīng)符合表2規(guī)定。 3 用直徑90mm的無菌培養(yǎng)皿，在無菌條件下倒入CPDA培養(yǎng)基20ml，自然凝固制成平板。取斜面上位于檢驗(yàn)項(xiàng)目 檢驗(yàn)結(jié)果 檢驗(yàn)項(xiàng)目 檢驗(yàn)結(jié)果 試管菌種長滿所需時(shí)間，d 總產(chǎn)，g 液體菌種達(dá)到所需濃度時(shí)間，d 平均單產(chǎn)，g 液體菌種接種至鋪滿菌所需天數(shù)，d 生物學(xué)效率，

9、% 液體菌種接種至轉(zhuǎn)色所需天數(shù)，d 子實(shí)體形態(tài)、色澤 液體菌種接種至子實(shí)體生長成熟所需時(shí)間，d 子實(shí)體直徑、長度，mm 表2 試管菌種感官質(zhì)量要求項(xiàng)目 要求 容器 完整，無損 棉塞或硅膠塞（母種用膠塞） 干燥、潔凈、松緊適度，能滿足透氣和濾菌要求 培養(yǎng)基灌入量 為試管總?cè)莘e的三分之一至四分之一 培養(yǎng)基斜面長度 頂端距管口60 mm80 mm 接種量（接種塊大小） （35）mm（35）mm 菌種外觀 菌絲生長量 長滿斜面 菌絲體特征 表面分生孢子層均勻、橘黃色 菌絲體表面 均勻、平整、無角變， 菌絲分泌物 無 菌落邊緣 整齊 氣味 有蟲草菌特有的香味，無酸、臭、霉等異味 7.2 生物學(xué)要求試管菌

10、種生物學(xué)要求應(yīng)符合表3規(guī)定。 表3 試管菌種生物學(xué)要求項(xiàng)目 要求 雜菌 無 螨蟲 無 細(xì)菌 無 霉菌 無 7.3 菌絲生長速度按照6.3方法，菌絲一般10d15d長滿平皿。具體的生長速度也與培養(yǎng)基配方、菌株品種有關(guān)，天數(shù)也可根據(jù)具體情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。 7.4 栽培性狀對照6.4操作后，以時(shí)間計(jì)的檢驗(yàn)項(xiàng)目中，被檢試管菌種的任何一項(xiàng)時(shí)間較對照菌株推遲5d以上（含5天）者，為栽培性狀不合格；產(chǎn)量顯著低于對照菌株者，為栽培性狀不合格；子實(shí)體外觀形態(tài)與對照明顯不同或畸形者，為栽培性狀不合格。 8 判定規(guī)則菌種的感官要求，生物學(xué)要求、生長速度以及栽培性狀均符合要求的，為合格菌種。其中任何一項(xiàng)不符合要求，均為不合格菌種。 附 錄 A（資料性）蛹蟲草菌種抽樣方案采用一般檢驗(yàn)水平的一次抽樣方案，方案規(guī)定的 AQL（不合格品百分?jǐn)?shù)）為 0.5%。 一次抽樣方案由樣本量 n、接收數(shù) Ac 和拒收數(shù) Re 組成。Re=Ac+1。一次抽樣檢驗(yàn)方案表現(xiàn)為N，n， Ac 或（n，Ac），（n，Ac，Re ）等。 其中：N