課件：12基因工程的基本操作程序（人教版選修3）

1、名師商城1.2基因工程的基本操 作 程 序目的基因的獲取基因表達載體的構建將目的基因導入受體細胞基因工程操作的動畫目的基因的表達和檢測基因工程的基本操作程序什么叫基因？基因有遺傳效應的DNA片段。什么叫遺傳效應？ 遺傳效應能轉錄為mRNA，繼而翻譯為蛋白質；能轉錄為核糖體RNA；能轉錄為轉運RNA?；蚬こ痰哪康幕驈墓w轉移到受體的基因。與生物抗逆性相關的基因與優(yōu)良品質相關的基因與生物藥物和保健品相關的基因與毒物降解相關的基因與工業(yè)所需酶相關的基因具有調控作用的因子？1、獲取目的基因的方法有哪些？2、什么叫基因文庫，它包括哪些種類？3、用PCR技術擴增基因需要哪些原料？1、人工合成2、從基因

2、文庫中獲取3、利用PCR技術擴增(基因比較小，序列已知)基因文庫基因組文庫部分基因文庫如：cDNA文庫聚合酶鏈式反應目的基因的獲取人工合成目的基因DNA合成儀基因文庫的構建1、某科研小組發(fā)現一種新的稀有植物，為了保護基因多樣性的潛在價值，簡述怎樣構建該植物的基因組文庫。2、某科研小組在深海發(fā)現一種強抗寒的魚類,經研究找到了其中的抗寒基因，為了儲存該抗寒基因以備利用，簡述怎樣構建該魚抗寒基因的cDNA文庫。mRNARNADNA雜合雙鏈單鏈DNA雙鏈DNARNA病毒逆轉錄的過程逆轉錄酶DNA聚合酶?為什么cDNA文庫中不含啟動子、內含子？原核細胞的基因結構編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游

3、調控遺傳信息的表達(調控序列)轉錄RNA(編碼序列)編碼區(qū)非編碼區(qū)(下游)非編碼區(qū)（上游）(與RNA聚合酶結合位點)啟動子(轉錄終止標記)終止子原核細胞的基因結構包括若干個結構基因啟動子 .VS. 起始密碼/終止子 .VS. /終止密碼存在分子：作用：DNA(基因)啟動/終止轉錄mRNA起始/終止翻譯mRNA中存在啟動子/終止子的序列嗎？編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子(能編碼蛋白質)啟動子內含子(不能編碼蛋白質)真核細胞的基因結構上游終止子下游真核細胞的一個基因的編碼區(qū)轉錄出mRNA前體，需把其中的內含子切除，外顯子拼接成成熟mRNA。(結構基因)mRNARNADNA雜合雙鏈單鏈DNA雙鏈DNA

4、逆轉錄從基因文庫獲取目的基因根據目的基因的有關信息，如：基因的已知核苷酸序列；基因的功能；基因在染色體上的位置；基因的轉錄產物mRNA；基因的表達產物蛋白質； 利 用 PCR技術 擴增目的基因（聚合酶鏈式反應）體外擴增DNA55335353DNA聚合酶DNA連接酶DNA復制的條件：模板DNA、脫氧核苷酸、解旋酶、引物酶、DNA聚合酶、DNA連接酶引物PCR技術DNA的基本單位核苷酸脫氧核苷酸核糖核苷酸dNMPdAMPdGMPdCMPdTMPNMPAMPGMPCMPUMP核苷酸的衍生物NDP 、NTPdNDP、dNTP553353DNA復制的條件：模板DNA、（dNTP）、解旋酶、引物酶、DNA

5、聚合酶、DNA連接酶53DNA聚合酶DNA連接酶引物高溫變性中溫延伸低溫復性PCR加熱變性退火復性延伸PCR循環(huán)PCR技術PCR反應體系中目的基因成指數(2n)形式擴增?1個DNA分子進行PCR擴增,循環(huán)4次，理論上至少需要幾個引物？細胞內復制 .VS. PCR擴增DNA母鏈4種dNTPTaq DNA聚合酶引物（2個snDNA）溫度控制1）模板：2）原料：3）酶：DNA母鏈4種dNTP解旋酶DNA聚合酶引物酶DNA連接酶DNA增殖4）特點:半保留復制邊解旋邊復制(不用DNA連接酶)半保留復制全解旋再復制PCR擴增儀？1、基因表達載體包括哪些必需組分？2、將目的基因導入植物、動物、微生物細胞的方

6、法分別有哪些？3、目的基因的檢測有哪些方法？基因表達載體的構建基因表達載體的模式圖抗生素抗性基因基因表達除含有目的基因外，還需要以下元件：啟動子終止子標記基因將目的基因導入受體細胞 轉化農桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術感受態(tài)法受體細胞植物cell動物cell原核cell植物腫瘤農桿菌轉化法適用于雙子葉植物裸子植物適用于單子葉植物基因槍法胚珠花藥花絲柱頭花柱子房壁子房雄蕊雌蕊花粉管通道法適用于被子植物種子植物裸子植物被子植物雙子葉植物單子葉植物: 松、柏、杉:花生、大豆、棉花: 水稻、小麥、玉米雙子葉植物網狀脈單子葉植物平行脈顯微注射技術目的基因的表達和檢測接種實驗抗原抗體雜交法DNA-RNA分子雜交法DNA分子雜交法受體是否具有轉基因特征個體水平目的基因是否翻譯目的基因是否轉錄目的基因是否導入分子水平方法檢測對象DNA分子雜交基因探針，是一段帶有檢測標記，且序列已知的，與目的基因互補的核酸序列?；蛱结樛ㄟ^分子雜交與目的基因結合，產生雜交信號，能從浩翰的基因組