C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則學(xué)習(xí)資料

1、Good is good, but better carries it.精益求精，善益求善。C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則-附件6C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的技術(shù)審評(píng)提供參考。本指導(dǎo)原則是對(duì)C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。本指導(dǎo)原則是對(duì)申請(qǐng)人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊(cè)審批所涉及的行政事

2、項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿(mǎn)足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。一、范圍C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒是指利用免疫比濁法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨法、免疫熒光法等基于抗原抗體反應(yīng)原理的免疫學(xué)方法對(duì)人全血、血清、血漿或其他體液中的C反應(yīng)蛋白進(jìn)行體外定量測(cè)定的試劑。二、注冊(cè)申報(bào)資料要求（一）綜述資料C-反應(yīng)蛋白（C-reactiveprotein，CRP）由肝細(xì)胞合成，在

3、胎兒期產(chǎn)生，非母體胎盤(pán)傳遞。其產(chǎn)生機(jī)理是：當(dāng)機(jī)體受感染或組織受損傷時(shí)巨噬細(xì)胞和其他白細(xì)胞等被激活，產(chǎn)生白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子TNF-a等細(xì)胞因子及其他介導(dǎo)物，這些細(xì)胞因子和介導(dǎo)物到達(dá)肝臟，刺激肝細(xì)胞和上皮細(xì)胞合成CRP。在結(jié)構(gòu)上，CRP含5個(gè)多肽鏈亞單位，非共價(jià)地結(jié)合為盤(pán)形多聚體，分子量為11.5萬(wàn)14萬(wàn)，CRP是一種典型的急性時(shí)相蛋白。常規(guī)CRP測(cè)定包括定性、半定量和定量分析，可用于評(píng)價(jià)感染，組織損傷和炎癥性疾病。對(duì)于常規(guī)的CRP測(cè)定，參考值通常被認(rèn)為是臨床上含量高于10毫克/升。在健康人群血液中CRP水平低于5毫克/升，而在各種條件下，急性炎癥

4、48小時(shí)內(nèi)，CRP值達(dá)到約20至500毫克/升。常規(guī)CRP作為急性炎癥評(píng)估指標(biāo)比紅細(xì)胞沉降率（ESR）和白細(xì)胞計(jì)數(shù)更敏感、更可靠。超敏C反應(yīng)蛋白線性范圍低端低于常規(guī)CRP，這種較低的范圍可擴(kuò)大使用適應(yīng)癥，C反應(yīng)蛋白是非特異性的，必須結(jié)合臨床癥狀綜合評(píng)估，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的確診依據(jù)。圖1超敏CRP與常規(guī)CRP的區(qū)別超敏C反應(yīng)蛋白常見(jiàn)的用途可作為心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別的輔助手段。配合傳統(tǒng)的急性冠脈綜合征臨床診斷使用，可作為冠狀動(dòng)脈疾病或急性冠脈綜合征復(fù)發(fā)的預(yù)警指示物。圖2超敏CRP的臨床意義表1各種CRP的區(qū)別及性能要求常規(guī)CRP超敏CRP用途感染，組織損傷和炎癥性疾病的評(píng)價(jià)。提供炎癥性

5、疾病的診斷，治療和監(jiān)控的信息是區(qū)分低水平炎癥狀態(tài)的靈敏指標(biāo),血清hs-CRP水平與HYPERLINK/view/292047.htmt_blank動(dòng)脈粥樣硬化及急性腦梗死(ACI)等心腦血管疾病的發(fā)生、嚴(yán)重程度及預(yù)后密切相關(guān)參考值范圍參考值范圍:約10mg/L健康人群：5mg/L急性范圍:20-500mg/L參考值范圍:1mg/L推薦線性范圍5mg/L到上限1.0mg/L到10.0mg/L靈敏度明確在線性范圍低端的性能確定定量限（功能靈敏度）綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、研究結(jié)果的總結(jié)評(píng)價(jià)以及同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，其中同類(lèi)產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從方法學(xué)

6、、臨床應(yīng)用情況、性能指標(biāo)等方面寫(xiě)明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場(chǎng)上已獲批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品之間的異同。應(yīng)符合體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）（以下簡(jiǎn)稱(chēng)辦法）和體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料基本要求（國(guó)食藥監(jiān)械2007609號(hào)）的相關(guān)要求。（二）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、標(biāo)本采集及處理、實(shí)驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的要求，境外試劑的中文說(shuō)明書(shū)除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說(shuō)明書(shū)的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且

7、符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。結(jié)合體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的要求，下面對(duì)C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書(shū)編制。1.【預(yù)期用途】C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、全血和/或其他體液中的C反應(yīng)蛋白濃度，適用的樣本類(lèi)型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究情況進(jìn)行確認(rèn)。注1：CRP值是非特異性的，不能作為特定的疾病或疾病的風(fēng)險(xiǎn)的檢測(cè)指標(biāo)，不建議把CRP的具體臨床診斷意義列入預(yù)期用途。注2：C

8、反應(yīng)蛋白包括常規(guī)C反應(yīng)蛋白（CRP）、超敏CRP（hsCRP），具體根據(jù)臨床試驗(yàn)核定。2.【主要組成成份】（1）說(shuō)明試劑包含主要組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度等信息。（2）試劑中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，申請(qǐng)人應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的名稱(chēng)、貨號(hào)及其他相關(guān)信息。（3）試劑盒中不包含質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材，應(yīng)說(shuō)明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他耗材的制造商、產(chǎn)品名稱(chēng)以及產(chǎn)品貨號(hào)等詳細(xì)信息；如包含校準(zhǔn)品和/或質(zhì)控品，應(yīng)說(shuō)明其主要組成成分及其生物學(xué)來(lái)源，校準(zhǔn)品應(yīng)注明其定值及溯源性，質(zhì)控品應(yīng)有合適的檢測(cè)范圍。3.【儲(chǔ)存條件及有效期】試劑的效期穩(wěn)定性、開(kāi)封穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等信息作詳細(xì)介

9、紹。并對(duì)開(kāi)封后未使用產(chǎn)品允許暴露于空氣中的溫度、濕度及效期等條件予以明確。4.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：（1）樣本采集：采集時(shí)間點(diǎn)是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響，具體采集部位及類(lèi)型，詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響。（2）樣本處理及保存：樣本的保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）、運(yùn)輸條件等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)限制。（3）樣本的最大可稀釋倍數(shù)。5.【適用機(jī)型】所有適用的儀器型號(hào)，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶(hù)操作。6.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：（1）

10、實(shí)驗(yàn)條件：實(shí)驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度等注意事項(xiàng)，檢驗(yàn)試劑及樣本復(fù)溫等要求。（2）試劑使用方法（手工/半自動(dòng)/全自動(dòng)）、注意事項(xiàng)。（3）詳述待測(cè)樣品的預(yù)處理方法、步驟及注意事項(xiàng)。（4）明確樣本檢測(cè)加樣量及觀察時(shí)間。7.【參考值（參考范圍）】應(yīng)注明常用樣本類(lèi)型的正常參考值（范圍），簡(jiǎn)單介紹設(shè)定該參考值（范圍）所選健康人群的區(qū)域特征，建議注明以下字樣“由于地理、人種、性別及年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考值（范圍）”。8.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】結(jié)合質(zhì)控品對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果進(jìn)行合理的解釋。本試劑的檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，對(duì)患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。如存

11、在檢測(cè)灰區(qū)，應(yīng)對(duì)灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述。明確有可能存在的數(shù)值升高因素及數(shù)值降低因素，明確說(shuō)明對(duì)何種條件下需要進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，以及在重復(fù)檢測(cè)時(shí)對(duì)待測(cè)樣本可能采取的優(yōu)化條件等進(jìn)行詳述。9.【檢驗(yàn)方法局限性】（1）干擾物質(zhì)及HOOK效應(yīng)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。（2）操作時(shí)必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程，精心操作才能得到正確結(jié)果，對(duì)操作程序作任何修改都可能影響結(jié)果。（3）有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析。某些未知成分屏蔽了抗原決定簇使之無(wú)法與抗體結(jié)合；C反應(yīng)蛋白抗原隨著樣本放置時(shí)間的延長(zhǎng)和外界溫度上升逐漸降解無(wú)法被抗體識(shí)別；不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理、樣本中被測(cè)物質(zhì)濃度過(guò)低等均有可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。10.【產(chǎn)品性能指標(biāo)

12、】詳述以下性能指標(biāo)：注1：由于C反應(yīng)蛋白目前尚無(wú)國(guó)家參考品，故選用國(guó)際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內(nèi)部參考品，以后國(guó)家參考品若建立，采用國(guó)家參考品。注2：對(duì)線性范圍、分析靈敏度等的最低要求見(jiàn)表1。（1）準(zhǔn)確度：a)檢測(cè)線性范圍內(nèi)幾個(gè)濃度點(diǎn)的C反應(yīng)蛋白參考物質(zhì)（國(guó)際約定、行業(yè)參考品或企業(yè)內(nèi)部參考品），檢測(cè)濃度3mg/L時(shí)，結(jié)果誤差在20%內(nèi)；檢測(cè)濃度3mg/L時(shí)，結(jié)果誤差應(yīng)在15%（建議相對(duì)偏差）內(nèi)。注1：最低不得低于國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生部門(mén)質(zhì)控允許范圍。注2：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。b)回收：將已知濃度的C反應(yīng)蛋白加

13、入到血液基質(zhì)或其他體液成份中，其回收率在（85%115%）范圍內(nèi)。c）比對(duì)：用已上市試劑盒或參考方法進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，結(jié)果應(yīng)滿(mǎn)足相應(yīng)要求。（2）線性范圍：確立線性范圍至少應(yīng)取5點(diǎn)（包括下限、中限及上限），每次應(yīng)重復(fù)測(cè)定三次，計(jì)算出直線方程y=a+bx，相關(guān)系數(shù)r值0.990。（3）分析靈敏度或檢測(cè)限（空白限）：a）分析靈敏度：說(shuō)明試劑的分析靈敏度或不高于某濃度水平，簡(jiǎn)單介紹確定方法，對(duì)功能靈敏度如何研究可一并注明。b）檢出限：用零濃度校準(zhǔn)品或樣本稀釋液作為樣本進(jìn)行檢測(cè)，重復(fù)測(cè)定20次，得出20次測(cè)量結(jié)果，計(jì)算其平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），得出M+2SD，根據(jù)零濃度校準(zhǔn)品和相鄰校準(zhǔn)品之間的濃度結(jié)果

14、進(jìn)行兩點(diǎn)回歸擬合得出一次方程，將M+2SD的結(jié)果代入上述方程中，求出對(duì)應(yīng)的濃度值，即為最低檢出限。（4）重復(fù)性：同一批次的檢測(cè)試劑對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)某個(gè)濃度的C反應(yīng)蛋白樣本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算10次測(cè)量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式CV=SD/M100%得出變異系數(shù)，變異系數(shù)CV（%）15%。注：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。（5）批間差：三個(gè)批次的檢測(cè)試劑對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)某個(gè)濃度的C反應(yīng)蛋白樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算30次測(cè)量結(jié)果的平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD），根據(jù)公式CV=SD/M100%得出變異

15、系數(shù)，變異系數(shù)CV（%）值應(yīng)20%。注：推薦檢測(cè)范圍內(nèi)高、中、低濃度樣本各選一個(gè)樣本測(cè)試，其中低值樣本推薦hsCRP1mg/L左右，CRP10mg/L左右。（6）校準(zhǔn)品溯源性申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)GB/T21415-2008提供所用校準(zhǔn)品的來(lái)源、賦值過(guò)程和相應(yīng)指標(biāo)、以及不確定度等內(nèi)容。（7）質(zhì)控品性能要求（如有）a)定值質(zhì)控品測(cè)量準(zhǔn)確度應(yīng)至少給出一種用校準(zhǔn)品校準(zhǔn)測(cè)量程序后測(cè)定該定值質(zhì)控品的試驗(yàn)方法。b)均一性通常取同批號(hào)的一定數(shù)量最小包裝單元的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，每包裝單元測(cè)試1次，按下面的公式計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S1；另用上述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品中的1個(gè)最小包裝單元連續(xù)測(cè)試相同次數(shù)，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平

16、均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差S2；按下列各公式計(jì)算瓶間重復(fù)性CV%，所有參數(shù)的瓶間重復(fù)性結(jié)果均應(yīng)符合要求。最小裝量不夠完成瓶間差檢測(cè)的可只進(jìn)行批內(nèi)精密度檢測(cè)。公式1公式2公式3公式4EQ當(dāng)S1S2時(shí)，令CV瓶間=0式中：-平均值；S-標(biāo)準(zhǔn)差；n-測(cè)量次數(shù)；xi-指定參數(shù)第i次測(cè)量值。（八）生物安全性（如適用）校準(zhǔn)品、質(zhì)控品如含人源性成分，用經(jīng)過(guò)國(guó)家批檢合格的以下三種體外診斷試劑盒對(duì)該試劑盒的校準(zhǔn)品、質(zhì)控分別進(jìn)行檢測(cè)：a)人類(lèi)免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒；b)丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒；c)乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒，HIV抗體、HCV抗體和HBsAg應(yīng)為陰性。11.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：（1）

17、有關(guān)人源組分（如有）的警告，如：試劑內(nèi)質(zhì)控品或其他可能含有人源物質(zhì)的組分，雖已經(jīng)通過(guò)了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。（2）建議實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境要求，如溫度、濕度、電磁環(huán)境等。（3）對(duì)采集樣本的要求，建議使用新鮮血液，不建議使用高脂乳糜樣、黃疸、高類(lèi)風(fēng)濕因子樣本，勿使用溶血樣本，明確樣本的處理辦法。（4）對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都視為傳染源進(jìn)行處理。（5）其他有關(guān)C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒的注意事項(xiàng)。（三）擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)及編制說(shuō)明擬定產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法和體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資

18、料基本要求的相關(guān)規(guī)定。另外，對(duì)于國(guó)產(chǎn)試劑，應(yīng)參考中國(guó)生物制品規(guī)程（2000年版），將擬申報(bào)產(chǎn)品的主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品檢定、校準(zhǔn)品制備溯源過(guò)程、質(zhì)控品的制備賦值過(guò)程等內(nèi)容作為附錄附于標(biāo)準(zhǔn)正文后，并在正文的“產(chǎn)品分類(lèi)”項(xiàng)中引出該附錄內(nèi)容。作為定量檢測(cè)試劑盒，C反應(yīng)蛋白產(chǎn)品的注冊(cè)檢測(cè)應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀檢查、物理檢查、準(zhǔn)確度、線性范圍、分析靈敏度/檢出限（空白限）、精密度（批間、重復(fù)性）、校準(zhǔn)品溯源性、質(zhì)控品測(cè)量準(zhǔn)確度及均一性、生物安全性（如適用）等。如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的專(zhuān)用國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或相應(yīng)方法學(xué)的通用標(biāo)準(zhǔn)要求發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。（四）注冊(cè)檢驗(yàn)根據(jù)體外

19、診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行）要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第二類(lèi)產(chǎn)品應(yīng)該在國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行注冊(cè)檢測(cè)。由于C反應(yīng)蛋白目前尚無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，申請(qǐng)人應(yīng)建立自己的參考品體系并提供相應(yīng)的內(nèi)部參考品。（五）主要原材料研究資料1試劑盒所用抗體的制備、篩選、純化以及鑒定等詳細(xì)試驗(yàn)資料。如抗體為申請(qǐng)人自制，則應(yīng)詳述抗體的名稱(chēng)及生物學(xué)來(lái)源，申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求（如外觀、純度、蛋白濃度、效價(jià)等），確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)；如抗體為申請(qǐng)人外購(gòu)，則應(yīng)詳述抗體的名稱(chēng)及生物學(xué)來(lái)源，外購(gòu)方名稱(chēng)，提交外購(gòu)方出具的抗體性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書(shū)，詳述申請(qǐng)人對(duì)該抗體技術(shù)指標(biāo)的要求以及申

20、請(qǐng)人確定該抗體作為主要原材料的依據(jù)。2其他主要原輔料的選擇及驗(yàn)證資料，如包被板、反應(yīng)緩沖液等，申請(qǐng)人應(yīng)詳述每一原輔料技術(shù)指標(biāo)的要求以及確定該原輔料作為主要原輔料的依據(jù)。若為外購(gòu)，應(yīng)詳述每一原輔料的外購(gòu)方名稱(chēng)并提交外購(gòu)方出具的每一原輔料性能指標(biāo)及檢驗(yàn)證書(shū)。3企業(yè)內(nèi)部參考品的原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料。（六）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可以流程圖方式表示，并簡(jiǎn)要說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。2.產(chǎn)品反應(yīng)原理介紹。3.抗體包被/致敏工藝研究：申請(qǐng)人應(yīng)考慮如包被液量、濃度、時(shí)間、溫度等指標(biāo)對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述指標(biāo)的最佳組合。4.實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人

21、因考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、pH值等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過(guò)試驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。5.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對(duì)產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果的影響，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測(cè)，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過(guò)試驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的物質(zhì)或處理方法。確定反應(yīng)所需其他物質(zhì)用量（標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)物、底物等）的研究資料。固相載體、顯色(發(fā)光)系統(tǒng)、酶作用底物等的介紹。6.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述。（七）分析性能評(píng)估資料企業(yè)應(yīng)提交原廠在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的

22、所有性能驗(yàn)證的研究資料，包括具體研究方法、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)、統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。對(duì)于C反應(yīng)蛋白定量檢測(cè)試劑盒建議至少選擇3批產(chǎn)品對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究：分析靈敏度、準(zhǔn)確度、特異性、線性范圍、精密度（批間、批內(nèi)）等指標(biāo)，具體研究方法建議參考相關(guān)指導(dǎo)原則。對(duì)于適用多個(gè)機(jī)型的產(chǎn)品，應(yīng)提供如產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【適用機(jī)型】項(xiàng)中所列的所有型號(hào)儀器的性能評(píng)估資料。1.準(zhǔn)確度（1）與企業(yè)內(nèi)部參考品的比對(duì)研究使用已溯源的企業(yè)內(nèi)部定值參考品進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察檢測(cè)結(jié)果的偏差情況。（2）回收試驗(yàn)用于評(píng)估定量檢測(cè)方法準(zhǔn)確測(cè)定加入純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。通常對(duì)樣本進(jìn)行23次回收試驗(yàn)，取平均值即平均回收率?；厥赵囼?yàn)注意

23、事項(xiàng)：=1*GB3加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積一般應(yīng)小于樣本體積的10%；=2*GB3盡量使加入標(biāo)準(zhǔn)液后樣本中的被測(cè)物濃度接近醫(yī)學(xué)決定水平；=3*GB3標(biāo)準(zhǔn)物濃度應(yīng)該足夠高，以得到不同濃度的回收樣本；=4*GB3注意基質(zhì)效應(yīng)，盡量采用與臨床待測(cè)樣本接近的基質(zhì)。（3）方法學(xué)比對(duì)采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的已上市同類(lèi)試劑作為參比方法，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批病人樣品，從測(cè)定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說(shuō)明兩檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)病人標(biāo)本測(cè)定結(jié)果基本相符，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋?zhuān)瑪M申報(bào)試劑與參比方法相比不會(huì)產(chǎn)生差異結(jié)果。在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試

24、劑和參比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類(lèi)型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。注：C反應(yīng)蛋白目前尚無(wú)國(guó)家參考品，以后國(guó)家參考品若建立，優(yōu)先采用（1）方法；本產(chǎn)品不建議采用方法(2)衡量準(zhǔn)確度。2.分析靈敏度分析靈敏度的確定常使用同批號(hào)試劑對(duì)零濃度校準(zhǔn)品（或樣品稀釋液）進(jìn)行至少20次重復(fù)檢測(cè)，以空白均值加兩倍標(biāo)準(zhǔn)差報(bào)告方法的檢測(cè)限（X+2SD）。3.線性范圍建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響

25、。建立一種定量測(cè)定方法的線性范圍時(shí)，需在預(yù)期測(cè)定范圍內(nèi)選擇711個(gè)濃度水平。例如，將預(yù)期測(cè)定范圍加寬至130%，在此范圍內(nèi)選擇更多的濃度水平，然后依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果逐漸減少數(shù)據(jù)點(diǎn)直至表現(xiàn)出線性關(guān)系，可發(fā)現(xiàn)最寬的線性范圍。4.精密度測(cè)量精密度的評(píng)估應(yīng)至少包括兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，兩個(gè)濃度包括醫(yī)學(xué)決策點(diǎn)附近的數(shù)據(jù)、報(bào)告范圍上下限附近的濃度值，通常選用該檢測(cè)指標(biāo)的正常參考值（范圍）附近和異常高值樣本。兩個(gè)濃度都選用高值樣品，可能致CV偏小，也不能選用接近最低檢出限的樣品，可能致CV偏大。對(duì)hsCRP，其中一個(gè)水平應(yīng)處于美國(guó)心臟協(xié)會(huì)/美國(guó)疾病預(yù)防控制中心（AHA/CDC）給出的低風(fēng)險(xiǎn)類(lèi)的臨床節(jié)值（1.0m

26、g/L），其CV應(yīng)10%；中間水平應(yīng)處于檢測(cè)范圍的中點(diǎn)；第三個(gè)水平應(yīng)處于檢測(cè)上限的附近。5.分析特異性(1)交叉反應(yīng)：易產(chǎn)生交叉反應(yīng)的其他抗原、抗體等的驗(yàn)證情況；(2)干擾物質(zhì)：樣本中常見(jiàn)干擾物質(zhì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響，如高脂、黃疸、類(lèi)風(fēng)濕因子等干擾因子的研究（結(jié)果應(yīng)量化表示，禁用輕度、嚴(yán)重的模糊表述）；(3)藥物影響：常見(jiàn)相關(guān)治療藥物對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。6.鉤狀（Hook）效應(yīng)（如有）：說(shuō)明不會(huì)產(chǎn)生Hook效應(yīng)的濃度上限或相關(guān)研究，如需稀釋?zhuān)瑧?yīng)注明對(duì)稀釋液的要求、最佳或最大稀釋比例。（八）參考值（參考范圍）確定資料參考值（范圍）確定所采用的樣本來(lái)源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料。建議參考CLSI/NCC

27、LSC28-A2。（九）穩(wěn)定性研究資料穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性?xún)刹糠謨?nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。（十）臨床試驗(yàn)資料1.研究方法選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類(lèi)產(chǎn)品作為參比試劑

28、，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱(chēng)考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。建議企業(yè)盡量選擇方法學(xué)相同、線性范圍及精密度等性能接近的同類(lèi)試劑作為參比試劑。2.臨床研究單位的選擇（1）第二類(lèi)產(chǎn)品申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選定不少于2家（含2家）省級(jí)衛(wèi)生醫(yī)療機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)。（2）臨床研究單位應(yīng)有能力提供臨床評(píng)價(jià)所需的各類(lèi)樣本，實(shí)驗(yàn)操作人員有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，考核試劑和參比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。（3）不同的臨床單位應(yīng)使用同一批考核試劑進(jìn)行臨床試驗(yàn)，以便

29、對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)客觀的統(tǒng)計(jì)分析。3.臨床試驗(yàn)方案臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)基本一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法及樣本隨機(jī)分配以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。對(duì)于新試劑的

30、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)研究，應(yīng)在方案中明確前后兩次濃度變化有臨床意義的標(biāo)準(zhǔn)。臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類(lèi)型應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)一致，且每種樣本類(lèi)型例數(shù)的選擇應(yīng)符合基本的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。各研究單位選用的參比試劑及所用機(jī)型應(yīng)一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。4.臨床病例選擇(1)臨床試驗(yàn)樣本量的確定：申請(qǐng)人或臨床研究者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品臨床使用目的，與該改產(chǎn)品相關(guān)疾病的臨床發(fā)生率確定臨床研究的樣本量。在符合指導(dǎo)原則有關(guān)最低樣本要求的前提下，還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。臨床研究的總樣本數(shù)至少為200例。應(yīng)考慮樣本量的分布。樣本量的選擇應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)及相關(guān)指導(dǎo)原則的要求。樣本濃度應(yīng)覆蓋考核試劑檢測(cè)范圍，盡可能均勻分布。盡可能使30%樣本的測(cè)定值處于

31、參考區(qū)間以外，但在測(cè)量范圍內(nèi)。另外，建議在臨床試驗(yàn)中選擇部分含干擾物質(zhì)的標(biāo)本進(jìn)行對(duì)比研究，包括高脂、溶血、黃疸的樣本、類(lèi)風(fēng)濕因子陽(yáng)性樣本，易共存的其他急性炎癥時(shí)相因子同時(shí)升高的患者標(biāo)本，以從臨床角度驗(yàn)證試劑的特異性。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、受試者工作特征（ROC）曲線分析等。對(duì)于對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，最常用是對(duì)考核試劑和參比試劑兩組檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證

32、明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果有明顯差異的樣本，應(yīng)采用臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類(lèi)試劑進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)根據(jù)體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。（1）臨床試驗(yàn)總體設(shè)

33、計(jì)及方案描述=1*GB3臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹；=2*GB3病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)；=3*GB3樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等；=4*GB3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。（2）具體的臨床試驗(yàn)情況=1*GB3考核試劑和參比試劑的名稱(chēng)、批號(hào)、有效期及所用機(jī)型等信息；=2*GB3對(duì)各研究單位的病例數(shù)、病種分布情況進(jìn)行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比；=3*GB3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控品運(yùn)行情況，對(duì)檢測(cè)精密度、質(zhì)控品回收（或測(cè)量值）、抽查結(jié)果評(píng)估；=4*GB

34、3具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本檢測(cè)、數(shù)據(jù)收集、樣本長(zhǎng)期保存、結(jié)果不一致樣本的校驗(yàn)等。（3）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析=1*GB3數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。定量值相關(guān)性和一致性分析用回歸分析驗(yàn)證兩種試劑結(jié)果的相關(guān)性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是考核試劑結(jié)果，x是參比試劑結(jié)果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)，同時(shí)應(yīng)給出b的95%（或99%）置信區(qū)間，定量值結(jié)果應(yīng)無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。（4）討論和結(jié)論對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)

35、論。三、名詞解釋1.分析特異性（AnalyticalSpecificity）：測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量物的能力。分析特異性用于描述檢測(cè)程序在樣本中有其他物質(zhì)存在時(shí)只測(cè)量被測(cè)量物的能力。通常以一個(gè)被評(píng)估的潛在干擾物清單來(lái)描述，并給出在特定醫(yī)學(xué)相關(guān)濃度值水平的分析干擾程度。注：潛在干擾物包括干擾物和交叉反應(yīng)物。2.精密度（Precision）：在規(guī)定條件下，相互獨(dú)立的測(cè)試結(jié)果之間的一致程度。精密度的程度是用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法得到的測(cè)量不精密度的數(shù)字形式表示，如標(biāo)準(zhǔn)差（SD）和變異系數(shù)（CV）。四、參考文獻(xiàn)1.體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法（試行），（國(guó)食藥監(jiān)械2007229號(hào)）。2.體外診斷試劑臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則，（國(guó)食藥監(jiān)械2007240號(hào)）。3.體