實(shí)驗(yàn)二-中藥顯微鑒定技術(shù)(二)匯編

1、實(shí)驗(yàn)二中藥顯微鑒定技術(shù)（二）【目的要求】掌握常用細(xì)胞壁顯微鑒定技術(shù)掌握常用細(xì)胞內(nèi)含物顯微鑒定方法練習(xí)顯微觀察方法【儀器、試劑、材料】?jī)x器生物顯微鏡，目鏡測(cè)微尺，鏡臺(tái)測(cè)微尺，顯微描繪器，鑷子，解剖針，載玻片，蓋玻片，酒精燈，單面刀片，粉碎機(jī)，繪圖板，鉛筆等。試劑水合氯醛試劑，蘇丹川試液，稀甘油試劑，鹽酸，硝酸，碘化鉍鉀試劑，氯化鋅碘試液，硫酸，a-萘酚濃硫酸試液，碘試液，間苯三酚試液，釘紅試液，硝酸汞試液，乙醚，石油醚，90%乙醇，70%乙醇，a-萘酚乙醇溶液，稀鹽酸，稀醋酸等。藥材樣品牛膝、薄荷、石斛、藥材粉末大黃、肉桂、山藥、黃芪、金銀花、紅花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心蓮【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】一

2、、用于組織切片及粉末藥材的封藏劑1水合氯醛試液為常用優(yōu)良的化學(xué)透明劑之一，特點(diǎn)是能迅速透入組織，使干燥收縮的細(xì)胞逐漸膨脹復(fù)原，并能溶解大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)含物，如淀粉粒、葉綠體、菊糖、樹(shù)脂、蛋白質(zhì)、揮發(fā)油等，使細(xì)胞組織清晰透明，易于觀察。用水合氯醛裝片可觀察各種組織特征，各種結(jié)晶，如草酸鈣結(jié)晶、碳酸鈣結(jié)晶和硅質(zhì)塊，各類細(xì)胞形狀，如導(dǎo)管、纖維、石細(xì)胞、木栓細(xì)胞等。不加熱裝片可觀察菊糖、橙皮苷結(jié)晶等。天冷時(shí)，水合氯醛裝片后易析出結(jié)晶，可加一滴稀甘油避免。2稀甘油為物理性透明劑，能較快的透入組織，形成良好的透光條件，一般作臨時(shí)封藏劑，常用于觀察胡粉粒和菌絲等。3甘油醋酸（斯氏液）用于觀察淀粉粒或測(cè)量其大小的

3、封藏劑。也可以用乳酸酚溶液代替。乙醇根據(jù)不同目的，選用不同濃度的乙醇裝片。50%以上濃度的乙醇可以固定乳管；80/90濃度的乙醇可以固定和觀察菊糖；95的乙醇可以觀察黏液細(xì)胞；100%乙醇可用于植物葉綠體脫色；低濃度（1030%）乙醇可以代替水軟化含黏液質(zhì)的材料。蒸餾水可以溶解水溶性物質(zhì)，透入組織較快，但不能溶解大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)含物，透明度差，易干燥?？捎糜跈z查淀粉粒的有無(wú)或配合其他試劑檢查細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)含物的性質(zhì)。二、用于檢查細(xì)胞壁和細(xì)胞內(nèi)含物性質(zhì)的試劑間苯三酚試液常與濃鹽酸配用，檢查木化細(xì)胞壁。加間苯三酚試液12滴，稍放置，再加濃鹽酸1滴，木化細(xì)胞壁因木化程度不同，顯淡紅色、紅色或紫紅色。氯化

4、鋅碘試液檢查纖維素細(xì)胞壁。加氯化鋅碘試液或先加碘試液后，稍放置，用濾紙條吸去多余的碘液，再加66%硫酸溶液，纖維素細(xì)胞壁顯藍(lán)色或紫色。蘇丹川試液檢查角質(zhì)化或栓質(zhì)化細(xì)胞壁，以及脂肪油、揮發(fā)油和樹(shù)脂等細(xì)胞內(nèi)含物。加蘇丹川試液，放置15min以上，或微加熱，角質(zhì)化、栓化細(xì)胞壁顯桔紅色至紅色；脂肪油、揮發(fā)油和樹(shù)脂顯桔紅色、紅色或紫紅色。碘試液檢查淀粉粒和糊粉粒。力口碘試液，淀粉粒顯藍(lán)色或藍(lán)紫色；糊粉粒顯棕色或黃棕色，后者加硝酸汞試液，顯磚紅色。5a萘酚試液常與濃硫酸配用，檢查菊糖等。6釕紅試液檢查黏液質(zhì)。加釕紅試液，黏液質(zhì)顯紅色。也可用95乙醇裝片，觀察黏液細(xì)胞形狀后，自玻片的一邊引入1滴蒸餾水，可見(jiàn)

5、黏液細(xì)胞逐漸膨脹，黏液質(zhì)溶解而擴(kuò)散。7稀醋酸草酸鈣結(jié)晶加稀醋酸后不溶解。8稀鹽酸加稀鹽酸，草酸鈣結(jié)晶和碳酸鈣結(jié)晶均溶解，而碳酸鈣結(jié)晶溶解并產(chǎn)生氣泡。9?。?0）硫酸加20硫酸，草酸鈣結(jié)晶和碳酸鈣結(jié)晶均溶解，并可產(chǎn)生硫酸鈣針晶，而碳酸鈣結(jié)晶溶解并產(chǎn)生氣泡。硅質(zhì)塊在各種稀酸中均不溶解。三、試驗(yàn)觀察淀粉粒取半夏粉末水裝片，觀察淀粉粒的類型、形狀，觀察臍點(diǎn)的形狀、位置，層紋的有無(wú)。用碘試液檢驗(yàn)。石細(xì)胞取黃柏粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述石細(xì)胞的形狀、顏色，觀察細(xì)胞壁及孔溝的特征。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述石細(xì)胞壁的木化情況。纖維取肉桂粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述韌皮纖維的

6、分布狀態(tài)、形狀、顏色、細(xì)胞壁的特征，測(cè)量細(xì)胞的長(zhǎng)度和直徑。用間苯三酚-濃鹽酸制片，觀察和描述細(xì)胞壁的木化情況。木栓細(xì)胞取黃芪粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述木栓細(xì)胞的存在狀態(tài)、切面觀和表面觀的形狀、顏色。用間苯三酚-濃鹽酸試液制片，觀察和描述木栓細(xì)胞的木化情況；用蘇丹川試液制片，觀察和描述木栓細(xì)胞的木栓化情況。草酸鈣針晶取山藥粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述草酸鈣晶體的類型、存在狀態(tài)。碳酸鈣晶體（鐘乳體）取穿心蓮粉末少許，制水合氯醛加熱透化片，觀察并描述碳酸鈣晶體的分布狀態(tài)、形狀、顏色。在制片邊緣滴加少許鹽酸，觀察鐘乳體的變化和產(chǎn)生的現(xiàn)象。草酸鈣晶體取大黃粉末少許，制水合氯醛加

7、熱透化片，觀察并描述草酸鈣晶體的形態(tài)、大小、顏色。加20硫酸檢查。硅質(zhì)塊晶體取石斛粉末或藥材縱切，制水合氯醛加熱透化。觀察并描述硅質(zhì)塊形狀、大小、顏色。加稀酸檢查。菊糖取木香或桔梗粉末少許，用水或水合氯醛制片（不透化），觀察并描述菊糖的分布狀態(tài)、形狀、顏色，表面特征。加a-萘酚試液與濃硫酸檢查。非腺毛分別取石韋、金銀花、艾葉粉末或藥材碎片少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述非腺毛的分布狀態(tài)、類型、形狀、顏色、表面特征、細(xì)胞的數(shù)目和組成情況。腺毛分別取金銀花、洋金花等粉末少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述腺毛的分布狀態(tài)、形狀、顏色、表面特征、腺頭和腺柄細(xì)胞的數(shù)目和組成情況。腺鱗取薄荷粉末或藥材碎片

8、少許，制水合氯醛透化片，觀察并描述腺鱗的分布狀態(tài)、形狀、顏色、表面特征、腺頭和腺柄細(xì)胞的數(shù)目和組成情況，測(cè)量腺毛頭部柄部的直徑?；ǚ哿７謩e取洋金花、紅花等粉末，水合氯醛透化，觀察并描述花粉粒的形狀、顏色、表面特征等?！咀鳂I(yè)】熟記常用顯微鑒定試劑的性質(zhì)和應(yīng)用方法。記錄實(shí)驗(yàn)觀察內(nèi)容和檢查結(jié)果。學(xué)習(xí)-好資料實(shí)驗(yàn)三中藥品質(zhì)常規(guī)檢測(cè)技術(shù)【目的要求】掌握中藥水分測(cè)定法掌握中藥灰分測(cè)定法熟悉中藥浸出物測(cè)定方法熟悉中藥揮發(fā)油測(cè)定方法【儀器、試劑、材料】?jī)x器水分測(cè)定儀，坩堝、馬福爐、揮發(fā)油測(cè)定儀，粉碎機(jī)，電熱套、玻璃冷凝器、硬質(zhì)圓底燒瓶、干燥器、電子天平、扁型稱量瓶、二號(hào)篩、錐形瓶、沸石或玻璃珠等。試劑甲苯、蒸

9、餾水、乙醇、五氧化二磷干燥劑、稀鹽酸、乙醚。藥材樣品牛膝、薄荷、石斛、藥材粉末大黃、肉桂、山藥、黃芪、金銀花、紅花、洋金花、半夏、桔梗、木香、穿心蓮【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】一、中藥品質(zhì)常規(guī)檢測(cè)技術(shù)介紹1水分測(cè)定法測(cè)定用的供試品，一般先破碎成直徑不超過(guò)3mm勺顆?；蛩槠?；直徑和長(zhǎng)度在3mm以下的可不破碎；減壓干燥法需通過(guò)二號(hào)篩。第一法（烘干法）本法適用干不含或少含揮發(fā)性成分的藥品。測(cè)定法取供試品25g,平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，厚度不超過(guò)5mm疏松供試品不超過(guò)10mm,精密稱定。打開(kāi)瓶蓋在100105C干燥5h，將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，冷卻30min,精密稱定，再在上述溫度干燥1h.冷卻，稱重，至連

10、續(xù)兩次稱重的差異不超過(guò)5mg為止。根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含水量）。第二法（甲苯法）本法適用于含揮發(fā)性成分的藥品。儀器裝置，如圖。A為500ml的短頸圓底燒瓶；B為水分測(cè)定管；C為直形冷凝管，夕卜管長(zhǎng)40cm。使用前，全部?jī)x器應(yīng)清潔。并置烘箱中烘干。測(cè)定法取供試品適量約相當(dāng)于含水量I4ml，精密稱定，置A瓶中，加甲苯約200ml，必要時(shí)加入干燥、潔凈的沸石或玻璃珠數(shù)粒。將儀器各部分連接，自冷凝管頂端加人甲苯，至充滿B管的狹細(xì)部分。將A瓶置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱，待甲苯開(kāi)始沸騰時(shí)，調(diào)節(jié)溫度。使每秒鐘餾出2滴。待水分完全餾出，即測(cè)定管刻度部分的水量不再增加時(shí)。將冷凝管內(nèi)部先用甲苯?jīng)_洗

11、。再用飽蘸甲苯的長(zhǎng)刷或其他適宜的方法，將管壁上附著的甲苯推下，繼續(xù)蒸餾5分鐘，放冷至室溫，拆卸裝置，如有水黏附在B管的管壁上，可用蘸甲苯的銅絲推下，放置，使水分與甲苯完全分離可加亞甲藍(lán)粉末少量，使水染成藍(lán)色。以便分離觀察。檢讀水量，并計(jì)算供試品中的含水量。附注用化學(xué)純甲苯直接測(cè)定，必要時(shí)甲苯可先加水少量、充分振搖后放置。將水層分離棄去，經(jīng)蒸餾后使用。第三法(減壓干燥法)本法適用于含有揮發(fā)性成分的貴重藥品。減壓干燥器取直徑12cm左右的培養(yǎng)皿，加人五氧化二磷干燥劑適量，使鋪成0.5Icm的厚度，放人直徑30cm的減壓干燥器中。測(cè)定法取供試品24g,混合均勻，分取約0.51g,置已在供試品同樣條件

12、下干燥并稱重的稱量瓶中，精密稱定，打開(kāi)瓶蓋，放入上述減壓干燥器中，減壓至2.67kPa(20mmHg)以下持續(xù)半小時(shí)，室溫放置24小時(shí)。在減壓干燥器出口連接無(wú)水氧化鈣干燥管，打開(kāi)活塞，待內(nèi)外壓一致，關(guān)閉活塞，打開(kāi)干燥器，蓋上瓶蓋，取出稱量瓶迅速精密稱定重量，計(jì)算供試品中的含水量(%)。五氧化二磷和無(wú)水氧化鈣為干燥劑，干燥劑應(yīng)保持有效狀態(tài)。第四法(氣相色潛法)詳見(jiàn)中國(guó)藥典2005年版附錄區(qū)Ho灰分測(cè)定(1)總灰分測(cè)定法測(cè)定用的供試品須粉碎，使能通過(guò)二號(hào)篩，混合均勻后，取供試品23g(如須測(cè)定酸不溶性灰分，可取供試品35g)，置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量(準(zhǔn)確至0.01g),緩緩熾熱，注意避免燃

13、燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500600C，使完全灰化并至恒重；根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量(%)。如供試品不易灰化，可將坩堝放冷，加熱水或10%硝酸銨溶液2ml，使殘?jiān)鼭駶?rùn)、然后置水浴上蒸干，殘?jiān)涨胺胱?，至坩堝?nèi)容物完全灰化。(2)酸不溶性灰分測(cè)定法取上項(xiàng)所得的灰分，在坩堝中小心加人稀鹽酸約l0ml，用表面皿覆蓋坩堝，置水浴上加熱10min，表面皿用熱水5ml沖洗、洗液并入坩堝中，用無(wú)灰濾紙濾過(guò)，坩堝內(nèi)的殘?jiān)盟从跒V紙上，并洗滌至洗液不顯氯化物反應(yīng)為止。濾渣連同濾紙移置同一坩堝中、干燥，熾灼至恒重。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中酸不溶性灰分的含量(%)。浸出物含量測(cè)定(1)水

14、溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定用的供試品需粉碎，使能通過(guò)二號(hào)篩，并混合均勻。冷浸法取供試品約4g,精密稱定，置250300m的錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6小時(shí)內(nèi)時(shí)時(shí)振搖，再靜置18小時(shí)，用干燥濾器迅速濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20ml,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105C干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量，除另有規(guī)定外、以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。熱浸法取供試品約24g,精密稱定，置100250ml的錐形瓶中，精密加水50100ml,密塞，稱定重量，靜置1小時(shí)后，連接回流冷凝管。加熱至沸騰、并保持微沸1小時(shí)。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定

15、重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25ml，置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105C干燥3小時(shí)，置干燥器中冷卻30分鐘，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量(%)。(2)醇溶性浸出物測(cè)定法照水溶性浸出物測(cè)定法測(cè)定。除另有規(guī)定外。以各品種項(xiàng)下規(guī)定濃度的乙醇代替水為溶劑。(3)揮發(fā)性醚浸出物測(cè)定法取供試品(過(guò)四號(hào)篩)25g，精密稱定，置五氧化二磷干燥器中干燥12小時(shí)。置索氏提取器中，加乙醚適量，除另有規(guī)定外，加熱回流8小時(shí)，取乙醚液，置干燥至學(xué)習(xí)-好資料恒重的蒸發(fā)皿中，放置，揮去乙醚，殘?jiān)梦逖趸赘稍锲髦懈稍?8小時(shí)，精密

16、稱定，緩緩加熱至姆105C，并于105C干燥至恒熏。其減失重量即為揮發(fā)性醚浸出物的重量。揮發(fā)油測(cè)定測(cè)定用的供試品。除另有規(guī)定外，須粉碎使能通過(guò)二號(hào)至三號(hào)篩，井混合均勻。儀器裝置如圖。A為1000ml（或500m1,2000ml）的硬質(zhì)圓底燒瓶。上接揮發(fā)油測(cè)定器B,B的上端連接回流冷凝管C,以上各部均用玻璃磨口連接，測(cè)定器B應(yīng)具有0.1ml的刻度。全部?jī)x器應(yīng)充分洗凈，并檢查接合部分是否嚴(yán)密、以防揮發(fā)油逸出。注：裝置中揮發(fā)油測(cè)定器的支管分岔處應(yīng)與基準(zhǔn)線平行。測(cè)定法甲法適用于測(cè)定相時(shí)密度在1.0以下的揮發(fā)油。取供試品適量（約相當(dāng)于含揮發(fā)油0.51.0ml），稱定重量（準(zhǔn)確至0.01g），置燒瓶中，加

17、水300-500ml（或適量）與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流人燒瓶時(shí)為止。置電熱套中或用其他適宜方法緩緩加熱至沸。并保持微沸約5小時(shí)，至測(cè)定器中油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0線上面5mm處為止。放置1小時(shí)以上，再開(kāi)啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0線平齊，讀取揮發(fā)油量、并計(jì)算供試品中揮發(fā)油的含量（）。乙法適用于測(cè)定相對(duì)密度在1以上的揮發(fā)油，取水約300ml與玻璃珠數(shù)粒，置燒瓶中，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再用移液管

18、加人二甲苯1ml,然后連接回流冷凝管。將燒瓶?jī)?nèi)容物加熱至沸騰，并繼續(xù)蒸餾，其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。30分鐘后，停止加熱，放置15分鐘以上，讀取二甲苯的容積。然后照甲法自“取供試品適量”起，依法測(cè)定，自油層量中減去二甲苯量，即為揮發(fā)油量，再計(jì)算供試品中揮發(fā)油的含量（%）。二、丁香水分測(cè)定選擇哪種水分測(cè)定法適宜丁香的水分測(cè)定設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程與步驟準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器，安裝水分測(cè)試裝置稱量丁香樣品30g，按實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行水分測(cè)定計(jì)算丁香樣品含水量，判斷含水量是否合格。（照水分測(cè)定法（附錄區(qū)H第二法）測(cè)定，不得過(guò)12.0%）6寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。三、大黃灰分測(cè)定選擇哪種灰分測(cè)定法適宜大黃的灰分測(cè)定，是否要測(cè)定酸不溶性灰分。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程與步驟準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)儀器，安裝灰分測(cè)試裝