二抗的偶聯(lián)標記

1、二抗的偶聯(lián)標記一般來講耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶（辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP ,PAP ）, 熒光基團（FITC, RRX, TR, PE）和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。對于western blot 和ELISA，最常用的二抗是酶標二抗，而細胞或組織標記實驗（細胞免疫化學，組織免疫化學，流式細胞 術）中通常使用熒光基團標記的二抗，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標記的二抗。如 果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用biotin/avidin檢測系統(tǒng)。下面簡單介紹幾種二抗探針的優(yōu)缺點及其適用的實驗：酶：主要有兩種不同的酶耦聯(lián)物，HRP和

2、AP。比較而言，前者更經(jīng)濟、快速、穩(wěn)定，而后者較前者更為 靈敏，通常情況下，HRP廣泛應用于免疫組化，western blot和ELISA中，而堿性磷酸酶（AP）更適 合于固相的免疫檢測實驗，如ELISA和western blot. HRP標記的二抗P號產(chǎn)品名稱反應種 屬應用貨期abs20008anti-Sheep IgG h+l Antibody (Rabbit) - Adsorbed HRP ConjugatedSheepELISA: 0.1 - 0.01 ug/ml IHC: 5.0 - 1.0 ug/ml WB: 0.5 - 0.05ug/ml現(xiàn)貨abs20001goat anti-m

3、ouse IgG-HRPMouseELISA: 0.1 - 0.01 ug/ml; IHC: 5.0 - 1.0 ug/ml; WB: 0.5 - 0.05ug/ml現(xiàn)貨abs20002goat anti-rabbit IgG-HRPRabbitELISA:0.1 - 0.01 ug/ml; IHC: 5.0 - 1.0 ug/ml; WB: 0.5 - 0.05ug/ml現(xiàn)貨abs20031Goat Anti-Rat IgG (H + L),HRPRatIHC 1:500 - 1:5,000; ELISA 1:5,000 - 1:100,000; WB 1:10,000 - 1:200,00

4、0 1:100 - 1:800 for most applications現(xiàn)貨abs20005Rabbit anti-Goat IgG-HRPGoatELISA: 0.1 - 0.01 ug/ml; IHC: 5.0 - 1.0 ug/ml; WB: 0.5 - 0.05ug/ml現(xiàn)貨熒光基團：1. FITC : FITC是廣泛使用的熒光基團，但其最大的缺點是淬滅快，使用抗淬滅劑可以減輕。 FITC標記的二抗貨號產(chǎn)品名稱反應種屬應用貨期abs20018Goat anti-Chicken IgY(IgG)-FITCChickenHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytomet

5、ry,IF 1:50 - 1:200 for most applications現(xiàn)貨abs20003Goat anti-Mouse IgG-FITCMouseIF: 10 - 2 ug/ml; IHC: 10 -2 ug/ml; WB: 0.2 - 0.05 ug/ml現(xiàn)貨abs20012Goat anti-Mouse IgG-FITCMouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:50 - 1:200 for most applications現(xiàn)貨abs20004Goat anti-Rabbit IgG-FITCRabbitIF : 1:100-

6、200現(xiàn)貨abs20023Goat anti-Rabbit IgG-FITCRabbitHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:50 - 1:200 for most applications現(xiàn)貨abs20006Rabbit anti-Goat IgG-FITCGoatIF: 10 - 2 ug/ml; IHC: 10 -2 ug/ml; WB: 0.2 - 0.05 ug/ml現(xiàn)貨2. AMCA :常用在多標記實驗中，如免疫熒光、流式細胞術。其缺點是，淬滅快，且由于肉眼不能很好的 檢測其所激發(fā)的藍色熒光，因而AMCA耦聯(lián)的二抗更適用于檢測大量存在的

7、抗原。3.花青染料（Cy2,Cy3,Cy5） : Cy2比FITC更穩(wěn)定，且在表面熒光顯微鏡下，Cy2的熒光FITC更強。Cy3 和Cy5比大多數(shù)熒光基團更亮，更穩(wěn)定，背景更弱。二者常在共聚焦顯微實驗中作多標記。但Cy5的缺點 是不能用表面熒光顯微鏡觀察，因此通常用具有遠紅外檢測器的共聚焦顯微鏡觀察。花青染料標記的二抗貨號產(chǎn)品名稱反應種屬應用abs20028Donkey anti-Goat IgG-Cy3GoatHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry, IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20015Donkey a

8、nti-Mouse IgG-Cy3MouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20016Donkey anti-Mouse IgG-Cy3MouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20022Donkey Anti-Rabbit IgG-Cy3RabbitHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:

9、800 for most applicationsabs20024Goat anti-Rabbit IgG-Cy3RabbitHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20010Goat Anti-rabbit IgG/Cy3RbIF=1:100-1000 not yet tested in other applications.optimaldilutions/concentrations should be determined by the end user.TRITC,RR

10、X,TR : TRITC經(jīng)常和FITC 一起用于雙標記實驗中，也可以使用RRX或TR，但TR會產(chǎn)生較 高的背景。在使用裝有氪氫燈的激光共聚焦掃描顯微鏡作三標記實驗時，RRX尤其有用，可以和Cy2 （或 FITC）及Cy5 一起使用，因為RRX的發(fā)射波長在Cy2和Cy5中間，且和這兩者的重疊很少。?：常和FITC 一起用于流式細胞術雙標記實驗。 PE標記的二抗貨號產(chǎn)品名稱反應種屬應用abs20007Goat Anti-Mouse IgG/PE antibodymouseFlow-Cyt=1:100-1000 IF=1:100-1000 not yet tested in other applic

11、ations. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.6.生物素：生物素（biotin）可以和抗生素蛋白（avidin）發(fā)生不可逆反應而緊密結合在一起。首先加入生物素標記的二抗，在加入耦聯(lián)有酶或熒光集團的avidin、ExtrAvidin或streptavidin，后者能夠結合于 二抗表面的多個位點上，從而極大的放大檢測信號。生物素標記的二抗.貨號產(chǎn)品名稱反應種屬應用abs20030Rabbit Anti-Chicken IgY PolyclonalAntibody, Biotin Conju

12、gatedChickenWB = 1:500-2000 ELISA=1:500-1000 IHC-P=1:400-800 IHC-F = 1:400-800 ICC = 1:100-500 IF = 1:100-500其他熱賣二抗abs20009Donkey Anti-rabbit IgG/APC antibodyrabbitFlow-Cyt=1:100-1000 IF=1:100-1000abs20032Goat Anti-rabbit IgG/APC antibodyrabbitFlow-Cyt=1:100-1000 IF=1:100-1000abs20033Rabbit Anti-pig

13、 IgG antibodypigWB=1:1000-5000ELISA=1:2000-10000IHC-P=1:200-1000 IHC-F = 1:200-1000abs20019Donkeyanti-ChickenIgY-AlexaFluor 488ChickenHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20026Donkeyanti-GoatIgG-AlexaFluor 488GoatHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100

14、- 1:800 for most applicationsabs20027Donkeyanti-GoatIgG-AlexaFluor 647GoatHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry, IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20029Donkey Anti-Guinea PigIgG-DyLight 405Guinea PigHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry, IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20014Donkeyanti-

15、MouseIgG-AlexaFluor 488MouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20017Donkeyanti-MouseIgG-AlexaFluor 594MouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20021Donkey anti-Rabbit IgG-AlexaFluor 594RabbitHisto-/Cyto-Chemistry,Fl

16、ow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20020Donkeyanti-RabbitIgG-AlexaFluor 488RabbitHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20013Goat anti-Mouse IgG-AlexaFluor488MouseHisto-/Cyto-Chemistry,Flow Cytometry,IF 1:100 - 1:800 for most applicationsabs20011Goat Anti-rabbit IgG antibodyRabbit, Qu