24砷鹽檢查法操作規(guī)程

1、編制人審核人批準(zhǔn)人編制日期審核日期批準(zhǔn)日期頒發(fā)部門廠務(wù)部制作備份2份實(shí)施日期分發(fā)部門QC受控編號目的：建立砷鹽檢查法操作規(guī)程。范圍：適用于藥品中砷鹽的檢查。職責(zé)：質(zhì)檢室質(zhì)檢員負(fù)責(zé)本規(guī)程的執(zhí)行，質(zhì)保室質(zhì)監(jiān)員負(fù)責(zé)本規(guī)程執(zhí)行的監(jiān)督檢 查。內(nèi)容：簡述：砷鹽檢查法適用于藥品中微量砷鹽（以AS計算）的限量檢查。砷鹽檢查法中的第一法（古蔡氏法）用作藥品中砷鹽的限量檢查；第二 法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法）既可檢查藥品中砷鹽限量，又可測定含量；兩 法并列，可根據(jù)需要選用。古蔡氏法是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫與藥品中微量亞砷酸 鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇漠化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與同一 條件下

2、定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的砷斑比較，以判定砷鹽的限量。二乙基二硫代氨基甲酸銀法是將生成的砷化氫氣體導(dǎo)入盛有二乙基二 硫代氨基甲酸銀試液的管中，使之還原為紅色膠態(tài)銀，與同一條件下定量的標(biāo)準(zhǔn) 砷溶液所制成的對照液比較，或在510nm波長處測定吸收度，以判定含砷鹽的限 度或測定含量。儀器與用具：第一法（古蔡氏法），按藥典規(guī)定：有機(jī)玻璃塞D和E的孔徑應(yīng)與導(dǎo)氣 管C內(nèi)徑一致，以免生成的色斑直徑不同，影響比色的準(zhǔn)確度；B磨口塞，C管 頂端與D、E有機(jī)玻璃旋塞塞蓋間應(yīng)緊密吻合，以防砷化氫泄漏。第二法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法），按藥典規(guī)定：B磨口塞應(yīng)密閉， 以防砷化氫泄漏；與標(biāo)準(zhǔn)磨口塞B相連的導(dǎo)氣管C 一端長度

3、應(yīng)不低于80mm，便 于裝醋酸鉛棉花達(dá)80mm,另一端長度應(yīng)不低于180mm尖端內(nèi)徑不可超過1mm,以 保證產(chǎn)生的砷化氫吸收完全；D管的標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管要一致，管內(nèi)徑，色澤，刻 線要相同。試藥與試液：3.1 .標(biāo)準(zhǔn)砷溶液：精密稱取105C干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置 100ml量瓶中，加20%氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀 硫酸10ml,用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加稀硫酸l0ml，用水稀 釋至刻度，搖勻即得（每lml相當(dāng)于1.0 u g的As）。碘化鉀試液：按藥典規(guī)定，應(yīng)臨用新配。酸性氯化亞錫試液：按藥典

4、規(guī)定，配成后3個月即不適用。乙醇制漠化汞試液：按藥典規(guī)定，應(yīng)置棕色磨口塞玻璃瓶內(nèi)，在暗處保 存。漠化汞試紙：取質(zhì)地較疏松的中速定量濾紙條浸入乙醇制漠化汞試液 中，l小時后取出，在暗處干燥，即得。本試紙宜置棕色磨口塞玻璃瓶內(nèi)保存。鋅粒：以能通過1號篩的細(xì)粒無砷鋅為宜，如使用鋅粒較大時，用量酌 情增加，反應(yīng)時間亦應(yīng)延長為1小時。醋酸鉛棉花：取脫脂棉，浸入醋酸鉛試液與水的等容混合液中，濕透后， 瀝去過多的溶液，并使之疏松，在100C以下干燥后，貯于磨口塞玻璃瓶中備用。二乙基二硫代氨基甲酸銀試液：按藥典規(guī)定。本液應(yīng)置棕色玻璃瓶中， 密塞，置陰涼處保存。操作方法：第一法：（古蔡氏法）4. 1. 1.標(biāo)準(zhǔn)

5、砷斑的制備：裝置的準(zhǔn)備：取醋酸鉛棉花適量（6010mg）撕成疏松狀，每次少 量用細(xì)玻璃棒均勻地裝入導(dǎo)氣管C中，松緊要適度，裝管高度為6080mm。用 玻璃棒夾取漠化汞試紙1片（其大小能覆蓋D頂端口徑而不露出平面外為宜）， 置旋塞D頂端平面上，蓋住孔徑，蓋上旋蓋E并旋緊。精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加 碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g, 立即將準(zhǔn)備好的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶，并將A瓶置2540C水浴中反應(yīng)45分鐘， 取出漠化汞試紙，即得。檢查法：取照該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn) 砷斑的制備，自“再加碘化鉀

6、試液5ml”起依法操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑 比較，即得。第二法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法）標(biāo)準(zhǔn)砷對照液的制備：裝置的準(zhǔn)備取醋酸鉛棉花適量（80100mg），撕成疏松狀，每次 少量，用細(xì)玻璃棒均勻地裝入導(dǎo)氣管C中，松緊要適度，裝管高度約80mm。精 密量取二乙基二硫代氨基甲酸銀試液5ml置D管中。精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加 碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g， 立即將準(zhǔn)備好的導(dǎo)氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導(dǎo)人D管中，并將A 瓶置2540C水浴中反應(yīng)45分鐘，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，即得。檢查法：準(zhǔn)備

7、好C管裝置，取照該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液， 置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷對照液的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起依法操作。 將所得溶液與標(biāo)準(zhǔn)砷對照液同置白色背景上，從D管上方向下觀察，比較，即得。 必要時，可將所得溶液與標(biāo)準(zhǔn)砷對照液分別轉(zhuǎn)移至lcm吸收池中，用分光光度計， 在510um波長處，以二乙基二硫代氨基甲酸銀試液作空白，分別測定吸收度。5.注意事項(xiàng)：所用儀器和試液等照本法檢查，均不生成砷斑，或經(jīng)空白試驗(yàn)至多生成 僅可辨認(rèn)的斑痕。新購置的儀器裝置，在使用前應(yīng)檢查是否符合要求?？蓪⑺褂玫膬x器 裝置依法制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，所得砷斑應(yīng)呈色一致；同一套儀器應(yīng)辯別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液 1. 5ml與2. 0ml

8、所呈砷斑的深淺。制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑或標(biāo)準(zhǔn)砷對照液，應(yīng)與供試品檢查同時進(jìn)行。因砷斑不穩(wěn) 定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制，標(biāo) 準(zhǔn)砷貯備液存放時間一般不宜超過一年。第一法：（古蔡氏法）反應(yīng)靈敏度約為0.75 g （以As計），砷斑色澤的 深度隨砷化氫的量而定，藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)砷斑為2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于2ugAs） 所形成的色斑，此濃度得到的砷斑色度適中，清晰，便于分辨。供試品規(guī)定含砷 限量不同時，采用改變供試品取用量的方法來適應(yīng)要求，而不采用改變標(biāo)準(zhǔn)溶液 取用量的辦法。藥品中存在的微量砷鹽常以三價的亞砷酸鹽或五價的砷酸鹽存在，五價 狀態(tài)的砷生成砷化氫比三價砷慢，故先加入

9、碘化鉀和氯化亞錫為還原劑，使五價 砷還原為三價砷。如供試品中存在銻鹽，將干擾砷鹽檢查，所以本法不適用供試品為銻鹽 中砷鹽檢查。但在藥典規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，100ug的銻存在不致于干擾測定。實(shí) 驗(yàn)中加入氯化亞錫不僅有效地抑制銻的干擾，防止銻化氫與漠化汞試紙作用生成 梯斑或與二乙基二硫代氨基甲酸銀試液反應(yīng)。干擾砷鹽檢查；還可與鋅作用，在 鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣均勻連續(xù)地發(fā)生，使產(chǎn)生的砷 化氫氣體一致，有利于砷斑的形成。供試品和鋅粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產(chǎn)生H2S氣體，干 擾實(shí)驗(yàn)，故用醋酸鉛棉花吸收除去H2S；因此，導(dǎo)氣管中的醋酸鉛棉花，要保持 疏松、干燥，不要塞入近

10、下端。浸入乙醇制漠化汞試液的濾紙的質(zhì)量，對生成砷 斑的色澤有影響，用定性濾紙，所顯砷斑色調(diào)較暗，深淺梯度無規(guī)律；用定量濾 紙質(zhì)地疏松者，所顯砷斑色調(diào)鮮明，梯度規(guī)律，因此必須選用質(zhì)量較好，組織疏 松的中速定量濾紙；漠化汞試紙一般宜新鮮制備。鋅粒大小影響反應(yīng)速度，為使反應(yīng)速度及產(chǎn)生砷化氫氣體適宜，選2mm 左右粒徑的鋅粒。反應(yīng)溫度一般控制在30C左右，冬季可置溫水浴中。如反應(yīng) 太快，宜適當(dāng)降低反應(yīng)溫度，使砷化氫氣體能被均勻吸收。如供試品為鐵鹽，需先加酸性氯化亞錫試液，將高鐵離子還原為低價鐵 而除去干擾。如枸櫞酸鐵銨的砷鹽檢查。有機(jī)藥品中的砷鹽檢查：可溶于水的脂肪族有機(jī)酸如枸櫞酸、乳酸及 其鹽、氨基

11、已酸、與葡萄糖酸鈣等，一般可不經(jīng)有機(jī)破壞而直接依法檢查砷鹽； 多數(shù)環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，因砷與雜環(huán)分子可能以共價鍵結(jié)合，需先行有機(jī)破壞， 否則檢出結(jié)果偏低或難以檢出。有機(jī)破壞時，所用試劑的含砷量如超過lug，除 另有規(guī)定外，對照標(biāo)準(zhǔn)液應(yīng)取同量的試劑按供試品同樣處理，最后加入砷標(biāo)準(zhǔn)液 一定量，與供試品比較所生成砷斑的顏色。如供試品為硫化物、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽等，則在酸性溶液中可生 成大量硫化氫或二氧化硫氣體，干擾檢查;可加硝酸使氧化成硫酸鹽以除去干擾， 如硫代硫酸鈉中砷鹽檢查。5.12 .在二乙基二硫代氨基甲酸銀法中，需要加入一定量的有機(jī)堿以中和反 應(yīng)中的二乙基二硫代氨基甲酸；USPXX11配制

12、成0. 5%二乙基二硫代氨基甲酸 銀的毗啶溶液，其缺點(diǎn)是毗啶有惡臭；中國藥典1995年版采用含1.8%三乙胺和 0. 25%二乙基二硫代氫基甲酸銀的氯仿溶液，呈色穩(wěn)定性及試劑穩(wěn)定性均好， 低毒、無臭，與砷化氫產(chǎn)生的顏色在510nm波長處有最大吸收；如遇室溫低，同 法操作，標(biāo)準(zhǔn)砷對照液不顯色，可將D管置2540C水浴加溫使顯色。5.13.二乙基二硫代氨其甲酸銀試液在配制后兩周內(nèi)穩(wěn)定。當(dāng)供試液中含砷 (AS) 0. 757.5 u g時顯色反應(yīng)的線性關(guān)系良好，2小時內(nèi)穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。 本法操作時，由于砷化氫氣體導(dǎo)入盛有準(zhǔn)確5ml的二乙基二硫代氨基甲酸銀試液 中，在2540C水浴中反應(yīng)45min后，

13、有部分氯仿?lián)]發(fā)，比色前應(yīng)添加氯仿至00ml,搖勻，比色。因二乙基二硫代氨基甲酸銀試液帶淺黃綠色，測吸收度時 要用此試液作空白。記錄與計算：記錄：必須記錄采用的方法，樣品取樣量，標(biāo)準(zhǔn)砷溶液取用量，操作過 程，使用特殊試劑、試液的名稱和用量，實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。計算：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液濃度的計算：1mol的三氧化二砷質(zhì)量為197.82g，含砷(As) 2X74.92g，稱取三氧化二 砷0. 132g溶于1000ml溶液中配成的貯備液，每加1ml含As量為：2X74.92X0.132X1000As=0.1mg197.8X1000貯備液定量稀釋100倍后所得標(biāo)準(zhǔn)砷溶液，每1ml含AS量為lug。砷限量計算：進(jìn)行限量檢查時，取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml制成對照液，與供 試品溶液在相同條件下處理比較砷斑或吸收液顏色的深淺，從而確定砷含量是否超過規(guī)定，砷限量可用下式計算：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液體積（ml）X標(biāo)準(zhǔn)溶液砷溶液濃度（g/ml）砷限量%=X 100%供試品量（g）如取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml,標(biāo)準(zhǔn)砷溶液濃度0. 000001g/ml，供試品取樣1g； 2X0.000001砷限量%=X 100%=0.0002% （百萬分之二）1供試品取樣量計算