(完整版)NGS簡介課件

1、基因測序技術(shù)簡介主講人：徐德陽目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、Pacbio測序原理全基因組測序的英文是Whole Genome Sequencing，簡稱WGS，目前默認(rèn)指的是人類的全基因組測序。所謂全（Whole），指的就是把物種細(xì)胞里面完整的基因組序列從第1個DNA開始一直到最后一個DNA，完完整整地檢測出來，并排列好，因此這個技術(shù)幾乎能夠鑒定出基因組上任何類型的突變。第一代DNA測序技術(shù)用的是1975年由桑格（Sanger）和考爾森（Coulson）開創(chuàng)的鏈終止法，以及1976-1977年由馬克西姆（Maxam）和吉爾伯特（Gilbert）發(fā)明的化學(xué)法（鏈降解）

2、。在1977年，由桑格老人家測定了第一個基因組序列噬菌體phiX-174。http:/smcg.cifn.unam.mx/enp-unam/03-EstructuraDelGenoma/animaciones/secuencia.swf目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、Pacbio測序原理測序流程Illumina測序原理上機(jī)測序的文庫Illumina測序原理測序流程Illumina測序原理cBotIllumina測序原理測序芯片F(xiàn)lowcellLane：八條相對獨(dú)立通道兩端小孔：進(jìn)液孔與出液孔Oligo：DNA小片段，通過化 學(xué)鍵連接在Flowcell上， 能與文庫兩端

3、堿基互補(bǔ)配對oligoIllumina測序原理Index變性：雙鏈DNA變 為單鏈DNA， 雜交在Flowcell上結(jié)合方式：堿基互補(bǔ)配對原則雜交Illumina測序原理延伸RCR擴(kuò)增模版：雜交結(jié)合鏈引物：OligoIllumina測序原理變性O(shè)riginal template： 與Flowcell 氫鍵連接， 不穩(wěn)定Newly synthesized strand： 與Flowcell 磷酸二酯鍵 連接，穩(wěn)定Illumina測序原理成簇二代測序核心技術(shù)之一：橋式擴(kuò)增Illumina測序原理橋式擴(kuò)增搭“橋”： DNA鏈與周圍Oligo 通 過堿基互補(bǔ)配對結(jié)合 PCR擴(kuò)增： 以DNA鏈為模版 以新結(jié)合的Oligo為引物Illumina測序原理變性結(jié)果：一條DNA鏈變成兩條Illumina測序原理繼續(xù)橋式擴(kuò)增Illumina測序原理線性化Illumina測序原理切割I(lǐng)llumina測序原理阻斷ddNTPs 阻斷阻止繼續(xù)擴(kuò)增一簇完全相同的DNA鏈增強(qiáng)檢測信號ead1 Illumina測序原理Read1 測序引物雜交目錄一、測序技術(shù)發(fā)展與比較二、illumina測序原理三、 Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Pacbio測序原理Oxford NanoporeMinION它是基于電信號而不是光