植物生理學(xué)大實驗 實驗一 植物激素對植物形態(tài)建成的作用

1、生物學(xué)綜合實驗?zāi)K二植物生理學(xué)大實驗1實驗一 植物激素對植物形態(tài)建成的作用目的與要求 了解不同比例的生長素和激動素對煙草髓愈傷組織形成和分化的影響，并學(xué)習(xí)植物組織培養(yǎng)的技術(shù)。原理 植物各器官的分化，首先是細胞的極化過程。植物體的每一個細胞都由受精卵分裂而來，即使高度分化的細胞，也保留著遺傳上的全能性，即在每一個細胞中，包含著產(chǎn)生一個完整有機體的全部基因。 在煙草髓組織培養(yǎng)中，激動素和生長素在愈傷組織的形成和分化中，有相互作用。產(chǎn)生大量的愈傷組織，需要有生長素和激動素。在一定濃度范圍內(nèi)，生長素/激動素的比例高時，產(chǎn)生根；生長素/激動素比例低時，產(chǎn)生芽；在二者的比例子居間時，愈傷組織占優(yōu)勢。2 材

2、料與設(shè)備一、材料 40-60厘米高、生長健壯的煙草植株二株。二、設(shè)備 高壓滅菌鍋 培養(yǎng)室 超凈工作臺 三角瓶（100毫升） 培養(yǎng)皿 手術(shù)刀 封口膜 長柄鑷子 手術(shù)剪 消毒棉3試 劑各種母液（1）1毫克/毫升的生長素溶液（2）1毫克/毫升的激動素溶液（3）1毫克/毫升維生素B1（鹽酸硫胺素）水溶液（4）20毫克/毫升的肌醇溶液（5）稱取下列試劑，溶于水后定容到250毫升。 H3BO3 0.31克 KH2PO4 8.5克 KI 0.0415克 Na2MoO42H2O 0.0125克 CoCl 26H2O 0.00125克（6）稱取下列試劑，溶于水后定容到250毫升。 MgSO47H2O18.5克

3、MnSO4H2O0.845克 ZnSO47H2O0.43克 CuSO45H2O 0.00125克（7）稱取下列試劑，溶于水后定容到500毫升。 Na2EDTA 1.86克 FeSO47H2O1.39克4愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基（RM-1965培養(yǎng)基） 每一升培養(yǎng)基含有： 母液（5） 5毫升 鹽酸硫胺素 0.4毫升 母液（6） 5毫升 生長素 2毫升 母液（7） 10毫升 激動素 0.30毫升 NH4NO3 1.65克 肌醇 5毫升 KNO3 1.9克 蔗糖 30克 CaCl2 0.33克 瓊脂 10克 用1M的氫氧化鈉調(diào)pH至5.65.8。每瓶裝50毫升，于高壓滅菌 鍋中滅菌121,15-20分鐘，

4、冷卻后備用。5愈傷組織分化培養(yǎng)基 除生長素和激動素按下面的濃度加入外，培養(yǎng)基的其他成分和濃度，同RM-1965培養(yǎng)基。培養(yǎng)基分成六個處理，每個處理有五個重復(fù)。 生長素濃度（毫克/升） 激動素濃度（毫克/升） （1） 0 0 （2） 0 0.2 （3） 2 0 （4） 2 0.2 （5） 2 0.02 （6） 0.02 2 調(diào)整pH、分裝及滅菌的步驟同誘導(dǎo)培養(yǎng)基。6操作程序一、愈傷組織的誘導(dǎo)1煙草莖段的滅菌 取約2尺高的煙草植株地上部分，去葉，去頂，刷洗干凈。切成7厘米長的小段，分別用70%的乙醇和5%次氯酸鈉溶液浸泡消毒，置于無菌培養(yǎng)皿中備用。2煙草髓的制備 在無菌超凈工作臺中，用鑷子夾住煙草

5、莖切段的頂端，另取無菌手術(shù)刀將切段四周的皮層組織切掉，直至露出煙草髓組織，然后用手術(shù)刀將髓的兩端各切出0.5厘米去掉，再將中間一段切成2毫米左右厚的小圓片，切割時要注意煙草形態(tài)學(xué)的上下方向。3接種 用長柄鑷子向裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的三角瓶中，接入三個髓片，使其形態(tài)學(xué)的上端朝下緊貼在培養(yǎng)基上，封好封口膜。4培養(yǎng) 將接種完畢的材料置于培養(yǎng)室中，28下培養(yǎng)。一周后，可明顯地看到圓片的周圍和上表面漸漸地形成愈傷組織。7操作程序二、器官的再分化 在無菌條件下，用長柄鑷子將誘導(dǎo)出的愈傷組織取出，用手術(shù)刀小心地切成約222毫米3的小塊，并分別轉(zhuǎn)入RM分化培養(yǎng)基中，置于28培養(yǎng)室中自然光照下培養(yǎng)。每周觀察培養(yǎng)物，記錄其生長及變化情況。五周后總結(jié)觀察結(jié)果。8結(jié)果記錄1愈傷組織出現(xiàn)的時間。2根和芽出現(xiàn)的時間。3統(tǒng)計根、芽及全苗數(shù)。處理號根數(shù)芽數(shù)全苗數(shù)（1）（2）（3）（4）（5