第4章-分析樣品前處理課件

1、第四章 分析樣品前處理第一節(jié) 概述第二節(jié) 體外樣品分析前處理方法一、含鹵素有機(jī)藥物的分析 含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽結(jié)構(gòu)特點：CX（一）鹵原子的活潑性1. 鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系（1）乙烯型鹵和芳鹵 不活潑（2）烯丙型鹵和芐鹵 活潑（3）鹵代烷型 介于兩者之間2. 分子中所含鹵原子的個數(shù) 分子中所含鹵原子的個數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)，特別是同一碳上含多個鹵原子或一個苯環(huán)上含多個鹵原子時，活潑性增強(qiáng)更加明顯3. 鹵素的種類IBrClF常見的含鹵素有機(jī)藥物三氯叔丁醇六氯對二甲苯

2、泛影酸膽影酸碘他拉酸碘番酸碘苯酯I鹽酸胺碘酮諾氟沙星醋酸氟輕松磺溴酞鈉（二）含鹵素有機(jī)藥物的分析直接回流后測定法堿性或酸性還原后測定法氧瓶燃燒分解后測定法1. 直接回流后測定法 本法是將含鹵素有機(jī)藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液（或一定量過量的硝酸銀滴定液）后，加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Volhard法）測定。 本法適用于含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵原子和脂肪碳原子相連者）。 原理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定

3、液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。 例三氯叔丁醇的測定 ChP2000）CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕紅色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 測定方法 取本品約0.1g，精密稱定，加乙醇5ml溶解后，加20%氫氧化鈉溶液5ml，加熱回流15min，放冷至室溫，加水20ml與硝

4、酸5ml，精密加硝酸銀滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加鄰苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，強(qiáng)力振搖后，加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.216mg的C4H7Cl3O1/2H2O。反應(yīng)摩爾比為13T滴定度，每1ml滴定液相當(dāng)于被測組分的mg數(shù)c滴定液濃度，mol/LM被測物的摩爾質(zhì)量，g/moln1mol樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)，常用反應(yīng)摩爾比體現(xiàn)，即反應(yīng)摩爾比為1n 2. 堿性或酸性還原后測定法 本法是將含鹵素有機(jī)藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)

5、，使有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Fajans法）測定。 本法適用于測定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個苯環(huán)上含多個碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。 （1） 堿性還原后測定法例 泛影酸的測定 ChP (2000) 取本品約0.4g，精密稱定，加氫氧化鈉溶液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。COOHINHCOCH3IIH3COC

6、HN+ 11NaOH + Zn回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O USP (24)、BP（1998） ChP(2000)收載的膽影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法測定。 （2）酸性還原后測定法 取本品的干燥品約0.4g，精密稱定，加鋅粉1g及冰醋酸10ml，加熱回流30min，放冷，冷凝管用水30ml洗滌，用脫脂棉過濾，燒瓶與脫脂棉用水洗滌2次，每次20ml，洗液與濾液合并，加四溴酚酞乙酯指示液1ml ，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定。終點時黃色沉淀變?yōu)榫G色。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于

7、19.031mg的C11H12 I 3NO2。例 碘番酸的測定 JP (13)3. 氧瓶燃燒分解后測定法 （1）原理 氧瓶燃燒法：將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)欲測物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定 適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析 本法特點是簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析 （ 2） 儀器與材料 儀器裝置 燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、硬質(zhì)玻璃錐型瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品 無灰濾紙 B. 液體樣品

8、紙袋 C. 軟膏類樣品：將適量樣品置不含被測成分的蠟油紙中包裹嚴(yán)密，外層再用無灰濾紙包裹吸收液 A. 作用：吸收液的作用是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y定的價態(tài)氧氣B. 吸收液的選擇氟 水 氯 NaOH溶液溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼飽和溶液碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液（3）操作方法燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備 用洗液洗凈后，按各藥品項下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口。樣品的準(zhǔn)備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。樣品的

9、燃燒 點燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，俟燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片），充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同法另做空白試驗。然后按各藥品項下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定。根據(jù)被燃燒分解的樣品量選用適宜大小的燃燒瓶。（4）注意事項 ChP（2000）規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析 待分解樣品量 燃燒瓶的體積 35mg（微量分析） 150250ml 2030mg（半微量分析） 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多 2000

10、ml或特殊結(jié)構(gòu)的燃燒瓶 正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。測定含氟有機(jī)藥物時，用石英制燃燒瓶鉑絲燃燒時起催化作用應(yīng)同時做空白試驗燃燒時要注意防爆燃燒要完全燃燒產(chǎn)生的煙霧完全被吸收（5）應(yīng)用例 磺溴酞鈉的含量測定 ChP (2000)燃燒分解O2HBr + S2- + SO4 + HBr + S2- NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2溴 取本品約0.2g，照氧瓶燃燒法（附錄 C）進(jìn)行有機(jī)破壞，選用1000ml燃燒瓶，以0.4%氫氧化鈉溶液10ml，濃過氧化氫溶液0.5ml與水10ml作

11、為吸收液，俟生成的煙霧完全吸入吸收液后，用水稀釋至100ml，煮沸5分鐘，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸銀滴定液（0.1mol/l）20ml，搖勻，再加硫酸鐵胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每1mL硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于7.990mg的溴(Br)。例 碘苯酯的含量測定 ChP（2000）原理 碘苯酯系有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游

12、離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即為終點 取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用氫氧化鈉試液2ml與水l0ml為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀10g，加冰醋酸適量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02Mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg的C19H

13、29IO2。 滴定度的計算 放大反應(yīng)2mol碘苯酯1molI21molI21molNaIO+1molNaI1molNaIO1/3molNaIO3+2/3molNaImolNaI+Br2molNaIO3即2mol碘苯酯2molNaIO32mol NaIO3+10I-6molI2即2mol碘苯酯1molI2 6molI212molI12molNa2S2O3反應(yīng)摩爾比為1698：140. 氧瓶燃燒法中的裝置有A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 磨口軟質(zhì)玻璃錐形瓶C. 鉑絲D. 鐵絲E. 鋁絲96：133（99x：138）選擇氧瓶燃燒法所必備的實驗物品A. 磨口硬質(zhì)玻璃錐形瓶B. 鉑絲C. 普通濾紙D. 氫

14、氣 E. 無灰濾紙99：76氧瓶燃燒法測定含氯有機(jī)藥物時所用的吸收液多數(shù)為A. H2O2溶液B. H2O2NaOH溶液C. NaOH溶液D硫酸肼飽和液E. NaOH硫酸肼飽和液99：134. 氧瓶燃燒法可用于A. 含鹵素有機(jī)藥物的含量測定B. 醚類藥物的含量測定C. 檢查甾體激素類藥物中的氟D. 檢查甾體激素類藥物中的硒E. 芳酸類藥物的含量測定二、含金屬有機(jī)藥物的分析 含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物 如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵 有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳原子以共價鍵相連，結(jié)合比較牢固 如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利酒石酸銻鉀硬脂

15、酸鎂富馬酸亞鐵葡萄糖酸銻鈉卡巴胂醋酸苯汞汞撒利含金屬有機(jī)藥物定量分析前的處理方法 不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 直接測定法;經(jīng)水解后測定法;經(jīng)還原-汞齊化后測定法 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 濕法破壞(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等);干法破壞（一）不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法1. 直接測定法 適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬有機(jī)藥物或某些CM鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。富馬酸亞鐵的含量測定 ChP (2000) 取本品約0.3g，精密稱定，加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，放冷，加新沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白

16、試驗校正。每1ml硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于16.99mg 。原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe2+ Fe2+ + e-Fe3+紅色淺藍(lán)色OOCCHOHCCO+Fe2+ 例 葡萄糖酸銻鈉的測定 ChP（2000） 取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg的Sb。 如枸櫞酸鐵銨的測定 ChP（2000

17、） 取本品約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中。加水15ml溶解后，加硫酸lml，加熱至溶液由暗棕色變成淡黃色，放冷至約15，滴加高錳酸鉀試液至溶液顯粉紅色并持續(xù)5s，加鹽酸15ml與碘化鉀試液15ml，密塞，靜置3min，加水50ml稀釋后，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于5.585mg的Fe。 2. 用硫酸水解后測定法例 硬脂酸鎂的測定 ChP（2000） 取本品約0.1g，精密稱定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清

18、，繼續(xù)加熱10min，放冷至室溫，加甲基橙指示液12滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于2.016mg的MgO。原理：Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O 某些含汞有機(jī)藥物，由于CHg鍵不牢固，在水溶液（冰?。┲械渭恿蛩崾蛊渌?，將有機(jī)汞定量轉(zhuǎn)化成硫酸汞，再用硫氰酸銨滴定液滴定。例 汞撒利的測定 取本品約0.5g，精密稱定，加蒸餾水10ml，置冰浴中，滴加硫酸10ml，隨滴隨攪拌，至產(chǎn)生的沉淀復(fù)溶解，再加蒸餾水50ml，硫酸鐵銨指示液2ml，用硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫氰酸銨滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于25.29mg的汞撒利。3. 經(jīng)還原-汞齊化后測定法 本法系在酸性或堿性溶液中，加鋅粉、加熱回流，將藥物中有機(jī)結(jié)合的汞還原析出金屬汞，并與過量的鋅生成鋅汞齊。將鋅汞齊溶于硝酸后，選用適當(dāng)?shù)姆椒y定汞的含量，并換算成含汞有機(jī)藥物的含量。 如醋酸苯汞的含量測定 取本品約0.5g，精密稱定，置100ml燒瓶中，加水15ml，甲酸5ml與鋅粉1g，附回流冷凝器，煮沸30min。放冷，濾過，濾紙和鋅汞齊用蒸餾